蛋白多糖属于哪一类蛋白质.docx

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1、蛋白多糖属于哪一类蛋白质 摘要：目的探讨红枣多糖的沉淀特性以及脱蛋白质工艺。方法采纳无水乙醇沉淀法沉淀红枣多糖，Sevag法、三氯乙酸法，以及酶法与Sevag法联用脱蛋白质。结果乙醇浓度达80 时，可沉淀出绝大多数红枣多糖，以60 和70 醇浓度沉淀出的多糖在多糖总量中所占比例最高；酶法与Sevag法联用可脱去91.7 %的蛋白质，且多糖损失少。结论红枣多糖中中等相对分子质量的多糖比例较高；脱蛋白质的最佳方法是酶法与Sevag法联用。 关键词：红枣多糖；脱蛋白质；沉淀特性 中图分类号：TQ460.6文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)03-0021-03 Studies on

2、 Deposition Performance and Removal of Proteins of Jujube Date Polysaccharide WU Hai-yue (College of Food Engineering and Nutritional Science, Shaanxi Normal University, Xian 710062, China) Abstract ：ObjectiveTo study the deposition performance and the technological processing ofremoving proteins of

3、 jujube date polysaccharide. MethodsThe jujube date polysaccharide was precipitated with anhydrous alcohol and proteins was removed by Sevag method, trichloroacetic acid method and enzyme & Sevag unite method, respectively. ResultsMost of polysaccharide could be precipitated at alcohol concentration

4、 of 80 % and the proportion of polysaccharide was the highest at alcohol concentration of 60 % or 70 %. The proteins of 91.7 % could be removed by enzyme & Sevag unite method and the lost of polysaccharide was lower.ConclusionThe middle molecular weight polysaccharide is majority in jujube date poly

5、saccharide and the enzyme & Sevag unite method is the preferred way to remove proteins. Key words：jujube date polysaccharide; removal of proteins; deposition performance 红枣又名中华大枣、大枣、华枣，是鼠李科枣属植物枣（Zizyphus jujuba Mill）树的果实。红枣富含糖类、粗纤维、维生素、氨基酸、矿物质等养分成分1-3，药理探讨证明，多糖是红枣的主要有效成分之一，具有明显的抗补体活性，促进淋巴细胞增生，体外清除自由

6、基，抗氧化，抗苍老，增加免疫等功能4-5。随着多糖的抗肿瘤，提高免疫，抗凝血，降血糖和抗病毒等活性的相继开发，红枣多糖引起了探讨者的极大爱好。 由于多糖的相对分子质量（Mr）一般分布很广，即运用相同的红枣原料，提取或分别过程中的差异都可能造成产物Mr不同。目前多糖的提取分别大多用水提醇沉工艺6，而醇沉往往是多糖分别纯化的第一步，不同醇沉条件对多糖的组成、得率和含量有较大的影响。本试验采纳分步醇沉和分级醇沉方法探讨了红枣多糖的沉淀特性，以了解红枣多糖Mr的分布，同时探讨了红枣粗多糖脱蛋白质的方法，以获得高纯度多糖。 1试验材料与方法 1.1试验材料 红枣（陕西佳县油枣）；木瓜蛋白酶（上海化学试剂

7、开发中心）；牛血清白蛋白（生化试剂，Whatman公司）；石油醚、无水乙醇、氯仿、三氯乙酸等均为分析纯。 1.2红枣多糖的提取 鲜枣50 g去核破裂加入体积比1:10的石油醚脱脂过滤按1:15的料液比加入蒸馏水浸提(100 ，6 h)过滤滤渣重复提取合并滤液离心分别浓缩上清液加入体积比1:4的无水乙醇沉淀离心分别沉淀复溶于水（重复操作）沉淀用无水乙醇、丙酮反复洗涤（直到沉淀近透亮）真空冷冻干燥红枣多糖粗品7, 8。 1.3测定方法 1.3.1多糖含量的测定采纳硫酸-苯酚法。 1.3.2多糖得率计算公式9 1.3.3蛋白质含量测定采纳考马斯亮蓝染色法。 2结果与分析 2.1红枣粗多糖提取 采纳热

8、水浸提法提取红枣多糖，在温度100 、料液比1:15、浸提时间6 h、滤渣提取2次的条件下，测得50 g鲜枣平均可以得到2.125 g多糖，即粗多糖得率为4.25 。 2.2沉淀剂添加量对多糖沉淀的影响 红枣粗多糖溶于水中，加入无水乙醇沉淀，粗多糖溶液与无水乙醇的体积比分别为1:1，1:2，1:3，1:4，1:5，多糖得率见图1。 由图1可见， 红枣多糖溶液与无水乙醇的体积比为1:4时，红枣多糖基本完全沉淀。因此，沉淀红枣多糖的最佳比例应为1:4。 2.2沉淀剂浓度对多糖沉淀的影响 2.2.1分级醇沉红枣粗多糖溶于水，分别以醇浓度10 ，20 ，30 ，40，50 ，60 ，70 ，80 和9

