2009 全国艾滋病检测技术规范全篇.doc

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1、第一章 样品的采集和处理 1 范围本章规定了用于人免疫缺陷病毒HIV检测的全血、血清、血浆、细胞、唾液、尿液以及滤纸干血斑DBS样品的采集和处理方法，适用于HIV抗体咽侧、抗原检测、耐药检测，CD4+和CD8+T淋巴细胞测定和HIV别离培养。3 样品种类及相应的用途3.1 全血、血清、血浆、唾液、尿液以及DBS样品可用于HIV抗体检测3.2 抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定。3.3 血浆可用于HIV-1病毒载量、基因型及耐药测量。DBS样品可用于HIV-1基因型及耐药检测。3.4 全血、血浆、淋巴细胞富集液、外周血液巴细胞PBMC及DBS样品可用于HIV核酸的定型检测。3.5 P

2、BMC、全血淋巴细胞富集液等可用于HIV-1别离培养4 操作步骤4.1 采样前准备根据检测工程的具体要求，确定采集样品的种类、处理、保存及运输的时限和方法，按照临采血技术标准的要求操作，遵守生物按照要求参见本标准第八章实验室生物平安，要监察所需物品是否已备齐，是否在有效期内，油污破损，是否足量，特点应检查受检者心里与样品容器外表的标记是否一致，并注明样品采集时间。选择适宜的室内外采血空间，受检者坐卧于适合的位置，准备采血用具、皮肤消毒用品、采血管及试管架、硬质废物容器等。 样品的编号和记录 应制订样品编码的标准操作程序SOP，规定样品编号的原那么和方法，为样品制订唯一性编码编号，保证期唯一性。

3、 采血前，先对装有样品的离心管或滤纸进行标记，核对后编码。要将标签贴在试管的侧面，最好使用预先印制好的、专门用于冷冻储存的耐低温标签。 应使用专门的样品记录本或登记表记录样品，同时率如电脑保存。4.2 血液.2 抗凝全血：消毒局部皮肤，用加有抗凝剂EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠的真空采血管抽取适量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移甚加有抗凝剂的事关重，轻轻颠倒缓匀68次，备用。.2 末梢全血：消毒局部皮肤成人和1岁以上儿童可训练耳垂、中指、无名指或食指。1岁以下儿童采用足跟部。采取血针刺破皮肤，用无菌纱布擦掉第一滴血。收集滴出的血液，备用。.3 血液：将采集的抗凝全血1500300

4、0r/min离心15min，上层即为血液，吸出至于适宜的容器中，备用。.5 淋巴虚报富集液：将采集的抗凝劝学15003000r/min离心15min，吸取血浆层下的淋巴细胞富集液，置于适宜的容器中，备用。.6 PBMC：使用淋巴细胞别离液近来密度梯度离心，吸收PBMC层，备用。.7 根据检测要求选用适当的抗凝剂，如CD4+CD8+T淋巴细胞测定可选用EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠，HIV病毒别离、核酸定型=定量检测可选用EDTA钠盐或加盐或枸橼酸钠。.8 样品采集或处理、保存、运输的时限和条件，因不同的检测工程而异，应参见不同样册工程要求。.9 采血完成后的穿刺枕头必须迭起与锋利危险品容

5、器里，妥善处理，防止发生职业暴露。 滤纸干血斑.1 根据需要，可将采集的的中血液样品制备成滤纸干血斑，保存、运输机检测。最常用的是用抗凝血、末梢全血和血浆制备滤纸干血斑。.2 用溢液器从样品管中吸取100ul抗凝全血或血浆样品，对准滤纸印圈的中心处，将样品滴在滤纸上，或将穿刺后自皮肤伤口列出的末梢全血直接滴加在滤纸印圈的中心处。.3 根据需要，连续在数个印圈上滴加样品。.2.4 于师温下自然枯燥至少4小时潮湿气侯下至少枯燥24小时，不要加热堆叠血斑，勿与其他截面接触。.5 血斑充分枯燥后，匠气放入密封贷中，防止血斑之间的相互濡染，同时放入枯燥剂及湿度指示卡，密封包装，保存备用。 尿液和唾液.1

