血清学检验及其新技术--教学提纲.ppt
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1、血清学检验及其新技术-临床生化检查临床生化检查l1常用生化分析技术l2参考值、参考区间与医学决定水平l3蛋白质测定l4糖类及其代谢产物的测定l5脂类与脂蛋白测定l6电解质测定l7非蛋白氮类化合物测定l8酶活力测定l9激素及其代谢产物的测定l10血气分析Company Logo临床免疫学及血清学检查临床免疫学及血清学检查l1总补体和单个成分的测定l2免疫球蛋白测定l3免疫复合物的测定l4自身抗体的检测l5肿瘤免疫学检查Company LogoHot TiplHow do I incorporate my logo to a slide that will apply to all the oth
2、er slides?OntheViewmenu,pointtoMaster,andthenclickSlideMasterorNotesMaster.Changeimagestotheoneyoulike,thenitwillapplytoalltheotherslides.概概述述Company Logo概概述述Company Logo全血、血清和血浆全血、血清和血浆l一般的,临床检验采用的血液标本分为:全血、血清和血浆l全血:血液经抗凝处理后的全部血液。l血浆:离心除去血细胞后所得到的淡黄色液体。l血清:如血液不经抗凝处理,让他自行凝固,则在抽血后的一段时间内,血液会自动在一系列凝血因子的
3、作用下发生凝集,血液首先凝固成一个整体,再经过一段时间或用离心机离心,血液中凝固的部分会与一些清澈淡黄色的液体分离开,这些液体称为血清。概概述述Company Logo血浆、血清血浆、血清l血浆与血清的区别是血清中不含纤维蛋白原等凝血因子。l全血-主要用于血细胞成分的检查l血清和血浆,主要用于大部分临床化学检查和免疫学检查 血清-多用于血液生化、免疫等方面的测定;血浆多用于凝血等方面的测定。概概述述Company Logo血清的主要成分血清的主要成分l各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等l这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽
4、有很大进展,但血清的成份可能有几百种之多,目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识 概概述述Company Logo血清的主要作用血清的主要作用l提供基本营养物质l提供激素和各种生长因子l提供结合蛋白:结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质,如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等,转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用l提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤l对培养中的细胞起到某些保护作用概概述述Company LogoContents概述概述1临床生化检查临床生化检查2临床免疫学及血清学检查临床免疫学及血清学检查3血清
5、学新技术血清学新技术Company Logo临床生化检查临床生化检查l1常用生化分析技术l2参考值、参考区间与医学决定水平l3蛋白质测定l4糖类及其代谢产物的测定l5脂类与脂蛋白测定l6电解质测定l7非蛋白氮类化合物测定l8酶活力测定l9激素及其代谢产物的测定l10血气分析临临床床生生化化检检验验Company Logo一、血常规一、血常规l血常规检查一般取用血常规检查一般取用末梢血检查末梢血检查,如指尖、耳,如指尖、耳垂部位的血。在经过垂部位的血。在经过血液细胞分析仪器血液细胞分析仪器,电脑,电脑报告结果,此项目已成为检查病畜的一个惯例,报告结果,此项目已成为检查病畜的一个惯例,所以称之为血
6、常规。所以称之为血常规。l将采取的抗凝全血注入将采取的抗凝全血注入5ml5ml的真空采血管,摇匀的真空采血管,摇匀后去掉密封上盖,将样本放到采血针下吸样,后去掉密封上盖,将样本放到采血针下吸样,仪器显示结果后打印。仪器显示结果后打印。临临床床生生化化检检验验Company Logo一、血常一、血常规规-临床临床意义意义l血常规检查在全身体检中是基本的体检项目,血常规检查在全身体检中是基本的体检项目,它的意义在于可以发现许多全身性疾病的早期它的意义在于可以发现许多全身性疾病的早期迹象,诊断是否贫血,是否有血液系统疾病,迹象,诊断是否贫血,是否有血液系统疾病,反应骨髓的造血功能等。反应骨髓的造血功
