氨基甲酸酯类农药检测用免疫传感器的研究baar.docx

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1、氨基甲酸酸酯类农农药残留留检测用用免疫传传感器的的研究The StuddyoffImmuunossenssor onCCarbbamaatePPestticiidessResiidueeDeteectiion摘要：近近年来，食食品生物物安全问问题越来来越受到到各国政政府和百百姓的重重视，寻寻找一种种优良的的检测方方法成为为当前食食品安全全监督部部门的当当务之急急。农药药残留成成为危害害食品安安全的重重要问题题之一，这这就对食食品农药药残留的的快速检检测提出出高要求求。生物物传感器器技术具具有快速速、灵敏敏、特异异、简便便等特点点，在食食品检测测领域具具有广阔阔的应用用前景，因因此生物物传感器器

2、作为一一种新的的检测分分析工具具，在检检测食品品农残中中具有广广泛的应应用前景景。本文文主要介介绍免疫疫传感器器的特点点、优点点、国内内外的研研究现状状、存在在的问题题及我们们要研究究的氨基基甲酸酯酯类农药药检测用用免疫传传感器的的内容和和预期达达到的效效果。关键词：农药残残留；生生物传感感器；检检测Absttracct:IIn rreceent yeaars,govvernnmennts andd peeoplle ppaidd moore atttenttionn too prrobllem of foood bbio-saffetyy. FFinddingg ann exxcelllen

3、nt mmethhodtto ssolvve tthesse pprobblemms bbecoomess an urrgennt wworkk inn foood saffetyy suuperrvissionn deeparrtmeentss. The onee off thhe mmostt immporrtannt pprobblemms ffor harrminng ffoodd saafetty iis tthe pessticcidee reesidduess, aand a rrapiid ddeteectiion of pessticcidee reesidduess inn

4、 foood makke hhighh deemannds. Beecauuse of thee exxperrt, sennsittivee, qquicck-rrespponddinggreaactiion andd siimplle,bbiossenssor is widdelyy apppliied in thee foood anaalyssis. So biioseensoor aas aa noovell deetecctioon aand anaalyssis toools aree wiidelly uusedd inn deetecctioon oof ppestticii

5、de ressiduues in foood. In thiis ppapeer, thee chaaraccterristticss, tthe advvanttagee, rreseearcch hhomee annd aabrooad, oppen queestiionss off immmunoosennsorr, ass weell as thee sttudyy off immuunossenssor onccarbbamaate pestticiidess deteectiionwweree diiscuusseed.Keywwordd:carbbamaateppestticii

6、de ressiduue；immmunoosennsorr；dettecttionn引言农药是重重要的农农业生产产资料，在在农产品品生产中中对病、虫虫、草等等危害的的防治有有着不可可替代的的作用，由由于使用用农药我我国每年年仅粮食食一项就就挽回损损失约占占总产量量的7%。 由由此可见见，农药药的发明明和使用用给农业业生产带带来了革革命性的的变化，而且在农业生产中发挥着越来越重要的作用。虽然农药在我国农业生产中有着不可替代的作用，但由于农药的不合理使用，导致很多农产品中农药残留超标，这严重威胁了人类的饮食安全1。农药残留是农药使用后一个时期内没有被分解而残留于生物体、收获物、土壤、水体、大气中的

7、微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称，不仅对环境造成了极大的污染，同时，通过食物链的富集作用，进入人体，对人体产生各种危害。1.氨基基甲酸酯酯类农药药残留检检测用免免疫传感感器研究究的意义义食品安全全问题除除了作为为重大公公共卫生生问题外外,也是一一个社会会问题,涉及到到管理监监督水平平、食品品生产经经营者的的素质、全全社会消消费观念念等。然然而,长期存存在的科科技“瓶颈”是影响响我国食食品安全全的重要要因素。为为了能够够改善我我国食品品安全现现状、减减少食源源性疾病病的发病病率、更更有效的的对市场场进行卫卫生监管管,对于关关键检测测技术的的研究非非常重要要。1.1农农药残留留的传统统

