啤酒酵母磷脂的制备联产多糖及蛋白肽的工艺研究_高娜娜 (2).docx

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1、 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研宄 所取得的成果 =除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集 体己经发表或撰写过的科研成果。对木文的研究做出重要贡献的个人和集体，均 已在文中以明确方式标明 本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解济南大学有关保留、使用学位论文的规定，间意学校保留或向 W家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版 .允许论文被查阅和借鉴：木人 授权济南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以 采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编 _学位论文。 开，口保密 c _ 年，解密后应

2、遵守此规定 ） 论文作者签名 . H 期：如 /6tAr 关于学位论文使用授权的声明 分类号： Q81 密级：公开 单位代码： 10427 学号： 2014220417 硕士学位论文 啤酒酵母磷脂的制备联产多糖及蛋白肽的工艺研究 研宄生姓名 高娜娜 导 师 姓 名 王元秀 学科（领域 ） 生物工程 申 请 学 位 类 别 工程颂士 答辩时 间 2016 年 6 月 The Technology Research on the Preparation of Beer Yeast Phospholipids combined Polysaccharide and Protein Peptide B

3、y GAO Na Na Under the Supervision of WANG Yuan Xiu A Thesis Submitted to the University of Jinan In Partial Fulfillment of the Requirements For the Degree of Master of Engineering University of Jinan Jinan, Shandong, P. R. China June , 2016 目录 第一章前言 . 1 1.1 啤酒废酵母的综合利用 . 1 1.1.1 在饲料行业的应用 . 1 1.1.2 在食

4、品行业的应用 . 1 1 丄 3 在生物制药行业的应用 . 2 1.2 啤酒酵母中磷脂的提取与应用研宄 . 3 1.2.1 磷脂的化学结构与理化性质 . 3 1.2.2 磷脂的提取研宄 . 4 1.2.3 磷脂的应用研宄 . 7 1.3 啤酒酵母中多糖的提取与应用研究 . 7 1.3.1 酵母多糖的提取研宄 . 8 1.3.2 酵母多糖的应用研宄 . 8 1.4 啤酒酵母中蛋白肽的提取与应用研宄 . 9 1.4.1 酵母蛋白肽的提取研宄 . 9 1.4.2 酵母蛋白肽的应用研宄 . 9 1.5 本文主要研宄内容、创新点 . 10 1.6 MM. 10 第二章啤酒酵母磷脂提取工艺研宄 . 11

5、2.1 酵母磷脂提取工艺研宄 . 11 2 丄 1 实验材料与仪器设备 . 11 2.1.2 实验方法 . 12 2.1.3 实验结果与讨论 . 14 2.2 酵母磷脂的纯化与磷脂成分的薄层色谱分析 . 25 2.2.1 实验材料与仪器设备 . 25 2.2.2 实验方法 . 25 2.2.3 实验结果与讨论 . 27 2.3 本章小结 . 30 第三章联产酵母多糖及蛋白肽的工 艺研宄 . 33 3.1 实验材料与仪器设备 . 33 3.2 实验方法 . 34 3.2.1 酵母多糖的提取 . 34 3.2.2 酵母蛋白肽的提取 . 35 3.2.3 联产酵母多糖及蛋白肽的工艺优化 . 36 3

6、.3 实验结果与讨论 . 37 3.4 经济效益分析 . 47 3.5 本章小结 . 47 第四章结论 . 49 参考文献 . 51 至夂 i 射 . 57 隱 . 59 摘要 啤酒废酵母是在啤酒生产过程中经主发酵和后发酵两道发酵工艺后所产生 的副广物。啤酒酵母中 H 养丰富， 45%50%左右为蛋白质，基本能够满足人体 对必须氨基酸的需求；酵母多糖含量在 25%35%左右，主要是甘露聚糖和 P-(l， 3)-D-葡聚糖，具有抗肿瘤、抗病毒、降血糖血脂、增强机体免疫力等功能； 磷脂作为重要的两亲物质，既是重要的乳化剂和表面活性剂，又是食品添加剂， 含量在 4%5%左右。对啤酒废酵母进行综合应用

