卵蛋白致敏新西兰家兔建立支气管哮喘模型 新西兰肉兔养殖.docx

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1、卵蛋白致敏新西兰家兔建立支气管哮喘模型 新西兰肉兔养殖 （1.北京中医药高校,北京 100029；2.中日友好医院国家中医药管理局重点探讨室，北京 100029） 摘 要：目的：视察新西兰家兔腹腔注射卵蛋白后静脉血、支气管肺泡灌洗液嗜酸粒细胞计数的表达以及家兔症状表现。方法：试验家兔分为两组，即空白比照组和模型组。模型组家兔腹腔注射10%卵蛋白（OVA），空白比照组家兔腹腔注射等剂量生理盐水，14天后模型组用1%OVA连续雾化7天诱发其哮喘发作，空白比照组则赐予生理盐水雾化吸入。结果：模型组家兔出现明显腹肌抽搐、烦躁、二便失禁等症状；模型组家兔静脉血以及支气管肺泡灌洗液中的嗜酸粒细胞计数与空白

2、比照组相比明显上升。结论：新西兰家兔腹腔注射卵蛋白胜利建立支气管哮喘模型。 关键词：卵蛋白；新西兰家兔；支气管哮喘；模型 中图分类号：R-33文献标识码：A文章编号：1673-7717（2011）03-0473-03 Giving New Zealand Rabbits Celiac Injection With Ovalbumin To Simulate Bronchial Asthma Model CHEN Xin-xin1, LI You-lin2 （1.Medical Doctoral Student of 2008 of Beijing University of Tradition

3、al Chinese Medicine，Beijing 100029,China; 2.Focus Investigatory Office of China-Japan Friendship Hospital and State Administration of Traditional Chinese Medicine of the Peoples Republic of China, Beijing 100029,China） Abstract:Objective:To observing the number of acidophil in venous blood and bronc

4、hia alveolar fluid and the symptom of New Zealand rabbits after injecting ovalbumin. Methods:These rabbits are divided into controlled team and intervened team. The intervened team rabbits are injected with 10%OVA but the controlled team are injected with 95%NaCl.After 14 days, we cause the interven

5、ed team rabbits asthma with inhaling 1%OVA. The controlled team rabbits inhaling 95%NaCl.Results：The intervened team rabbits appearing the symptom of convulsion, dysthesia, urinary and fecal incontinence,etc. The number of acidophil in the intervened team rabbitsvenous blood and bronchia alveolar fl

6、uid more than the controlled team rabbits.Conclusion:We Simulate New Zealand Rabbits bronchial asthma model with injecting ovalbumin in celiac successfully. Key words:ovalbumin；New Zealand rabbits；bronchial asthma；model 收稿日期：2010-10-28 基金项目：国家自然科学基金资助项目（30772096） 作者简介：陈馨馨（1981-），女，黑龙江哈尔滨人，2008级博士探讨生

7、，探讨方向：中医药防治肺系疾病探讨。 通讯作者：李友林（1961-），男，山东烟台人，博士，探讨方向：呼吸系统疾病的临床与试验探讨。 支气管哮喘是一种严峻威逼人类健康的常见呼吸道疾病。以嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞等炎性细胞聚集为主，而嗜酸性粒细胞仍是评价气道变应性炎症的主要指标1。目前，用于制备过敏性支气管哮喘的试验动物种类繁多，有SD、Wistar大鼠，BALB/c小鼠，以及豚鼠。 国外在做哮喘试验时多采纳BALB/c小鼠，BALB/c小鼠较易产生气道高反应，用卵蛋白易致敏，并可产生高滴度IgE，另外它的成本相对于其它鼠低，因此备受探讨者青睐2。国内状况与国外不同，BALB/c小鼠价

8、格相对较高，豚鼠则被广泛应用。豚鼠易被致敏，多采纳卵白蛋白腹腔注射及雾化吸入激发的方法，接受致敏物质后反应程度与其他动物相比较强，能产生型变态反应且雾化激发后能产生速发相与迟发相哮喘反应，因而始终是国内应用最多的过敏性哮喘试验动物之一。但豚鼠个体反应差异大，对于致敏原或不反应或因产生过敏性休克而死亡，从而造成试验资源的奢侈3。 家兔和豚鼠一样，可采纳卵蛋白主动致敏的方法，用抗原攻击主动致敏的家兔可诱发速发型支气管反应。家兔可出现速发相和迟发相的哮喘反应，并伴有嗜酸性粒细胞的聚集反应。家兔体型较小，性格和顺，价格相对便宜，可以反复运用而不出现脱敏4。另外，哮喘家兔模型和过敏性体质的人群具有极为相

