巴比妥类药物分析(1).ppt

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1、第五章第五章 巴比妥类药物的分析巴比妥类药物的分析巴比妥类药物的分子结构通式巴比妥类药物的分子结构通式 5,5-取代的巴比妥类药物 5戊巴比妥戊巴比妥1,5,5-取代的巴比妥类药物 己琐巴比妥己琐巴比妥515，5取代的硫代巴比妥类药物 第一节第一节 结构与性质结构与性质 一、结构分析 5,5取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物1,5,5取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物5,5取代的硫代巴比妥类药物取代的硫代巴比妥类药物区别各种巴比妥类药物 环状丙二酰脲、1,3-二酰亚胺基团 决定巴比妥类药物的特性 1.环状母核部分2.取代基部分二、性质（一）物理性质 1.白色结晶或结晶性粉未，具有固定的熔点

2、。2.游离巴比妥类药物微溶或极微溶于水，易溶于乙醇及有机溶剂；其钠盐则易溶于水，而不溶于有机溶剂。（二）化学性质 1.弱酸性 巴比妥类药物分子结构中都有1,3-二酰亚胺基团，能发生酮式和烯醇式的互变异构，在水溶液中可以发生电离，因此，本类药物的水溶液显弱酸性（pKa为7.38.4），可与强碱形成水溶性的盐类。与与强碱的成盐反应：强碱的成盐反应：2.水解反应（1）巴比妥类药物的水解）巴比妥类药物的水解（2）巴比妥类药物钠盐的水解）巴比妥类药物钠盐的水解3.与重金属离子反应（1）与银盐的反应（2）与铜盐的反应（3）与钴盐的反应）与钴盐的反应 无水无水:所用试剂均应不含水分。所用试剂均应不含水分。反

3、应条件：反应条件：碱性：异丙胺碱性：异丙胺（4）与汞盐的反应）与汞盐的反应巴比妥类药物巴比妥类药物+汞盐汞盐白色白色 （可溶于氨试液）（可溶于氨试液）4.与香草醛（与香草醛（vanillin）的反应的反应 5.紫外吸收光谱特征A.H2SO4溶液溶液(0.05mol/L)B.pH9.9缓冲溶缓冲溶液液C.NaOH溶液溶液(0.1mol/L)(pH 13)巴比妥类药物的紫外吸收光谱巴比妥类药物的紫外吸收光谱硫喷妥的紫外吸收光谱硫喷妥的紫外吸收光谱HCl 溶液溶液 (0.1mol/L)NaOH 溶液溶液 (0.1mol/L)巴比妥类药物的紫外吸收光谱特征和其电离的程度有关。5,5-取代的巴比妥类药物

4、，在酸性溶液中，因不电离，几乎无明显的紫外吸收。在pH10的碱性溶液中，发生一级电离，于240 nm波长处有最大吸收。在pH13的强碱性溶液中，发生二级电离，最大吸收红移至255 nm波长处。1,5,5-取代的巴比妥类药物，在酸性溶液中，因不电离，几乎无明显的紫外吸收。在pH10的碱性溶液中，发生一级电离，于240 nm波长处有最大吸收。在pH13的强碱性溶液中，发生一级电离，最大吸收仍在240 nm波长处。硫代巴比妥类药物在酸性或碱性溶液中，均有较明显的紫外吸收。TLC：生物样品分析生物样品分析 一一般般采采用用对对照照品品（或或标标准准品品）比比较较法法，要要求求供供试试品品斑斑点点的的R

5、f值值应应与对照品斑点一致。与对照品斑点一致。6、色谱行为特征、色谱行为特征TLC、HPLC 7、显显微微结结晶晶鉴鉴别别特特色色鉴鉴别别反应反应 巴比妥：长方形；巴比妥：长方形；苯巴比妥：球形苯巴比妥：球形花瓣状花瓣状生物样品分析生物样品分析1药物本身的晶形药物本身的晶形 巴巴比比妥妥 铜铜吡吡啶啶试试液液 十十字字形紫色结晶形紫色结晶 苯苯巴巴比比妥妥 铜铜吡吡啶啶试试液液 细细小不规则或似菱形的浅紫色结晶小不规则或似菱形的浅紫色结晶 2反应产物的晶形反应产物的晶形第二节第二节 鉴别试验鉴别试验 苯巴比妥 Ch.P（2005）【鉴别】（4）本品显丙二酰脲类的鉴别反应（附录）一、丙二酰脲类鉴