7、，既能减少环境污染，避免资 源浪费，又能提高经济效益，拓宽产业链条。本文以啤酒废酵母为原料，研宄 了磷脂联产 P-(U)-D-葡聚糖、甘露聚糖和蛋白肽的分离、提取方法，主要研宄 结果如下： 实验通过复合蛋白酶对酵母细胞破壁处理后，利用混合有机溶剂对酵母磷脂 进行提取，探宄了正庚烷、正己烷、异丙醇和乙醇四种有机溶剂不同比例组合对 磷脂得率的影响。通过实验获得最佳条件：正庚烷与异丙醇 （ 3:1)混合提取， 料液比为 1:11， 85C下提取 30 min， 得率为 3.87%，达到了传统氯仿 -甲醇法的 80.29%。实验证实，利用正庚烷与异丙醇混合溶液 （ HPIP)提取磷脂基本实现 了低毒性

8、溶剂提取磷脂的要求。 实验利用硅胶固相萃取小柱 （ SPE 小柱）纯化磷脂并结合薄层色谱分析技术 (TLC)对酵母各磷脂组分进行分离鉴定。确定最终萃取条件为 ： 400mg/mL 的 磷脂样品上样量为 0.5mL， 先后用 5 mL 正己烷和 4 mL 氯仿将麦角留醇和中性脂肪 洗脱出来，然后用 10 mL 甲醇洗脱磷脂，样品中磷脂回收率为 80.96%。每根 SPE 小柱可重复利用两次。再以 TLC 法进行分析，展开溶剂为氯仿 :甲醇 :水 （ V/V/V 为 6.07:2.43:1.5)，展 f 7cm。碘显色后，在与磷脂对照品色谱相应的位置上显现 4 个分离清晰的斑点，分 别为磷脂酰胆碱

9、 （ PC)、 磷脂酰乙醇胺 （ PE)、 磷脂酰肌 醇 （ PI)和磷脂酰丝氨酸 （ PS)。 实验证实，利用硅胶萃取小柱纯化磷脂，结合 TLC 法快速分离鉴定磷脂成分简单方便，样品中有机溶剂残留量低，且易实现操 作自动化。 酵母多糖及蛋白肽主要存在于利用复合蛋白酶水解酵母细胞提取磷脂后的 上清液以及酵母沉淀物中，由于酵母沉淀物中仍有少许细胞壁未破碎，多糖及蛋 in 白释放不彻底，为提高多糖及蛋白肽的得率，采用碱溶液处理提取磷脂后的酵母 沉淀物。实验通过对比不同的酵母多糖及蛋白肽的提取方法，确定用复合蛋白酶 与碱法相结合提取啤酒酵母中的甘露聚糖和 P_( 1， 3 )-D-葡聚糖，并用 se

10、vage 试剂 (氯仿 :正丁醇为 5:1)沉淀多糖溶液中的蛋白肽。通过响应面软件分析后确定了 最佳提取条件：碱提温度 64C、 碱提时间 lh、 NaOH浓度 2%，此时 P-(l， 3)-D-葡 聚糖的得率为 14.87%、甘露聚糖的得率为 19.64%，蛋白肽的得率为 16.56%。实 验中所获得的蛋白肽产品，分子量小于 3000 Da 的占 81.5%，分子量小于 1000 Da 的 占 60.31%。这说明所获得的产品大部分是以短肽或氨基酸的形式存在的。酵母 甘露聚糖的相对分子质量主要分布在213KD 左 右 ， 成 分 比 较 单 一 。 葡 聚 糖虽然得到了一定程度上的降解，但是

11、其中分子量大于 200KD 的 P-(l， 3)-D-葡聚糖 占 66.07%，具有强生物活性的 P_(l，3)-D-匍聚糖所占的比例较 本研宄得到了制备酵母磷脂联产酵母甘露聚糖、 P-(U)-D-葡聚糖及蛋白肽 的工艺，对全面开发啤酒酵母资源、提高酵母产品的附加值奠定了理论基础。 关键词：啤酒酵母；磷脂；多糖；蛋白肽；联产 Abstract Waste beer yeast is a by-product of beer industry, produced after primary fermentation and fermentation brewing process in the

