补充西德果实(Ziziphus spina-christi L.)的发酵骆驼奶的影响牙髓对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠高血糖的影响.docx
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1、补充西德果实(Ziziphus spinachristi L.)的发酵骆驼奶的影响牙髓对链服佐菌素诱导的糖尿病大鼠高血糖的影响抽象糖尿病是最常见的慢性代谢性疾病之一,其发生率近几十年来有所上升。Sidr (Ziziphus spina-christiL)是一种传统的草本药 用植物。除了其良好的风味外,sidr还具有抗糖尿病,抗炎,镇静,镇痛和降血糖活性。骆驼奶具有很高的营养和健康价值,但 其咸味仍然是其感官特性的主要缺点。生产调味或强化的骆驼奶产品来掩盖咸味是非常有益的。本研究旨在研究西德果肉(SFP) 对发酵骆驼奶的功能和营养特性的影响。以5%, 10%和15%的速率将SFP添加到骆驼奶中,
2、然后在功能和营养特性方面选择 发酵最好的产品(补充15%SFP的骆驼奶),并评估其在链胭佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠中的降血糖活性。将32只雄 性成年白化大鼠(体重150-185g)分为四组:第1组,未治疗的非糖尿病大鼠(阴性对照);第2组,给予STZ的糖尿病大鼠 (60mg/kg体重;阳性对照);第3组,糖尿病大鼠用发酵的骆驼奶(10克/天)喂养基础日粮;和第4组,糖尿病大鼠用补充15%SFP (10克/天)的发酵骆驼奶喂养基础饮食。结果说明,SFP对骆驼奶的补充增加了其总固体、蛋白质、灰分、纤维、粘度、酚类 含量和抗氧化活性,与补充比例成正比。与其他治疗方法相比,补充15%SFP的发酵
3、骆驼奶在感官特性方面的得分最高。补充 15%SFP的发酵骆驼奶表现出显着降低(p0.05)血糖,内二醛,低密度脂蛋白胆固醇,胆固醇,甘油三酯,天冬氨酸氨基转 移酶,丙氨酸氨基转移酶,肌酊和尿素,并且与糖尿病大鼠相比,高密度脂蛋白胆固醇,总蛋白含量和白蛋白显着增加(p0.05)。 与未治疗组相比,在糖尿病大鼠中施用15%SFP的发酵骆驼奶在各种酶和肝功能测试中恢复了一系列组织病理学变化的改善, 说明补充15%SFP的发酵骆驼奶可能对此类患者起到预防作用。关犍字:糖尿病洒德果实;骆驼奶;理化;血糖;胆固醇;尿素1 .引言糖尿病是最常见的慢性代谢性疾病之一,近几十年来发病率不断上升1。这种代谢紊乱有
4、三种主要类型(1-3型),其特 征是血浆葡萄糖水平长期异常升高2。许多因素,如脂肪和蛋白质代谢,碳水化合物代谢改变,胰岛素缺乏或抵抗,是导致糖 尿病的高血糖水平的常见原因。与糖尿病相关的慢性高血糖通常与许多其他并发症相关,例如神经系统、肾脏、视网膜、心血 管、皮肤病和神经疾病3。在2型糖尿病中,胰岛素作用的进行性下降(称为胰岛素抵抗和胰腺B细胞功能障碍)导致血糖水 平升高4。目前2型糖尿病的治疗包括胰岛素和口服降糖药,如睡唾烷二酮类、双弧类、磺酰胭类衍生物和。葡萄糖甘酶抑制 剂。然而,这些药物有几种副作用,包括钠潴留、骨质疏松症、发生乳酸性酸中毒的风险、诱导肥胖以及严重低血糖的发生率 较高5。
5、越来越需要寻找副作用较少的有效抗糖尿病药物。作为替代方案,己经采用了针对这种代谢紊乱的植物性疗法6, 7, 8, 9o抗氧化剂可以减少糖尿病实验和临床模型中的氧化应激标志物10。来自天然来源的生物活性成分也因其功能,药理学 和生物学特性而引起了科学的关注11。其中,sidr (Ziziphus spina-christi)被称为多功能树。其叶子、果实和果汁被认为是生 物活性成分的良好来源,例如酚类、类黄酮、生物碱、环肽、类固醇单宁、白桦酸、三菇皂甘、糖苗、维生素C和生物活性多 糖12, 13, 14。这些生物活性成分显示出针对肝脏疾病、泌尿问题、消化系统综合征、虚弱、肥胖、糖尿病、皮肤感染、食