6、 尿液：使用听节的容器收集尿液。女性应避开月经期。尿液样品可以在28oc下存放。存放时间、是否冻村以及是否添加防腐剂以试剂盒说明书为准。.2 唾液：使用试剂盒提供的容器收集唾液样品。存放时间和是否冻村以试剂盒说明书为准。4.3 样品的保存 用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期1周内坚决检测的可存放于28oc，一周以上应存放于-20oc以下。 用于核酸检测的血液和学和保养品4天内坚决检测的可存放于4oc，3个月以内应存放于-20oc务一下。3个月以上应至于-70oc以下。椅子并言侧筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送确证实验室，筛查阴性样品，可根据具体需要决定保存时间，建议至少保存12隔越。

7、特殊用途或专项工程的样品根据具体要求确定保存时间。 艾滋病检测确实实验室受到的筛查阳性样品，以后确证结果如何，均应将生育的样品保存至少10年，特殊用途或专项工程的样品根据具体要求确定保存时间。4.4 样品的运送 应采用三层容器对样品坚决包装，虽样品应富有与样品唯一性便面相对应的送检单。送检单应说明受检者姓名、样品种类等信息，并应放置在第二层和第三层容器之间。.1 第一层容器：直接装样品，应防渗漏。样品应至于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，说明样品的唯一性编码或受检者姓名、种类和采集时间，在试管的周围应垫有缓冲溪水材料，以免碰碎。.2 第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装假设干个第一层容

8、器。要求不易破碎、带盖防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。.3 第三层容器：容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的姚谦，著名数量、收样和发件人及联系方式，同时要著名“小心轻放、防止日晒、小心水侵、防止重压等字样，还应易于消毒。.4 用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。用于CD4+和CD8+T淋巴细胞制订的样品应在室温下1825oc或4oc特殊要求时运送，用于病毒在两检测的样品应在-20oc以下运输，DBC样品应在室温下1825oc运送，每一件包装的体积以不超过50ml为宜。.5 运送样品必须有记录。.6 特殊情况下经有关部门批准可以用特快专递邮寄样品，但必须按三层包

9、装，将样品管包扎好，严禁使用玻璃容器。4.5 样品的接受 样品包裹比拟在具有处理感染性材料能力的实验室内、有经过培训的、穿戴防护衣、戴口罩、防护眼睛的工作人员在生物按照柜中翻开，用后的包裹应及时进行消毒。 核对样品与送检单，检查样品关油污破损和溢漏。如发现溢漏应立即将上存留的样品溢出，对样品管和盛器消毒，同时报告实验室负责任和上一级实验室技术人员。 检查样品的状况，记录油污严重溶血、微生物污染、血脂给高一级黄疸等情况，如果污染过重或者认为样品不能被接受，应将样品平安废弃。并将样品情况立即通知送样人。 接受样品时应填写样品接收单。第二章 HIV抗体检测1 范围 本章规定了HIV抗体的检测方法、程

10、序、结果报告、检测策略及质量控制。适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检测检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者诊断和检测的实验室依据。3 HIV抗体检测实验室要求 应符合?全国椅子并检测工作管理方法2006?中实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。 实验室的质量保证核试验是平安防护按本标准相关章节规定执行。4 HIV抗体检测的目的4.1.1 HIV抗体检测可用于诊断、血液筛选、检测等。4.1.2 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况，包括临床检测、资源咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。4.1.3 以血液筛拴为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括献血员

