3临检室作业指导书.doc
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1、临检室作业指导书 文件编号:ABCD-3-LJ-0150第A版 生效日期:2006年8月8日ABCD人民医院检验科目 录序号主 题 内 容 代 号页 号1血红蛋白电泳检查电泳法ABCD-3-LJ-0152精液常规检查ABCD-3-LJ-0293粪便常规检查直接涂片法ABCD-3-LJ-03124粪便潜血试验定性纸片法ABCD-3-LJ-04145尿沉渣检查(UD-S仪器法)ABCD-3-LJ-05166血疟原虫(MP)厚血片检查法ABCD-3-LJ-06217血疟原虫(MP)薄血片检查法ABCD-3-LJ-07238尿人绒毛膜促性腺激素定性ABCD-3-LJ-08259阴道分泌物常规检查ABC
2、D-3-LJ-092710一小时尿沉渣计数ABCD-3-LJ-102911Xt2000i红细胞计数ABCD-3-LJ-113112Xt2000i白细胞检验ABCD-3-LJ-123313Xt2000i白细胞分类计数ABCD-3-LJ-133614Xt2000i血红蛋白检测ABCD-3-LJ-143915全血血细胞沉降率测定ABCD-3-LJ-154116Xt2000i红细胞比积的测定ABCD-3-LJ-164317Xt2000i平均红细胞体积检测ABCD-3-LJ-174618Xt2000i血小板(PLT)测定ABCD-3-LJ-184819红细胞平均血红蛋白含量测定ABCD-3-LJ-195
3、120红细胞平均血红蛋白浓度测定ABCD-3-LJ-205321尿液酸碱度测定干法学法ABCD-3-LJ-215522尿葡萄糖定性实验干化学法ABCD-3-LJ-225823尿蛋白定性测定干法学法ABCD-3-LJ-236124尿血红蛋白测定干化学法ABCD-3-LJ-246425尿胆原定性测定干法学法ABCD-3-LJ-256726脑脊液蛋白定性试验潘氏法ABCD-3-LJ-267027脑脊液外观检查目测法ABCD-3-LJ-277328脑脊液有形成分检查显微镜法ABCD-3-LJ-287529尿亚硝酸盐定性测定干法学法ABCD-3-LJ-297930凝血酶原时间PT测定ABCD-3-LJ-
4、308131活化局部凝血活酶时间测定ABCD-3-LJ-318532凝血酶时间TT测定ABCD-3-LJ-328933血浆纤维蛋白原Fbg测定ABCD-3-LJ-339334骨髓巨核细胞计数ABCD-3-LJ-349735过氧化物酶染色Washburn法ABCD-3-LJ-359936糖原染色Schiff法ABCD-3-LJ-3610137中性粒细胞碱性磷酸酶染色ABCD-3-LJ-3710338尿微量白蛋白定量ABCD-3-LJ-3810539全血C-反响蛋白定量ABCD-3-LJ-3911040尿乳糜定性检查ABCD-3-LJ-4011441前列腺液常规检查玻片法ABCD-3-LJ-411
5、1642血浆硫酸鱼精蛋白副凝固时间ABCD-3-LJ-4211743异常白细胞检查显微镜法ABCD-3-LJ-4311944异常红细胞检查显微镜法ABCD-3-LJ-4412345浆膜腔积液粘蛋白定性检查ABCD-3-LJ-4512846浆膜腔积液化学检查ABCD-3-LJ-4613147浆膜腔积液外观检查目测法ABCD-3-LJ-4713448浆膜腔积液有形成分检查ABCD-3-LJ-4813649血球分析仪操作维护规程ABCD-3-LJ-4913950血球分析仪操作手册ABCD-3-LJ-50143 修 订 页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期123456789101112
