药物分析实验讲义.docx

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1、药物分析实验医科大学药学院药物分析教研室附录一、 药品：1. 盐酸普鲁卡因注射液（O.lg）2. 1： 1 盐酸（15 ml）3. KBr （固）（2g）4. 含锌碘化钾淀粉糊（400 ml）5. 0.05 mol/LNaNO2 （2500 ml）二、 仪器：1 .电磁搅拌器（8台）2 .白反响瓷板（16个）3 . 25 ml碱式滴定管（8支）4 .托盘天平（3台）5 . 150 ml 烧杯三、试液配制：1 .含锌碘化钾淀粉糊：取水100 ml加KI溶液（3-20） 5 ml与ZnCb溶液（1 -5） 10 ml, 煮沸，加淀粉混悬液（马铃薯淀粉5 g加水30 ml搅拌制成），随加随搅拌，继续

2、煮沸7, 放冷即得。2 . 0.05 mol/L NaNCh 液取NaNCh约3.6 g+无水Na2co3O.I g+水适量溶解至1000 ml,摇匀。取120 干燥恒重基准对氨基苯磺酸约0.25 g,精密称定，加水30 ml及浓氨水2 ml 溶解后，加盐酸1： 1 20 ml搅拌在30 下，用本液迅速滴定，以含锌KI淀粉指示终点（T=17.32）实验四硫酸阿托品注射液的含量测定（酸性染料比色法）一、目的要求：掌握酸性染料比色法测定生物碱制剂的基本原理及操作方法。二、实验内容：1 .对照液的制备精密称取在12CTC干燥至恒重的硫酸阿托品对照品25mg至25ml量瓶中， 加水溶解并稀释至刻度，摇

3、匀，精密量取5ml,至100ml量瓶中，加水稀释至刻 度，摇匀，即得（每1ml含无水硫酸阿托品50ug）。2 .供试液的制备精密量取本品适量（约相当硫酸阿托品2.5mg）至50ml量瓶中，加水稀释 至刻度摇匀即得。3 .测定法（标示量为：0.5mg/ml）精密量取对照液与供试液各2ml,分别置于预先精密加入氯仿10ml的60ml 分液漏斗中，各加漠甲酚绿溶液2mL摇匀提取2分钟后，静置分层，分取氯仿 层移置1cm吸收池中，以水2ml按同法操作所得的氯仿液作空白，在420nm的 波长处分别测定吸收度。中国药典（2015）规定：本品含硫酸阿托品（Ci7H23NO3）2H2SO4 H2O 应为标示量

4、的90.0%110.0%。三、考前须知：1 .本实验所用分液漏斗必须干燥无水2 .供试品和对照品平行操作，提取振摇，放置时间等均应一致。3 .用甘油淀粉糊均匀地涂在分液漏斗磨口处。4 .分取氯仿层测定时，初流液应弃去，所取氯仿层必须澄清、透明、不混有水 珠。5 .初次振摇，要放气。四、思考题1 .酸性染料比色法测定生物碱的原理是什么？2 .如何选择酸性染料，提取溶剂？3 .为何要求标准品与供试品同时操作，振摇和放置时间应一致4 .写出标示量百分含量的计算公式？附录：一、药品试剂：1 .硫酸阿托品对照液2 ml （200 ml）2 .澳甲酚绿溶液2 ml （500ml）3 .氯仿10 ml （4

5、5瓶）4 .甘油淀粉糊5 .硫酸阿托品注射液（每组6支，0.5mgxlml）二、 仪器1 . 60 ml分液漏斗（干燥）2 .比色管架3 . 10 mk 2 ml移液管（加氯仿和阿托品对照液）4 .擦镜纸5 . 722分光光度计6 .每组4支15 ml小试管（干燥）三、试液配制：1 .甘油淀粉糊：取丙三醇22 g加可溶性淀粉9 g加热至140 ,保持30不断搅拌。（配制 此法x2倍）2 .漠甲酚绿50 mg与邻苯二甲酸氢钾1.021 g加N/5 （0.2 mol/L） NaOH 6 ml使溶解，再加 水稀释至100 mlo操作：精密称取澳甲酚绿250 mg与邻苯二甲酸氢钾（分析纯）5.104

