实验一植物原生质体的分离和培养一．教学目标：了解植物原生质.docx

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1、实验一 植物原原生质体体的分离离和培养养一教学学目标：了解植植物原生生质体作作为细胞胞工程研研究的重重要意义义，了解解原生质质体活性性鉴定的的原理。掌握分分离和培培养原生生质体的的技术、方法和和原理。掌握细细胞活性性的检测测方法。掌握细细胞计数数的原理理和方法法。二重点点：掌握握分离和和培养原原生质体体的技术术、方法法和原理理。掌握握细胞活活性的检检测方法法。掌握握细胞计计数的原原理和方方法。三难点点：分离和和培养原原生质体体的技术术。四授课课方式与与教学方方法：讲讲解原理理、实验验操作示示范或具具体指导导。五教学学内容:实验原理理植物原生生质体(prootopplasst)是是除去细细胞壁后

2、后 为原原生质所所包围的的“裸露露细胞”,是开开展基础础研 究究的理想想材料。其中,酶解法法分离原原生质体体是一个个常用的的技术,其原理理是植物物细胞壁壁主要由由纤维 素、半半纤维素素和果胶胶质组成成,因而而使用纤纤维素 酶、半半纤维素素酶和果果胶酶能能降解细细胞壁成成分,除除 去细细胞壁,即可得得到原生生质体。由于原原生质体体内 部部与外界界环境之之间仅隔隔一层薄薄薄的细细胞膜,必须保保持在渗渗透压平平衡的溶溶液中才才能保持持其完整整性, 使原原生质体体分离后后不致膨膨胀破裂裂，渗透透剂常用用甘露醇醇或蔗糖糖，酶液液还应含含一定CCa2+来稳定定原生质质膜。 其次,还应当当考虑取取材、酶酶的

3、种类类和纯度度、酶液液 的渗渗透压、酶解时时间及温温度等因因素对分分离原生生质 体体的影响响。将原原生质体体接种在在培养基基上进行行培养，细胞壁壁再生，细胞分分裂和再再生植株株。测定原生生质体的的活性有有多种方方法。荧荧光素双双醋酸酯酯(FDDA)染染色是常常用的一一种方法法,FAAD 本本身无荧荧光,无无极性,可透过过完整的的原生质质膜。 一旦进进入原生生质体后后,由于于受到酯酯酶分解解而产生生 具有有荧光的的极性物物质荧光光素。它它不能自自由出入入原 生生质膜,因此有有活力的的细胞能能产生荧荧光,无无活力 的原生生质体不不能分解解FADD无荧光光产生。 细胞计数数一般用用血细胞胞计数极极，

4、按白白细胞计计数法进进行计数数。从理论上上讲，植植物体的的任何一一部分都都可以通通过酶解解作用去去除细胞胞壁而得得到原生生质体。但在实实际操作作中，只只有幼嫩嫩的组织织才能完完成去壁壁的过程程。所以以，为了了制备健健康的原原生质体体，一般般选用根根尖、茎茎尖、嫩嫩叶及对对数生长长期的愈愈伤组织织为材料料，一旦旦细胞具具有木质质化或次次生加厚厚的外壁壁，则不不能被酶酶降解。因此，取材成成为实验验成功与与否的首首要问题题。 花花期短的的花瓣，由于其其组织鲜鲜嫩，又又具有色色素标记记，是该该实验中中较好的的材料。实验方法法1把叶叶片(或花期期短的花花瓣)洗净，把表面面水吸干干。（22人一组组）2撕去

5、去叶片背背面的表表皮，用用2mll离心管管的盖打打下1圆圆片。圆圆片扣压压于 00.5mml酶液液面上。让去除除下表皮皮的一面面接触酶酶液，辅辅满一层层。0.5mll酶液已已放入22ml离离心管中中。（酶酶液：44%纤维维素酶，2%果胶覆覆酶，PPH5.8，0.66moll/L甘甘露醇）。3288300保温酶酶解26h（放培培养箱中中）；镜镜检叶肉肉细胞原原生质体体。用血血球计数数板计数数。46000 rrpm 离心55minn，使原原生质体体沉降。吸除上上面的酶酶液。5加00.2 moll/L 的加氯氯化钙液液0.55ml，轻轻吹吹打均匀匀。6用11mL注注射器向向离心管管底部缓缓缓注入入2