11、筛选核原料血浆筛查。4.1.4 以检测为目的的检测是为了了解不同人权XIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。4.2 HIV抗体检测的要点4.2.1 根据目的的选择检测方法及检测策略。4.2.2 严格遵守实验室SOP。4.2.3 筛查试验阳性，需作确证试验。 筛查试验阳性，不应做确证试验。 筛查及确证实验阳性均应作好咨询工作。5 以诊断为目的的检测策略5.1 常规HIV抗体检测的方法和程序 HIV抗体检测分为筛查试验包括初筛和复检和确证试验。5.1.1 筛查试验.1 筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理注册批准、在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用临床

12、质量评估敏感性和特异性高的试剂。5.1.1.2 筛查样品HIV抗体筛查可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液样品。.3筛查方法（1） 酶联免疫吸附试验ELISA可使用血液、唾液、尿样两品，ELISA多为单纯XIV抗体检测试剂。HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIVIPZW抗原和HIV1/2抗体。HIV抗原和抗体包被于固相载体，参加待检样品和酶标记的HIV开元或楷体，加底物显色，用酶标仪测定结果。药效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。（2） 化学发光或免疫荧光试验这类试剂采用发功或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体。HIV抗原或抗体包被与载体，参加待检样品和酶或荧光标

13、记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物，用光或荧光仪测定结果。有效试验的，阴性和昂性对照必须符合试剂盒规定。（3） 开素检测RT及其他检测实验 这类试验简便快速，适用于应急检测、门诊集镇检测。一般可在1030分钟内得出结果。 明胶颗粒凝集实验PA：是HIV血清抗体检测的一种简便方法。将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待样品作用，当待样品还有HIV抗体时，明胶颗粒与抗体发生凝集反响，根据凝集情况判读结果。PA实际有两种：同时检测HIV1和HIV2抗体以及分别检测HIV1和HIV2抗体。有效试验必须有阴性和阳性质控。免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免疫胶体金或胶体硒快速试验：军以硝酸纤维膜为载

14、体，HIV抗原点状固定在膜上，家待检样品。阳性结果在膜上抗部位显示出有色斑点。反响时间在10分钟以内。有效试验的质控点必须显色。免疫层试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原线固定在膜上，待检样品血液或唾液沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位现实出有色条带。有效试验的质控带必须显色。筛查程序.4 筛查程序1初筛试验根据检测目的自选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检测，对呈阴性反响的样品，可出具HIV抗体阴性一报告：对呈阳性反响的样品，需要进一步作福建试验和确证试验。2复检试验对初筛呈阳性反响的样品，应使用原油试剂盒另外一种不同原理或厂家的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验：

15、如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，作复查必须包括一种抗原抗体联合试剂。如两种试剂复检均呈阴性反响，那么报告HIV抗体阴性一；如军呈阳性反响，或一阴一阳，需送艾滋病清正实验室进行确证试验图1。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反响，而抗体试剂检测为阴性反响，那么应考虑进行HIV1p24抗原或核酸检测，必要时进行随访。艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反响的样品，确实实验室可以直接进行确证实验。3初筛和复检流程图1 样品样 品 筛查试剂初筛试验阴性反响阳性反响 原有试剂+另一部同原理或厂家 试剂或另外两种不同原理或厂家 试剂复检试验均阴性反响均阳性反响一阴一阳确证试验报告阴性图1 HIV抗体筛查检测流

16、程4筛查试验结果的报告HIV抗体筛查试验用附表1进行报告，阴性反响报告为“HIV抗体阴性一；阳性反响报告为“HIV抗体待复检。5筛查试验呈阳性反响样品的转送如需送上级时间是进行复检，需要核对身份，补充个人信息如姓名和身分证号码，必要时采集第二份学样，持HIV抗体筛查报告，送当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送实验室复检。HIV抗体复查试验用附表2进行报告，两次检测均阳性或一阴一阳报告为“HIV抗体待清正；两次检测均阳性报告为“HIV抗体阴性一；，HIV抗体复检报告需由1名检验人员和1名审核人员签字。 确证试验.1 确证试剂 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。.2 确证样品