12、process of beer production. Beer yeast is very nutritious, contains 48% protein, which includes 8 kinds of essential ammonia acid needed for human body; the yeast polysaccharide content is 25% 25%, which have lots of medical value, such as strengthening immune system reducing blood-lipid and blood s

13、ugar, etc. Phospholipid is one kind of natural amphiphilic substances, which is not only being increasingly used as surfactants and emulsifiers in industry but also a kind of food additives. The comprehensive utilization of waste beer yeast not only creates a good economic, but also reduces environm

14、ental pollution and extends the industrial chain. This study mainly introduced the research of extraction methods of phospholipids,p-(l,3)-D-glucan, mannan and protein peptide from waste beer yeast. Main results for this study are as follows: This study used mixed organic solvent after the hydrolysi

15、s of the yeast cell wall to study the combination of n-heptane, n-hexane, isopropyl alcohol and ethanol on the influence of yeast phospholipids extraction yield. The optimum condition as follows: The extraction solvent is HP IP, solid ratio is 1:11, 85 C treatment 30 min, repeat 3 times. The rate of

16、 recovery is 3.87%, which reached to 80.29% of the traditional method. The extraction of phospholipids with HPIP has been testified by the experiments. In this paper, the yeast phospholipids were purified and identified with solid phase extraction and TLC technique. The optimal extractive conditions

17、 are developed: 400 mg/mL of phospholipid sample on volume is 0.5 mL, 5 mL n-hexane elution ergosterol, 4 mL chloroform elution neutral fat, 10 mL methanol elution phospholipid; the recoveries of phospholipids were about 80.96%. Each pillar of solid phase extraction can repeat twice. It was better t

18、o separate phospholipids by using chloroform-methanol-water (6.07:2.43:1.5) as the mobile phase. TLC spray reagents of phospholipids indicated that there are four same color reference substances in the corresponding location on chromatography, which are Phosphatidyl Choline (PC) and Phosphatidyl Eth

19、anolamine (PE), Phosphatidyl Inositol (PI), Phosphatidylserine (PS) respectively. This technology is simple and auto-operation is easy, and the level of organic solvent is lower. In this paper, different extracted techniques of protein and polysaccharide from waste yeast were studied, and decided to

20、 extract p-(l， 3)-D-glucan and mannan with enzyme decomposition method, and subside the protein peptide in the polysaccharide solution with sevage. The best condition is obtained as follows: the concentration of NaOH is 2.03%,64.20 C treatment!.04 h. The recovery rate ofP-(l,3)-D-glucan was 14.87%,

21、it increased by 4% compared to the predicted value. The recovery rate of mannan was 19.64%, it reduced by 1.2% compared to the predicted value. The recovery rate of protein peptide was 16.56%, it increased by 2.4% compared to the predicted value.The results showed that the molecular weight of the pr

22、otein peptide for less than 3000 accounted for 81.5%, and less than lOOOfor 60.31%.This shows that the product obtained are in the form of short peptides or amino acids.The molecular weight of mannan is about 213KD.p-(l,3)-D-glucanwere degraded in the deinking effluent.The molecular weight greater t

23、han 200KD accounted for 66.07%,which shows that the ratio of strong biological activity is higher. This study mainly introduced the research of synchronous extraction methods of phospholipids,p-(l,3)-D-glucan, manan and protein peptide from waste beer yeast. It provides the theoretical basis for dev

24、eloping product with high added value by using beer yeast in beer industry. Key Wordsrsaccharomyces cerevisiae; phospholipids; polysaccharide; protein peptide; Synchronous production 第一章前言 啤酒废酵母是在啤酒生产过程中经主发酵和后发酵两道发酵工艺后所产生 的副产物。我国啤酒产量巨大，啤酒废酵母资源丰富，对其进行综合利用，不 仅会产生巨大的经济效益，提高企业竞争力，也有利于环境的保护。 1.1 啤酒废酵母的综合