7、能等。l例如:通常感染性疾病会使白细胞的数值和分例如:通常感染性疾病会使白细胞的数值和分类发生变化;贫血时血红蛋白或红细胞的检验类发生变化;贫血时血红蛋白或红细胞的检验值会降低;而血小板的减少会导致容易出血或值会降低;而血小板的减少会导致容易出血或出血后不容易止住,而血小板增多会增多血栓出血后不容易止住,而血小板增多会增多血栓发生的可能;另外,有些肿瘤、变化反映性疾发生的可能;另外,有些肿瘤、变化反映性疾病也可以引起血常规检查部分数值的变化。病也可以引起血常规检查部分数值的变化。临临床床生生化化检检验验Company Logo一、血常一、血常规规-常规常规参数参数临临床床生生化化检检验验Com
8、pany Logo一、一、血常规血常规-常规参数的临床意义常规参数的临床意义l血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)临临床床生生化化检检验验Company Logo一、血常一、血常规规-常常规参数的临床意义规参数的临床意义l白细胞(WBC)、中性粒细胞临临床床生生化化检检验验Company Logo一、血常一、血常规规-常常规参数的临床意义规参数的临床意义l嗜酸性粒细胞临临床床生生化化检检验验Company Logo一、血一、血常规常规-常规常规参数的临床意义参数的临床意义l淋巴细胞、单核细胞临临床床生生化化检检验验Company Logo一、血常规一、血常规-常规参数的临床意义常规参数的临床意义
9、l血小板(PLT)临临床床生生化化检检验验Company Logo一、血常规一、血常规-常规参数的临床意义常规参数的临床意义l血沉、网织红细胞计数临临床床生生化化检检验验Company Logo二、血清生化检验二、血清生化检验-血液化学检查血液化学检查l血清电解质和酸碱平衡检测:血清钾、钠、氯、血清电解质和酸碱平衡检测:血清钾、钠、氯、钙、无机磷,血气与酸碱平衡,血液乳酸钙、无机磷,血气与酸碱平衡,血液乳酸l血清酶检测:血清转氨酶、血清碱性磷酸酶血血清酶检测:血清转氨酶、血清碱性磷酸酶血清清-谷氨酰转移酶、血清肌酸激酶血清乳酸脱谷氨酰转移酶、血清肌酸激酶血清乳酸脱氢酶、血清淀粉酶、超氧化物歧化
10、酶、谷胱甘氢酶、血清淀粉酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、血清铜氧化酶、血清胆碱酯酶肽过氧化物酶、血清铜氧化酶、血清胆碱酯酶 l血清其他生化指标检测:血糖、血清蛋白质、血清其他生化指标检测:血糖、血清蛋白质、血清胆红素、血清胆固醇、血清甘油三酯血清血清胆红素、血清胆固醇、血清甘油三酯血清肌酐、血清尿素肌酐、血清尿素 、血清尿酸、维生素、血清尿酸、维生素(A/B/C.A/B/C.)临临床床生生化化检检验验Company Logo二、血清生化检验二、血清生化检验-内容内容临临床床生生化化检检验验Company Logo二、血清生化检验二、血清生化检验-辅助诊断辅助诊断l尿常规可以辅助诊断泌尿
11、系统及其邻尿常规可以辅助诊断泌尿系统及其邻近器官疾病,查不出肾上腺,要查肾近器官疾病,查不出肾上腺,要查肾上腺功能,需要查肾上腺素、去甲肾上腺功能,需要查肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、促肾上腺皮质激素上腺素、多巴胺、促肾上腺皮质激素等肾上腺分泌的激素等肾上腺分泌的激素临临床床生生化化检检验验Company Logo二、血清生化检验二、血清生化检验临临床床生生化化检检验验Company Logo二、血清生化检验二、血清生化检验l1.血糖 【临床意义】对于胰岛素,糖皮质激素、肾上腺素等分泌不足或过多有鉴别意义,对于糖尿病的诊断和糖尿病的治疗效果有一定意义。l2.二氧化碳结合力 【临床意义】对于判
12、断代谢性或呼吸性酸中毒、碱中毒有一定意义。临临床床生生化化检检验验Company Logo二、血清生化检验二、血清生化检验l3.尿素氮(BUN)【临床意义】判定肾功能。增高可见于各种原因的肾功能损害;肝功能严重损害时减低。l4.肌酐 【临床意义】对急、慢性肾炎的诊断和预后有重要意义l5.尿酸 【临床意义】增高:临床多见于痛风、急性及慢性肾炎、白血病、多发性骨髓瘤等临临床床生生化化检检验验Company Logo二、血清生化检验二、血清生化检验l6.钾、钠、氯 【临床意义】判定电解质及酸碱平衡情况l7.钙 【临床意义】判定甲状旁腺机能,维生素缺乏症,骨肿瘤,多发骨髓瘤有意义。l8.蛋白:总蛋白、