8、检测方方法农药残留留分析既既要有精精细的微微量操作作手段，又又需要高高灵敏度度的痕量量检测技技术。经经典的分分析方法法,如液液相色谱谱（LCC）、气气相色谱谱（GCC）以及超超临界流流体层析析等分析析方法。目目前实验验室使用用最多的的农药检检测方法法是高效效液相色色谱法（HPLLC）和气象象色谱-质谱（GC-MS）以及特特异性检检测如电电子捕捉捉检测、氮氮磷检测测已与质质谱分析析法结合合并应用用于农药药残留包包括主要要的农药药代谢物物和降解解物分析析2-4。这这些分析析方法虽虽然具有有高选择择性，但但是操作作繁琐、耗耗时长、成成本高，并且要求对样品进行预浓缩和衍生处理，难以得到广泛的应用。因此

9、,人们迫切需要快速、可靠、经济和适合于现场应用的快速检测方法。于是,廉价、快速、可信、敏感的生物传感器应运而生。与传统的分析方法相比,生物传感器具有如下特点：待测的样品不用经过预先处理，,除缓冲液外无需其他试剂，可以同时对样品进行分离和检测。专一性强，只对特定的底物起反应，而且不受颜色、浊度的影响。分析速度快，可以在一分钟得到结果。准确度高，一般相对误差可以达到1。操作系统比较简单，可以实现连续监侧，容易实现自动分析成本低，在连续使用时，每例测定仅需要几分钱人民币。有的生物传感器能够可靠地指示微生物培养系统内的供氧状况和副产物的产生。敏感物质经固定化可重复使用。响应快,样品用量微传感器连同侧定

10、仪的成本远低于大型分析仪器,便于推广普及1-3。1.2生生物传感感器简介介根据生物物传感器器中分子子识别元元件即敏敏感元件件用于农农药残留留的生物物传感器器可分为为五类：酶传感感器（enzzymeesennsorr），微生物物传感器器（miccrobbiallsennsorr），压电电生物传传感器（piezzoessenssor）和免疫疫传感器器（immmunoolseensoor），显而而易见，所应用的敏感材料依次为酶、微生物个体、抗原和抗体。免疫传感器是根据抗原和抗体特异性结合所引发的免疫反应的原理研制成的传感器。相对于强特异性的免疫传感器而言前几种生物传感器分别存在，酶的价格较高、稳定性

11、稍差；稳定性和选择性不高；增加了操作时间,蛋白质活性在干燥过程易受到损害，更突显了免疫传感器的优越性。免疫反应一般难以检测到小分子物质,通常用荧光素、放射性同位素或酶等物质来标记抗原或抗体,然后用现代测试仪器检测。免疫分析分类方法较多,按标记技术的不同可分为酶联免疫吸附分析法、生物发光免疫分析、荧光标记免疫分析及化学发光免疫分析等;按反应体系物理状态的不同可分为均相免疫分析和非均相免疫分析。电化学免疫传感器是生物技术和电化学技术相结合的产物，而免疫感受器在检测过程中只有抗体和抗原污染物结合没有化学反应，需要其他体系帮助才能完成信号的转换和放大5-7，在早期的免疫传感器中较多的使用酶标抗体或抗原

12、，但是酶标的步骤繁琐，且酶易失活，研究一种无标记得电化学免疫传感器受到很多学者的重视。1.3氨氨基甲酸酸酯类农农药残留留检测用用免疫传传感器研研究的目目的本研究重重点研究究了无标标记免疫疫传感器器的设计计方法如如应用了了自组装装技术，凝凝胶溶胶胶技术，定定向固定定技术，纳纳米固定定技术等等将无标标记的抗抗原或抗抗体固定定在电极极上，优优化出最最适宜的的固定方方法，进进一步降降低检测测限，并并应用于于果蔬中中农药残残留的检检测。在在目前的的研究基基础上免免疫传感感器的发发展还存存在很多多问题：为了保保证生物物传感器器的高稳稳定性和和高灵敏敏度，应应当使尽尽可能多多的高特特异性抗抗体或抗抗原分子子

13、与固相相载体结结合。为为了缩短短生物传传感器的的感应时时间，延延长使用用寿命，如何将基膜尽可能的做薄则成为另一个难题；如何使生物传感器在使用环境中更加稳定也需要进一步的研究。2. 该该领域目目前的国国内外研研究水平平和发展展趋势免疫分析析法(LLnmuunoaassaay)正正是基于于抗原和和抗体特特异性结结合前后后物理和和化学性性质的变变化建立立的分析析方法。免免疫传感感器是根根据抗原原和抗体体特异性性结合所所引发的的免疫反反应的原原理研制制成的传传感器。免疫生生物传感感器以免免疫生物物分子作作为识别别元件，通通过固定定化技术术将免疫疫蛋白结结合到感感受器表表面，发发生免疫疫识别反反应后，生