6、0%的蔗糖糖溶液11ml，出出现下部部蔗糖液液，上部部原生质质体悬浮浮液.以6000rpmm离心110 mmin，在两液液相之间间出现一一条绿色色带，便便是纯净净的原生生质体。7用11mL注注射器取取出管底底的杂质质、下部部蔗糖溶溶液和上上部氯化化钙液。少许原原生质体体于载片片上，盖盖片观察察其形态态，检测测纯度。8加MMS培养养液液11ml洗涤涤，轻轻轻混匀，6000 rppm 离离心5mmin，使原生生质体沉沉降。吸吸除上面面的溶液液。9加MMS培养养液液00.5mml, 轻轻混混匀, 用血血球计数数板计数数细胞密密度, FDAA染色测测定原生生质体的的活性。10扣扣上盖子子，在226下进

7、行行暗培养养。观察察细胞壁壁的再生生和细胞胞分裂。实验结果果结果讨论论六课堂堂小结：根据学生生的实验验结果进进行总结结。细胞计数数板的使使用：细胞计数数板系一一长方形形厚玻片片，常用用的改良良牛氏(Impprovved-Neuubauuer)计数板板在中央央横沟的的两边各各有一计计数室，两计数数室结构构完全相相同。计计数室较较两边的的盖玻片片支柱低低0.11毫米。因此，放上盖盖玻片时时，计数数板与其其间距即即计数室室空间的的高为00.1毫毫米(图图8-11)。在在低倍显显微镜下下可见计计数室被被双线划划分成个边长长为毫毫米的大大方格。四角的的大方格格又各分分为个中方方格，这这是用来来计数白白细

8、胞的的。中央央大方格格被划分分为个中方方格，每每一中方方格又划划分成个小小方格(图82称=4000小方格格，也有有的计数数板为=4000格的，小方格格面积一一致)。中央大大方格的的四角及及中心个中方方格(者者则为四四角上的的中方格格)为红红细胞或或血小板板计数范范围。细胞计数数先用试管管稀释法法制备禽禽类血细细胞悬液液：将禽禽类红细细胞稀释释液、分别置置水浴锅锅中预热热到，取液mmL于试试管中，用吸血血管加入入新鲜鸡鸡血(或或肝素抗抗凝血)霯霯，再加加入液mmL混匀匀，置该该水浴锅锅中保温温ss左右，置室温温，即为为待检的的血细胞胞悬液。可用于于充液计计数。取取干洁的的计数板板，置于于水平的的

9、显微镜镜载物台台上，盖盖上盖玻玻片，使使两侧各各空出少少许。摇摇匀血细细胞悬液液，用滴滴管吸取取，将滴滴管尖轻轻轻置于于盖玻片片边缘外外，让滴滴出的血血细胞悬悬液凭毛毛细管作作用吸入入计数室室内，刚刚好充满满计数室室为宜(图83)。静置minn后计数数，先用用低倍镜镜观察，不均匀匀则抛弃弃。计数数时用虹虹彩、集集光器、反光镜镜等调节节入射光光角度和和强度，认清计计数室位位置。采采用“由上至至下，由由左至右右，顺序序如弓”的顺序序，对压压边线细细胞采取取“数上不不数下，数左不不数右”的原则则(图884)。依次次计数并并记录个中方方格中分分别有多多少个红红细胞。注意事项项1计数数板、盖盖玻片和和测