25、利用 啤酒酵母属真菌，是由细胞壁、细胞膜、细胞质和细胞核等结构构成的单 细胞微生物，细胞形态为椭圆形或圆形。啤酒废酵母中蛋白质含量在 48%左右， 基本能够满足人体对必须氨基酸的需求；酵母多糖含量在 25%35%左右 ， g 是甘露聚糖和P-(l,3)-D-葡聚糖；含有 6%8%的 RNA; 4%5%左右的磷脂；酵 母中还含有麦角留醇、矿物质和维生素等多种营养物质 1。数据显示， 2014 年 我国有 5000 万升的啤酒产量2，这意味着在啤酒生产过程中将会产生接近 1000 吨以上的啤酒酵母泥 3。目前，仅有 40% 50%的啤酒废酵母被回收利用，其 余都被排放掉，这无疑造成了资源的浪费与环

26、境的污染 4。 目前，对啤酒废酵母的开发应用主要集中在饲料行业、食品行业、生物制 药行业等方面。 1.1.1 在饲料行业的应用 我国每年都要从国外进口将近 500 万吨的鱼粉来弥补蛋白饲料缺乏严重的 现状5。晒干之后的啤酒酵母营养价值很高，同鱼粉一样富含蛋白质、维生素、 矿物质等，可作为鱼粉的替代物 6，因此啤酒酵母是我国蛋白饲料工业的宝贵 资源。在饲料行业，有的啤酒酵母与菜籽饼混合后干燥，制成饲料添加剂 7; 有的与核黄素等混合，充当核黄素等营养物质的载体加入到饲料中 8。 1.1.2 在食品行业的应用 啤酒酵母因其含有丰富的营养物质，所以在食品行业具有非常广泛的应用。 目前，啤酒酵母主要应

27、用于食用营养酵母、酵母抽提物和天然调味品等方面的 研宄与应用。 食用营养酵母是将啤酒酵母粉干燥后直接获得的可食用物质，无需深层次 加工，也无需添加其他物质 9。在国外，啤酒酵母经干燥后以粉末状进行销售。 这种粉末 酵母可直接加入到酸奶或饮食中，有助于消化，也可直接饮用 1。在 我国，啤酒酵母在食品行业还未得到充分的应用。 酵母抽提物主要是对酵母蛋白及酵母核酸的应用。酵母蛋白经降解后得到 氨基酸和多肽，核酸降解后得到呈味核苷酸，这些物质均可作为配料应用于食 品当中 11。在肉制品 12、食用香精 13、酱油 14、方便面料包 15、鸡精粉 16等 产品中，酵母抽提物的应用也很广泛。 啤酒酵母泥中

28、氨基酸种类繁多，同时含有 5-肌苷酸二钠、 5-鸟苷酸二钠 等多种呈味核苷酸，酵母调味剂的味道鲜美浓郁，正是多种氨基酸与核苷酸的 综合体现，与单一氨基酸调味剂相比，其味道更加柔和、醇厚，因此其前景非 常广阔 17。 1.1.3 在生物制药行业的应用 啤酒酵母细胞中含有多种可应用于制药行业的生物活性物质，如超氧化物 歧化酶 （ SOD)、 核酸、多糖、谷胱甘肽 （ GSH)、 果糖二磷酸钠 （ FDP)、 麦角 甾醇等，是提取生化物质的宝贵资源。 SOD 最先是从牛血细胞中提取的，后来 主要从植物和微生物如酵母中提取 18。与动物血液中的 SOD 相比，虽然植物与 微生物中所提取的SOD 活性