17、 可采用血清、血浆一滤纸干血斑样品。.3 确证方法 包括免疫印迹试验WB、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验RIPA及免疫荧光试验IFA等。.4 确证流程图2使用HIV1/2混合型试剂进行检测，如果呈阴性反响，那么报告HIV抗体阴性一；如果呈阳性反响，那么报告HIV-1抗体阳性+；如果不是阴性反响，但又不满足阳性判断标准，那么报告HIV抗体不确定()。结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展霍城阴性反响，那么报告阴性；如随访器件出现阳性反响，那么报告阳性；如苏方器件带型有进展，但不满足阳性并准，应继续随访到8周，如带型没有进展霍城阳性反响那么报告阳性；满足HIV抗体阳性诊断标准那么报

18、告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访，随访器件可根据需要，检测病毒核酸或P24抗原作为辅助诊断。如果出现HIV2型的特异性只是条带，根据实际情况需用HIV2型免疫印迹试剂再做HIV2的抗体确证试验或HIV2核酸检测，以进一步明确HIV2感染状态，疑难样品送国家艾滋病参比实验室进一步分析。筛查试验阳性反响样品 确证试剂阴性反响出现HIV-2指示条带HIV-1阴性反响不确定反响根据具体情况进一步检测HIV-2报告HIV-1阳性报告阴性结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展霍城阴性反映，那么报告阴性；如随访器件出现阳性反映，那么报告阳性；如随访器件带型有进展，但不满足阳

19、性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展霍城阳性反映那么报告阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准那么报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。图2HIV抗体确证检测流程.5 HIV抗体确证实验结果的判定1HIV1抗体阳性 同时符合以下2条标准可判为HIV1抗体阳性：至少有2条env带gpwd和gp120出现，或至少1条env带和p24带同时出现；符合试剂盒提供的阳性判定校准。2HIV2抗体阳性出现HIV2型特异性指示带的样品；如果同时呈HIV1抗体阳性反响，报告HIV1抗体阳性，不推荐进一步做HIV2抗体确证实验：如何同时呈HIV1抗体不确定或阴性反响，需用HIV2型确证试剂再做HIV

20、2的抗体确证试验。同时符合以下二条标准，即出现至少2条env带gp36和gp140/gp105，和试剂盒提供的阳性判定标准，可潘玮HIV2抗体阳性。3HIV抗体不确定出现HIV抗体特异带，但缺乏以判定阳性。注：1HIV1抗体特异带包括：env带：gp160=gp120、gp41；gag带：p55、p24、p17或p18；pol带：p66或p65、p51、p31。2HIV2楷体特异带包括：env带；gp140/gp105、gp36；gag带：piu、pzu、pdu；pol带：p68、p53、p34。由于使用的毒株不同，喜鹊2env带也可谓gp125/gp80、gp36。4HIV抗体阴性无HIV抗

21、体特异带出现。.6 HIV抗体确证试验结果报告HIV抗体确证实验结果用附表3报告 1符合HIV1抗体阳性判断标准，报告“HIV1抗体阳性+，并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作，符合HIV2抗体阳性判断标准，报告“XIV2抗体阳性+并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。2符合XIV抗体阴性判断标准，报告“XIV抗体阴性一，如疑似“窗口期感染，建议进一步做XIV核酸检测，尽早明确诊断。3符合XIV抗体不确定判断标准，报告“XIV抗体不确定，在备注中应著名“4后复检。.7 发出确证报告的同时要做好检测后咨询。.8 HIV抗体确证报告由检测者，复核人员和签发人员签字后，按原送检程序反响一

22、式三份确证实验室一份、送检单位一份、患者一份。如确证对于户口不属于本辖区，确证报告应同时抄送感染者户口所在地的省艾滋病确证中心实验室。其他系统确证的地方人员，也应及时向当地卫生行政部门和省艾滋病确证中心实验室报告。.9 省艾滋病确证中心实验室难以确证的样品，送国家艾滋病参比实验确证。同一受检对象的样品在不同实验室得到不一致确实证结果时由国家艾滋病参比实验室予以仲裁。5.2 其他HIV抗体检测的方法和程序 VCT替代检测策略除筛数常规检测程序以外，对HIV高流行地区高危人权的VCT检测，可采用替代策略。 .1 使用要求使用替代策略，应在确证中心实验室和确证实验室或以上实验室制订的筛查实验室进行，