6、131415161718192021血红蛋白电泳检查电泳法1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。所有血红蛋白的血红素局部都是相同的。所测定的血红蛋白的蛋白局部称之为珠蛋白。正常人血红蛋白多肽链包括、和。血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白,其外表电荷不同,在电场中的泳动率不同。本实验在碱性PH=8.60条件下,以琼脂糖凝胶电泳的方法进行,对红细胞洗涤后造成溶血,电泳别离血红蛋白后以氨基黑染色。多余的染色液用酸性液体洗去。待琼脂糖凝胶板枯燥后,肉眼可直接判别有无电泳条带异常。运用光密度扫描仪检测
7、准确定量分析电泳条带异常情况。血红蛋白异常有二种类型:血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常,称之为地中海贫血。2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备:受检者应空腹。2.2 标本种类:抗凝血2.3 标本要求:抗凝剂选用EDTA,柠檬酸或肝素均可,防止碘乙酸。常规静脉采血1.8ml,参加含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的枯燥。清洁试管中,充分混匀。4. 标本储存:储存于2-8冰箱中,5天。5. 标本运输:储存于2-8状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。6. 标本拒收标准:细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。7. 试剂7.1 试剂名称:血红
8、蛋白电泳检查试剂7.2 试剂生产厂家:法国Sebia公司7.3 包装规格:150tests7.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶 10块 溶血素 1瓶缓冲液条带 10包2条 薄滤纸 110张氨基黑浓缩液1瓶100ml 点样模具滤纸 10条1盒7.5 试剂储存条件及有效期:贮存于室温1530或冰箱28,不能冷冻。有效期两年。8. 仪器设备8.1 仪器名称:SEBIA电泳仪8.2 仪器厂家:法国Sebia公司8.3 仪器型号:HYDRASYS9. 操作步骤9.1 血红蛋白液制作:抗凝血离心,5000rpm,5分钟,去掉血浆,用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞3次,假设红细胞体积小于10ul,需特别小心。取10
9、ul红细胞参加130ul溶血液造成溶血。震荡混匀10秒钟,室温下培育5分钟待测。9.2 启动电泳仪9.3 将加样器放在一平板上,有数字的一端向上。各加样孔参加10ul溶血的样品,2分钟内加样完毕。将加样器放入保湿盒内,齿端向上转运时用塑料齿保护架。等待5分钟,使样品扩散至齿端。翻开电泳仪盖,抬起电极和加样器支架。9.4 使用HYDRAGEL 15 HEMOGLOBINCE时选择仪器的“HBTOTAL程序位于链盘左侧。9.5 从包装袋内取出缓冲条,拿出末端的塑料片,将缓冲条两端塑料片固定在电极支架背侧的钉上,塑料片应紧贴支架。9.6 取出凝胶板。将薄的滤纸轻轻吸去凝胶板外表的多余液体,然后立即丢
10、弃滤纸。在电泳仪温度控制板外表的边线内加200ul蒸馏水或去离子水。凝胶面朝上,放置凝胶板,边缘对齐边线。略略将凝胶弯曲,然后放平,使水均匀分布在凝胶板下面而不含气泡。9.7 降低支架,使缓冲条不接触到凝胶板。9.8 从保温盒里取出加样器。取时拿保护框。折断加样器齿端保护框。将加样器放在4号位置。9.9 关上电泳仪盖子,按下键盘左侧的绿色箭头“START键,电泳开始。9.10 凝胶染色扫描 翻开盖子 取出并丢弃加样器9.10.3 升高两个支架,握住塑料端取出并丢弃缓冲条。 翻开凝胶托架,平放,将枯燥的凝胶片放入两层间,然后关上托架。 将凝胶支架放入染色池 取出凝胶支架,翻开盖子,取出枯燥的凝胶