6、g+0.1 mol/LNaOH 60 ml使溶解（水浴中），再加水稀释至500 ml容量瓶中，即得。注：0.1 mol/LNaOH 60 ml需用50 ml碱式滴定管精密加入。3 .硫酸阿托品对照液：精密称取120 干燥至恒重的硫酸阿托品25 mg置25 ml量瓶中， 加水溶解稀释至刻度，摇匀。再精密量取5 ml置100 ml量瓶加水稀释至刻度。（50 g/ml） 操作：精密称取硫酸阿托品25 mg定容于25 ml量瓶，加水至刻度。再吸取10 ml至200 ml量瓶中，加水至刻度。10实验五 维生素Bi的含量测定一、实验目的：掌握紫外分光光度法测定药物含量的方法及仪器的操作和使用。二、实验原理

7、：维生素B1分子中具有共扼双键结构，在紫外区有吸收，根据其最大吸 收波长处的吸光度即可计算含量。ChP2010收载的维生素B1片剂和注射液 均采用本法进行测定。三、实验步骤：取本品10片（标示量为：10mg/片），精密称定，研细，精密称取适量 （约相当于维生素Bi25mg）；置于100ml的量瓶中，加盐酸溶液（9一 1000） 约70ml,振摇15分钟，使维生素Bi溶解，用上述溶剂稀释至刻度，摇匀， 用干燥滤纸滤过。精密量取续滤液5ml,置于另一 100ml量瓶中，再加盐酸溶 液（9 1000）稀释至刻度，摇匀；在246nm波长处测定吸光度，按 G2HWC1N4s-HC1的吸收系数 %皿）为4

8、21计算，即得。中国药典（2015）规定，本品含维生素Bi（Ci2Hi70N4OSHCl）应为标示 量的 90.0 % 110.0 %。四、考前须知：1 .开启电源，使仪器预热20分钟。2 .开启前，先确认仪器样品室内是否有东西挡在光路上，以免影响仪器自检。3 .维生素B1的紫外吸收峰随溶液的pH的变化而不同，因此要严格控制溶 液的pH值。五、思考题：4 、单色光不纯对于测得的吸收曲线有何影响？5 、为什么需要加盐酸溶液溶解？6 、写出此方法含量测定的公式。11附录:一、药品试剂：1、维生素日片(来源：天津市太平洋制药厂，规格每片10mg)；2、盐酸溶液( 9 - 1 0 0 0 )二、主要仪

9、器干燥的研钵一个；干燥100mL量瓶三个；称量纸；小药匙；干燥5mL移液管1-2支；吸耳球；干燥小烧杯12个；干燥小漏斗；滤纸；铁架台或比色架；玻璃棒；万分之一天平12实验六苯磺酸氨氯地平的有关物质检查1、 药物结构:C2oH25C1N205 C6 H6 O3 S 567.052、反响机理：此药物属于二氢毗咤类钙通道阻滞药物,具有苯环，所以有紫外吸收, 可以采用紫外检查器进行检测。氨氯地平为合成过程中的中间产物，因此 需要检测其含量。有关物质I取本品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含Im g的溶液，作 为供试品溶液；精密量取适量，用流动相定量稀释制成每1 ml中含3 11g的溶液, 作为

10、对照溶液。照高效液相色谱法（通那么0512）试验，用十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂（Phenomenex Luna C 18柱，4.6 mm x 250mm,5Mm或效能相当的色谱 柱）；以甲醇-乙睛- 0.7%三乙胺溶液（取三乙胺7.0ml,加水稀释至1000ml,用 磷酸调节pH值至3 .0 士 0. 1 ）（35 : 15:50 ）为流动相；检测波长为237nm。取苯 磺酸氨氯地平对照品5mg,加浓过氧化氢溶液5ml,置70加热10-30分钟， 作为系统适用性溶液，取系统适用性溶液2011注入液相色谱仪，记录色谱图， 氨氯地平峰保存时间约为18分钟，氨氯地平峰与氨氯地平杂质I峰（相对保存

