微生物学实验教案-新乡医学院理论课教案首页grfv.docx

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1、新乡医学学院实验验课教案案首页课程名称称：微生生物学授授课教师师姓名及及职称：丰慧根根教授一、授课课题目实验一细细菌的简简单染色色和革兰兰氏染色色二、授课课对象20055级生物物技术专专业本科科生三、实验验教学目目标与课课时分配配1、学习习微生物物涂片、染染色的操操作技术术；2、掌握握细菌单单染色和和革兰氏氏染色的的方法；3、初步步掌握无无菌操作作技术；4、掌握握革兰氏氏染色反反应原理理、操作作步骤和和意义。3课时四、授课课重点1、微生生物涂片片、染色色的基本本技术；2、无菌菌操作技技术五、授课课难点1、微生生物涂片片、染色色的基本本技术；2、无菌菌操作技技术六、授课课形式实验课讲讲授七、授课

2、课方法与与课前准准备授课方法法：启发发式教学学，讨论论式教学学；课前准备备：做预预实验，准准备示教教材料，写写教案八、教材材与参考考文献沈萍、范范秀荣、李李广武主主编。微微生物学学实验（第第三版），高高等教育育出版社社。九、思考考题1你认认为哪些些环节会会影响革革兰氏染染色结果果的正确确性？其其中最关关键的环环节是什什么？2当你你对一株株未知菌菌进行革革兰氏染染色时，怎怎样能确确证你的的染色技技术操作作正确，结结果可靠靠？十、教研研室主任任及课程负负责人签签字教研室主主任（签签字）课课程负责责人（签签字）年月日年年月日新乡医学学院实验验课教案案课程名称称：微生生物学任任课教师师：丰慧根根教授基

3、本内容容教学手段段和教学学组织细菌的简简单染色色和革兰兰氏染色色一、实验验目的1、学习习微生物物涂片、染染色的操操作技术术；2、掌握握细菌单单染色和和革兰氏氏染色的的方法；3、初步步掌握无无菌操作作技术；4、掌握握革兰氏氏染色反反应原理理、操作作步骤和和意义。二、实验验内容和和原理细菌的涂涂片和染染色是微微生物学学实验中中的一项项基本技技术。细细菌个体体微小，且且较透明明，必须须借助染染色法使使菌体着着色，与与背景形形成鲜明明的对比比，以便便在显微微镜下进进行观察察。此法法操作简简便，适适用于菌菌体一般般形状和和细菌排排列的观观察。用于生物物染色的的染料主主要有碱碱性染料料、酸性性染料和和中性

4、染染料三大大类。碱碱性染料料的离子子带正电电荷，能能和带负负电荷的的物质结结合。因因细菌蛋蛋白质等等电点较较低，当当它生长长于中性性、碱性性或弱酸酸性的溶溶液中时时常带负负电荷，所所以通常常采用碱碱性染料料（如美美蓝、结结晶紫、碱碱性复红红或孔雀雀绿等）使使其着色色。酸性性染料的的离子带带负电荷荷，能与与带正电电荷的物物质结合合。当细细菌分解解糖类产产酸使培培养基ppH下降降时，细细菌所带带正电荷荷增加，因因此易被被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。根据实验验目的不不同，可可分为简简单染色色法、鉴鉴别染色色法和特特殊染色色法等，

5、本本实验主主要做前前面两种种。（一）简简单染色色法原理理：这是最基基本的染染色法，由由于细菌菌在中性性环境下下一般带带负电荷荷，所以以通常采采用一种种碱性染染料如美美蓝、碱碱性复红红、结晶晶紫进行行染色。简简单染色色法是只只用一种种染料使使细菌着着色以显显示其形形态，简简单染色色不能辨辨别细菌菌细胞的的构造。（二）革革兰氏染染色法原原理革兰氏染染色法是是18884年由由丹麦病病理学家家C.GGramm所创立立的。革革兰氏染染色法是是细菌学学上最常常用的鉴鉴别染色色法，因因为通过过此法染染色，可可将细菌菌鉴别为为革兰氏氏阳性菌菌（G+）和革革兰氏阴阴性菌（G-）两大类。革兰氏染染色过程程所用四四

6、种不同同溶液和和作用：1、碱性性染料：这在简简单染色色中已讨讨论过，此此处用结结晶紫。2、媒染染剂：其其作用是是增强染染料与细细菌的亲亲和力，更更好地加加强染料料与细胞胞的结合合。常用用的媒染染剂是碘碘液。3、脱色色剂：帮帮助染料料从被染染色的细细胞中脱脱色。利利用细菌菌对染料料脱色的的难易程程度不同同，而将将细菌加加以区分分。革兰兰氏阳性性细菌不不易被脱脱色剂脱脱色，而而革兰氏氏阴性细细菌则易易被脱色色。常用用的脱色色剂是丙丙酮或乙乙醇，这这里所用用的是995%的的乙醇。4、复染染液：也也是一种种碱性染染料，目目的是使使脱色的的细菌重重新染上上另一种种颜色，以以便与未未脱色菌菌进行比比较。这