23、用临床试剂质量评估敏感性和特异性高的筛查试剂检测。使用该策略判断结果，阳性报告须由确证中心实验室和确证实验室或以上实验室认可的筛查实验室出具。.2 检测程序及结果报告图3 送检样品 筛查试剂1高敏感性阳性反响 阴性反响 筛查试剂2高敏感性阴性反响阳性反响筛查试剂3高敏感性ELISAS/CO确证试验阴性反响阳性反响不确定随访报告阴性报告阳性图3 高危人群VCT检测流程1先用第一种筛查试剂高敏感性检测，出现阴性应报告HIV楷体阴性，出现阳性反响那么报告“XIV抗体待复检，用第二种筛查试剂复检。2第二种筛查试剂高特异性复检，出现阴性反响进行确证实践，出现阳性反响用第三种筛查实际进行确证。3第三种筛查

24、实际高特异性ELISA检测结果阴性那么报告HIV抗体阴性；检测结果阳性，且S/CO比值大于或等于6.0者，可以出具“HIV1抗体阳性+报告，使用“HIV抗体替代策略检测报告单5.9之间，须进行确证试验。按照确证试验结果报告。 .3 在发放检测报告的同时上报疫情，.4 做好检测后咨询。 HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测策略及流程图4 .1 使用范围 HIV感染产妇所生婴幼儿；已满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床骇异HIV感染的儿童。 .2 检测程序及结果报告 1婴儿满12个月进行第一次HIV抗体检测。使用两种不同原理或布头床架筛查试剂进行抗体检测，

25、两种筛查试剂检测结果均为阴性反响，包括“HIV抗体阴性一，可排出感染。检测结果出现阳性反响一种为阴性反响一种为阳性范围或两种均呈阳性反响，局部排出感染，应继续追踪随访，至儿童满18个月时再次进行HIV抗体检测。 2婴儿满18个月时应再次进行HIV抗体检测。使用两种不同原理或不同厂家筛查试剂进行抗体检测。两种筛查试剂的检测结果均为阴性反响，报告“XGV抗体阴性一，可排出感染。言侧出现阳性反响一种为阴性反响一种为阳性范围或两种均呈阳性反响，进一步进行确证实验，根据确证试验的结果判断是否感染HIV图4。 3在发放检测报告的同时上报移情。 4做好检测咨询。 艾滋病病毒感染产妇所生儿童 12个月进行HI

26、V抗体筛查试验 阴性 阳性 用另一种不同原理或不同厂家生产的筛查试剂再次检测 阴性 阳性18个月时再进行HIV抗体筛查试验 阴性 阳性用另一种不同原理或不同厂家的筛查试剂再次检测 阴性 阳性 确证试验 阴性 不确定 阳性提供咨询，继续随访，4周后再次进行确证试验报告HIV抗体检测结果阴性报告HIV抗体检测结果阳性图4 艾滋病感染产妇所生儿童HIV抗体检测流程 HIV新近感染检测 HIV常规抗体检测方法可以判定感染和未感染状态，新近感染检测方法那么用于识别近期感染与既往感染。目前，检测HIV新近感染的血清学方法中，研究和应用最多的是BEDEIA HIV1捕获EIA方法BEDCEIA，其原理是根据