9、像的特征：（1）对腺嘌呤核苷、组织胺、乙酰胆碱、血小板活性因子的气道高反应性；（2）气道炎症和渗透性变更，即释放包括中性粒子、嗜酸型趋化因子；（3）产生抗原特异性IgE及肥大细胞依存性上升；（4）支气管肺泡灌流液中腺嘌呤核苷上升5。其中新西兰家兔尤为适用于过敏反应的探讨。所以，笔者用卵蛋白致敏家兔的方法建立支气管哮喘模型。 1 试验材料 1.1 试验动物选择 哮喘的发病率一般被认为儿童高于成人，而成人男女患病率则大致相同。因此，我们选择同系交配纯种白色新西兰无菌家兔14只，雌雄不限，2月龄（为幼年家兔），体重约1kg，由北京海淀兴盛试验动物养殖厂供应。随机分为两组，即空白比照组和模型组，每组7

10、只。自由饮食、饮水，兔舍温度保持在1629之间，湿度限制在40%70%，噪音限制在60dB以下。 1.2 造模药物及仪器 卵蛋白干粉（ovalbumin,OVA）级，购自美国sigma公司。402A型超声雾化器，由江苏鱼跃医疗设备有限公司出品。olympus显微镜。cytosprin细胞离心机（英国珊顿公司）。北京普利生医学仪器公司图像自动分析系统。 2 方 法 2.1 模型制备 家兔适应性饲养7天无异样后，模型组家兔予10%卵蛋白（生理盐水溶液）腹腔注射，空白比照组家兔予等剂量生理盐水腹腔注射。各组每只家兔均注射一次。 根据豚鼠的注射剂量为200mg/kg，体重为250g，家兔体重为1kg计

11、，依据换算公式DBDA*RB/RA*（WA/WB）1/3（其中DA200mg/kg；DB为家兔每千克体重赐予的卵蛋白量；RA为豚鼠的体型系数；RB为家兔体型系数；WA为豚鼠体重；WB为家兔体重）得出家兔每千克体重赐予卵蛋白量为120mg。模型组注射卵蛋白溶液量为1.2mL/kg，空白比照组注射生理盐水1.2mL/kg。 14天后，将家兔置于一密闭容器内，此容器与402A型超声雾化器相连通，用1%OVA生理盐水溶液雾化激发。连续雾化7日，每日1次，每次首先雾化810min后停止雾化，打开容器盖间隔12min，目的使家兔避开窒息，然后再雾化810min后间隔12min，这样反复操作直至家兔出现腹肌

12、抽搐、烦躁、唇鼻紫绀、二便失禁等表现。 2.2 标本实行 耳缘静脉血：第7日雾化结束后当天，首先实行两组家兔耳静脉血。将家兔固定于兔盒内，拔去耳缘少许毛发后，用酒精棉棒擦拭消毒并轻缕耳缘使静脉充盈，用2mL注射器逆血流方向实行1mL静脉血，马上注入事先加有EDTA的抗凝管内，室温放置30min后，离心（400r/min,5min），晾干后用瑞氏姬姆萨染色液染色30min，冲洗后晾干。用低倍镜（10）找寻分布匀称的视野，用油镜（100）作白细胞分类计数，每个样本计数100个细胞，选取其中嗜酸性粒细胞计数作为统计分析数据。图片抓取采纳北京普利生医学仪器公司图像自动分析系统。 支气管肺泡灌洗液：耳静

13、脉取血后，将事先配置的浓度为10%的水合氯醛麻醉剂，按每只家兔1mL/kg体重耳静脉注射麻醉。家兔胜利麻醉后，固定于解剖台，剪开颈部皮层，暴露主支气管，用镊子将其剥离，在主支气管上剪一小口，插入气管插管，再将一导管经气管插管轻插入到肺中气管壁样结构的位置，注入3mL一般生理盐水，然后回抽，反复回抽23次，将回抽液注入冰中冷却的离心管。细胞悬液用细胞离心机涂片，约每100mL/片。离心（400r/min,5min），晾干后用瑞氏姬姆萨染色液染色30min，冲洗后晾干。用低倍镜（10）找寻分布匀称的视野，用油镜（100）作白细胞分类计数，同样每个样本计数100个细胞，选取其中嗜酸性粒细胞计数作为统计分析数据。图片抓取采纳北京普利生医学仪器公司图像自动分析系统。 2.3 统计学处理 应用SAS 8.2软件，经方差齐性检验及正态性检验后，采纳wilcoxon秩和检验。 3 结 果 3.1 视察每次雾化后出现的症状表现 模型组：出现烦躁、呼吸急促、腹肌抽搐、唇鼻紫绀、二便失禁、行动迟缓等症状；空白比照组：出现呼吸急促、烦躁等症状。 3.2 静脉血嗜酸粒细胞计数 见表1。模型组静脉血嗜酸粒细胞计数高于空白组（P与空白组嗜酸性粒细胞比较，P