7、这里用的的是蕃红红花红溶溶液。近年来由由于对细细菌细胞胞壁的结结构有了了较深入入的了解解，对革革兰氏染染色的机机制提出出不同的的看法。一一般认为为革兰氏氏阳性细细菌的肽肽聚糖层层较厚，经经乙醇处处理后使使之发生生脱水作作用而使使孔径缩缩小，结结晶紫与与碘的复复合物保保留在细细胞内而而不被脱脱色；而而革兰氏氏阴性细细菌的肽肽聚糖层层很薄，脂脂肪含量量高，经经乙醇处处理后部部份细胞胞壁可能能被溶解解并改变变其组织织状态，细细胞壁孔孔径大，不不能阻止止溶剂透透入，因因而将结结晶紫与与碘的复复合物洗洗去而被被脱色。虽虽然如此此，革兰兰氏染色色的差异异并不能能完全认认为是化化学的差差别，也也有物理理结构

8、不不同的结结果，因因为酵母母菌细胞胞壁的成成份完全全和细菌菌不同，但但具有革革兰氏染染色阳性性反应。三、实验验器材1、活材材料：培培养122-166h的枯枯草杆菌菌（Baacillluss suubtiiliss），培培养244小时的的大肠杆杆菌（Esccherrichhia colli）2、染色色液和试试剂：草草酸铵结结晶紫染染液、卢卢哥氏碘碘液、95%酒精、蕃蕃红染液液、复红红、乙醚酒酒精溶液液、香柏柏油、无无菌水3、器材材：废液液缸、洗洗瓶、载载玻片、接接种杯、酒酒精灯、擦镜纸、显微镜等。四、实验验方法1、简单单染色：（1）涂涂片：取取干净载载玻片一块块，在载载玻片的左左、右各各加一滴滴

9、无菌水水，按无无菌操作作法从菌菌种斜面面挑取少少量菌体体与水滴滴充分混混匀，并并涂成薄薄膜，涂涂布面积积约11.5ccm2，左边边涂枯草草杆菌，右右边涂大大肠杆菌菌。注意意取菌不不要太多多，图片片要均匀匀。（2）干干燥：让让涂片自自然晾干干。（3）固固定：手手执玻片一端端，让菌菌膜朝上上，通过过火焰22-3次次固定。在在火上固固定时，用用手摸涂涂片反面面，以不不烫手为为宜。不不能将载载片在火火上烤，否否则细菌菌形态毁毁坏。（染染色前必必须固定定细菌。其其目的有有二：一一是杀死死细菌并并使菌体体粘附于于玻片上上；二是是增加其其对染料料的亲和和力。常常用的有有加热和和化学固固定两种种方法。固固定时

10、尽尽量维持持细胞原原有的形形态。）（4）染染色：将将固定过过的涂片片放在废废液缸上上的搁架架上，加加草酸铵铵结晶紫紫染液11-2mmin。（5）水水洗：倾倾去染色色液，斜斜置载片片，用自自来水的的细水流流由载片片上端流流下，不不得直接接冲在涂涂菌处，直直洗至从从载片上上流下的的水中无无染色液液的颜色色为止。（6）干干燥：将将洗过的的涂片放放在空气气中晾干干或用吸吸水纸吸吸干。（7）镜镜检：先先低倍观察，再再高倍观观察，并并找出适适当的视视野后，将将高倍镜镜转出，在在涂片上上加香柏柏油一滴滴，将油油镜头浸浸入油滴滴中仔细细调焦观观察细菌菌的形态态。2、革兰兰氏染色色：（1）涂涂片：涂涂片方法法与

11、简单单染色涂涂片相同同。（2）晾晾干：与与简单染染色法相相同。（3）固固定：与与简单染染色法相相同。（4）结结晶紫染染色：将将玻片置于于废液缸缸玻片搁架架上，加加适量（以以盖满细细菌涂面面）的结结晶紫染染色液染染色1分钟。（5）水水洗：倾倾去染色色液，用用水小心心地冲洗洗。（6）媒媒染：滴加卢卢哥氏碘碘液，媒媒染1mmin。（7）水水洗：用用水洗去去碘液。（8）脱脱色：将将玻片倾斜斜，连续续滴加995%乙乙醇脱色色20-25ss至流出出液无色色，立即即水洗。（9）复复染：滴滴加蕃红红复染22minn。（10）水水洗：用用水洗去去涂片上上的蕃红染色色液。（11）晾晾干：将将染好的的涂片放放空气中