27、HIV特异性IgG占总IgG抗体的比例随着感染时间的延长而逐渐增高。应用BEDCEIA进行新近感染检测只适用于HIV阳性样品，由于个体间抗体声称的变异性，对个体而言，BED结果的预测值偏低 在个体水平上，BED检测可能产生一定的假阳性和假阴性，但在人群水平上，假阳性的数目与假阴性的数目杨晋，因次可以相互抵消彼次的作用，美国FDA将BEDCEIA归为“只应用于检测目的，不能用于个体诊断和临床的实验方法，该方法用于检测及发病率计算的条件参见“HIV新近感染检测方案。 .1 新近感染检测样品的入选标准 1新近感染检测必须应用诊断为HIV1阳性的血样，简直将HIV阴性样品纳入新近感染检测。2使用替代策

28、略近来常规检测的地区，假设将其HIV阳性样品纳入新近感染检测，对于BEDCEIA抗体梯度试验检测0Dn值0.3的样品，需要对该样品进行确证检测，以排出潜在的HIV阴性样品。3用于新近感染检测的样品，可以使用常规检测确证为HIV阳性的剩余/库存样品，不必重新采样。样品必须按照要是保存在-20oc以下，反复冻熔次数小于三次。 4每份样品量不少于0.5ml。要求清亮、无严重溶血。 5没有交叉污染、个案信息全面准确。 6用于新近感染检测的阳性样品数量必须占总阳性样品的80%以上，否那么不推荐纳入新近感染检测。 7如果统一人在3个月内出现2份或2份以上确实证阳性样品，将第一份样品纳入新纳入新近感染检测，

29、其余样品从总样品种删除。.2 新近感染检测样品排出标准 1已经向检测系统报告过的感染者的样品非初次诊断阳性者，该样品采集时间距HIV阳性检测纪律已经超过3个月。2所有艾滋病病人样品。3所有接受抗病毒治疗人样品。.3 参加新近感染检测的实验室每年至少接受二次国家参加实验室组织的能力验证PT，通过考核前方可开始检测。6 以检测为目的的检测策略 6.1 使用范围 全国艾滋病疫情检测。 6.2 检测程序及结果报告图5 先用第一种筛查试剂高敏感性ELISA检测，出现阴性反响报告“HIV抗体阴性一， 5.9之间，或复检结果出现阴性反响，应进一步作确证试验，按照确证试验的标准判断结果图5。 发放检测报告的同

30、时上报疫情。 对报告阴性者做好检测后咨询。 本程序仅用于流行病学检测和无关联检测，结果不值得报告给个人。第三章 HIV1抗原检测1 范围本章规定了HIVIP24抗原检测的方法和用途。适用于对人血液标本和病毒培养上清液中HIV1P24抗原的检测。3 HIV1P24抗原检测的意义3.1 HIV1感染窗口期、HIV抗体不确定或HIV1阳性母体所生婴儿的鉴别诊断。3.2 第四代HIV检测试剂的阳性结果的辅助诊断。3.3 检测病程进展或抗病毒治疗效果。3.4 HIV分别培养，病毒复制状况的监测。4 实验室要求同HIV抗体检测。5 检测方法及程序5.1 试剂：矿体夹心ELISA方法，应使用经国家药品监督管

31、理局批准注册的试剂。5.2 样品：血清、血浆或病毒培养上清液。5.3 硬性检测5.31 筛选试验按照试剂盒说明书提供的要准判断有反响或无反响。 确证试验 是24开元的中和试验，用于排出筛选试验的假阳性。吊检样品先与中和剂P24抗原的抗体共同孵育，如果样品中存在P24抗原，中和抗体将阈值结合形成复合物，而不能与固定载体上的捕获抗体结合。然后，用这样处理过的样品重复筛选实验的步骤，同时作一孔未中和的原始样品对照，将中和与未中和孔的0D值进行比拟，如果中和孔的0D值下降50%以上，认为样品中的P24抗原是真正的阳性；如果中和孔没有出现0尔德值下降，认为P24抗原的反响性可能是假阳性，需要作RNA言侧