11、 时间约0.5）的别离度应大于4. 5,理论板数按氨氯地平峰计算不低于3000。精密 量取供试品溶液与对照溶液各20 U1,分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成 分峰保存时间的3倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，氨氯地平杂质I的峰 面积乘以2不得大于对照溶液主峰面积（0. 3 % ）,其他各杂质峰面积的和不得 大于对照溶液主峰面积（0 .3 % ）。供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积 0.1倍的色谱峰忽略不计。1314实验一药物杂质检查1实验二阿司匹林片的含量测定5实验三盐酸普鲁卡因注射液的含量测定7实验四硫酸阿托品注射液的含量测定9实验五维生素Bi的含量测定 11实验六苯磺酸氨氯地平的

12、有关物质检查13实验一药物的杂质检查一、葡萄糖中一般杂质的检查（一）、教学目的：1 .掌握葡萄糖中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、碑盐等限量的检方法、原理、 反响条件及计算。2 .熟悉纳氏比色管、验碎瓶、量筒、天平等使用方法。3 . 了解药物一般杂质检查工程的意义。（二）、实验内容：1 .氯化物的限量检查取本品0.6g ,加水溶解使成25ml,再加稀硝酸10ml,溶液假设不澄清、滤 过，置50ml纳氏比色管中，加水使成40ml,加硝酸银试液1ml,用水稀释至50 ml,摇匀在暗处放置5分钟，如发生混浊，与标准氯化钠6 ml同法操作所制的 对照液比拟，不得更深（0.01%）。2 .硫酸盐的限量检查

13、取本品2g ,加水溶解使成40ml,溶液假设不澄清、滤过，置50ml纳氏比色 管中，加稀HC12ml,摇匀，加25%氯化钢溶液5ml,用水稀释成50 ml,摇匀， 放置10分钟，如发生混浊，与标准硫酸钾溶液2 ml同法操作所制的对照液比拟, 不得更深（0.01%）。3 .铁盐的限量检查取本品2g ,加水20 ml溶解，再加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，用水稀释 至45 ml,加硫氧酸镂溶液（3-100） 3 ml摇匀，如显色，与标准铁溶液2 ml 同法操作所制的对照液比拟，不得更深（0.001%）。（三）、思考题1 .在进行氯化物检查、硫酸盐或重金属检查时，遇到有颜色的样品如何处理?2 .何谓“限

14、度检查”？杂质限度应如何计算？二、特殊杂质检查（一）、目的要求：熟悉阿斯匹林、盐酸普鲁卡因中的一些特殊杂质的检查原理及操作方法。（二）、提要1 .特殊杂质是指药物本身特有的根据其生产主艺、自身牲质，而产生的杂质， 其检查方法在药典中列在各药品的检查项下。2 .特殊杂质的检查方法是根据药物与杂质在理化性质及生物活性上的差异，选 择灵敏变高，专属性强的方法做为检查方法，如根据其对光的选择性差异，可 选用比色法目视、可见、紫外）及原子吸收分光光度法，根据理化学性质上的 差异，可选薄层层折法，气相色谱法，高压液相法等。3 .乙酰水杨酸中游离水杨酸（生产中未反响完全或贮存中水解产生的）的检查, 采用目视

15、比色法。+ 4Fe3+COO-Fe3+ Fe3+ + 12 H+-34 .盐酸普鲁卡因发生如下分解反响H2NC00（CH2）2N（C2H5）2 f H2NQC00H + H0-C2H4-N（C2H5）2 普鲁卡因对氨基苯甲酸利用盐酸普鲁卡因和对氨基苯甲酸在硅胶G簿极上吸附行为不同，经层析而达 到别离的目的。以一定限量的对氨基苯甲酸对照品为标准进行杂质限量，利用对 二甲氨基苯甲醛进行显色。（三）、实验内容：1 .乙酰水杨酸中游离水杨酸检查取本品0.1g加乙醇1ml溶解后，加冷水至50ml,立即加新制的硫酸铁镂溶 液1ml,摇匀30秒钟内如显色，与对照液精密称取取水杨酸0.1g加水溶解后,加冰醋酸