12、中晾干或或者用吸吸水纸吸吸干。（12）镜镜检：镜镜检时先先用低倍倍，再用用高倍，最最后用油油镜观察察，并判判断菌体体的革兰兰氏染色色反应性性。（13）实实验完毕毕后的处处理：将浸过过油的镜镜头按下下述方法法擦拭干干净：aa.先用用擦镜纸纸将油镜镜头上的的油擦去去；b.用擦镜纸纸沾少许许乙醚酒酒精溶液液将镜头头擦2-3次；c.再用用干净的的擦镜纸纸将镜头头擦2-3次。注注意擦镜镜头时向向一个方方向擦拭拭。看后的的染色玻玻片用废纸纸将香柏柏油擦干干净。五、注意意事项1.载玻玻片要洁洁净无油油迹，否否则菌液液涂不开开。涂片片时，滴滴水不要要过多，挑挑菌量宜宜少，涂涂片要均均匀，菌菌膜宜薄薄。2.革兰

13、兰氏染色色成败的的关键是是酒精脱脱色。如如脱色过过度，革革兰氏阳阳性菌也也可被脱脱色而染染成阴性性菌；如如脱色时时间过短短，革兰兰氏阴性性菌也会被被染成革革兰氏阳阳性菌。脱脱色时间间的长短短还受涂涂片厚薄薄及乙醇醇用量多多少等因因素的影影响，难难以严格格规定。3.染色色过程中中勿使染染色液干干涸。用用水冲洗洗后，应应吸去玻玻片上的残残水，以以免染色色液被稀稀释而影影响染色色效果。4.选用用幼龄的的细菌。G+菌培养12h-16h，E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。六、实验验作业(一)绘绘图绘出Baacillluss suubtiiliss和Esc

14、cherrichhia colli革兰兰氏染色色视野图图。(二)问问题和思思考1你认认为哪些些环节会会影响革革兰氏染染色结果果的正确确性？其其中最关关键的环环节是什什么？2当你你对一株株未知菌菌进行革革兰氏染染色时，怎怎样能确确证你的的染色技技术操作作正确，结结果可靠靠？强调实验验课的要要求和规规则简单复习习理论知知识过渡渡到本实实验目的的结合理论论知识讲讲解实验验原理简单介绍绍本次实实验所用用器材重点介绍绍制片方方法，强强调无菌菌操作边讲解边边演示,并强调调实验注注意事项项通过提出出问题加加强学生生对实验验原理的的理解强调实验验后处理理的重要要性通过正反反两方面面再次强强调实验验注意事事项布

15、置本次次实验报报告和思思考题新乡医学学院实验验课教案案首页课程名称称：微生生物学授授课教师师姓名及及职称：丰慧根根教授一、授课课题目实验二 细细菌的芽芽孢和荚荚膜染色色二、授课课对象20055级生物物技术专专业本科科生三、实验验教学目目标与课课时分配配1、继续续学习微微生物标标本的制制作方法法；2、掌握握芽孢、荚荚膜染色色的基本本原理及及方法;3、巩固固无菌操操作技术术。3课时四、授课课重点1、微生生物标本本的制作作方法；2、芽孢孢、荚膜膜染色的的方法及及注意事事项五、授课课难点1、微生生物标本本的制作作方法；2、芽孢孢、荚膜膜染色的的方法及及注意事事项六、授课课形式实验课讲讲授七、授课课方法

16、与与课前准准备授课方法法：启发发式教学学，讨论论式教学学；课前准备备：做预预实验，准准备示教教材料，写写教案八、教材材与参考考文献沈萍、范范秀荣、李李广武主主编。微微生物学学实验（第第三版），高高等教育育出版社社。九、思考考题1若涂涂片中观观察到的的只是大大量游离离芽孢，很很少看到到芽孢囊囊及营养养细胞，你你认为这这是什么么原因?2组成成荚膜的的成分是是什么?涂片一一般用什什么固定定方法，为为什么?十、教研研室主任任及课程负负责人签签字教研室主主任（签签字）课课程负责责人（签签字） 年年月日年月日新乡医学学院实验验课教案案课程名称称：微生生物学授授课教师师姓名及及职称：丰慧根根教授基本内容容教

17、学手段段和教学学组织细菌的芽芽孢和荚荚膜染色色法一、实验验目的1、继续续学习微微生物标标本的制制作方法法；2、掌握握芽孢、荚荚膜染色色的基本本原理及及方法;3、巩固固无菌操操作技术术。二、实验验内容和和原理芽孢、荚荚膜染色色法都是是利用细细菌各部部位（分分）的构构造不同同，它们们对染料料的亲和和力也不不同。因因此，可可以采用用各种特特殊染色色方法，使使细菌细细胞的不不同构造造能在显显微镜下下显示出出来，便便于观察察和区别别。（一）芽芽孢染色色法：芽孢又称称内生孢孢子（eendoospoore），是是某些细细菌（革革兰氏染染色阳性性杆菌）生生长到一一定时间间（对数数期后期期），在在细胞内内形成一