32、或随访作进一步确证。 5.4 定量检测 将P24抗原的标准物质稀释成包含0.0和125pg/ml而二哥浓度在内的六个不同浓度的系列标准，进行检测。以横坐标为P24抗原的浓度pd/ml，纵坐标为0D值，绘制出标准曲线，侧出未知标本的0D值以后，在标准曲线上查出抗原的浓度。如果未知标本的0D值超出标准曲线上最高抗原浓度的0D值，那么需用正常人血清将表笔稀释以后再形检测。 5.1 结果报告和解释 HIV1 P24抗原筛选试验有反响的标本必须经过中和试验确证已经才能判断阳性或阴性。 HIV2 P24抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能据次确认。 HIV1 P24抗原阳性结果不能排出HIV感染。

33、 检测病程今人或抗病毒治疗效果应进行HIV1 P24抗原的定量检测。6 质量保证和质量监控1P24抗原检测的根底培训。6.2 定型检测时，内部对照应满足试剂盒规定的条件，还可以使用含有中等浓度HIV1P24抗原的质控品血液或病毒培养上清液作为外部对照，按照常规的质控方法，绘制质控图，进行外部质控。中和试验应使用试剂盒提供的中和抗体，使用P24抗原阳性的样品作为阳性对照，阳性对照的中和孔，0D值应下降50%以上。6.3 定量检测时，0.0和125pg/ml六六二个浓度的O1值应在试剂盒说明书规定的范围内。 第四章 HIV 核酸检测 1 范围 本章规定了HIV核酸定型和定量检测病毒载量的意义、实验

34、室要求、检测方法、质量控制及结果判定标准，适用于HIV1核酸的定型检测和病毒载量的测定。3 核酸检测的意义3.1 早期诊断 婴儿的早期诊断HIV感染母亲所生小雨18个月龄的婴儿，不同时间的两次HIV核酸检测均为阳性即可作出诊断。18个月龄以上而且诊断与成人相同：有极性HIV感染综合症或流行病学史，且不同时间的两次HIV核酸检测解决均为阳性，即可诊断。也可使用多样品吉诃德方法，对采供机构的原料血浆以及HIV抗体阴性的告慰人群样品进行集合核酸检测，及时发现窗口期感染，降低“剩余危险度，减少二代传播。3.2 疑难样本的辅助诊断 在一般情况下，HIV抗体检测足以对HIV感染与否作出正确诊断，但在特殊情

35、况下，单纯HIV抗体检测解决不能进行明确的诊断，如在感染早期或疾病终末期出现抗体不确定反响时，RNA的层定解决可帮助提供HIV感染早期或重末期的证据。由于试剂的灵敏度、接受有效的抗病毒治疗后以及存在长期低水平病毒的少数感染者等原因，应对其他检测数据和样品背景情况近来综合判断。3.3 遗传变异监测可用于HIV分子流行病学检测，包括HIV1和HIV2感染的鉴别诊断、HIV感染传播链的分析、HIV基因亚型和充足病毒的鉴定和分析以及人群HIV遗传编译趋势的检测。 3.4 耐药性检测 可用于HIV耐药检测和监测，知道公共卫生医生了解耐药性病毒株流行的态势和知道临床医生判断开并度治疗效果和修改开对度治疗方

36、案。3.5 病程监控及预测 HIV感染发生后病毒载量病人具有一定规律，这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。因次定期进行病毒载量检测有助于确定疾病开展的阶段，以确定相应的治疗方案。HIV病毒载量与6年发病率的关系为：病毒在两30，000c/ml时那么为80%。HIV感染者CD4+T细胞计数200ul无视，病毒载量与36个月开展至AIDS的危险为，病毒载量/ml时为22.4%。 3.6 知道抗病毒治疗及疗疗效 通常在病毒载量大家一定水平后如35，00050，000c/ml抗病毒治疗才现实良好的治疗效果。治疗后，通过病毒水平的检测能力确定治疗是否有效。通常在治疗6个月后病毒水平降低0.5log以上