6、别反应附录 一般鉴别试验 取取供供试试品品约约 0.1g，加加碳碳酸酸钠钠试试液液1ml与与水水 10m1，振振摇摇 2分分钟钟，滤滤过过，滤滤液液中中逐逐滴滴加加入入硝硝酸酸银银试试液液，即即生生成成白白色色沉沉淀淀，振振摇摇，沉沉淀淀即即溶溶解解；继继续续滴滴加加过过量量的的硝硝酸酸银银试试液液，沉沉淀淀不不再再溶溶解。解。1.与银盐的反应 取取供供试试品品约约50mg，加加吡吡啶啶溶溶液液（110）5m1，溶溶解解后后，加加铜铜吡吡啶啶试试液液1m1，即显紫色或生成紫色沉淀。即显紫色或生成紫色沉淀。2.与铜盐的反应 巴比妥类的钠盐酸 游离巴比妥类药物 过滤 洗涤 干燥 测熔点 二、熔点测

7、定及衍生物熔点测定 1.熔点测定【鉴鉴别别】（1）取取本本品品约约0.5 g，加加水水5 ml溶溶解解后后，加加稍稍过过量量的的稀稀盐盐酸酸，即即析析出出白白色色结结晶晶性性沉沉淀淀，滤滤过过；沉沉淀淀用用水水洗洗净净，在在105干干燥燥后后，依依法法测测定定（附附录录 C），），熔点为熔点为174178。苯巴比妥钠 Ch.P（2005）【鉴鉴别别】取取巴巴比比妥妥0.5g，加加1mol/L碳碳酸酸钠钠溶溶液液5ml使使溶溶解解，加加4.5（W/V）对对硝硝基基氯氯苄苄的的乙乙醇醇溶溶液液10m1，在在水水浴浴上上加加热热回回流流30min，放放置置1h后后，滤滤过过，所所得得沉沉淀淀用用乙乙

8、醇醇进进行行重重结结晶晶后后，在在100105干干燥燥，测测定定衍生物的熔点，应为衍生物的熔点，应为150左右。左右。2.衍生物熔点测定鉴别衍生物熔点测定鉴别巴比妥巴比妥三.特殊元素及取代基的反应 司可巴比妥钠可使溴试液或碘试液褪色（1）不饱和烃取代基的反应 与溴试液或碘试液的反应 与KMnO4的反应 司可巴比妥钠可还原紫色的KMnO4为棕色的MnO2（2）芳环取代基的反应 硝化反应硝化反应 与NaNO2H2SO4反应 苯巴比妥与NaNO2H2SO4反应生成橙黄色橙红色 苯巴比妥与甲醛H2SO4反应生成玫瑰红色环 与甲醛H2SO4反应（3）硫元素的反应 苯巴比妥钠 Ch.P（2005）【鉴别】

9、（3）本品显钠盐的鉴别反应（附录）(4)、钠盐的鉴别反应钠盐的鉴别反应 1.焰色反应 取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色附录 一般鉴别试验 2.与醋酸氧铀锌反应 取供试品的中性溶液，加醋酸氧铀锌试液，即生成黄色(5)、特殊取代基或元素的反应 司可巴比妥钠 Ch.P（2005）【鉴别】（2）取取本本品品0.1 g，加加水水10 ml溶溶解解后后，加加碘碘试试液液2m1，所所显显棕黄色在棕黄色在5 分钟内消失。分钟内消失。1.不饱和烃取代基的反应 苯巴比妥 Ch.P（2005）【鉴别】（1）取本品约10 mg，加硫酸2滴与亚硝酸钠约5 mg，混合，即显橙黄色，随即转

10、橙红色 与亚硝酸钠硫酸的反应2.芳环取代基的反应（2）取本品约50 mg，置试管中，加甲醛试液1 ml，加热煮沸，冷却，沿管壁缓缓加硫酸0.5 ml，使成两液层，置水浴中加热。接界面显玫瑰红色 与甲醛硫酸的反应 注射用硫喷妥钠 Ch.P（2005）【鉴别】（3）取取本本品品约约0.2 g，加加氢氢氧氧化化钠钠试试液液5 ml与与醋醋酸酸铅铅试试液液2 ml，生生成成白白色色沉沉淀淀；加加热热后后，沉淀变为黑色。沉淀变为黑色。3.硫元素的反应异戊巴比妥、巴比妥异戊巴比妥、巴比妥 JP（14）【鉴鉴别别】取取异异戊戊巴巴比比妥妥或或巴巴比比妥妥0.2 g，加加氢氢氧氧化化钠钠试试液液10 m1，加