14、生成的免免疫复合合物与产产生的物物理或化化学信号号相关联联，由换换能器将将其转化化为与待待测物质质浓度(或活度度)有关关的可定定量或者者可处理理的物理理化学信信号，如如电信号号、光信信号或者者声波信信号等，再再通过二二次仪表表放大并并且输出出信号，从从而可实实现对待待测分子子的快速速灵敏检检测。因因此免疫疫生物传传感器主主要由生生物识别别系统(感受器器)和换换能器等等元件组组成。由由于生物物传感器器在临床床医学、环环境和食食品工业业等方面面都有重重要用途途，以及及其具有有体积小小、精度度高、专专一度强强、灵敏敏度高、检检测快速速方便、成成本低和和容易实实现实时时在线活活体检测测等优点点，己成成

15、为当前前研究的的热点课课题之一一。2.1国国内研究究现状西南大学学的袁若若课题组组在免疫疫传感器器方面的的研究较较为系统统，该课课题组研研究了无无标记免免疫传感感器的多多种固定定材料，首首先基于于纳米材材料如：纳米金金、铁氰氰化镍纳纳米颗粒粒、二氧氧化硅-亚甲基基蓝纳米米复合物物、碳纳纳米管、纳纳米银等等纳米材材料的优优异的电电子传输输能力，以以此为基基础的固固定方法法近期研研究较多多；其次次研究了了几种基基于分子子膜如：有机-无机氧氧化还原原复合膜膜、纳米米结构功功能膜、功功能化壳壳聚糖生生物复合合膜、NNafiion膜膜等应用用于固定定的材料料。从另另一个大大方面来来说，该该课题组组研究了

16、了免疫传传感器的的多种检检测方法法如：应应用于检检测目标标物的电电位型免免疫传感感器，电电流型免免疫传感感器和酶酶电流型型免疫传传感器。使使用了包包括电沉沉积媒介介体、电电聚合、层层层自组组装、多多层自组组装、静静电吸附附技术制制备了系系列的无无标记的的免疫传传感器用用于抗原原浓度的的检测7-114。中山大学学的蔡沛沛祥课题题组在无无标记免免疫传感感器方面面的研究究的成果果也较为为突出，研研究了酶酶和其它它分子的的生物杂杂化膜、双双层类脂脂膜、自自组装膜膜和凝胶胶溶胶膜膜为基础础的免疫疫传感器器。其中中特别是是凝胶溶溶胶技术术和改进进的可再再生凝胶胶溶胶技技术因其其制作简简单，通通过优化化影响

17、免免疫反应应的多种种因素如如：电解解质、ppH、温温度等，可可得到系系列稳定定性较高高的免疫疫传感器器用于目目标物的的检测14-15。宁波大学学的干宁宁研究组组利用多多层自组组装技术术制作了了一系列列的安培培型免疫疫传感器器，主要要用于农农产品和和水产品品中的真真菌毒素素（黄曲曲霉毒素素）和抗抗生素的的检测。另另外在医医学上应应用的传传感器的的制作也也有一定定得成绩绩，在电电极的再再生和一一次性使使用的成成本较低低的免疫疫传感器器方面也也有进展展166。中国科学学院电子子学研究究所传感感技术联联合国家家重点实实验室边边超课题题组对免免疫传感感器做了了大量的的研究，主主要在免免疫微传传感器和和免

18、疫微微传感芯芯片方面面研究，其其中包括括了电位位型和电电流型微微传感器器，采用用了电聚聚合膜、凝凝胶溶胶胶、蛋白白A定向固固定等技技术制的的稳定的的免疫传传感器用用于了医医学、食食品安全全等许多多方面的的检测17。江南大学学的孙秀秀兰等人人对无标标记的阻阻抗性电电化学免免疫传感感器进行行了研究究188，优优化了初初始电位位、抗体体固定质质量、抗抗原抗体体孵育时时间等，进进而得到到了性能能可靠的的免疫传传感器。在在溶胶凝凝胶和自自组装方方面也进进行了研研究。浙江大学学的应义义斌研究究了压电电免疫传传感器在在电极表表面固定定有机磷磷单克隆隆抗体，使使用直接接免疫的的方法检检测有机机磷农药药的残留留