29、较低，但是原料更为人性化，易于大规模生产，因 此利用啤酒废酵母泥提取 SOD 是获取 SOD 的重要途径，且产品安全性高。于洋 等 19人通过喷雾干燥处理酵母泥，这样可以保护 SOD 的活性，然后利用超声 - 微波辅助法提取废酵母中的 SOD，最终获得活性为 40.368 U/mg 的 SOD。 啤酒 酵母中核糖核酸的含量为 6% 8.3%，在生物制药行业可用于生产治疗癌症、 脑震荡、肝炎等疾病的药物。酵母多糖含量为 25% 30%，主要是 P-(l， 3)-D-葡 聚糖和甘露聚糖，与蛋白质和几丁质等交联成网状结构存在于细胞壁中。酵母 胞壁多糖是一种活性多糖，可用作膳食纤维，具有良好的抗癌效果

30、 2，尤其是 碱不溶性葡聚糖能增强免疫力，有抗癌、抗病毒、降低血脂等功能。酵母体内 的谷胱甘肽 （ GSH)能够清除自由基，在解毒、治疗肝炎、白内障等方面均有 良好的疗效 21。 1,6-二磷酸果糖能改变酶促反应过程中酶的状态，可用于治疗 心肌梗塞、冠心病等疾病。啤酒酵母中还含有谷大量的麦角留醇，它是维生素 D2 的前体，可制成钙片。 啤酒废酵母在饲料行业的应用比较广泛，在食品与生物行业的应用，目前 仍处于拓展阶 段。但研宄表明，随着制药行业逐步向生物制药转移，啤酒酵母 在生物制药行业中的应用前景将会越来越广阔。 1.2 啤酒酵母中磷脂的提取与应用研究 磷脂是含磷酸根的脂类，属于复合脂，具有重

31、要的营养和医用价值 22。人 们最早在 19 世纪初从人体脑组织中发现磷脂，之后由 Goble 从蛋黄中分离出并 命名 23，到了 20 世纪 60 年代，人们从植物与酵母中也发现了磷脂。磷脂在生 物体细胞中几乎无处不在，尤其是在某些重要的组织中。在欧美国家，人们对 磷脂的研宄应用仅低于某些维生素的地位。 1.2.1 磷脂的化学结构与理化性质 磷脂是一类复合脂类，由于骨架不同，可将磷脂分为含甘油的甘油磷脂类 和含鞘氨醇的鞘氨醇磷脂类 24。甘油磷脂在实际应用更广泛一些，因此更被重 视。 甘油磷脂 （ phosphoglycerides)以丙三醇为基本骨架， 1、 2 号位上轻基与 脂肪酸结合成

32、酯， 3 号位上的羟基被磷酸及含氮碱类化合物或肌醇所取代 25， 其结构通式如图 1.1: 图 1.1 甘油磷脂结构通式 与甘油 1、 2 号位羟基结合的脂肪酸多为碳原子数为 C12C18的脂肪酸残基， 且碳原子数多以偶碳数居多。 X 不同，所代表的磷脂类型也不同，常见的磷脂 种类见表 1.1 所示。 表 1.1 常见磷脂 X 基团及名称 一 X 基团 中文名称（俗称 ） 英文名称（缩写 ） 一 H 磷脂酸 Phosphatidic Acid(PA) CH2CH2NH3 磷脂酰乙醇胺（脑磷脂） Phosphatidylethanolamine(PE) CH2CH2N(CH3)3 磷脂酰胆碱（卵

33、磷脂） Phosphatidylcholine(PC) CH2CH(NH2)COOH 磷脂酰丝氨酸 Phosphatidylserine(PS) CH2CH(OH)CH2OH 磷脂酰甘油 Phosphatidylglycerol(PG) 0C6H6(0H)5 磷脂酰肌醇 Phosphatidylinositol(PI) 高纯度磷脂一般为白色蜡状固体，但市面上常见的磷脂产品一般呈淡黄色 至棕色，这可能和制取方式与储存方法有关。磷脂不易溶于水，但在磷脂分子 中，有磷酸根与氨基醇的亲水基团和碳氢键的疏水基团，能够使磷脂在水相与 油相之间形成一个界面层 26。另外，磷脂在与适量水混合时，容易吸水膨胀形