9、0 进行沉淀（红枣多糖溶液与醇体积比为1:4）。冷冻干燥醇沉物，测定多糖含量及多糖得率10，结果见图2。 由图2可见，多糖得率随醇浓度的上升而增加，在醇浓度小于80 时，多糖得率与醇浓度呈指数相关；不同Mr范围的红枣多糖在不同浓度的乙醇溶液中溶解度差异较大，醇沉浓度越高，沉淀的多糖Mr越小；乙醇浓度80 与90 时红枣多糖的得率相差不大，乙醇浓度80 即可。 2.2.2分步醇沉红枣粗多糖溶于水中，加乙醇调醇浓度为10 （红枣多糖溶液与醇体积比为1:4），收集沉淀；调上清液醇浓度为20 、30 ，直至90 ，分别收集沉淀；冷冻干燥醇沉物，测定多糖含量及多糖得率8。结果见图3。 不同醇沉部分的红枣

10、多糖的Mr分布不同。10 30 醇浓度沉淀出的应是一些高Mr的多糖11，90 醇浓度沉淀出的应是一些低Mr的多糖，这两部分多糖在红枣多糖总量中的比例均很小；40 80 醇浓度沉淀出的应是一些中等Mr的多糖，这部分多糖在多糖总量中占很大的比例，且以60 和70 醇浓度沉淀出的多糖比例最大。这表明红枣多糖中中等Mr的多糖比例最高。 2.3红枣多糖脱蛋白质工艺的探讨 2.3.1Sevag法在多糖水溶液中加入1/5体积氯仿，再加入1/25体积正丁醇，猛烈振摇，然后离心分别（3 000 r/min，15 min） 12, 13；上清液再加氯仿和正丁醇重复操作7次；再加入1:4体积比的无水乙醇，沉淀真空冷

11、冻干燥得到多糖。测定多糖的含量及蛋白质的含量，结果见图4。 由图4可见，Sevag法脱蛋白质5次后，红枣多糖粗品中蛋白质下降趋缓；7次后，粗多糖中还有11.8 %的蛋白质，脱蛋白质效果已经不明显。 2.3.2酶法与Sevag法联用在多糖水溶液中加入2 木瓜蛋白酶，pH 6.50、60 条件下水解2 h，然后加入1/5体积氯仿，再加入1/25体积正丁醇猛烈振摇，离心分别（3 000 r/min，15 min），重复操作2次，上清液再以1:4的体积比加入无水乙醇13-15，沉淀真空冷冻干燥得到多糖。 2.3.3三氯乙酸（TCA）法（1）5 TCA 在多糖水溶液中加入1:1体积比的5 TCA，摇匀后

12、低温放置过夜，离心分别（3 000 r/min，15 min），上清液再以1:4体积比加入无水乙醇 13，沉淀真空冷冻干燥物得到多糖；（2）30 % TCA 在多糖水溶液中加入1:1体积比的30 TCA，摇匀后低温放置过夜，离心分别（3 000 r/min，15 min），上清液再以1:4体积比加入无水乙醇，沉淀真空冷冻干燥得到多糖。 比较Sevag法、酶法与Sevag法联用以及TCA法3种方法脱蛋白质的效果，见表1。 由表1可见，用传统的Sevag法脱蛋白质虽可使蛋白质降至9.7 ，但操作至少须7次，且多糖有损失；TCA虽1次就可使蛋白质降至11.4 ，但多糖含量也随之大幅下降，这可能是多糖

13、分解所致；酶法与Sevag法联用，在酶水解2 h后，用Sevag法脱2次即可使蛋白质下降至8.3 ，操作简洁，且多糖损失少，是红枣多糖脱蛋白质的最佳方法。 4结论 （1）温度100 ，料液比1:15，浸提时间6 h，提取2次，红枣多糖溶液与无水乙醇的体积比为1:4，佳县油枣中多糖的得率为4.25 。 （2）分级醇沉结果表明，随着乙醇浓度增加，多糖得率呈增加的趋势；乙醇浓度低于80 时，多糖得率与醇沉浓度呈指数相关；乙醇浓度达80 时，可沉淀出绝大多数的红枣多糖。 （3）分步醇沉结果显示，红枣多糖中低Mr和高Mr多糖所占比例较少，中等Mr的多糖比例较高，以60 和70 醇浓度沉淀出的多糖比例最大

14、。 （4）脱蛋白质试验表明，单纯运用Sevag法脱蛋白质需7次以上；TCA法脱蛋白质时不仅损失了多糖，而且脱蛋白质后多糖复溶性明显减弱；酶法与Sevag法联用是红枣多糖脱蛋白质的最佳方法，在蛋白酶水解蛋白质后，只需用Sevag法2次即可脱去粗多糖中的大部分游离蛋白质。 参考文献 1王军，张宝善，陈锦屏. 红枣养分成分及其功能的探讨J. 食品探讨与开发，2003，24（2）：68-72. 2程功，白焱晶，赵玉英. 枣属植物化学成分及药理活性探讨概况J. 国外医药植物药分册，1999，14（4）：151-157. 3张荣泉，杨企铮. 大枣化学成分探讨J. 中草药，1992，23（11）：609.

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