6、 欲不振、发热、支气管炎、咽炎、贫血、失眠和腹泻的潜在活性,以及免疫调节、抗氧化、抗肿瘤和保肝15, 16。在许多国家, 传统上将生物活性多糖或富含多酚的食物与牛奶混合食用17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24。与牛奶相比,骆驼奶的特点是具有更高的营养和健康价值,因为它含有具有抗氧化和抗炎活性的免疫蛋白。不含p乳球 蛋白(P-LG)的免疫球蛋白可能引起某些人的过敏反响,并含有大量的铁、钾和维生素C、E和A25, 26, 27。骆驼奶还含 有大量的乳铁蛋白、乳过氧化物酶、溶菌酶和免疫球蛋白G和A,与牛奶相比,具有更多的游离氨基酸和肽28, 29, 30o此 外,骆驼奶中非蛋
7、白质结合的氨基酸很容易被微生物消化,此外,当用于发酵剂培养制剂时,肽数量更多,代谢活性增加。因 此,骆驼奶可用于发酵乳生产31, 320传统上,骆驼奶是生吃或自然发酵的33,有些产品是由骆驼奶制成的,例如巴氏杀菌 奶来制造发醉骆驼奶,改善了化学,营养,抗氧化,流变和感官特性,并增加了发酵骆驼奶的营养和健康益处。与糖尿病大鼠 相比,在STZ诱导的糖尿病大鼠中食用补充15%SFP (10g/天)的发酵骆驼奶显着降低了血糖,MDA,胆固醇,TG, LDL-C, AST, ALT,肌酎和尿素水平,并增加了 HDL-C,总蛋白和白蛋白。建议进一步研究以探索在其他乳制品中掺入SFP的效果。牛奶34,发酵牛
8、奶35, 36,奶酪37,酸奶29和奶粉27, 38。然而,与牛奶相比,骆驼奶的特点是咸味,因为它含有较高 的Na和K盐。因此,生产调味或强化的骆驼奶产品以掩盖咸味非常重要17, 18, 19, 20, 21。此外,发酵的骆驼奶已被证 明具有健康益处,包括血管紧张素I转换酶抑制活性、低胆固醇作用以及抗菌、抗氧化、止泻和抗癌活性39, 40o然而,没有 关于在发酵骆驼奶生产中添加sider果肉的潜在影响的可用信息。鉴于上述信息,本研究旨在通过补充生物活性西德果肉(SFP) 来增强发酵骆驼奶的功能特性,并评估其生物利用度和对糖尿病和肝脏疾病的保护作用的改善。2 .材料和方法材料、试剂新鲜的骆驼奶是
9、从埃及北西奈省阿里什的一个私人农场的健康骆驼群中获得的。成熟的西德果实(5公斤)是从埃及 Sharkia的当地市场获得的。起始培养物“Yo-Flex培养物(YC-X11) ”含有嗜热绿球图和保加利亚凫/演的混合菌株,比例为50: 50,从Hansen实验室(丹麦哥本哈根)获得冷冻干燥,并用作酸奶发酵剂。其他化学品和试剂是从Sigma-Aldrich购买的。22高粘度SFP的制备先清洗西德果实。将新鲜果皮和果肉从种子中别离出来,以1: 1 (w/u)的比例与蒸锵水混合以产生高粘度纸浆,并在 受控的冷却条件(4-5。)下储存过夜。使用实验室搅拌机(东芝Mixie,日本东京)混合果皮和果肉,并保持在
10、4-5。0,直到 进一步用于发酵骆驼奶生产。发酵骆驼奶的制造新鲜骆驼奶分为以下四份:第一份不添加添加剂作为对照(C),其他三份以5%, 10%和15%(T1-T3)的比率加入SFP。 使用高速混合器(22, OOOrpm)在55-60下均质化强化骆驼奶基质2分钟;在85的恒温控制水浴中热处理30分钟;在冰浴 中、冷郢至42。0;接衲含有嗜热菌和保加利亚乳杆菌亚抱杆菌般2.5%( w/ v)发酵剂培养物,其溶解在50mL灭菌脱脂牛奶(121P 15分钟)中(从起始酵母至IJ 250 L/66 gal的额定50 U)液用前在42。0下激活15分钟;然后在42P下孵育6-8小时,直到获 得坚硬的凝乳