11、热煮沸，则产生具氨臭的气体。加热煮沸，则产生具氨臭的气体。水解反应水解反应戊巴比妥戊巴比妥 BP（2004）【鉴鉴别别】于于瓷瓷盘盘中中放放入入戊戊巴巴比比妥妥10 mg和和香香草草醛醛10 mg，加加浓浓硫硫酸酸0.15 m1，混混合合后后，放放在在水水浴浴上上加加热热30 s，即即产产生生棕棕红红色色。放放冷冷，加加96的的乙乙醇醇0.5 m1，颜色则转变为暗蓝色。颜色则转变为暗蓝色。与香草醛的反应与香草醛的反应 司可巴比妥钠 Ch.P（2005）【鉴别】（3）本本品品的的红红外外光光吸吸收收图图谱谱应应与与对对照照的的图图谱谱（光光谱谱集集137图）一致图）一致 八、红外光谱法八、红外光

12、谱法七、紫外吸收光谱特征七、紫外吸收光谱特征第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查 一、苯巴比妥一、苯巴比妥 1.酸度酸度 灵敏度法灵敏度法 2.溶液的澄清度溶液的澄清度 3.中性或碱性物质中性或碱性物质 提取重量法提取重量法二、司可巴比妥钠二、司可巴比妥钠 1.溶液的澄清度溶液的澄清度 2.中性或碱性物质中性或碱性物质 提取重量法提取重量法 终点指示：自身指示 电位法指示 Ch.P（2005）一、银量法1.原理 反应摩尔比：11溶剂系统：甲醇+3%无水碳酸钠第四节第四节 含量测定含量测定 苯巴比妥苯巴比妥 Ch.P（2005）【含量测定含量测定】取本品约取本品约0.2 g，精密称精密称定，加

13、甲醇定，加甲醇40 ml使溶解，再加新制的使溶解，再加新制的3无水碳酸钠溶液无水碳酸钠溶液15 m1，照电位滴照电位滴定法（附录定法（附录A），），用硝酸银滴定液用硝酸银滴定液（0.1 mol/L）滴定。每滴定。每1 ml 硝酸银滴硝酸银滴定液（定液（0.1 mo1/L）相当于相当于23.22 mg的的C12H12N2O3。2.测定方法测定方法3.注意事项注意事项（1）无水碳酸钠应新鲜配制）无水碳酸钠应新鲜配制（2）AgNO3滴定液应新鲜配制滴定液应新鲜配制（3）银电极使用前应进行处理）银电极使用前应进行处理 凡凡取取代代基基中中含含有有双双键键的的巴巴比比妥妥类类药药物物，其其不不饱饱和和键

14、键可可与与溴溴定定量量地地发发生生加加成成反反应应，故故可可采采用用溴溴量量法法进进行行测测定定。如如司司可可巴巴比比妥妥钠钠及及其胶囊的测定原理为：其胶囊的测定原理为：二、溴量法1.原理 I22Na2S2O32NaINa2S4O6KBrO35KBr6HCl3Br26KCl3H2O Br22KI2KBrI2 取溴酸钾3.0 g与溴化钾15 g，加水适量使溶解成1000 ml，摇匀。溴滴定液（0.05 mol/L）的配制：反应摩尔比11司可巴比妥钠司可巴比妥钠 Ch.P（2005）【含含量量测测定定】取取本本品品约约0.1g，精精密密称称定定，置置250ml碘碘瓶瓶中中，加加水水10m1，振振摇

15、摇使使溶溶解解，精精密密加加溴溴滴滴定定液液（0.05mol/L）25ml，再再加加盐盐酸酸5m1，立立即即密密塞塞并并振振摇摇1分分钟钟，在在暗暗处处静静置置15分分钟钟后后，注注意意微微开开瓶瓶塞塞，加加碘碘化化钾钾试试液液10m1，立立即即密密塞塞，摇摇匀匀后后，用用硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液（0.1mol/L）滴滴定定，至至近近终终点点时时，加加淀淀粉粉指指示示液液，继继续续滴滴定定至至蓝蓝色色消消失失，并并将将滴滴定定结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每1ml溴溴滴滴定定 液液（0.05mo1/L）相相 当当 于于 13.01mg的的C12H17N2NaO3。2.测定方法