16、1ml,摇匀，再加水使成1000 ml摇匀，精密量取1 ml,加乙醇1ml , 加冷水至50ml,立即加新制的硫酸铁镀溶液1 ml摇匀，比拟不得更深。2 .盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查标准对氨基苯甲酸的制备：精密称对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每ml 含30ug的溶液。供试液的制备：精密量取盐酸普鲁卡因注射液加乙醇制成每ml含2.5mg的 盐酸普鲁卡因溶液。薄板的制备：取层析用硅胶G粉约2.5g,加适量水（约按1： 2； 1： 3）调 匀，研磨、铺在平滑玻璃板上（一般厚度0.20.3mm）阴干，105加热活化1 小时取出放入密闭干燥器内备用点样：在制好的薄板上距下端边2.5cm处，用

17、微量注射器分别吸取对照液和 在试液各10ul分别点样两点间一般距离1.52.0cm,距边缘一侧1.52.5cm。展开：用丙酮：0.8%盐酸（911）混合液作展开剂，1015 ml展开剂于层 析槽中，将点好样的薄板放入饱和5分钟，用倾斜上行法展开，展开长度为 1015cm取出后风干。显色：用喷雾器啧射显色剂对二-甲氨基苯醛溶被使其显色（2%对二甲氨基 苯甲醛乙醇溶液100ml加5ml冰醋酸）。供试溶液如显与对照品相应的杂质斑点 与对照品溶液的主斑点比拟不得更深。（四人考前须知1 .游离水杨酸检查中，样品管应尽量干燥，不得带入过多的水，否那么样品加醇 后不易溶解。2 .薄板所用的玻璃必须仔细清洗，

18、不附着油污，否那么易引起薄层的剥落。3 .用石膏作粘合剂时，此法的关键是控制开始凝固的时间，过早倒于玻板上那么 易流，过迟那么太粘不能成均匀薄层。4 .如在空气中点样一般不超过10分钟，所点圆点直径应小于3mm并应分次点, 以免使圆点扩大，直径太大，所有圆点在统一水平线上，面积也应尽可能一致。（五）、思考题：1 .乙酰水杨酸中游离水杨酸检查中，为何要在30秒钟内比色？2 .盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸杂质限量是多少？3 . TLC杂质检查有儿种类型？4 .举例哪一种杂质检查是通过反响灵敏度来控制的？附录:试剂药品葡萄糖稀硝酸400 ml硝酸银试液100 ml标准氯化钠试液200ml稀盐酸1

19、00 ml25%氯化钢溶液250 ml标准硫酸钾100 ml硝酸100 ml30%硫氟酸筱液150 ml标准铁溶液100 ml稀硫酸200ml盐酸200ml乙酰水杨酸(阿司匹林)3小瓶乙醇8小瓶新制稀 NH4Fe(SO4) 2200 ml水杨酸标准液500 ml盐酸普鲁卡因乙醇液(125 mg-50 ml)硅胶G粉对氨基苯甲酸乙醇液(75 mg-50 ml,取 1 ml-50 ml)展开剂：0.8%HCl：丙酮(1:9)500 ml显色剂：2%对二甲氨基苯甲醛乙醇液100 ml二、仪器100g托盘天平2 ml移液管6支层析槽烧杯水浴锅(六孔2台)比色管架称量纸10 ml移液管2支微量进样器(1

20、0|il)1ml移液管2支5x20cm薄层板(每组1块) 量筒三、试液配制：LAgNCh 试液：17.5g+z|1000ml2 .稀盐酸:234 ml+水一1000 ml3 .稀硫酸：57 ml+水-1000 ml(9.5%10.5%)4 .稀硝酸：105 ml+水一 1000 ml5 .酚献指示液：取酚献1 g+乙醇100 ml溶解。6 .水杨酸标准液：精密称取水杨酸0.1 g加水溶解后，加冰醋酸1 ml摇匀，再加水使 成1000mL摇匀。(注：水杨酸不易溶解，先加无水乙醇溶解后再加水)。7 . NH4Fe(SO4) 2 :取 1M 盐酸 1 ml 加 NH4Fe(SO4) 2指示液 2 m

21、l,加水稀释至 100 ml。8 .NH4Fe(SO4) 2指示液：取8 g硫酸铁镂加水100 ml。9 .对氨基苯甲酸乙醇液(75 mg-50 ml,取1ml50 m1)10 .展开剂:0.8%HCl：丙酮(1： 9)500 ml11 .显色剂：2%对二甲氨基苯甲醛乙醇液，每100 ml加5 ml冰HAc 100 ml实验二阿司匹林片的含量测定一目的要求:掌握阿司匹林肠溶片片剂含量测定的基本原理和操作方法。二、实验原理：含量测定两步滴定法片剂中除了加入少量酒石酸或枸椽酸稳定剂外，制剂工艺过程中又可能有 水解产物（水杨酸、醋酸）产生，因此不能采用直接滴定法，而采用先中和供试 品共存的酸，再将阿