18、一个圆形形、椭圆圆形或圆圆柱形的的结构。芽孢有的的长在中中央或近近中央，圆圆形或椭椭圆形，芽芽孢的大大小，位位置，在在分类鉴鉴定上有有一定的的意义，它它仅仅是是芽孢细细菌生活活史的一一个环节节，它还还是检验验培养基基灭菌彻彻底不彻彻底的依依据。芽孢壁厚厚、透性性低，着着色和脱脱色均较较困难，当当用弱碱碱性染料料（孔雀雀绿）在在加热的的情况下下进行染染色时，使使染料不不仅进入入菌体也也可进入入芽孢内内，进入入菌体的的染料经经水洗后后被脱色色，当用用对比度度大的复复染色剂剂（蕃红红液）染染色后，芽芽孢仍保保留初染染剂的颜颜色，是是芽孢和和菌体更更易区分分。菌体体呈红色色而芽孢孢呈绿色色。（二）荚荚

19、膜染色色法荚膜是包包围在细细菌细胞胞外的一一层粘液液状或胶胶状物质质，其成成分为多多糖、糖糖蛋白或或多肽。由由于荚膜膜与染料料的亲和和力弱、不不易着色色；而且且可以溶溶于水，易易在用水水冲洗时时被除去去。荚膜虽不不是细胞胞的主要要结构，但但它是细细胞外碳碳源和能能源性贮贮藏物质质，并能能保护细细胞免受受干燥的的影响，同同时能增增加某些些病原菌菌的致病病能力，使使之抵御御宿主吞吞噬细胞胞的吞噬噬。由于荚膜膜与染料料的亲和和力弱、不不易着色色；而且且可以溶溶于水，易易在用水水冲洗时时被除去去。通常常用负染染色法染染色，使使细菌和和背景着着色，背背景与菌菌体之间间形成一一透明区区即荚膜膜，便于于观察

20、，由由于荚膜膜很薄，容容易变形形，在制制片是一一般不用用加热固固定。三、实验验器材1、菌种种：蜡样样芽孢杆杆菌约22 d营营养琼脂脂斜面培培养物；褐球固固氮菌(Azootobbactter chrrooccocccus)约2 dd无氮营营养基琼琼脂斜面面培养物物。2、染色色液和试试剂：55孔雀雀绿水溶溶液、00.5蕃红溶溶液、碳碳素墨水水、甲醇醇、生理理盐水等等3、器材材：试管管夹、酒酒精灯、接接种针、载载玻片、显显微镜、香香柏油、乙乙醚酒精精、擦镜镜纸等。四、实验验方法1、芽孢孢染色：（1）制制片：按按常规涂涂片、干干燥、固固定；（2）染染色：用用试管夹夹夹住玻玻片的一一端，在在涂片上上滴加

21、孔孔雀绿334滴，维维持5mmin；（3）水水洗：待待玻片冷冷却、用用细水流流冲洗至至流出的的水为无无色；（4）复复染：蕃蕃红溶液液复染22-3mmin，水水洗；（5）镜镜检：干干后，先先低倍镜镜观察，再再高倍镜镜观察，并并找出适适当的视视野后，将将高倍镜镜转出，在在涂片上上加香柏柏油一滴滴，将油油镜头浸浸入油滴滴中仔细细调焦观观察。2、荚膜膜染色（湿湿墨水法法）：（1）制制备菌和和墨水混混合液：加一滴滴墨水于于洁净的的载玻片片上，然然后挑取取少量褐褐球固氮氮菌与之之充分混混合均匀匀；（2）加加盖玻片片：将一一洁净盖盖波片盖盖在混合合液上，然然后在盖盖波片上上放一张张滤纸，轻轻轻按压压以吸去去

22、多余的的混合液液；（3）镜镜检：用用低倍镜镜和高倍倍镜观察察。五、注意意事项1、供芽芽孢染色色用的菌菌种应控控制菌龄龄，使大大部分芽芽孢仍保保留在菌菌体上为为宜。2、染色色加热过过程要及及时补充充染液，切切勿让涂涂片干涸涸。3、荚膜膜染色涂涂片不要要用加热热固定，以以免荚膜膜皱缩变变形。4、涂片片不要用用力过猛猛，不要要滴加水水，以防防破坏其其荚膜原原形。六、实验验作业(一)绘绘图1绘出出表示芽芽孢杆菌菌的形态态特征，注注意芽孢孢的形状状、着生生位置及及芽孢囊囊的形态态特征。2 绘绘图说明明你所观观察到的的细菌的的菌体和和荚膜的的形态。(二)问问题和思思考1若涂涂片中观观察到的的只是大大量游离

23、离芽孢，很很少看到到芽孢囊囊及营养养细胞，你你认为这这是什么么原因？2组成成荚膜的的成分是是什么？涂片一一般用什什么固定定方法，为为什么?先点评上上次实验验作业结合理论论知识讲讲解实验验原理简单介绍绍本次实实验所用用器材再次介绍绍制片方方法，强强调无菌菌操作边讲解边边演示,并强调调实验注注意事项项再次强调调实验注注意事项项布置本次次实验报报告和思思考题新乡医学学院实验验课教案案首页课程名称称：微生生物学授授课教师师姓名及及职称：郭伟云云讲师一、授课课题目实验三 放放线菌的的形态观观察二、授课课对象20055级生物物技术专专业本科科生三、实验验教学目目标与课课时分配配1、学习习并掌握握观察放放线

