高效液相色谱含量测定 [高效液相色谱法测定护肝宁片含量的研究] .docx

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1、高效液相色谱含量测定 高效液相色谱法测定护肝宁片含量的研究 R25633 A 16723783(2011)04022602 目的：建立护肝宁片中大黄素含量的HPLC测定方法。方法：采纳 SupelcosilTMC8分析柱，流淌相为甲醇-0.1磷酸溶液（80:20），在254nm波特长检测。 结果：大黄素的线性范围为10.3-103.6g， 平均加样回收率为99.47，RSD为1.27%（n=5)。结论：方法简便，快速，精确，可用于护肝宁片生产的质量限制。 本品清热利湿，益肝化瘀，疏肝止痛；退黄，降低谷丙转氨酶。用于急性肝炎及慢性肝炎。 1 仪器与试药 1.1 仪器 HP1100高效液相色谱系统

2、：在线脱气机，四元泵，HP1100色谱工作站。 1.2 试药 甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯；大黄素比照品 中国药品生物制品检定所，批号：0756-200110 样品：自制 2 试验方法与结果 2.1 色谱条件 SupelcosilTMC8分析柱（150mm4.6mm,5mm），流淌相：甲醇-0.1磷酸溶液（80:20），流速：1.0ml./min，检测波长：254nm；柱温：室温；进样量：20l；理论塔板数：按大黄素峰计算应不低于2000。 2.2 试验溶液的制备 2.2.1 供试品溶液制备 精密称定，研细，取0.2g，精密称定，置具塞锥瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定

3、重量，超声处理60分钟，放冷，再称定得量，用甲醇补足减失的重量，取上清液滤过，取续滤液，即得。 2.2.2 比照品溶液制备 精密称取以大黄素比照品适量，加甲醇制成每1ml中含40g的溶液，即得。 2.2.3 阴性比照液制备 按处方量称取不含虎杖药材的阴性样品，然后按样品溶液制备方法制备溶液， 2.3 干扰性试验：精密吸取阴性样品溶液10l，注入液相色谱仪，记录色谱图，考察其他组分对大黄素测定的干扰性。结果该色谱图中在大黄素峰相应位置未出现汲取峰，说明大黄素在本片剂中为虎杖独有，可表征虎杖含量。其他组分对测定无干扰。 精密吸取空白流淌相10l，注入液相色谱仪，记录色谱图，考察流淌相溶剂峰对大黄素

4、测定的干扰性。结果该色谱图中在大黄素峰相应位置未出现汲取峰，说明流淌相溶剂峰对大黄素测定的无干扰。 2.4 线性范围考察 ：精密称取大黄素比照品6.48mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，再稀释成10.368、20.736、31.104、41.472、62.208、103.68g/ml进样测定，记录峰面积，以浓度（C）对峰面积（A）进行回来，考察线性关系并绘制标准曲线，A=4.61104C-1.21104 R2=0.9999结论：在大黄素进样10.3-103.6g /ml范围内，浓度（C）和峰面积（A）呈良好线性关系。 2.5 精密度试验 ：取大黄素比照品溶液（41.427g/m

5、l），连续进样6次，得峰面积，计算大黄素峰面积的平均值及RSD。结果：平均峰面积为1898148，RSD为0.80，本测定法的精密度良好。 2.6 稳定性试验 ：精密吸取样品溶液20l分别于0、1、2、4、6、8小时注入液相色谱仪，记录色谱图，计算大黄素峰面积的平均值及RSD，结果见下表。 结果：经测试，样品溶液平均峰面积为1863117.5，RSD0.63，证明样品溶液在8小时内测试稳定。 2.7 回收率测定：取含量测定项下供试品0.08g，分别精密加入不同浓度比照品溶液10ml，再精密加入甲醇10ml，照含量测定项下操作，进样，测得回收率，其结果见表。 2.8 重现性试验：取样品共5份精密

6、称定，研细，取0.2g，精密称定，置具塞锥瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理60分钟，放冷，再称定得量，用甲醇补足减失的重量，取上清液滤过，取续滤液，精密吸取滤液20l注入液相色谱仪，记录色谱图，每份样品进样两次，同时记录大黄素素比照品的峰面积，计算样品中大黄素的含量，结果见下表 41.472g/ml大黄素素比照品的峰面积为（1913428+1931755）/2=1922591.5 结果：经测试样品的大黄素平均含量为1.92mg，RSD为0.44，本测定法的样品测定重现性良好。 3 探讨 本品的含量测定方法选定了多种方法,其中选用了最先进的高效液相色谱法,使其精确度增加了,有劝服力。并做了其他的协助性试验,可以充分证明其牢靠性。