中山大学药剂学课件-第四章灭菌与无菌技术.ppt

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1、第四章第四章 灭菌与无菌技术灭菌与无菌技术 灭菌法是指杀死或除去所有微生物包括繁殖体和芽胞的技术。细菌的芽胞具有较强的抗热能力，不易杀死，因此灭菌效果，常以杀灭芽胞为准。（应区分灭菌、防腐、消毒的概念）1第一第一节节 物理物理灭灭菌法菌法包括加热、紫外照射、辐射、过滤等。一一、干干热热灭灭菌菌法法：加热可以破坏蛋白质与核酸中的氢键，导致蛋白质变性或凝固，核酸破坏，酶失去活性，使微生物死亡。1 1、火火焰焰灭灭菌菌法法 火焰直接烧灼灭菌一般只适合耐火器材的灭菌；2 2、干干热热空空气气灭灭菌菌法法 高温干热空气灭菌，其灭菌温度和时间各有不同规定，如1801小时或160-1702-4小时等。本法缺

2、点是穿透力弱，温度不均匀，灭菌温度高、时间长，有局限性。2二二、湿湿热热灭灭菌菌法法：在饱和蒸汽或沸水或流通蒸汽中进行灭菌的方法。湿热灭菌法蒸汽比热大，穿透力强，易使蛋白质变性，灭菌可靠；包括：1、热压灭菌法 压力6.86104-13.72104Pa，温度115-126.5，时间15min-30min，能杀死所有细菌繁殖体和芽胞。操作时必须注意：必须使用饱和蒸汽；必须将灭菌器内的空气排除；灭菌时间必须由全部药物温度真正达到所要求的温度时算起；灭菌完毕后停止加热，必须使压力逐渐降到0，才能放出锅内蒸汽，使锅内压力与大气压相等后，稍稍打开灭菌锅，待10-15 min，再全部打开。（避免由于压差、温

3、差过大而使物品冲出、玻璃瓶炸裂）32、流通蒸汽灭菌法 100流通蒸汽30-60 min，有时要加抑菌剂，适于不耐高温的品种。3、煮沸灭菌法 通常煮30-60 min，有时要加抑菌剂。4、低温间歇灭菌法 先于60-80加热1小时，杀灭细菌繁殖体，然后放置温室24小时，让芽胞发育成繁殖体，再次加热将其杀灭。耗时。4三、其它三、其它 紫外灭菌：利用紫外光线进行空气灭菌和表面灭菌。滤过灭菌：机械除菌-除菌滤过器，主要适用于对热不稳定的物质。如白陶土滤器、垂熔玻璃滤器、微孔滤膜等。微波灭菌：微波是指频率大于300兆赫，波长小于1米，甚至小于1微米的高频率振动电磁波。辐射灭菌：电离辐射产生射线如钴-60辐

4、射。超声波灭菌等。如：单扉式灭菌箱、电热隧道式无菌烘箱、隧道式灭菌烘箱 5第二节第二节 F F与与F F0 0值在灭菌中的意义与应用值在灭菌中的意义与应用 F与F0值是验证灭菌可靠性的参数。一、一、D D值与值与Z Z值值 1.D值 研究表明，微生物在被杀灭的过程中，其杀灭速度符合一级过程，即：dN/dt=-kN 或lgNt=lgN0-kt/2.303 式中，N0为原有微生物数，Nt为灭菌时间t时残存的微生物数，k为杀灭速度常数。lgNt对t作图得一直线，斜率=-k/2.303=（lgNt-lgN0）/t，令：斜率的负倒数为D值，则 D=2.303/k=t/（lgN0-lgNt），当lgN0-

5、lgNt=1时，D=t，即即D D的物理意的物理意义为义为，在一定温度下，在一定温度下杀灭杀灭微生物微生物90%90%或残或残存率存率为为10%10%时时所需的所需的灭灭菌菌时间时间。62.Z值 灭菌条件不同，其灭菌速率也不同，当温度升高时，k增大，D值就减小，在一定温度范围内（100-1380C）lgD与温度T成直线关系，令Z=（T2-T1）/（lgD1-lgD2），或变为 D2/D1=10（T1-T2）/Z，Z的物理意义是，Z值为降低一个lgD值所需升高的温度数。设Z=10 0C，T1=110 0C T2=121 0C，则D2/D1=10-1=0.079，即1100C灭菌1min与121

6、0C灭菌0.079min效果相当。7二、二、F F与与F F0 0值值 1.F值 首先F=t10（T-T0）/Z，t是测量被灭菌物料温度的时间间隔，一般为0.5-1.0min，T则是每个t测得的被灭菌物料的温度，T0是参比温度。所以F F的的定定义义为为在在一一定定温温度度T T下下，给给定定Z Z值值 所所产产生生的的灭灭菌菌效效力力与与参参比比温温度度T T0 0给给定定Z Z值值所所产产生生的的灭灭菌菌效效力力相相当当时时所所相相当当的的时时间间，单位是min（分钟），常用于干热灭菌。82.F0值 这是一个在灭菌周期设计和验证中广泛应用的术语，但目前只限于蒸汽灭菌。F0=t10（T-12

7、1）/10，T0=121 0C，Z=10 0C，F F0 0的的定定义义为为在在一一定定灭灭菌菌温温度度T T下下，给给定定Z=10 Z=10 0 0C C，所所产产生生的的灭灭菌菌效效力力与与121 121 0 0C C、Z=10 Z=10 0 0C C所所产产生生的的灭灭菌菌效效力力相相当当时时所所相相当当的的时时间间，也就是说，不管温度如何变化，t分钟内的灭菌效果相当于温度在121 0C下灭菌F0分钟的效果。因此F0为标准灭菌时间。F0值的计算对于灭菌周期设计和验证极为有效，它将温度与时间对灭菌的效果统一在F0值中。（将不同灭菌温度计算到相当于121 0C湿热灭菌时的灭菌效力。）9二、无

8、菌操作法二、无菌操作法无菌操作法是把整个过程控制在无菌条件下进行的一种操作方法。无菌操作所用的一切用具、材料以及环境，均需灭菌，操作须在无菌环境中进行。同时要求操作人员进入操作室之前要洗澡，换上洁净工作服、帽和鞋。无菌检查法系指检查物料是否无菌的一种方法。无菌检查的过程应该严格遵守无菌操作。10第三节第三节 化学灭菌法和无菌操作法化学灭菌法和无菌操作法一、化学灭菌法一、化学灭菌法 1.气体灭菌法 制药工业上多用环氧乙烷,室温下为气体,在水中易溶(1ml水中可溶解195ml)；环氧乙烷具有可燃性,空气中含量达3.0%(V/V)时即可爆炸,故应用时需用惰性气体、二氧化碳或氟利昂稀释。同时环氧乙烷还可损害皮肤和眼粘膜，可产生水泡或结膜炎，应用时要特别注意。在药剂工作中，也常采用化学药剂的蒸气熏蒸进行灭菌，如甲醛、醋酸、丙二醇溶液加热熏蒸。2.化学杀菌剂 如75%乙醇、0.1%-0.2%新洁尔灭溶液、2%酚溶液等，该类杀菌剂并不能杀死芽胞，仅对繁殖体有效，为物体表面杀菌剂。11