24、菌形形态的基基本方法法；2、初步步了解放放线菌带带形态特特征。3课时四、授课课重点1、放线线菌的制制片方法法及其注注意事项项五、授课课难点1、放线线菌的制制片方法法及其注注意事项项六、授课课形式实验课讲讲授七、授课课方法与与课前准准备授课方法法：启发发式教学学，讨论论式教学学；课前准备备：做预预实验，准准备示教教材料，写写教案八、教材材与参考考文献沈萍、范范秀荣、李李广武主主编。微微生物学学实验（第第三版），高高等教育育出版社社。九、思考考题1试比比较三种种培养和和观察放放线菌方方法的优优缺点。2镜检检时，你你如何区区分放线线菌的基基内菌丝丝和气生生菌丝？十、教研研室主任任及课程负负责人签签字

25、教研室主主任（签签字）课课程负责责人（签签字） 年年月日年月日新乡医学学院实验验课教案案课程名称称：微生生物学实实验授课课教师姓姓名及职职称：郭郭伟云 讲师基本内容容一、实验验目的1、学习习并掌握握观察放放线菌形形态的基基本方法法；2、初步步了解放放线菌带带形态特特征。二、实验验内容和和原理放线菌是是指能形形成分枝枝丝状体体或菌丝丝体带一一类革兰兰氏阳性性细菌。常见放线线菌大多多能形成成菌丝体体，紧贴贴培养基基表面或或深入培培养基内内生长带带叫基内内菌丝（简简称“基丝”），基基丝生长长到一定定阶段还还能向空空气中生生长出气气生菌丝丝（简称称“气丝”），并并进一步步分化产产生孢子子丝及孢孢子。放

26、线菌的的孢子丝丝形状和和孢子排排列情况况是放线线菌分类类的重要要依据，为为了不打打乱孢子子的排列列情况，常常用印片片染色法法和胶带带纸粘菌菌染色法法进行制制片观察察。为了观察察放线菌菌的形态态特征，人人们设计计了各种种培养和和观察方方法，这这些方法法的主要要目的是是为了尽尽可能保保持放线线菌自然然生长条条件下的的形态特特征，本本实验介介绍其中中几种常常用的方方法。（1）扦扦片法将放线菌菌接种在在琼脂平平板上，扦扦上灭菌菌盖玻片片后培养养，使放放线菌丝丝沿着培培养基表表面与盖盖玻片的的交接处处生长而而附着在在盖玻上上，观察察时，轻轻轻取出出盖玻片片，置于于载玻片片上直接接镜检。这这种方法法可以观

27、观察到放放线菌自自然生长长状态下下的特征征，而且且便于不不同生长长期的形形态。（2）玻玻璃纸法法玻璃纸是是一种透透明的半半透膜，将将灭菌的的玻璃纸纸覆盖在在琼脂平平板表面面，然后后将放线线菌接种种于玻璃璃纸上，经经培养，放放线菌在在玻璃纸纸上生长长形成菌菌苔。观观察时，揭揭下玻璃璃纸，固固定在载载玻片上上直接镜镜检。这这种方法法既能保保持放线线菌的自自然生长长，也便便于观察察不同生生长期的的形态特特征。（3）印印片法将要观察察带放线线菌带菌菌落或菌菌苔，先先印在载载玻片上上，经染染色后观观察。这这种方法法主要用用于观察察孢子丝丝带形态态、孢子子带排列列及其形形状等。该该方法简简便、但但形态特特

28、征可能能有所改改变。我们本次次实验主主要采用用印片法法来观察察放线菌菌的基本本形态。三、实验验器材1.菌种种：细黄黄链霉菌菌(strrepttomyycs miicuooflaavuss)又称54406或或青色链链霉菌（S. glaucus），弗氏链霉菌（S. fradiae）；2.染色色液：石石炭酸复复红染色色液；3.器材材：载玻玻片，玻玻璃纸，小小刀，接接种环，吸吸水纸，擦擦镜纸，酒酒精灯，香香柏油，乙乙醚-乙醇混混合液，显显微镜。四、实验验方法（1）印印片：用用解剖刀刀取放线线菌培养养体一块块，将菌菌面朝上上放在一一载玻片片上，另另取一洁洁净载玻玻片置于于火焰上上微热后后，盖在在菌苔上上