34、 成胶体，从油脂中分离出来。磷脂中的脂肪酸多含有不饱和双键，因此易发生 氧化作用而导致磷脂颜色发生改变。由于磷脂不溶于丙酮等极性溶剂，是丙酮 不溶物，可根据此性质分离磷脂。 1.2.2 磷脂的提取研究 磷脂在细胞膜中与蛋白和多糖结成复合物，是细胞膜的主要组成成分 27。 原料不同，提取磷脂所采用的方法也不同。目前，生产磷脂的主要方法包括有 机溶剂萃取法、超声波辅助萃取法、微波辅助萃取法和超临界 co2 萃取法。但 是对于酵母磷脂的提取鲜有报道。 1.2.2.1 有机溶剂萃取法 有机溶剂萃取是根据物质中各组分在不同溶剂中的溶解性差异不同，利用能 够溶解目标物的一种溶剂或一个溶剂系统将目标物分离出

35、来。因为磷脂在细胞中 与蛋白和多糖结成复合物，所以溶剂提取体系通常包括亲水相和亲脂性的有机相， 使高度亲脂性的脂质溶解在有机相中 28。磷脂与蛋白质结合形成的脂蛋白复合 物并不能被氯仿、正庚烷等非极性溶剂所破坏，而磷脂又不能被甲醇等极性溶剂 溶解完全，因此，单一的使用极性溶剂或单一的使用非极性溶剂均达不到提取效 果，需将两者结合使用。代玲莉等 29人通过实验证明了将两种不同极性的溶剂 混合后所提的磷脂含量要高于单一 极性溶剂提取所得。 尸 1 池法 3是有机溶剂萃取法中最经典的方法，此方法所使用的有机溶剂为 氯仿 :甲醇 (V/V 为 2:1)混合液。后来此方法不断地改进，： 81 丨 11

36、等 3132用氯仿 :甲醇 (V/V 为 2:1)混合溶液提取样品中的脂质时，再向提取液中加入水，使得脂质相分 离更为快捷。曾涛等 33用不同比例的氯仿 -甲醇混合液制备 10%的肝脏组织匀浆， 寻找测定肝脏甘油三酯含量最佳的提取效果。热娜古丽等 34将鸡皮剪碎，加入 Folch 试剂，恒温提取 lh 得提取液，然后用氯仿 :甲醇 :蒸馏水 （ V/V/V 为 8:4:3)进 行萃取洗涤得磷脂溶液。经改良后的方法均能提高磷脂的得率，且更加快捷。 虽然 Folch 法提取效果很好，但由于氯仿毒性比较大，刺激性较强，所以研 宄人员正在寻找一种更有效、更安全的提取方法。目前使用的方法主要是烷烃 /

37、醇 /水体系。与 Folch 试剂相比，这种混合提取试剂密度低，不仅不易挥发，能够 减小因溶剂挥发而造成的脂质损失，而且容易离心去除组织中的残留物，增加脂 质得率 。 Ali 111111116(1 等 35在实验中利用正己院和异丙醇的混合溶液提取洋麻 种子中的油脂，得率达到了 Folch 试剂的 85%。许晓慧 36利用含水乙醇与乙醚的 混合溶剂提取鸡蛋卵黄中的卵磷脂，丙酮脱水去油，测得粗品卵磷脂的纯度高达 68.2%。陈志强等 37利用乙醇 -正己院体系提取肌醇磷脂，他们在实验中研宄了大 豆磷脂中肌醇磷脂在不同浓度的乙醇中的分离效果，得出 5%的乙醇对磷脂得率 最高。利用有机溶剂提取磷脂简

38、单便捷，设备要求不高，并且可以有效地提取极 性脂质而去除中性脂质，提取效果较佳。 1.2.2.2 超声波辅助萃取法 超声辅助萃取法 3839是利用超声波的空化作用，将微生物菌体在几秒内完 成破裂，使菌体物质提取的更加完全。微生物菌体一般受细胞壁结构的保护， 超声波能够破坏细胞壁 4，促进胞内物质的释放与溶解，缩短萃取时间 41。张 丽等 42利用超声波提取鲣鱼脑中磷脂，超声功率 300 W， 在 35C 下超声提取 40 min，提取溶剂为正己烷与乙醇的混合溶剂，此条件下磷脂的得率为 0.19%， 达到氯仿 -甲醇法的 87.1%。利用超声波辅助萃取法能够提高萃取率，缩短萃取 时间。 1.2.