19、，对多多种固定定方法进进行比较较，在00.000510 g/mL 范围内内呈现良良好的线线性范围围，其检检测限为为2.1161103g/mL19。此研研究为国国内使用用直接免免疫方法法检测农农药残留留的典型型例子。2.2国国外研究现现状Yanbbin Li20-22 课题题小组研研制了一一系列的的无标记记的阻抗抗型的免免疫传感感器用于于致病菌菌等方面面的检测测，其研研究了叉叉指型阵阵列微电电极传感感器的制制备及应应用，并并使用阻阻抗方法法为检测测方法。在在具体的的组装过过程中使使用磁性性纳米微微粒材料料，得到到了较理理想的检检测限。Enriiquee233-266在免免疫传感感器方面面也做了了

20、大量的的研究，在在农药残残留检测测中做了了莠去津津的检测测，其课课题组使使用的是是叉指型型电机，为为了扩大大免疫传传感器的的响应电电流使用用纳米金金标记的的抗体，也也使用了了固定抗抗原的方方法，对对实验进进行了一一系列的的优化，进进而得到到了23g/L。Manii277利用标标记了磁磁珠的抗抗体研制制了超灵灵敏的免免疫传感感器，利利用的磁磁珠的直直径大约约是11033mm，对对待侧样样品的最最低检测测限达到到5 ffg，灵灵敏度是是已研究究方法的的8倍。其其免疫传传感器的的制作过过程如下下：此方法同同ELIISA和和仪器分分析的结结果相比比较吻合合度较好好。 Ronnghuui WWangg2

21、88 对对叉指型型阵列电电极的研研究较多多，基于于阻抗型型制作的的叉指型型阵列微微电极作作为一种种新颖的的具有高高灵敏度度和高特特异性的的方法应应用于医医学等其其它方面面的研究究，研究究中表明明了微电电极的电电阻随着着蛋白AA的固定定，抗体体在电极极表面的的固定和和辣根过过氧化物物酶（HHRP）对对免疫传传感器的的封闭步步骤的进进行而逐逐步扩大大，在抗抗原和抗抗体的特特异性反反应中电电阻值进进一步扩扩大，况况且扩大大值与待待测物的的浓度成成比例，从从而得到到待测物物的浓度度。此研研究的优优很突出出，首先先使用在在电阻测测量方面面有优势势的插指指型阵列列微电极极，可以以起到放放大信号号，缩小小非

22、特异异性吸附附和减少少测量时时间的作作用；其其次利用用蛋白AA的定向向固定方方法可以以最大量量的把抗抗体固定定在电极极表面，并并且可以以使抗体体呈现定定向固定定可以更更有效的的吸附抗抗原。其其组装方方法图如如下： 从图中中可以看看出步骤骤较为简简便，可可控制和和可操作作性较强强。应用用阻抗图图谱描述述了组装装效果，使使用原子子力显微微镜（AAFM）研研究抗体体抗原的的特异性性结合，其其线性检检测范围围从1003到1077 EIID500/mll，检测测限为1103 EIID500/mll。Jun Okuuno29研究了了单壁碳碳纳米管管(SWNNTs)的特性性及在无无标记的的电化免免疫传感感器

23、中的的应用，在在此实验验中使用用查分伏伏安法（DDPV）为为检测方方法，其其目标检检测物前前列腺抗抗原的检检测限达达到0.25 ng/mL。由由于SWWNTss独特的的、特定定的电学学和机械械学特性性经常被被用于免免疫传感感器的设设计中。近些年来来生物传传感器的的发展一一直紧随随着新材材料的进进展，在在Fanng330的的文献中中使用了了介电材材料钛酸酸钡，使使用溶胶胶凝胶技技术在电电极上形形成一层层薄的衍衍生非结结晶型钛钛酸钡（BST）薄膜，在制作传感器的过程中应用溶胶凝胶技术联合自组装技术共同应用，使用阻抗的方法进行测量，并对实验条件如：电解液的浓度、抗体的浓度、pH进行了优化，最终得到的