29、，轻轻轻按压，使使培养物物（气丝丝、孢子子丝或孢孢子）粘粘附（“印”）在后后一块载载玻片的的中央，有有印迹的的一面朝朝上，通通过火焰焰2-33次固定定；（2）染染色：用用碳酸复复红覆盖盖印迹，染染色约11minn后水洗洗；（3）镜镜检：干干后先用用低倍镜镜后用高高倍镜，最最后用油油镜观察察孢子丝丝、孢子子的形态态及孢子子排列情情况。五、注意意事项1、铲菌菌苔时注注意不要要将琼脂脂铲得太太厚，以以免影响响压片；2、玻片片不要太太热，以以免琼脂脂融化，干干扰放线线菌的附附着；3、制片片过程中中切不可可涂片，以以免破坏坏菌丝形形态；4、印片片完毕后后注意将将印有放放线菌的的一面朝朝上进行行固定，印印

30、片不要要用力过过大压坏坏琼脂培培养基，也也不要挪挪动，以以免改变变放线菌菌的自然然形态；5、观察察时宜采采用略暗暗的光线线。六、实验验作业(一)绘绘图绘出说明明你所观观察到的的放线菌菌的主要要形态特特征。(二)问问题和思思考1试比比较三种种培养和和观察放放线菌方方法的优优缺点。2镜检检时，你你如何区区分放线线菌的基基内菌丝丝和气生生菌丝？教学手段段和教学学组织先点评上上次实验验作业结合理论论知识和和图片讲讲解实验验原理简单介绍绍本次实实验所用用器材边讲解边边演示印印片方法法,并强强调实验验注意事事项再次强调调实验注注意事项项布置本次次实验报报告和思思考题新乡医学学院实验验课教案案首页课程名称称

31、：微生生物学 授授课教师师姓名及及职称：郭伟云云讲师一、授课课题目实验四 酵酵母菌的的形态观观察及死死活细胞胞的鉴别别二、授课课对象20055级生物物技术专专业本科科生三、实验验教学目目标与课课时分配配1、观察察酵母菌菌的细胞胞形态及及出芽生生殖方式式；2、学习习掌握区区分酵母母菌死、活活细胞的的染色方方法；3、掌握握酵母菌菌的一般般形态特特征及其其与细菌菌的区别别。3课时四、授课课重点1、酵母母菌的形形态特征征2、酵母母菌死活活细胞鉴鉴别的原原理五、授课课难点1、酵母母菌的形形态特征征2、酵母母菌死活活细胞鉴鉴别的原原理六、授课课形式实验课讲讲授七、授课课方法与与课前准准备授课方法法：启发发

32、式教学学，讨论论式教学学；课前准备备：做预预实验，准准备示教教材料，写写教案八、教材材与参考考文献沈萍、范范秀荣、李李广武主主编。微微生物学学实验（第第三版），高高等教育育出版社社。九、思考考题1、吕氏氏碱性美美蓝染液液浓度和和作用时时间的不不同，对对酵母菌菌死细胞胞数量有有何影响响？试分分析其原原因。2、在显显微镜下下，酵母母菌有哪哪些突出出的特征征区别于于一般细细菌？十、教研研室主任任及课程负负责人签签字教研室主主任（签签字）课课程负责责人（签签字） 年年月日年月日新乡医学学院实验验课教案案课程名称称：微生生物学实实验授课课教师姓姓名及职职称：郭郭伟云 讲师基本内容容一、实验验目的1、观察

33、察酵母菌菌的细胞胞形态及及出芽生生殖方式式；2、学习习掌握区区分酵母母菌死、活活细胞的的染色方方法；3、掌握握酵母菌菌的一般般形态特特征及其其与细菌菌的区别别。二、实验验内容和和原理酵母菌是是多形的的、不运运动的单单细胞微微生物，细细胞核与与细胞质质已有明明显的分分化，菌菌体比细细菌大。繁繁殖方式式也较复复杂，无无性繁殖殖主要是是出芽生生殖，仅仅裂殖酵酵母属是是以分裂裂方式繁繁殖；有有性繁殖殖是通过过接合产产生子囊囊孢子。本实验通通过用美美蓝染色色浸片来来观察生生活的酵酵母形态态和出芽芽生殖方方式。美蓝是一一种无毒毒性染料料，它的的氧化型型是蓝色色的，而而还原型型是无色色的，用用它来对对酵母的

34、的活细胞胞进行染染色。由于细胞胞中新陈陈代谢的的作用，使使细胞内内具有较较强的还还原能力力，能使使美蓝从从蓝色的的氧化型型变为无无色的还还原型，所所以酵母母的活细细胞无色色，而对对于死细细胞或代代谢缓慢慢的老细细胞，则则因它们们无此还还原能力力或还原原能力极极弱，而而被美蓝蓝染成蓝蓝色或淡淡蓝色。因因此，用用美蓝水水浸片不不仅可观观察酵母母的形态态，还可可以区分分死、活活细胞。三、实验验器材1、菌种种：酿酒酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）培养约2d的麦芽汁斜面培养物；2、染色色液和试试剂：00.055和0.1%吕吕氏碱性性美蓝染染液；3、器材材：废液液缸、载载玻片、盖