39、2.3微波辅助萃取法 微波法 4344又叫微波萃取技术，其原理是高频微波能够快速穿透菌体并产 生能量导致菌体细胞内部温度升高，细胞破裂，内容物流出而获取萃取的物质。 使用微波萃取，速度快、得率高，是一种效率较高的的辅助萃取方法 45。李英 妹等 46在提取鹌鹑蛋黄卵磷脂时利用微波进行辅助萃取，在 650 W 的微波条件 下提取 40 s， 得率为 88%。 1.2.2.4超临界流体 C02萃取法 超临界流体 co2 萃取法 4748是在超临界状态下，使用超临界流体将萃取目标 物选 择 性 地 分 离 出 来 。 超 临 界 co2提取磷脂时，以乙醇为夹带剂， 实验证明温度升高不利于磷脂纯度的提

40、高，而萃取压力和乙醇含量增加有利于其 纯度的提高，得到的萃取物中磷脂含量约为 95%。超临界 C02技术制备的磷脂含 量高，有机试剂含量低，保证了磷脂样品的安全性，是一种较为理想的辅助萃取 方法 5 。 综上所述，超声波提取法虽然在一定程度上提高了反应速度，缩短了提取 时间，但是在加工过程中，超声波会带来一定的噪音污染，真正应用到实际生 产中还需要深入研宄与探索。微波提取法虽然提取品质高、快速，但如果微波 提取时间短，磷脂提取就会不完全，如果微波时间较长，一些功能性脂质就会 被破坏，所以要对实验目的进行综合分析后确定微波提取法的萃取条件。超临 界流体 C02 萃取法虽然有其他提取方法所不能比拟

41、的优势，但是其涉及高压系 统，大规模使用成本较高。有机溶剂萃取法虽然提取时间较长，对人力的要求 也比较高，但是此方法简便易行，对实验设备的要求不是很高，操作较简单， 因此，本文选取的是优化后的混合有机溶剂来提取酵母磷脂。 1.2.3 磷脂的应用研究 酵母磷脂是重要的两性表面活性剂，在食品工业、医药工业、化妆品工业、 饲料工业及其它工业部门均有着广泛的应用。 在食品工业，具有润湿、抗氧化、乳化等功能的酵母磷脂，是一种优质的食 品添加剂。它可以与淀粉、蛋白质等结合，用于烘焙食品中可作为起酥剂；加入 到糖果泡泡糖、人造奶油等食品中，具有乳化、湿润等功能；加入到肉制品中， 可增加脂肪类原料的分离度，易

42、于加工。 在医药工业，磷脂一方面具有降血脂、预防冠心病、高血压、强化脑部功能 等功能特性，是保肝药物、健脑健身药物和外用药物的活性成分 51;另一方面 磷脂又可作为多种药物制剂的调理剂、乳化剂，具有无毒、能量高、乳化效果好 等特点。研究表明，磷脂在体内不会产生特异性免 疫，磷脂脂质体在作为药物的 载体运送药物，既可以达到药物的高效利用，又可避免过敏反应 52。 在饲料工业，磷脂可作为饲料添加剂。研宄表明饲料中磷脂的添加可以增加 动物成活率、促进生长、保护肝脏、增强抗病能力等 53。 在化妆品工业，由于磷脂具有乳化性和保湿型，而且是细胞膜的重要组成成 分，因此添加到化妆品中可以活化皮肤呼吸、保持皮肤水分、增进皮肤的柔软性。 此外，磷脂在其他行业用途也很为广泛。例如，磷脂在皮革生产中可起到润 滑、增塑、增厚作用；在涂料中，可防止颜料沉淀；在农药中，可改善杀虫剂的 分散等 54。 因此，随着生物技术的进步，磷脂的应用范围会越来越广泛。 1.3 啤酒酵母中多糖的提取与应用研究 酵母细胞