10、定管管用清水水冲洗，再用绸绸布或细细布沾干干。2.充充液前应应充分混混匀血细细胞悬液液，充液液要连续续、适量量，充液液后应待待血细胞胞下沉后后再计数数。3.计数数板、盖盖玻片、吸血管管及测定定管等用用过后必必须立即即按要求求洗涤干干净。实验二、细胞膜膜的通透透性观察实 验 目 的的 了解细胞胞膜的渗渗透性及及各类物物质进入入细胞的的速度。 实 验 原 理理 将红细胞胞放入数数种等渗渗溶液中中，由于于红细胞胞对各种种溶质的的透性不不同，有有的溶质质可以渗渗入，有有的不能能渗入，渗入的的溶质能能够提高高红细胞胞的渗透透压，所所以促使使水分进进入细胞胞，引起起溶血，由于溶溶质透入入速度互互不相同同，

11、因此此溶血时时间也不不相同。 实 验 用 品品 一、器材材 50mll烧杯, 试管管（110ccm）, 100ml移移液管, 试管管架。 二、材料料 羊血。 三、试剂剂 0.17mmol/L氯化化钠，00.177moll/L氯氯化胺，0.117mool/LL醋酸胺胺，0.17mmol/L硝酸酸钠，00.122moll/草酸酸胺，00.122moll/硫酸酸钠，00.322moll/葡萄萄糖，00.322moll/甘油油，0.32mmol/乙醇，0.332mool/丙丙酮。 实 验 方 法法 一、羊血血细胞悬悬液取50mml小烧烧杯一个个，加11份羊血血和100份0.17mmol/L氯化化钠，形

12、形成一种种不透明的红色色液体，此即稀稀释的羊羊血。二、低渗渗溶液取试管一一支，加加入100ml蒸蒸馏水，再加入入1mll稀释羊羊血，注注意观察察溶液颜颜色的变变化，有有不透明明的红色色逐渐澄澄清，说说明红细细胞发生生破裂造造成1000%红红细胞溶溶血，使使光线比比较容易易透过溶溶液。三、羊红红细胞的的渗透性性1、取试试管一支支，加入入0.117mool/LL氯化钠钠10mml，再再加入11ml稀稀释羊血血，轻轻轻摇动，注意观观察溶液液颜色有有无变化化？有无无溶血现现象？为为什么？2、取试试管一支支，加入入0.117mool/LL氯化胺胺10mml，再再加入11ml稀稀释羊血血，轻轻轻摇动，注意

13、观观察溶液液颜色有有无变化化？有无无溶血现现象？为为什么？3、分别别在另外外8种等等渗溶液液中进行行同样实实验。步步骤同22。实 验 结 果果并对实验验结果进进行比较较和分析析。实验三 细胞胞骨架的的观察一、实验验目的掌握用光光学显微微镜观察察植物细细胞骨架架的原理理 及方方法，观观察光学学显微镜镜下细胞胞骨架的的网状 结构。 二、实验验原理植物细胞胞用适当当浓度的的TriitonnX1000处理 后，可可破坏细细胞内蛋蛋白质，但细胞胞骨架系系统的蛋蛋 白质质却保护护完好。考马斯斯亮蓝RR2500(Cooomaassiie bbrillliaant bluue RR2500)是一一种蛋白白质染

14、料料，处理理后 的的材料用用考马斯斯亮蓝RR2500(考马马斯亮蓝蓝R2550) 染色后后，用光光学显微微镜观察察，可以以见到一一种网状状 结构构，即是是细胞骨骨架结构构。三、材料料洋葱鳞叶叶四、试剂剂1)2考马斯斯亮蓝RR2500染色液液：称考考马 斯斯亮蓝RR25001g，溶于2250mml无水水乙醇中中，加 冰醋酸酸35mml.再再加蒸馏馏至5000mll. (2)磷磷酸缓冲冲液(ppH 668)：60mmmolL 磷磷酸缓冲冲液，调调至pHH6.88 (3)MM缓冲液液(pHH 72)550mmmolL咪唑唑， 550mmmol/L)氯氯化钾、055mmoolLL氯化镁镁、11mmoo