22、司匹林在碱性条件下水解后测定的两步滴定法。第一步为中和:COOHCH3第二步为水解与测定COONa0、ch3+ NaOH+ NaOHCH3 + H20CH3COONa2NaOH + H2SO4 - Na2so4 + 2H2O（剩余）三、实验内容：含量测定两步滴定法取本品30片（标示量25mg/片），精密称定。研细，称取片粉适量（约 相当于阿司匹林0.3g）,置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚醐指示液显中性） 20mL振摇使阿司匹林溶解.加酚醐指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1 mol/L）至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液（0.1 mol/L）40mL。置水 浴上加热15分钟并时时振摇，迅速

23、放冷（凉水冲冷）至室温，用硫酸滴 定液（0.05 mol/L）滴定至粉红色消失，并将滴定结果用空白实验校正。每 1 ml氢氧化钠滴定液（0.1 mol/ L）相当于18.02mg的C9H8。4。中国药典（2005）规定，本品含阿司匹林（C9H8。4）应为标示量的95. 0% 105. 0%。四、考前须知：1 .中和滴定速度稍快，注意旋摇，防止局部过浓2 .本实验中，中性乙醇对酚献指示液显中性。3 .阿司匹林在水中微溶，在乙醇中易溶，应选用乙醇为溶剂，且乙醇可抑制 阿司匹林的水解。五、思考题1 .在本实验中，为什么要选用中性乙醇作为溶剂？2 .为什么阿司匹林制剂不可以用直接滴定法来测定其含量？3

24、 .双步滴定法测定含量中为何要进行空白试验？附录：一、试剂药品阿司匹林肠溶片;酚醐（分析纯）；二、主要仪器电热恒温干燥箱;药匙；烧杯（25ml）；滤纸；碱式滴定管；纯化水；氢氧化钠（分析纯）;中性乙醇（分析纯）; 硫酸（分析纯）万分之一分析天平;量筒（10ml、50ml、胶头滴管；锥形瓶（250ml）；水浴锅；称量纸；100ml）； 研钵；玻璃漏斗;酸滴定管; 温度计实验三盐酸普鲁卡因注射液的含量测定（亚硝酸钠滴定法）一、教学目的：1 .掌握重氮化的反响原理，操作条件及考前须知。2 .熟悉注射液含量的测定基本方法和计算。3 .熟悉外指示剂法。二、实验原理：盐酸普鲁卡因含有芳伯氨基，在酸性条件下

25、与亚硝酸钠发生重氮化反响。 采用亚硝酸钠标准溶液进行快速滴定，外指示剂法指示终点。三、实验内容：精密量取本品适量（约相当于盐酸普鲁卡因0.1g）加水40ml与（1 -2）盐 酸液15mL而后置电磁搅拌器上，搅拌使混合均匀，再加漠化钾2g,插入伯电 极后，将滴定管插入液面下约2/3处，在1520用0.05mol/L亚硝酸钠在搅拌 下迅速滴定。，在近终点时将滴定管的尖端提出液面上用少量水将尖端洗涤，洗 液并入溶液中，继续缓慢滴定，至用细玻棒蘸取溶液少许，划过涂有含锌碘化钾 淀粉糊的瓷板上，即显兰色条痕时，停止滴定，3分钟后再蘸取少量划过一次， 如仍显兰色条痕时一，即为终点。1ml亚硝酸钠液（0.05mol/L）相当于 13.64mgCi3H20N2O2HCI。（标示量为：40mg/2ml）中国药典（2015）规定，本品含盐酸普鲁卡因（Ci3H2oN202HC1）应为标 示量的 95.0% 105.0%。三、思考题：1 .加入KBr的目的？2 .重氮化法的影响因素是什么？3 .开始滴定时，滴定管为什么要插入液面，不插入是否可以？4 .写出标示量的计算公式。