16、测定方法原料药 剩余滴定法 3.注意事项注意事项（1）操作中要防止溴和碘的逸失）操作中要防止溴和碘的逸失（2）平行条件进行空白试验可减少）平行条件进行空白试验可减少溴和碘逸失带来的误差溴和碘逸失带来的误差 用用碱碱滴滴定定液液测测定定酸酸类类物物质质的的中中和法称为和法称为酸量法酸量法。用用酸酸滴滴定定液液测测定定碱碱类类物物质质的的中和法称为中和法称为碱量法碱量法。三、酸碱滴定法1.在水醇混合溶剂中的滴定法 弱酸性 pKa7.38.4 取取本本品品约约0.5 g，精精密密称称定定，加加乙乙醇醇20 m1溶溶解解后后，加加麝麝香香草草酚酚酞酞指指示示液液6滴滴，用用氢氢氧氧化化钠钠滴滴定定液液

17、（0.1 mo1/L）滴滴定定，并并将将滴滴定定结结果果用用空空白白试试验验校校正正，即即得得。每每lml氢氢氧氧化化钠钠滴滴定定液液（0.1 mol/L）相相当于当于22.63 mg的的C11H18N2O3。异戊巴比妥的含量测定异戊巴比妥的含量测定2.在胶束水溶液中进行的滴定法在胶束水溶液中进行的滴定法 表面活性剂是一种所谓表面活性剂是一种所谓“两亲两亲”分分子，即其分子是由亲水基团和亲脂基团子，即其分子是由亲水基团和亲脂基团两部分组成。当表面活性剂在水溶液中两部分组成。当表面活性剂在水溶液中浓度很低浓度很低时，基本上呈时，基本上呈单分子单分子状态存在，状态存在，但当超过某一浓度时（临界胶束

18、浓度），但当超过某一浓度时（临界胶束浓度），多余的表面活性剂分子在溶液中多余的表面活性剂分子在溶液中不再分不再分散散，而是，而是聚集聚集成有一定分子组成数的聚成有一定分子组成数的聚集物，称为集物，称为胶束或胶团胶束或胶团。胶束具有胶束具有增溶增溶作用，水溶液中胶作用，水溶液中胶束的存在，能使不溶或微溶于水的有束的存在，能使不溶或微溶于水的有机化合物的溶解度显著增加，并显著机化合物的溶解度显著增加，并显著改变弱酸、弱碱性物质的解离，使其改变弱酸、弱碱性物质的解离，使其酸碱性增强酸碱性增强。本本法法是是在在某某些些有有机机表表面面活活性性剂剂的的胶胶束束水水溶溶液液中中进进行行滴滴定定，用用指指示

19、示剂剂或或电电位位法指示终点。终点的变化都很鲜明。法指示终点。终点的变化都很鲜明。在在胶胶束束介介质质中中，表表面面活活性性剂剂能能改改变变巴巴比比妥妥类类药药物物的的离离解解平平衡衡，使使Ka值值增增大，也就是使巴比妥类药物的酸性增强大，也就是使巴比妥类药物的酸性增强 本本法法简简便便，优优于于在在水水醇醇混混合合溶溶液液中的滴定法。中的滴定法。溶剂：二甲基甲酰胺 滴定剂：甲醇钠 指示剂：麝香草酚兰 3.非水溶液滴定法四、UV （一）直接紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法 本本法法是是将将样样品品溶溶解解后后，根根据据溶溶液液的的pH值值选选用用其其相相应应的的 max处进行直接测定。处

20、进行直接测定。取取硫硫喷喷妥妥钠钠约约100 mg，精精密密称称定定，置置于于200 ml量量瓶瓶中中，加加氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液（1250）使使溶溶解解，并并稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀。精精密密量量取取该该溶溶液液5 ml移移入入500 ml量量瓶瓶中中，加加氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液（1250）并并稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀。另另取取硫硫喷喷妥妥对对照照品品适适量量，精精密密称称定定，加加氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液（1250）溶溶解解，并并定定量量稀稀释释至至浓浓度度约约为为5 g/ml的的对对照照品品溶溶液液。随随即即以以1 cm吸吸收收池池，于于大大约约304 nm波波长长处处分

21、分别别测测定定以以上上两两种种溶溶液液的的吸吸收收度度，以以氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液(1250）作作空白。空白。USP（28）测定硫喷妥钠的方法为：测定硫喷妥钠的方法为：注射用硫喷妥钠注射用硫喷妥钠 Ch.P（2005）本品为硫喷妥钠本品为硫喷妥钠100份与无水碳酸份与无水碳酸钠钠 6 份混合的灭菌粉末。按平均装量份混合的灭菌粉末。按平均装量计算，含硫喷妥钠计算，含硫喷妥钠（C11H17N2NaO2S）应为标示量的应为标示量的93.0%107.0%。取取装装量量差差异异项项下下的的内内容容物物，混混合合均均匀匀，精精密密称称取取适适量量（约约相相当当于于硫硫喷喷妥妥钠钠0.25g），置置500