15、l/LL 乙二二醇(aa-氨基基乙基)醚四乙乙酸、00.1mmmoll/L乙乙二胺四四乙酸； 1mmmollL巯巯基乙醇醇，调至至pH 722。 (4)11%Trrionn X-1000：用MM缓冲液液配制。 (5)33%戊二二醛：用用磷酸缓缓冲液配配制； (6)中中性树胶胶。 仪器(请请参看仪仪器图库库)：显显微镜，烧杯，镊子。玻璃滴滴管，载载玻片 五、实验验步骤1.用镊镊子撕取取洋葱鳞鳞叶内侧侧的表皮皮若干片片 约11cm22大小若若干片)，置于于50mmL烧杯杯中，加加 入ppH6.8磷酸酸缓冲液液，使其其下沉； 2.吸去去磷酸缓缓冲液，用1Triitonn X1000 处理理20mmi

16、n。3.吸去去Triitonn X1000，用MM缓冲液液洗3 次,每每次5mmin。 4.用33戊二二醛固定定30mmin。 5.磷酸酸缓冲液液(pHH 68)洗洗3次，每次55minn。6.0.2%考考马斯亮亮蓝R2250染染色100minn。 7.蒸馏馏水洗22次，然然后将样样品置于于载玻片片上,加加盖玻片片，于普普通光学学显微镜镜下观察察。 8.如果果染色效效果好，则可依依次用550乙乙 醇、70%乙醇,95乙醇、正丁醇醇、二甲甲苯处理理 样品品,各55minn,然后后将样品品平展于于载玻片片上，加加 一滴滴中性树树胶，盖盖上盖玻玻片封片片，制成成永久切切片。六、实验验报告描绘所观观察

17、到的的洋葱鳞鳞叶细胞胞骨架图图。实验四、线粒体体和液泡泡系的超超活染色色与观察察活体染色色是能使使生活有有机体的的细胞或或组织特特异性着着色但对对活样品品又没有有毒害作作用的一一种活体体染色方方法，其其目的是是显示生生活细胞胞内的某某些结构构，而不不影响细细胞的生生命活动动和产生生任何物物理、化化学变化化以致引引起细胞胞的死亡亡。活体体染色技技术可用用来研究究生活状状态下的的细胞形形态结构构和生理理、病理理状态。 通常把活活体染色色分为体体内活体体染色与与体外活活体染色色两类。体外活活体染色色又称超超活染色色，它是是由活的的动、植植物分离离出部分分细胞或或组织小小块，以以染料溶溶液浸染染，染料

18、料被选择择固定在在活细胞胞的某种种结构上上而显色色。活体体染料之之所以能能固定、堆积在在细胞内内某些特特殊的部部分，主主要是靠靠染料的的“电化学学”特性。碱性染染料的胶胶粒表面面带阳离离子，酸酸性染料料的胶粒粒表面带带有阴离离子，而而被染的的部分本本身也是是具有阴阴离子或或阳离子子，这样样，它们们彼此之之间就发发生了吸吸引作用用。但并并非任何何染料均均可用于于活体染染色，理理论上应应选择那那些对细细胞无毒毒性或毒毒性极小小的染料料，且使使用时需需要配成成稀淡的的溶液。一般说说来，最最为适用用的是碱碱性染料料，这可可能是因因为它具具有溶解解在类脂脂质(如如卵磷脂脂、胆固固醇等)的特性性，易于于被

19、细胞胞吸收。詹纳斯斯绿B(Jannus greeen B)和和中性红红(neeutrral redd)两种种碱性染染料是活活体染色色剂中最最重要的的染料，对于线线粒体和和液泡系系的染色色分别具具有专一一性。 实 验 目 的的1、观察察动、植植物活细细胞内线线粒体、液泡系系的形态态、数量量与分布布； 2、学习习一些细细胞器的的超活染染色技术术。实 验 原 理理 线粒体体是细胞胞内一种种重要细细胞器，是细胞胞进行呼呼吸作用用的场所所。细胞胞的各项项活动所所需要的的能量，主要是是通过线线粒体呼呼吸作用用来提供供的。活活体染色色是应用用无毒或或毒性较较小的染染色剂真真实地显显示活细细胞内某某些结构构而