35、盖玻片、酒酒精灯、擦擦镜纸、显显微镜等等。四、实验验方法（1）在在载玻片片中央加加一滴00.1吕氏碱碱性美蓝蓝染色液液，用接接种环挑挑取少量量酵母菌菌苔放入入上述液液滴里，混混合均匀匀；（2）用用镊子取取一块盖盖玻片，先先将一边边与菌液液接触，然然后慢慢慢将盖玻玻片放下下使其盖盖在菌液液上；（3）将将制片放放置约33minn，先低低倍镜后后高倍镜镜观察酵酵母形态态和出芽芽情况，并并根据颜颜色区别别死活细细胞。（4）染染色300minn后再次次观察，注注意死活活细胞数数量的变变化；（5）用用0.005的的吕氏碱碱性美蓝蓝染色液液重复上上述操作作。五、注意意事项1、加染染液不宜宜过多或或过少，否否

36、则，在在盖上盖盖玻片时时，菌液液会溢出出或出现现大量气气泡而影影响观察察；2、盖玻玻片不宜宜平着放放下，以以免产生生气泡影影响观察察。六、实验验作业(一)绘绘图绘图说明明你所观观察到的的酵母菌菌的细胞胞结构及及出芽生生殖方式式。(二)问问题和思思考1、吕氏氏碱性美美蓝染液液浓度和和作用时时间的不不同，对对酵母菌菌死细胞胞数量有有何影响响？试分分析其原原因。2、在显显微镜下下，酵母母菌有哪哪些突出出的特征征区别于于一般细细菌？教学手段段和教学学组织先点评上上次实验验作业结合理论论知识和和图片讲讲解实验验原理简单介绍绍本次实实验所用用器材边讲解边边演示实实验方法法,并强强调实验验注意事事项再次强调

37、调实验注注意事项项布置本次次实验报报告和思思考题新乡医学学院实验验课教案案首页课程名称称：微生生物学授授课教师师姓名及及职称：刘涌涛涛副教授授一、授课课题目实验八 培养基基的制备备与灭菌菌二、授课课对象20055级生物物技术专专业本科科生三、实验验教学目目标与课课时分配配1、明确确培养基基的配制制原则；2、掌握握配制培培养基的的一般方方法和步步骤；3、了解解高压蒸蒸汽灭菌菌的基本本原理及及应用范范围；4、掌握握高压蒸蒸汽灭菌菌技术，了了解几种种常用灭灭菌方法法。6课时四、授课课重点1、掌握握配制培培养基的的一般方方法和步步骤；2、了解解高压蒸蒸汽灭菌菌的基本本原理及及应用范范围；五、授课课难点

38、掌握配制制培养基基的一般般方法和和步骤六、授课课形式实验课讲讲授七、授课课方法与与课前准准备授课方法法：启发发式教学学，讨论论式教学学；课前准备备：做预预实验，准准备示教教材料，写写教案八、教材材与参考考文献沈萍、范范秀荣、李李广武主主编。微微生物学学实验（第第三版），高高等教育育出版社社。九、思考考题为什么微微生物培培养需要要不同的的培养基基？十、教研研室主任任及课程负负责人签签字教研室主主任（签签字）课课程负责责人（签签字） 年年月日年月日新乡医学学院实验验课教案案课程名称称：微生生物学实实验授课课教师姓姓名及职职称：刘刘涌涛副副教授基本内容容一、实验验目的1、明确确培养基基的配制制原则；

39、2、掌握握配制培培养基的的一般方方法和步步骤；3、了解解高压蒸蒸汽灭菌菌的基本本原理及及应用范范围；4、掌握握高压蒸蒸汽灭菌菌技术，了了解几种种常用灭灭菌方法法。二、实验验原理培养基是是按照微微生物生生长繁殖殖或积累累代谢产产物所需需的各种种营养物物质，用用人工方方法配制制而成的的一种基基质。它它包括碳碳源、氮氮源、能能源、生生长因子子、无机机盐和水水六类营营养要素素。由于于不同微微生物细细胞组成成不同，因因而所需需营养基基质不同同，为了了分离、培培养和鉴鉴定不同同的微生生物，必必须根据据其需要要，配制制合适的的培养基基。培养基的的种类繁繁多，根根据培养养基的成成分、物物理性状状不同，可可分为

40、天天然培养养基、合合成培养养基、半半合成培培养基、固固体培养养基、半半固体培培养基和和液体培培养基。灭菌是指指应用物物理或化化学的方方法，杀杀灭物体体表面和和内部一一切微生生物营养养体、芽芽孢和孢孢子。灭灭菌方法法很多，可可分为加加热、过过滤、照照射和化化学药品品法等。常用加热热灭菌法法：1、干热热灭菌： 这种灭灭菌法是是利用热热空气使使物体升升温，而而导致物物体上所所带的微微生物由由于干热热脱水而而死亡。常常用于空空玻璃器器皿、金金属用具具等的灭灭菌，对对于带胶胶皮的物物品、液液体及固固体培养养基等不不能使用用此法灭灭菌。2、高压压蒸汽灭灭菌法 此种灭菌菌方法的的原理是是在一密密闭容器器中，