22、ml量量瓶瓶中中，加加水水稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，量量取取此此溶溶液液用用0.4%NaOH溶溶液液定定量量稀稀释释制制成成每每1ml中中约约含含5 g的的溶溶液液；另另取取硫硫喷喷妥妥对对照照品品，精精密密称称定定，加加0.4%NaOH溶溶液液溶溶解解并并定定量量稀稀释释制制成成每每1ml中中约约含含5 g的的溶溶液液。照照分分光光光光度度法法（附附录录A），在在304nm的的波波长长处处分分别别测测定定吸吸光光度度，根根据据每每支支的的平平均均装装量量计计算算。每每1mg硫硫喷喷妥妥相相当当于于1.091mg的的C11H17N2NaO2S。注射用无菌粉末，对照法（二）经提取分离后的紫

23、外分光光度法（二）经提取分离后的紫外分光光度法 苯苯巴比妥钠巴比妥钠W250ml V=250ml5ml100ml D=100/5多组分混合物不经分离的定量方法多组分混合物不经分离的定量方法计算分光光度法计算分光光度法 解方程组法解方程组法 双波长分光光度法双波长分光光度法 差示分光光度法差示分光光度法 导数光谱法导数光谱法 三波长法三波长法 取取两两份份相相等等的的供供试试溶溶液液，分分别别制制成成两两种种不不同同的的化化学学环环境境（如如在在其其一一中中加加酸酸、碱碱或或缓缓冲冲液液改改变变溶溶液液的的pH，或或在在其其一一中中加加能能与与供供试试品品发发生生某某种种化化学学反反应应的的试试

24、剂剂），然然后后将将两两者者分分别别稀稀释释至至同同样样浓浓度度，一一份份置置样样品品池池中中，另另一一份份置置参参比比池池中中，于于适适当当波波长长处，测其吸收度的差值（处，测其吸收度的差值（A值）。值）。（三）差示分光光度法（三）差示分光光度法（A法）法）1.测定方法测定方法2.必要条件（1）供供试试品品在在不不同同的的化化学学环环境境中中以以不不同同的的分分子子形形式式存存在在，它它们们的的吸吸收收光光谱谱有显著的差异有显著的差异（2）干扰物的吸收不受测定时化学环）干扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，光谱行为不变境的影响，光谱行为不变 供试品在两种不同的化学环境中分供试品在两种不同的化

25、学环境中分别以别以x、y表示，干扰物用表示，干扰物用z表示表示3.定量依据定量依据即，吸收度差值（即，吸收度差值（A）仅与待测组分仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，即的浓度有关，而与干扰组分无关，即干扰组分的干扰被消除。干扰组分的干扰被消除。可用对照法或标准曲线法定量可用对照法或标准曲线法定量 保留了通常的分光光度法简易快保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无需事先分速、直接读数的优点，又无需事先分离，并能消除干扰离，并能消除干扰4.特点特点 复方苯巴比妥散中苯巴比妥的测定复方苯巴比妥散中苯巴比妥的测定 本法是利用复方苯巴比妥散中的阿司匹本法是利用复方苯巴比妥散中的阿司匹

26、林和水杨酸等成分在林和水杨酸等成分在pH5.91和和pH8.04条件条件下吸收光谱重叠，下吸收光谱重叠，A=0，而苯巴比妥在而苯巴比妥在240nm波长处波长处 A值最大，因此可用差示分值最大，因此可用差示分光光度法测定苯巴比妥含量。光光度法测定苯巴比妥含量。5.应用应用（一）差示分光光度法测定血清中苯一）差示分光光度法测定血清中苯巴比妥的浓度巴比妥的浓度 1.预处理方法：血清以二氯甲烷在预处理方法：血清以二氯甲烷在酸性下提取两次酸性下提取两次 2.测定方法：在酸性、碱性条件下测定方法：在酸性、碱性条件下差示分光光度法测定差示分光光度法测定五、生物样品分析五、生物样品分析（二）血清中苯巴比妥的高效液相色二）血清中苯巴比妥的高效液相色谱法测定谱法测定 1.预处理方法：血清以醋酸乙酯在预处理方法：血清以醋酸乙酯在酸性下提取一次，氮气流挥干，甲醇酸性下提取一次，氮气流挥干，甲醇溶解溶解 2.测定方法：离子抑制色谱法，内测定方法：离子抑制色谱法，内标法定量标法定量