实验三-医学微生物学-精品课程gbke.docx

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1、实验三 物理因因素、化化学因素素对细菌菌的影响响和药物敏敏感试验验目的要求求1、掌握握消毒、灭灭菌、防防腐、无无菌的概概念。 2、熟悉悉常用物物理灭菌菌法的原原理、方方法及用用途。 3、熟悉悉化学消消毒剂的的基本原原理、了了解常用用药物的的作用机机制。 物理因素素对细菌菌的影响响（结合实实物在消消毒室中中介绍）1.热力力灭菌：（1）干干热灭菌菌：干烤（11601700，2hh）、焚焚烧（易易燃、废废弃物品品）、烧烧灼（不不易燃的的物品，如如取菌环环、试管管口）、红红外线：0.77710000mmm电磁波波,110 mm效效应最强强。（2）湿湿热灭菌菌巴氏消毒毒法：661.1162.8 300m

2、inn；711.7 1530ss，后一一种方法法最常用用。煮沸法：1000 5mmin可可杀死一一般细菌菌的繁殖殖体，水水中加入入2%碳碳酸氢钠钠，沸点点可达到到1055。流通蒸汽汽法：1100，15530mmin，可可杀灭细细菌的繁繁殖体。高压蒸汽汽灭菌法法：高压压锅-在1103.4kPPa（11.055kg/cm22、115磅/英寸22）蒸汽汽压下，温温度可达达1211.3，维持持1520mmin，可可杀灭芽芽孢在内内的所有有微生物物。干热灭菌菌与湿热热灭菌的的比较：穿透性；湿热穿穿透性强强。潜热；由由气体转转变为液液体时释释放热量量。菌体蛋白白在液体体中经加加热易变变性。2.辐射射杀菌法

3、法：（1）紫紫外线（UV）：200300nm（100+380nm）;265266nm杀菌作用最强;使一条链上相临的嘧啶形成二聚体。具有光复活作用，不能用紫外线制备灭活菌苗。紫外线穿透力差，只能用于空气和物体表面的杀菌。紫外线对人体皮肤、视网膜均有损伤。不能开着紫外线灯工作。（2）电电离辐射射：g射线线、X射线（3）微微波：1110000mmm的电磁磁波3. 滤滤过除菌菌法：滤滤菌器（ffilttrattionn）薄膜滤菌菌器（00.255nm）、玻玻璃滤菌菌器（GG1G6）、石石棉滤菌菌器（KK、EKK、EKKS型）、SSeittz滤菌菌器。适适合于不不耐热的的液体（血血清、细细胞因子子、抗生

4、生素、毒毒素等）及及气体的的滤过。化学因素素对细菌菌的影响响常用消毒毒剂：酚类、醇醇类、重重金属盐盐类、氧氧化剂、表表面活性性剂、烷烷化剂。作用机理理：1、促进进菌体蛋蛋白质变变性或凝凝固；2、干扰扰细菌的的酶系统统和代谢谢；3、损伤伤细菌的的细胞膜膜1%龙胆胆紫、22.5%碘酒、775%乙乙醇、00.1%新洁尔尔灭（红红汞现在在已取消消）。影响消毒毒剂灭菌菌效果的的因素：1、消毒毒剂的性性质、浓浓度与作作用时间间-乙乙醇例外外，700%乙醇醇消毒效效果最好好；2、微生生物的种种类与数数量；3、温度度；4、pHH；5、有机机物。消毒剂对对人体毒毒性太大大，只能能外用，不不能口服服或注射射。问题

5、：消消毒剂浓浓度越高高杀菌效效果越好好？为什什么？药物敏感感试验材料1、菌种种：大肠肠杆菌、葡葡萄球菌菌2、药敏敏纸片、接接种环、镊镊子、酒酒精灯、培培养箱等等原理在已接种种被测细细菌的琼琼脂平板板上，平平贴含有有一定量量抗菌药药物的药药敏纸片片，由于于培养基基中含大大量的水水分，所所以抗菌菌药物很很快溶解解于培养养基内，并并向四周周扩散，药药物在琼琼脂中的的浓度随随离开纸纸片的距距离增大大而降低低，当低低于MIIC时细细菌则生生长而形形成抑菌菌环。在药物浓浓度恰高高于该药药物对该该菌的最最低抑菌菌浓度的的琼脂中中，该细细菌的生生长就受受到抑制制，在药药物浓度度低于该该药物对对该菌的的最低抑抑

6、菌浓度度的琼脂脂中，细细菌能够够生长。孵孵育后，在在含药纸纸片的周周围形成成透明的的抑菌环环，量取取该抑菌菌环的直直径，可可测得该该细菌对对相应药药物的敏敏感度。 培养基：水解酪酪蛋白琼琼脂（MM-H琼琼脂）抑菌环的的直径与与最低抑抑菌浓度度（MIIC）呈呈负相关关。方法：同连续划划线接种种法密集集接种细细菌（改改良的KK-B法法）。用无菌镊镊子夹取取药敏制制片，分分别贴于于平板上上，各药药敏纸片片之间的的距离应应基本相相等，一一般每个个平板贴贴四个药药敏纸片片。37、培培养244h后测测定抑菌菌圈，作作出结果果判定。敏感程度度判断标标准：115mmm-敏感（非非检验专专业）质量控制制：培养养

7、基（MM-H琼琼脂）、纸纸片性质质与直径径（吸水水纸、直直径6mmm）、每张张纸片吸吸水2mml，抗抗生素含含量（青青霉素110m、红红霉素115mgg）、接接种细菌菌的量（相相当于11/2 0.5麦氏氏比浊管管浓度，即即0.7751108）。琼脂脂厚度为为4mmm土lmmm （平平板直径径？9ccm）。耐药敏感定量实验验有：试试管稀释释法、EE-试验验定性实验验可指导导临床医医生使用用什么药药物，定定量实验验可指导导临床医医生该药药物使用用多少量量，根据据半衰期期决定每每天给几几次药。实验成绩绩：不做做实验报报告，根根据药敏敏试验操操结果给给以实验验成绩（划划线7分分、贴纸纸片2分分、学号号标记11分）。注意事项项 第3章章理论课课没讲，在在实验课课上介绍绍一下灭灭菌、消消毒、防防腐、无无菌、无无菌操作作的概念念，消毒毒灭菌的的方法等等，对于于检验专专业的同同学，每每人做一一个平板板，强调调质量控控制的重重要性。