41、煮煮沸时形形成的蒸蒸汽不能能扩散到到容器外外面去，而而堆积在在密闭的的容器内内，使蒸蒸汽压力力升高；随着水水的煮沸沸，温度度也就相相应增高高。利用用过热的的蒸汽来来使细菌菌及其耐耐热芽孢孢蛋白质质凝固变变性，以以致失去去生命力力，从而而达到彻彻底灭菌菌的效果果。高压蒸汽汽灭菌是是最有效效的灭菌菌方法。一一般在11.055kg/cm22（15磅/英寸2），1221.330C保保持155300分钟进进行灭菌菌，就可可杀死一一切微生生物细胞胞及其芽芽孢或孢孢子。进进行高压压蒸汽灭灭菌的仪仪器叫高高压蒸汽汽灭菌锅锅。灭菌菌对象是是培养基基、玻璃璃器皿和和各种不不因高温温处理而而变质的的物品材材料。但但

42、对一些些不耐高高温、高高压的溶溶液或培培养基不不宜用此此种方法法。三、器材材和用品品110000mml刻度度分装搪搪瓷缸、2200mml烧杯杯、角匙匙、天平平、称量量纸或小小烧杯、ppH试纸纸、5000mll三角瓶瓶，188mm1800mm试试管、纱纱布、棉棉花、110mll移液管管等。2牛肉肉膏、蛋蛋白胨、NNaCll、100NaaOH溶溶液、110盐盐酸溶液液。四、方法法和步骤骤1培养养基配方方：牛肉肉膏5.0g,蛋白胨胨10.0g，NNaCll5.00g,琼琼脂200.0gg,蒸馏馏水10000mml,ppH7.0。2操作作步骤（1）用用称量纸纸分别称称取牛肉肉膏5.0g、蛋蛋白胨110

43、.00g，把把牛肉膏膏连同称称量纸与与蛋白胨胨一起放放入2000mll的烧杯杯中，然然后加入入1000ml水水，置电电炉上加加热搅拌拌至其完完全溶解解。用玻玻璃棒把把称量纸纸挑出冲冲净（用用洗瓶洗洗，冲洗洗液流入入烧杯）。（2）将将溶解的的混合液液倒入110000 mll搪瓷缸缸中，称称取5.0gNNaCll加入，洗洗涤烧杯杯233次，洗洗液倒入入缸中，补补足自来来水到110000ml（液液体培养养基制成成，即可可分装），搅搅拌加热热煮沸。（3）称称取200g琼脂脂，放入入煮沸的的溶解液液中，继继续加热热至琼脂脂完全溶溶解，加加热过程程中要不不断搅拌拌以防琼琼脂沉淀淀糊底或或溢出杯杯外。（4）

44、待待琼脂完完全融化化后，再再补足自自来水，趁趁热用玻玻璃棒蘸蘸少许液液体点在在pH试试纸上测测定酸碱碱度并用用NaOOH或HHCl溶溶液调整整pH值值至7.277.4。（5）趁趁热分装装入155mm1500mm试试管中，每每管5mml（斜斜面用）。18mm180mm试管，每管分装15ml（平板用）。（6）将将余下的的分装在在5000ml三三角瓶中中（每瓶瓶约 3300mml）。（7）将将上述分分装在各各种容器器中的培培养基，塞塞好棉塞塞，捆扎扎好。（8）00.1MMPa高高压蒸汽汽灭菌330分钟钟。（9）摆摆斜面灭灭菌后，需需做斜面面的试管管，应待待培养基基冷却至至5060（温度度不能过过高，

45、以以防斜面面上冷凝凝水太多多）后，摆摆成斜面面。斜面面的斜度度要适当当，斜面面的长度度不超过过试管长长度的二二分之一一。摆放放时注意意不要使使培养基基沾污棉棉塞，冷冷凝过程程中不要要移动试试管，待待斜面完完全凝固固后，再再收起使使用或贮贮藏。五、注意意事项1、称取取药品时时严防药药品混杂杂，一把把牛角匙匙称一种种药品；2、蛋白白胨极易易吸湿，称称取时动动作要迅迅速；3、配制制固体培培养基时时，先将将其他药药品加热热溶解到到快沸时时，再将将称好的的琼脂加加入，继继续加热热至琼脂脂完全熔熔化，此此过程要要不断搅搅拌，以以免琼脂脂糊底，并并控制火火力，防防止沸腾腾外溢； 4、分装装量根据据试管大大小和实实际需要要而定，固固体培养养基装量量约为管管高的11/5，液液体培养养基的装装量约为为管高的的1/44，三角角瓶的装装