24、检测线为40ng/ml，其具体组装方法和等效电路如下：虽然此实实验的采采用的两两电极系系统，但但是其固固定方法法、检测测方法、优优化指标标给我很很大的启启示。Thavvaruungkkul 等31制备了了无标记记阻抗分分析流动动注射免免疫传感感器，检检测牛奶奶中的青青霉素。青青霉素抗抗体固定定在自组组装硫辛辛酸单层层膜修饰饰的金电电极上，阻阻抗实时时检测的的频率为为1600Hz，在在1.00 10-113-1.0 110-88moll/L 范围内内阻抗与与青霉素素的浓度度是线性性的，检检出限为为3.00 10-15mmol/L。青青霉素抗抗体在自自组装硫硫辛酸单单层膜修修饰的金金电极上上的固定

25、定稳定，重重复使用用45 次后的的RSDD 小于于4%。2.3存存在的问问题及发发展趋势势免疫分析析技术是是现代分分析测试试领域里里的一个个重要的的研究课课题,该技术术不仅适适用在医医学领域域检测生生物大分分子,也越来来越多的的用于检检测复杂杂样本中中小分子子物质如如农药等等痕量组组分，由于抗抗原抗体体的免疫疫反应具具有极高高的特异异性和灵灵敏性,并且快快速、简简便,可进行行现场检检测,能够弥弥补仪器器分析技技术的不不足,因此,农药残留留的免疫疫检测技技术研究究与开发发,能够更更加有效效的监测测和检测测样品中中的农药药残留,对指导导生产实实践中的的合理使使用农药药、卫生生现场监监督、农农药残留

26、留超标和和中毒的的快速检检测、加加强食品品安全控控制的研研究工作作等,都具有有重要的的现实意意义。（1）免免疫传感感器多用用于痕量量检测，如何进一步提高灵敏度和选择性,解决检测干扰和样品前处理问题是制约技术发展的关键。（2）免免疫传感感器的应应用受到到可利用用的抗体体种类少少、抗体体的不稳稳定性、抗抗体膜的的可重复复性、膜膜的固定定化及再再生问题题等诸多多条件的的制约使使得其在在食品安安全检测测中实现现商业化化比较困困难，大大部分停停留在实实验室水水平。抗抗体膜的的固定化化及再生生问题将将是免疫疫传感器器今后研研究工作作的重点点。（3）缺缺少对免免疫传感感器的检检测结果果进行认认证和标标准化的

27、的标准，因因此免疫疫传感器器的应用用和商品品化生产产必然会会受到制制约。（4）实实验装置置的微型型化是221 世世纪分析析化学发发展的主主题之一一，免疫疫传感器器与微流流控芯片片、微阵阵列技术术相结合合是未来来发展的的必然趋趋势。近近年来，随随着微机机械电子子加工技技术(MMEMSS)及微微细蚀刻刻技术应应用于免免疫传感感器研究究与开发发，多通通道，阵阵列式免免疫传感感集成化化芯片将将会逐步步应用到到检测当当中。3. 氨氨基甲酸酸酯类农农药残留留检测用用免疫传传感器要要研究的的内容及及实施方方案3.1.研究内内容与预预期成果果（1）研研究单克克隆抗体体的特性性，用经经典的酶酶联免疫疫（ELII

28、SA）技术检检测抗体体的活力力，和抗抗体抗抗原结合合的特异异性，确确定抗体体的可应应用参数数，为实实验的精精确性和和可操作作性奠定定基础。（2）制制备一些些用于形形成抗体体膜的材材料，进进行纳米米材料如如纳米金金，纳米米Si002粒子子，磁性性纳米颗颗粒Fee3O44，纳米米钛酸钡钡，溶胶胶凝胶等等，使用用透射电电镜（TTEM）原原子力显显微镜（AAFM）或或扫描探探针电镜镜（SPPM）研研究其纳纳米粒子子的直径径大小，进进而得到到比表面面积可以以反映粒粒子的电电学特性性。（3）应应用制备备的材料料结合制制备抗体体膜的技技术设计计制备免免疫传感感器的敏敏感界面面。首先先利用自自组装技技术，通通