11、片。 在光密度仪的570nm处或以黄色滤光片扫描测定。使用HYDRYS,DVSE或PREFERENCE光密度仪时,使A2片段的标记置于扫描板5mm的标志处。10. 结果判断与参考范围扫描得到的只是每种血红蛋白条带的相对浓度值。取出胶片后,首先清洁胶片的反面。判断溶血液的浓度是否适宜,主要看基质带的浓度,如基质带浓度过淡,说明溶血液的浓度太淡。正常时A2浓度大约为基质带浓度的1-2倍。半岁-成人:HbA94.5,HbF2.0,HbA23.51个月:HbA 12-40,HbF 60-93,HbA2 0.1-1.06个月:HbA 86-98,HbF 0.84-10.7,HbA2 0.87-2.9脐带
12、血:HbA 4-40,HbF 30-96,HbA21.011. 质量控制建议测定每一批样本时都附有一控制品或含有血红蛋白A,F,C和S的血样本。12. 临床意义12.1 检测-地中海贫血 轻型:HbA2轻度升高,大多在4-8 中间型:HbA1A2缺如,HbF可达10 重型:HbF:30-90,HbA多低于40或甚至012.2 检测-地中海贫血 标准型-地中海贫血:新生儿期HbBarts可达5-15,几个月后消失。经煌焦油蓝温育后,少数红细胞内有H包涵体。血红蛋白电泳无异常发现。 血红蛋白H病:HbH在PH8.6或8.8电泳时,向阳极方向移动,泳速快于HbA;在PH6.5电泳时,仍向阳极方向移动
13、。 血红蛋白Bart胎儿水肿综合症:Hb Barts占80-100,可有少量HbH。HbA、A2及F均缺如。12.3 检测血红蛋白病:引起临床注意的异常血红蛋白有四种:S,C,E和D。 血红蛋白S:在碱性缓冲条件下血红蛋白S的条带位于A和A2片段之间 血红蛋白C:在碱性缓冲条件下血红蛋白C,E和A2的条带重叠在一起。假设这一片段15,应疑心有血红蛋白C或E的异常。 血红蛋白E:与血红蛋白C不同的是,E在酸性凝胶电泳中不与A2别离。 血红蛋白D:在碱性缓冲条件下,血红蛋白D和S的条带重叠在一起,但D在酸性凝胶电泳中不与A2别离。13. 操作性能:灵敏度高、特异性强、操作简便,重复性好。14. 考
14、前须知:14.1 试剂贮存于室温1530或冰箱28内,不能冷冻。14.2 不要应用溶血标本14.3 假设检测到异常血红蛋白,而又与常见的异常血红蛋白S,C,D或E不同,可使用其他方法如球蛋白链电泳检测,或求助于有关专门实验室。14.4 HbF小于全部血红蛋白的2-3时,扫描检测HbF或其它一些较少见的血红蛋白只是半定量的,结果不十分准确。14.5 对于中度或重度贫血的病例,点样量应增大为15ul或20ul,其结果不受影响。14.6 电泳过程中不能翻开盖子。在染色脱色以及枯燥过程中,仪器的一些程序处于锁定状态。14.7 最后染色后立即扫描测定。假设欲保存,可用一保护物覆盖后置于枯燥、暗处,防止受
15、热,可保存约3个月。精液常规检查1. 实验原理纪录精液量、颜色、透明度、粘稠度和是否液化。显微镜检查包括精子计数、活动力、活动率、形态。2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备:必须禁欲包括遗精和手淫37天。这是因为少于48小时采取的精液,因相距时间太短,精液中精子的数量可能偏少,容易造成少精症的假象。如果超过7天,精子活率、活力都有所下降,也可造成弱精子症的假象。精液检查应间隔一周或两周,要进行23次检查。因为一个人精子的产生在一年中,可因季节、气候等,诸多因素的影响而有一些变化。2.2 标本种类:精液 2.3 标本要求:用清洁枯燥小瓶收集,不应采用避孕套内精液。3. 标本储存:立即送检。4