13、白蛋白 【临床意义】可了解体内蛋白质代谢的一般情况:对肝肾损害,多发性骨髓瘤等有一定诊断、鉴别诊断意义临临床床生生化化检检验验Company Logo二、血清生化检验二、血清生化检验l9.血清胆红素:血清总胆红素、血清直接胆红素 【临床意义】诊断、鉴别诊断黄疸类型有重要意义。心血管疾病、中毒时升高l10.谷丙转氨酶(ALT)【临床意义】对肝胆疾病的诊断及病情变的观察有重要意义。l11.谷草转氨酶(AST)【临床意义】急性心肌梗塞时升高,肝病及其它脏器炎症时也常增高临临床床生生化化检检验验Company Logo二、血清生化检验二、血清生化检验l12.r-谷氨酰转移酶或转酞酶(r-GT)【临床意
14、义】肝胆系统病变特别是肝癌时明显增高。l13.肌酸磷酸激酶(CK)【临床意义】骨胳肌疾病、甲状腺功能减退、急性心肌梗塞时显著升高。l14.乳酸脱氢酶(LDH)【临床意义】心、肝、肺等组织急性损害时明显增高临临床床生生化化检检验验Company Logo二、血清生化检验二、血清生化检验l15.碱性磷酸酶(AKP)l【临床意义】阻塞性黄疸、肝炎、肝硬化、肺癌、骨肉瘤、肿瘤骨转移等明显升高。l16.胆碱酯酶(CHE)l【临床意义】有机磷中毒,严重而广泛的肝实质性损害时减低。l17.淀粉酶(AMS)l【临床意义】诊断胰腺炎、胰腺癌的主要指标之一。流行性腮腺炎甲期,胰腺附近的胃穿孔,也常增高。临临床床生
15、生化化检检验验Company Logo二、血清生化检验二、血清生化检验l18.总胆固醇、甘油三脂【临床意义】了解体内脂代谢情况,对冠心病、动脉粥样硬化、高血压、甲状腺机能减退等诊断有意义。临临床床生生化化检检验验Company Logo三、血清蛋白检验三、血清蛋白检验l免疫化学法特异定量个别蛋白质常规:免疫浊度法、免疫扩散法,免疫电泳法,微量:放射免疫测定(RIA),酶免疫测定法(ELA/ELISA)l电泳测定:电泳组成图谱半定量定量l定量化学测定TPr,Alb染料结合法,UV法,折光法等临临床床生生化化检检验验Company Logo三、血清蛋白检验三、血清蛋白检验-总蛋白测定总蛋白测定l1
16、.凯氏定氮法参考方法l2.双缩脲法(推荐)l3.酚试剂法l4.散射比浊法l5.染料结合法l6.UV法l7.折光测定法临临床床生生化化检检验验Company Logo三、血清蛋白检验三、血清蛋白检验-总蛋白测定总蛋白测定1.1.凯氏定氮法参考方法凯氏定氮法参考方法l优点:准确度高,精密度高,灵敏度高,是公认的参考方法。l缺点:操作复杂,费时,不适合常规检测,血清各蛋白含氮量会有所变化尤其是疾病时。l应用:标准蛋白的标定及校正其它常规方法临临床床生生化化检检验验Company Logo三、血清蛋白检验三、血清蛋白检验-总蛋白测定总蛋白测定2.双缩脲法l优点:简便,准确,重复性好,10g-120g/
17、L线性好,特异性与精密度好,批内CV%2%,显色稳定。l缺点:灵敏度较差,对蛋白质含量低的体液标本不适合。l应用:常规推荐方法。手工或上机使用。临临床床生生化化检检验验Company Logo三、血清蛋白检验三、血清蛋白检验-总蛋白测定总蛋白测定l3.酚试剂法(Folin试剂法)lLowry改良法:在酚试剂中加入Cu2+,提高了呈色的灵敏度,为双缩脲法的100倍左右。吸收峰为745-750nm。l优点:操作简单,改良法灵敏度高(10g-60g),适合测定蛋白含量少的标本。l缺点:各种蛋白质酪氨酸和色氨酸比例不同,只适合测定单一蛋白质。受一些药物干扰。临临床床生生化化检检验验Company Lo
18、go三、血清蛋白检验三、血清蛋白检验-总蛋白测定总蛋白测定4.比浊法l优点:简便不需特殊仪器。l缺点:浊度形成的干扰因素多(加试剂方法,反应温度,蛋白絮状沉淀等)5.染料结合法l优点:操作简便,重复性好,灵敏度高,且干扰因素少。l缺点:特异性不高;不同蛋白质和染料的结合力不一致,标准物不易确定。临临床床生生化化检检验验Company Logo三、血清蛋白检验三、血清蛋白检验-总蛋白测定总蛋白测定6.紫外分光光度法l优点:敏感而简便,可保留蛋白生物活性,常用与较纯的酶和免疫球蛋白。需紫外分光光度计及石英比色皿。l缺点:各种蛋白质中芳香族氨基酸含量和比例不同;在280nm测定易受游离色aa和酪aa