29、过制备备的不同同材料把把单克隆隆抗体组组装在电电极表面面；其次次：使用用溶胶凝凝胶技术术将抗体体固定在在其空隙隙中；然然后，为为了实现现对抗体体的定量量固定已已达到节节约抗体体和可以以精确计计算的目目的使用用定向固固定的方方法；最最后把研研究稳定定了的的的方法相相互组合合以便达达到更理理想的效效果。（4）对对于制备备的免疫疫传感器器的测量量可使用用循环伏伏安（CV）电流检检测，交交流阻抗抗（ELLS）电电阻检测测，差分分伏安（DDPV）检检测方法法等。对对于检测测系统采采用稳定定的三电电极系统统。（5）对对实验的的参数进进行优化化，需要要优化的的参数包包括制作作基础材材料的影影响条件件（温度度

30、、时间间、pHH），制制作抗体体膜过程程中的影影响因素素：膜的的固定时时间和固固定温度度，抗体体的浓度度，测试试底液的的pH，孵孵育时间间，孵育育温度，孵孵育pHH等，得得到一组组最优制制备效果果数据和和最稳定定的检查查结果。（6）为为了进一一步验证证抗体抗抗原的结结合情况况，使用用原子力力显微镜镜（AFFM）或或扫描隧隧道电镜镜（STTM）对对电极表表面的抗抗体抗抗原复合合物的比比率进行行研究，对对测试结结果进行行进一步步的精确确，得出出信号与与检测物物浓度的的标准曲曲线。（7）考考察免疫疫传感器器好坏，利利用的参参数除了了分析方方法中常常见的灵灵敏度、准准确度、精精确度之之外,还涵盖盖选择

31、性性(交互反反应率大大小) 、响应应时间、样样品通量量、传感感器寿命命、是否否能进行行实时在在线分析析、是否否能够再再生(rregeenerratiion)、是否否能检测测实际环环境样品品以及是是否能够够实现集集成化和和小型化化等进行行评价。（8）对对实际样样品进行行处理，对对用直接接溶解，超超声提取取，样品品榨汁等等多种方方法进行行优选，选选择精准准、简单单易行的的样品处处理方法法，将免免疫传感感器应用用到实际际的果蔬蔬样品中中农药残残留的检检测。3.2具具体的实实验方法法（1）应应用ELL I S AA检测技技术对克克百威单单克隆抗抗体的活活性和特特异性进进行检测测，确定定抗体的的使用浓浓

32、度等指指标，并并确定此此方法的的最低检检测限。（2）制制备材料料并描述述材料的的基本性性质的表表征。（3）清清洗电极极，电极极的表面面积对实实验结果果有较大大的影响响，因此此经过抛抛光、超超声清洗洗、硫酸酸活化得得到彻底底清洁的的电极。（4）电电极的修修饰，使使用自组组装的方方法制备备免疫传传感器，其其具体操操作步骤骤即组装装效果表表征如图图所示：（5）经经过对实实验参数数的优化化得到最最佳的实实验条件件，并在在最优条条件下对对农药浓浓度进行行检测，形形成电流流变化与与农药浓浓度或浓浓度对数数的校正正曲线，每每个浓度度进行多多个平行行实验，进进而得到到回归方方程计算算出检测测限。（6）对对免疫

33、传传感器的的稳定性性（重复复扫描稳稳定性、110天后后的稳定定性）、精精确性、可可重复利利用性（免免疫传感感器的复复活）、特特异性（不不同种类类的常见见农药及及结构相相似物）进进行检测测，得出出免疫传传感器的的应用参参数。（7）为为了进一一步验证证所制作作免疫传传感器的的性能，与与仪器测测试方法法如液相相色谱（LC）、气相色谱（GC）和经典方法酶联免疫（ELISA）的结果进行比较。用于实际样常见果蔬品检测和添加回收率的检测。4. 课课题研究究的创新新之处电流型免免疫传感感器将电电化学分分析方法法与免疫疫学技术术相结合合，具有有快速、灵灵敏、选选择性高高、操作作简便等等特点。本本实验从从功能化化