37、才被认为临床有效。4 HIV核酸检测实验室要求HIV核酸检测应在适宜的实验室中进行，应建立与实验和实施言管理相关的标准操作指导书和制订严格的管理制度，工作人员比拟充分了解各项规定并严格遵照执行。4.1 实验室分区和功能 实验室应设置两个独立的工作区域：核酸扩增前区和核酸扩增后区。核酸扩正前区包括试剂准备区和样品处理去，设在不同房间或区域；核酸扩增后包括扩增区和扩增超分析区，设在不同的房间或区域。歌曲的功能是： 试剂准备区：扩增试剂的储藏、配制和分装。 样品处理去：样品等级、处理和粉状；核酸提取、保存和使用，PCR扩增的第一轮家养。 扩增去：核酸扩增。如果再次区进行套式PCR的第二轮家养，应在P

38、CR防护找内进行。 扩增产物分子区：扩增产物的电泳、杂交、成像、序列测定、结果分析、等级及报告。 在满足以下要求的前提下，核酸扩增前区或核酸扩增后区可设在一个房间内： .1 核酸扩增前区实验室内设置两个不同位置的实验区，试剂配制在超净工作台中操作，样品矗立在生物平安介内操作。.2 在核酸扩增后区使用权封闭的扩增和检测系统时，如实时荧光PCR仪等。.3 每个实验人员使用各自的试剂、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。.4 在实验前后对操作区域和共享器具进行情节及消毒。.5 各区域的试剂、器具、仪器和设备为该区专用，不得交叉使用。4.2 实验室人员和要求 近来HIV核酸检测的人员须具有艾滋病检测实验室

39、的上岗资格，接受过省级以上的实验操作技术及艾滋病实验室生物平安培训及厂家的培训。4.3 实验室设施和设备 根据检测工程配备相应的设施和设备。 各区域的设施和设备为专用，应根据实验要是在相应区域配制。 试剂试剂准备去：配置冰箱、超净工作台、普通离心机、加样器、振荡器、废气物容器、可移动紫外灯。 样品处理区：配制-80oc冰箱、生物平安局、高速制冷离心机、加样器、制冰器或制冷模块、恒温水浴或干浴、上下水设备、废弃容器、紫外灯。 扩增区：配制核酸扩增仪、普通冰箱、无层流PCR操作柜或超净工作台、微型离心机、加样器、废弃物容器、紫外灯。 扩增产物分析区：配制电泳仪、电泳槽、加样器、自外透射仪、摄影/像

40、设备、普通冰箱、普通离心机、恒温水浴、微波炉、上下水设备、废气容器、紫外灯等。测序仪可安置在其他专门实验区。 各区域应使用专用或一系列工作服、孢子、口罩鞋及袖套、配制房紫外线眼镜。4.4 实验室生物平安 必须符合艾滋病实验室的通用生物平安要求。4.5 防止实验室核酸剩余Carryovnr污染设施。 严格执行实验室分区社制度 仪器、设备、材料、设施均应按工作区域近来师表、不得交叉昏庸。 单向工作流向制度.1 实验室的气流应从扩增前去流向扩增后去，不得逆向流动。建议扩增前去保持弱正压状态，扩增后去保持弱负压状况。.2 实验人员单向工作流向应该为：试剂准备区样品处理区扩增区扩增产物分析区，不得逆向流动。原那么上实验人员在扩增后区工作后当天不能再返回扩增前去工作。 .3 实验用品单向工作流向应该为：试剂准备区样品处理区扩增区扩增产物润色区，不得逆向流动。实验用品包括实验材料试剂、样品和扩增产物、实验器材容器、板架、实验服、帽子、口罩、手套、鞋套、办公用品记录纸、笔等、以及清洁材料等。 实验室防止核酸剩余污染的处理程序1%次氯化钠或涂布与操作台器具外表，两分钟后用纸巾擦净。.2 实验前移如所需试剂、耗材、样品以及盛放污染的物盛器。.3 用与定型与定量核酸1%次俗话那溶液涂布与操作台