20、又很很少影响响细胞生生命活动动的一种种染色方方法。詹詹纳斯绿绿 B是是线垃体体的专一一性活体体染色剂剂。线粒粒体中细细胞色素素氧化酶酶使染料料保持氧氧化状态态(即有有色状态态)呈蓝蓝绿色，而在周周围的细细胞质中中染料被被还原，成为无无色状态态。中性红为为弱碱性性染料，对液泡泡系(即即高尔基基体)的的染色有有专一性性，只将将活细胞胞中的液液泡系染染成红色色，细胞胞核与细细胞质完完全不着着色，这这可能是是与液泡泡中某些些蛋白质质有关。 实 验 用 品品1、器材材 显微镜镜、恒温温水浴锅锅、解剖剖盘、剪剪刀、镊镊子、双双面刀片片、解剖剖盘载载玻片、凹面载载玻片、盖玻片片、表面面皿、吸吸管、牙牙签、吸

21、吸水纸。 2、试剂剂（1）RRingger溶溶液： 氯化钠 0.885g (变温温动物用用0.665g) 氯化钾 0.225g氯化钾 0.225g氯化钙 0.003g蒸馏水 1000ml （2）110%、1/330000中性红红溶液： 称取00.5gg中性红红溶于550mll Riingeer液，稍加热热 (330440)使之之很快溶溶解，用用滤纸过过滤，装装入棕色色瓶于暗暗处保存存，否则则易氧化化沉淀，失去染染色能力力。临用用前，取取已配制制的1%中性红红溶液11ml，加入229mll Riingeer溶液液混匀，装入棕棕色瓶备备用。（3） 1%、1/550000詹纳斯斯绿B溶溶液 称取55

22、0mgg詹纳斯斯绿B溶溶于5mml RRingger溶溶液中，稍加微微热(330440)，使使之溶解解，用滤滤纸过滤滤后，即即为1%原液。取1%原液ll mll加入449mll Riingeer溶液液，即成成1/550000工作液液装入瓶瓶中备用用。最好好现用现现配，以以保持它它的充分分氧化能能力。 实验材料料 人口腔上上皮细胞胞，小麦麦种子或或黄豆幼幼根根尖尖。实 验 方 法法1、人口口腔粘膜膜上皮细细胞线粒粒体的超超活染色色与观察察清洁载玻玻片放在在37恒温水水浴锅的的金属板板上 滴2滴11/50000詹詹纳斯绿绿B染液液 用牙签口口腔颊粘粘膜处稍稍用力刮刮取上皮皮细胞 刮下的粘粘液状物物

23、放大载载玻片的的染液滴滴中 染色100l55minn(注意意不可使使染液干干燥，必必要时可可再加滴滴染液) 盖上盖玻玻片,显显微镜下下观察 2、植物物细胞液液泡系的的超活染染色与观观察 取豆芽的的根尖 用刀片片纵切根根尖 放入中性性红染液液滴中，染色55100minn。 吸去染液液，滴一一滴Riingeer液 盖上盖玻玻片进行行镜检(镊子轻轻轻地下下压盖玻玻片，使使根尖压压扁，利利于观察察) 实 验 结 果果 在高高倍镜下下，先观观察根尖尖部分的的生长点点的细胞胞，可见见细胞质质中散在在很多大大小不等等的染成成玫瑰红红色的圆圆形小泡泡，这是是初生的的幼小液液泡。然然后，由由生长点点向延长长区观