34、固定材材料的制制备，传传感器敏敏感界面面的构建建以及新新型信号号增强的的免疫传传感器的的研制等等方面进进行了以以下几点点的探索索和研究究：(1)基基于用于于农药检检测的酶酶生物传传感器的的基础上上制备了了新型电电流型无无标记免免疫传感感器，将将直接竞竞争的方方法应用用到农药药残留的的检测，这这种方法法到目前前还鲜有有报道。(2)基基于新的的物质材材料如纳纳米磁性性材料（TTiO22、Fee3O4）、电介介质材料料（BSST、SSiO2），结合合相应的的技术如如自组装装成膜技技术、溶溶胶凝胶胶成膜技技术、电电沉积技技术、定定向固定定技术等等，设计计一系列列新的用用于农药药检测的的免疫传传感器。参

35、考文献献1 王兆守守，刘丽丽花，邵邵宗泽，陈陈小兰，黄黄加扬，农农药残留留检测新新方法研研究进展展，化工工进展，27（2008），137013892 黄科林，吴睿，韦生敏， 慕朝师，刘宇宏，农药残留测定用生物传感器研究进展，企业科技与发展，268（2009），19233XXia Sunn, XXianngyoou WWangg, WWenppingg Zhhao. Poolyaanillinee moodiffiedd ellecttroddesaacettylcchollineesteerasse bbiossenssor. 20010 IEEEE IInteernaatioonall Co

36、onfeerennce on Mecchattronnicss annd AAutoomattionn, 220100, 8881-88334 蒋国辉辉，郑永永权，董董丰收. 农药药残留检检测技术术研究进进展JJ. 农业质质量标准准，1（220055），332-3355 马莉萍萍，毛斌斌，刘斌斌，李工工农，韩韩根亮，刘刘国汉，生生物传感感器的应应用现状状与发展展趋势，传传感器与与微系统统，288（20009），1146 孙 霞霞，王相相友，免免疫传感感器在牛牛奶抗生生素残留留检测中中的研究究进展，食食品科学学，311（20010），332633007冉冉小琪,袁若,柴雅琴琴,洪成成林,刘刘凯歌

37、,. 基基于纳米米金、铁铁氰化镍镍纳米颗颗粒共修修饰的电电流型甲甲胎蛋白白免疫传传感器的的研究，化学传传感器，1（20110），366418 Yaii Yuuan, Ruuo YYuann,Yaaqinn Chhai, Yiing Zhuuo, Li Maoo, SShirrongg Yuuan,A nnoveel llabeel-ffreee ellecttrocchemmicaal iimmuunossenssor forr caarciinoeembrryonnic anttigeen ddeteectiion bassed on thee AAgAAg2OO/SSiO22 naanoc

38、compposiite matteriial as a rredoox pprobbe,Jouurnaal oof EElecctrooanaalytticaal CChemmisttry, 6443( 20010),155-1999 管姝,袁若,柴雅琴琴,唐点点平,刘刘凯歌,王晋芬芬，基于聚聚2,66-二氨氨基吡啶啶膜及纳纳米金修修饰的癌癌胚抗原原免疫传传感器研研究，化学学学报，116（220099），1192331992810刘中原原,袁若若,柴雅雅琴,卓卓颖,洪洪成林，新型有有机-无无机氧化化还原复复合膜层层层组装装的无试试剂高灵灵敏电流流型前列列腺特异异性抗原原免疫传传感器研研究，化学

39、学学报，7（20009），6337644411凌书娟娟,袁若若,柴雅雅琴,张张婷婷，基于壳壳聚糖包包埋二氧氧化硅-亚甲基基蓝纳米米复合物物的电流流型癌胚胚抗原免免疫传感感器的研研究，化学传传感器，28（20008），1441912闵丽根根,袁若若,柴雅雅琴,陈陈时洪,许阳,付萍，基于纳纳米金与与碳纳米米管-纳纳米铂-壳聚糖糖纳米复复合物固固定癌胚胚抗原免免疫传感感器的研研究，化学学学报，14（20008），166761688013 Yaai YYuann, RRuo Yuaan,YYaqiin CChaii, YYingg Zhhuo, Liijuaan BBai, Yuuhonng LLia