11、。将凝乳在4町下冷臧过夜,使用混合器搅拌,倒入带盖的100mL塑料瓶中,储存在4rC下,并在制造后1 天进行分析41。实验一式三份重复,每次分析重复。按照发酵骆驼奶的制备时间表,将骆驼奶与5, 10和15%西德果肉混合,在55-60下均质,在85下热处理30分钟, 冷却至42并接种含有嘴券源和Lb. delbrueckii subsp. bulgaricus的2.5%酸奶培养物在42。0下孵育(6-8小时)将凝乳冷藏(41)过夜用电动搅拌器搅拌混合所得凝乳填充100 mLo带盖和41的塑料瓶在制造1天后分析所有处理的结果产物的物理化学,植物化学和感官特性。发酵骆驼奶处理的化学成分,物理化学和植
12、物化学分析,感官评估该步骤涉及按照其他地方描述的方案测定发酵骆驼奶样品的总蛋白、总固体(TS)、脂肪、灰分、纤维、碳水化合物和 可滴定酸度(TA) 42o使用1009烘箱测定sider果肉,骆驼奶和发酵骆驼奶样品的总固体24小时。水分含量的百分比通过 以下公式计算。% 水分=W1 - (W2 x 100) /W1其中,W1 =样品的初始重量;W2=干燥样品的重量总固体含量% = 100 -含水量。采用微凯氏定氮法测定总氮含量(TN),将牛奶组分的TN百分比乘以6.38,将sider果肉的TN百分比乘以6.25来计 算蛋白质含量。使用Gerber方法测定骆驼奶和发酵骆驼奶处理中脂肪的百分比,而使
13、用Soxhlet方法测定sider纸浆中脂肪的 百分比。为了测定灰分含量,将约5克样品在55CTC的马弗炉中加热过夜。将灰分重量与不溶性物质重量相减的产物之差,表 示为粗纤维与原始重量含量的比例。碳水化合物含量根据43按以下公式计算:总碳水化合物% = 100- (%脂肪+ %蛋白质+ %灰分+ %纤维+ %水分)通过将10 g发酵骆驼奶与10 mL蒸馀水混合,并以酚麟为指示剂以淡粉红色的终点为指示剂,用O.INNaOH滴定,并 以乳酸的百分比表示,测定了可滴定的酸度。他们的pH值使用配备玻璃电极的pH计进行监测(葡萄牙HANNA仪器)。发酵 骆驼奶的粘度是根据Aryana 44使用旋转粘度计
14、型实验室,线型号5437确定的。15秒后在30的温度下测定测量值;结果以 厘泊(cP)表示。为了确定发酵骆驼奶样品的植物化学性质,将样品在4照下以20, OOOxg离心60分钟。然后使用0.45|jm 注射器过滤器过滤上清液,并保持在-20。直至进一步测试。总酚含量(TPC),以mg没食子酸当量/100g表示,根据Maksimovic 等人45进行评估,并稍作修改。简单地将100pL不同浓度的测试样品与1mL稀释的FC试剂(1: 10)混合。10分钟后,将 1mL 7.5% (w/v)碳酸钠溶液加入到混合物中并在黑暗中孵育90分钟。在725nm处记录吸光度。TPC根据没食子酸的校准 曲线计算:
15、Y = 0.2808X + 0.0301 ;R2= 0.9983此外,根据Apostolidis等人46评估所制备的酸奶的抗氧化剂(AO)活性(),并使用分光光度计在517nm处注意到 吸光度(Thermo Scient由c, Wilmington, NC, USA)。使用以下公式计算清除活性:DPPH自由基清除率% = 1 -(样品吸光度-空白吸光度)/对照吸光度x 100(1)如47所述,使用氯化铝量热法测定总类黄酮含量。按照Tamime和Robinson的方法,从风味(50),质地(30)和外 观(20)的角度研究了酸奶样品的感官评估41。感官评估由20名经过专业和培训的小组成员组成。样