24、察察，在一一些已分分化长大大的细胞胞内，液液泡的染染色较浅浅，体积积增大，数目变变少。在在成熟区区细胞中中，一般般只有一一个淡红红色的巨巨大液泡泡，占据据细胞的的绝大部部分，将将细胞核核挤到细细胞一侧侧贴近细细胞壁处处。实验报告告（1）. 绘口口腔上皮皮细胞示示线粒体体的形态态与分布布 （2）. 绘蟾蟾蜍胸骨骨剑突软软骨细胞胞示液泡泡系的形形态与分分布实验五 叶绿体体的分离离与荧光光观察叶绿体是是植物细细胞所特特有的能能量转换换细胞器器，光合合作用就就是在叶叶绿体中中进行的的, 由由于具有有这一重重要功能能，所以以叶绿体体一直是是细胞生生物学、遗传学学和分子子生物学学的重要要研究对对象。叶叶绿

25、体是是植物细细胞中较较大的一一种细胞胞器，利利用低速速离心即即可分离离集中进进行各种种研究。 实 验 目 的的 1. 通通过植物物细胞叶叶绿体的的分离, 了解解细胞器器分离的的一般原原理和方方法。 2. 观观察叶绿绿体的自自发荧光光和次生生荧光, 并熟熟悉荧光光显微镜镜的使用用方法。 实 验 原 理理 将组织匀匀浆后悬悬浮在等等渗介质质中进行行差速离离心，是是分离细细胞器的的常用方方法。一一个颗粒粒在离心心场中的的沉降速速率取决决于颗粒粒的大小小、形状状和密度度，也同同离心力力以及悬悬浮介质质的粘度度有关。在一给给定的离离心场中中，同一一时间内内，密度度和大小小不同的的颗粒其其沉降速速率不同同

26、。依次次增加离离心力和和离心时时间，就就能够使使非均一一悬浮液液中的颗颗粒按其其大小、密度先先后分批批沉降在在离心管管底部，分批收收集即可可获得各各种亚细细胞组分分。 叶绿体的的分离应应在等渗渗溶液(0.335mool/LL氯化钠钠或0.4mool/LL蔗糖溶溶液)中中进行, 以免免渗透压压的改变变使叶绿绿体到损损伤。将将匀浆液液10000r/minn的条件件下离心心2miin, 以去除除其中的的组织残残渣和未未被破碎碎的完整整细胞。然后，在30000rr/miin的条条件下离离心5mmin，即可获获得沉淀淀的叶绿绿体(混混有部分分细胞核核)。分分离过程程最好在在055的条件件下进行行；如果果

27、在室温温下，要要迅速分分离和观观察。 利用荧光光显微镜镜对可发发荧光的的物质进进行检测测时，将将受到许许多因素素的影响响，如温温度、光光、淬灭灭剂等。因此在在荧光观观察时应应抓紧时时间, 有必要要时立即即拍照。另外，在制作作荧光显显微标本本时最好好使用无无荧光载载片、盖盖片和无无荧光油油。 实 验 用 品品 一、器材材 1.主要要设备: 普通通离心机机、组织织捣碎机机、粗天天平、荧荧光显微微镜。 2.小型型器材: 5000mll烧杯22个, 2500ml量量筒1个个, 滴滴管200支, 10mml刻度度离心管管20支支, 试试管架55个，纱纱布若干干，无荧荧光载片片和盖片片各4片片。 二、材料

28、料 新鲜鲜菠菜。 三、试剂剂 0.35mmol/L氯化化钠溶液液，0.01%吖啶橙橙(accriddinee orrangge)。 实 验 方 法法 一、叶绿绿体的分分离与观观察 1. 选选取新鲜鲜的嫩菠菠菜叶，洗净擦擦干后去去除叶梗梗脉，称称30gg于1550mll 0.35mmol/L NNaCll溶液中中，装入入组织捣捣碎机。 2. 利利用组织织捣碎机机低速(50000r/minn)匀桨桨355minn。 3. 将将匀浆用用6层纱纱布过滤滤于5000mll烧杯中中。 4. 取取滤液44ml在在10000r/minn下离心心2miin。弃弃去沉淀淀。 5. 将将上清液液在30000rr/m