40、oo, AAnEllecttocheemiccal enzzymee biioafffinnityy ellecttrodde bbaseed oon bbiottinSteeptaaviddin connjunnctiion andd biienzzymee suubsttratte rrecyycliing forr ammpliificcatiion,Annalyyticcal Bioocheemisstryy,4055( 220100),121-126614戴小锋锋,白燕燕,刘仲仲明,李李敏健,蔡沛祥祥,丙肝电电化学免免疫传感感器在血血清检测测中的应应用,分析测测试学报报,1（2000

41、6）,499-51115李敏健健,戴小小锋,刘刘仲明,蔡沛祥祥,白燕燕,基于硫硫堇衍生生化自组组装膜的的丙肝电电化学免免疫传感感器,分析化化学,112（20005）,17701-1700416许媛媛媛, 边边超, 陈绍凤凤, 等等. 基基于微/纳米加加工技术术的微型型电化学学免疫传传感器研研究， 传感感技术学学报, 19（220066），221499-2115217边超, 许媛媛媛, 陈绍凤凤， 基于于导电聚聚合膜及及MEMMS 技技术的安安培免疫疫传感器器，电子器器件, 30（20007）,222-25518孙秀兰兰,汪忠忠云,方方银军,陈佩佩佩,李在在均,. 溶胶胶凝胶法法固定抗抗体制备备

42、黄曲霉霉毒素免免疫传感感器, 分析析化学,2(220100),2245-248819 蒋雪雪松，王王剑平，叶尊忠忠，应义斌斌，Yannbinn Lii，用于于农药残残留快速速检测的的压电免免疫生物物传感器器的研究究，农业业工程学学报，24（20008），1889192220 Baalajji SSrinnivaasannandd Sttevee Tuung,A llabeel-ffreee, mmicrroflluiddicss anndinteerdiigittateed aarraay mmicrroellecttrodde-bbaseed iimpeedannce bioosennsor

43、r inncommbinnatiion witth nnanooparrticcless immmunnoseeparratiion forr deetecctioon oof EEschheriichiia ccolii O1157:H7 in foood ssamppless,Seensoors andd Acctuaatorrs BB: CChemmicaal,1128(20007),99-107721Maddhukkar Varrshnney,Yannbinn Lii,Innterrdiggitaatedd arrrayy miicrooeleectrrodees bbaseed ii

44、mpeedannce bioosennsorrs ffor dettecttionn off baacteeriaal ccellls, Biioseensoors anddBioeelecctrooniccs,24(20009),29551-22960022 Maadhuukarr Vaarshhneyy,Yaanbiin LLi, Douublee innterrdiggitaatedd arrrayy miicrooeleectrrodee-baseed iimpeedannce bioosennsorr foor ddeteectiion of viaablee Esscheericc

45、hiaa cooli O1557:HH7 iin ggrowwth meddiumm,Taalannta, 744(20008), 5118-552523 Ennriqque Valleraa, JJaviier Rammn-Azccn, M.-P. Maarcoo, ngeel RRodrrguuez,Connducctimmetrric immmunoosennsorr foor aatraazinne ddeteectiion bassed on anttiboodiees llabeelleed wwithh goold nannopaartiiclees,Miccroeelecctr

46、oonicc Ennginneerringg，877（20010），1167-173324 Ennriqque Valleraa, JJaviier Rammn-Azccn, Allejaandrro BBarrrancco, Beggoaa Allfarro, FraanciiscooSnncheez-BBaezza, M.-P. Marrco, nngell Roodrgueez，DDeteermiinattionn off attrazzinee reesidduess inn reed wwinee saamplles. A connducctimmetrric sollutiion，

47、Foood Cheemisstryy，1222（220100）8888-889425Javvierr Raamnn-Azzcnn, EEnriiquee Vaalerra, nggel Roddrgguezz, AAlejjanddro Barrrannco, Beegoa AAlfaaro, Frrancciscco SSancchezz-Baaezaa, AAn iimpeedimmetrric immmunoosennsorr baasedd onn innterrdiggitaatedd miicrooeleectrrodees (IDE) forr thhe ddeteermiinattionn off attrazzinee reesidduess inn foood sammplees, Biioseensoors andd Biioellecttronnicss,233(20008),13367-1377326Enrriquue VValeera, Jaavieer RRamn-AAzcn, nggel Roddrgguezz, LLuiss M. Caastaaerr, FF.-JJ. SSncchezz, MM.-PP. MMarcco,IImpeedimmetrric immmunoosennsorr foor