16、品装在塑料杯中,并用 三位数代码编码。每个杯子含有100亳升刚从冰箱中取出的酸奶样品。不同描述符的感官评估依赖于预先选择的描述符:风味 (甜味,酸度和苦味),质地(没有凝乳均匀性,结块和气泡),外观(乳清,白色和红色)和整体可接受性(所有特征结果 的总和)。编码样本以托盘形式呈现给小组成员。每次样品测试后,小组成员都会获得白开水来清洁他们的味觉,然后再进行 下一个样品。这些数据是在专门设计的选票中提供的。25生物学研究的实验设计农业研究中心(埃及吉萨)提供了 32只体重150-185克的成年成年白化大鼠。将所有动物置于受控的光照条件下(12 小时光照和12小时黑暗),环境温度为222。相对湿度
17、为40-60%,并在动物房间内自由获得水和食物。根据AIN-93指南, 所有动物均可自由获得标准饮食48。在适应基础饮食7天后,白化病大鼠被分为两大类。笫一组(。=8)仅给予标准饮食并 作为正常对照组,第二组(高血糖大鼠,n= 24)以60mg/kg体重(BW)的剂量腹腔注射链服佐菌素(STZ)。24-48小时 后,空腹血糖为200mg/dL的大鼠被认为是糖尿病大鼠。这组主要的糖尿病大鼠被分为三个亚组(每个亚组n = 8) ,第一个 亚组未接受治疗,并作为高血糖阳性对照。第二和第三组分别给予发酵骆驼奶(10g/天)和发酹骆驼奶(10g/d),补充15%SFP0 在实验开始时以7天的间隔测量大鼠
18、的BW。在实验结束时和过夜禁食(10小时)后,处死大鼠。收集血液样品并以3000rpm 离心以获得血清,将其储存在20。0下以进行进一步的生化分析。生化分析血糖水平的测定如别处所述49。根据Thomas等人在血液样本中测定胰岛素50。根据Satoh测定血清中的丙二醛(MDA) 51。此外,根据Bergmeyer Harder52,丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的测定。根据Baranowski 和Westenfelder测量血清肌酊水平5司。根据Marsch等人的血清尿素测定54。总胆固醛也根据酶比色法测定55。根据Devi 和Sharma测定总脂质和甘油三酯(TG)
19、56。低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)也使用Friedewald公式57计算如下:LDL-C=总胆固醇-高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C) - (TG/5)。(2)27胰腺的组织学评估将来自大鼠的胰腺标本固定在10%中性缓冲福尔马林溶液中24 h以确保完美固定,之后在分级醇系列中脱水,在二甲苯 中清除,最后嵌入石蜡中。将组织切成3Pm厚的切片并用苏木精和曙红染色58。使用奥林巴斯BX51显微镜检查组织切片的 组织病理学变化,并用适用于显微镜的奥林巴斯DP72相机拍照,如其他地方所述59。统计分析通过使用SPSS版本20 (2012) 60,通过方差分析,数据表示为均值土均值标准误差。使用显着的治
20、疗,然后是Duncan 新的多范围测试,用于评估结果的统计显着性。在庐0.05时、差异被认为是显着的。3.结果和讨论骆驼奶和SFP的化学成分和植物化学性质表1显示了骆驼奶和SFP的化学成分和植物化学性质。骆驼奶的TS、蛋白质、脂肪、灰分和碳水化合物含量分别为12.36、 3.20、4.16、0.88和4.14g/100g。这些结果与Zang等人获得的结果一致61,他们发现骆驼奶的蛋白质,乳糖,脂肪,灰分 和TS含量分别为3.55, 4.24, 5.65, 0.87和14.31g /100g。此外,Karaman等人62发现,骆驼奶的T分蛋白质、脂肪和 灰分含量分别为11.83、3.10、3.2
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