29、iin下离离心5mmin。弃去上上清液，沉淀即即不叶绿绿体(混混有部分分细胞核核)。 6. 将将沉淀用用0.335mool/LLNaCCl溶液液悬浮、 7. 取取叶绿体体悬液一一滴滴于于载玻片片上，加加盖玻片片后即可可在普通通光镜和和荧光显显微镜下下观察。 (1)在在普通光光镜下观观察。 (2)在在荧光显显微镜下下观察叶叶绿体的的直接荧荧光。 (3)在在荧光显显微镜下下观察叶叶绿体的的间接荧荧光：取取叶绿体体悬液一一滴滴在在无荧光光载片上上，再滴滴加一滴滴0.001%吖吖啶橙荧荧光染料料, 加加盖片后后即可在在荧光显显微镜下下观察。 二、菠菜菜叶手切切片观察察 用剔须刀刀片将新新鲜的嫩嫩菠菜叶

30、叶切削出出一斜面面置于载载玻片上上，滴加加122滴0.35mmol/L NNaCll溶液，加盖片片后轻压压，置显显微镜下下观察。 (1)在在普通光光镜下观观察。 (2)在在荧光显显微镜下下观察其其直接荧荧光。 (3) 观察其其间接荧荧光：向向所制手手切片上上滴加112滴滴0.001%吖吖啶橙染染液，染染色1mmin，洗去余余液, 加盖片片后即可可在荧光光显微镜镜下观察察其间接接荧光。 实 验 结 果果 一、叶绿绿体的分分离和观观察 1. 普普通光镜镜下，可可看到叶叶绿体为为绿色橄橄榄形，在高倍倍镜下可可看到叶叶绿体内内部含有有较深的的绿色小小颗粒，即基粒粒。 2. 以以Olyympuus荧光光

31、显微镜镜为例，在先用用B(bbulee)激发发滤片、B双色色镜和OO5300(orrangge)阴阴断滤片片的条件件下，叶叶绿体发发出火红红色荧光光。 3. 加加入吖啶啶橙染色色后，叶叶绿体可可发出桔桔红色荧荧光，而而其中混混有的细细胞核则则发绿色色荧光。 二、菠菜菜叶手切切片观察察 1. 在在普通光光镜下可可以看到到三种细细胞 (1)表表皮细胞胞: 为为边缘呈呈锯齿形形的鳞片片状细胞胞; (2)保保卫细胞胞: 为为构成气气孔的成成对存在在的肾形形细胞；(3)叶肉细细胞: 为排列列成栅状状的长形形和椭圆圆形细胞胞。叶绿绿体呈绿绿色橄榄榄形，在在高倍镜镜下还可可以看到到绿色的的基粒。 2. 在在

32、荧光显显微镜下下，叶绿绿体发出出火红色色荧光，但其荧荧光强度度要比游游离叶绿绿体弱, 气孔孔发绿色色荧光，两保卫卫细胞内内的火红红色叶绿绿体则环环绕气孔孔排列成成一圈。表皮细细胞内的的叶绿体体数量要要比叶肉肉细胞少少。 3. 用用吖啶橙橙染色后后，叶绿绿体则发发出桔红红色荧光光，细胞胞核可发发出绿色色荧光, 气孔孔仍为绿绿色。 作 业 1. 在在普通光光学显微微镜下，用目微微尺和台台微尺测测量一下下叶绿体体的长轴轴和短轴轴，分别别测量55100个叶绿绿体，求求其平均均值。 2. 在在荧光显显微镜下下，观察察叶绿体体的自发发荧光时时，更换换滤镜系系统，叶叶绿体的的颜色是是否有变变化？ 3. 游游离叶绿绿体和整整体细胞胞内的叶叶绿体，在荧光光显微镜镜下，其其颜色和和强度有有无差异异？为什什么？ 思 考 题 1. 叶叶绿体分分离的实实验原理理是什么么？在分分离叶绿绿体时应应注意些些什么问问题？ 2. 普普通光学学显微镜镜与荧光光显微镜镜有何异异同点？