16、. 标本运输:室温运输,冬季需保温运输。5. 标本拒收标准:久置标本,污染标本,避孕套内标本。6. 操作步骤7.1 纪录精液量、颜色、透明度、粘稠度和液化时间。7.2 精子活动率:取新鲜标本混匀后,在温玻片上用高倍镜观察100个精子,计数活动精子与不活动精子的比例,计算精子活动的百分率。精子活动率=活动精子数/活动精子数+不活动精子数100%7.3 取上述新鲜湿片标本,观察精子的活动力,可按以下五级报告:0级:精子完全不活动,加温后仍不活动;I级:精子运动不良,运动缓慢,原地打转或抖动,向前运动能力差;II级:精子活动较好,运动速度尚可,游动方向不定,呈直线或非直线运动,带有盘旋;III级:为
17、中速运动;IV级:精子活动好,快速直线运动,很快超越一个视野,活泼有力。7.4 精子计数: 于试管内加精子稀释液0.38ml,吸液化精液20ml,参加稀释液内摇匀。 充分摇匀后,滴入血细胞计数池内,静置1-2min,待精子下沉后,以精子头部作为基准进行计数。 如精子数少,可计数两个大方格内精子数,总数乘以10万即为每毫升精液内精子数,再换算成109/L报告。如精子数多,可计数5个中方格内精子数,总数乘以100万即为每毫升精液内精子数,再换算成109/L报告。7.5 精子形态观察:革兰氏或瑞氏染色后用油镜观察。异常精子可有:头部过大、过小、尖细、外缘不齐、双头等;中部消失、分枝或肿胀;尾部呈双尾
18、,卷曲度短或消失缺尾。7.6 细胞:红、白细胞40的精子活动不良,常是导致男性不育的重要原因。精子活动力低,主要见于精索静脉曲张、泌尿生殖系统非特异性感染,应用某些药物如抗疟药、雄激素等所致。 精子计数:正常人精子计数为10130109/L,相当于一次排出的精子总数为400106600106。当精子计数值20106/ml或一次排精总数20,将会导致不育,可能是由于精索静脉曲张、血液中有毒代谢产物、铅污染等或应用大剂量放射线及使用细胞毒性药物导致的精子形态异常。如果精液中发现1的病理性未成熟细胞,包括精原细胞、精母细胞和发育不完全的精细胞,提示睾丸的曲细精管的生精功能受到药物或其他因素影响或损伤
19、。如果精子凝集10,提示生殖道感染或免疫功能异常。9. 考前须知9.1 出现一次异常结果,应隔一周后复查,反复查2-3次才能得出比拟正确的结果。9.2 如低倍镜、高倍镜检查均无精子,应将精液离心沉淀后再涂片检查,如两次均无精子,报告“无精子。10. 操作性能:快速简便11. 方法局限性:易受人为主观经验缺乏影响结果判断。12. 参考文献中国人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程第二版.1997,149-150粪便常规检查直接涂片法1. 实验原理:本实验是利用肉眼观察粪便的颜色和性状,以及利用粪便生理盐水涂片在显微镜下观察涂片中是否有虫卵、幼虫、各种细胞、包囊、结晶等。2. 标本采集2.
20、1 标本采集前病人准备:无须特殊准备。2.2 标本种类:粪便 2.3 标本要求:标本应取自粪便的不同部位特别是病理性改变比拟明显的部位。3. 标本储存:粪便应取指头大小存放于枯燥、清洁、无吸水性的容器内。粪便的容器必须有盖且有明显的标记。4. 标本运输:室温运输。5. 标本拒收标准:尿液、植物、泥土、污水等污染标本;干结粪便6. 操作步骤6.1 肉眼观察粪的颜色、性状。6.2 再用竹片搜集少量不同部位的粪便标本,涂抹于滴有一滴生理盐水的洁净玻片上。6.3 盖上盖玻片,涂片的厚度以能透过印刷物字迹为准。6.4 先在低倍镜下观察有无包囊、虫卵、幼虫等,再在高倍镜下观察有无红细胞、白细胞、各种结晶,
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