19、以及尿酸和胆红素的干扰;核酸在206nm有最大吸收,在280nm有较大吸收,导致准确性和特异性受影响。l措施:在220-225nm波长区域,用0.15mol/l的NaCl稀释1000-2000倍可消除干扰。5.染料结合法临临床床生生化化检检验验Company Logo三、血清蛋白检验三、血清蛋白检验-总蛋白测定总蛋白测定7.折光测定法l优点:简便、快速,易掌握,重复性较好,适合临床急诊,体检筛查和胸腹水蛋白质测定。l缺点:准确性较差,易受高血脂症,高胆红素血症以及溶血等因素影响,会由于A/G比值变化而产生误差。临临床床生生化化检检验验Company Logo三、血清蛋白检验三、血清蛋白检验-总
20、蛋白测定总蛋白测定临床意义:l总蛋白升高:真性升高:MM、巨球蛋白血症、自身免疫性疾病等假性升高:机体明显失水,总蛋白含量相对升高,A/G几乎不变l总蛋白降低:丢失过多消耗增加白蛋白合成减少水肿临临床床生生化化检检验验Company Logo三、血清蛋白检验三、血清蛋白检验-白蛋白测定白蛋白测定l1.染料结合法(推荐)l2.盐析法l3.电泳法l4.免疫化学法临临床床生生化化检检验验Company LogoContents概述概述1临床生化检查临床生化检查2临床免疫学及血清学检查临床免疫学及血清学检查3血清学新技术血清学新技术Company Logo免疫血清学技术免疫血清学技术临临床床免免疫疫学
21、学检检验验用于检测抗原或抗体的体外免疫反应技术或称免疫检测技术,这一类技术因一般都需用血清进行试验,通常称为免疫血清学反应或免疫血清学技术。Company Logo免疫血清学实验免疫血清学实验临临床床免免疫疫学学检检验验一、凝聚性试验l凝集试验:由颗粒性抗原参与l沉淀试验:由可溶性抗原参与二、标记抗体技术l荧光抗体标记技术l酶标抗体技术l同位素标记技术三、中和试验l终点法中和试验l空斑减少试验Company Logo免疫血清学实验免疫血清学实验-凝集试验凝集试验临临床床免免疫疫学学检检验验l参与凝集试验的抗体主要为IgG、IgM。l凝集试验可用于检测抗原或抗体。l凝集试验可根据抗原的性质、反应
22、的方式分为直接凝集试验(简称凝集试验)和间接凝集试验。Company Logo免疫血清学实验免疫血清学实验-凝集试验凝集试验临临床床免免疫疫学学检检验验直接凝集试验l颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现凝集现象的试验称作直接凝集试验(directagglutinationtest)l玻片法:定性试验,适用于新分离细菌的鉴定或分型l试管法:定量试验,检测待测血清中是否存在相应抗体和测定抗体含量Company Logo免疫血清学实验免疫血清学实验-凝集试验凝集试验临临床床免免疫疫学学检检验验间接凝集试l将可溶性抗原(或抗体)先吸附于一种与免疫无关的,一定大小的不溶性颗粒(统称为载体颗粒)的表面,然后与
23、相应抗体(或抗原)作用,在有电解质存在的适宜条件下,所出现的特异性凝集反应称为间接凝集反应。l敏感性高,但特异性较差Company Logo免疫血清学实验免疫血清学实验-凝集试验凝集试验临临床床免免疫疫学学检检验验间接血凝试验l将抗原致敏于红细胞表面,用以检测相应抗体,在与相应抗体反应时出现肉眼可见凝集,称为间接血凝试验(passiveheamagglutinationassay,PHA)l将抗体致敏于红细胞表面,用以检测检样本中相应抗原,致敏红细胞在与相应抗原反应时发生凝集,称为反向间接血凝试验(reversepassiveheamagglutinationassay,RPHA)。Compa
24、ny Logo免疫血清学实验免疫血清学实验-凝集试验凝集试验临临床床免免疫疫学学检检验验乳胶凝集试验l聚苯乙烯乳胶是利用化工原料聚苯乙稀经过乳液聚合得到的高分子乳胶液,乳胶微球直径约0.8m。l对蛋白质、核酸等高分子物质具有良好的吸附性能。l利用聚苯乙烯乳胶的微球作载体,以吸附某些抗原(或抗体),即能用以检测相应的抗体(或抗原),称为乳胶凝集反应。(latexagglutinationtest)Company Logo免疫血清学实验免疫血清学实验-凝集试验凝集试验临临床床免免疫疫学学检检验验协同凝集试验l葡萄球菌A蛋白(staphylococalproteinA,简称SPA)是大多数金黄色葡萄
25、球菌的特异性表面抗原,能与多种哺乳动物IgG分子的Fc片结合。lSPA与IgG结合后,其Fab片暴露于外,并保持其抗体活性。l当此被覆着特异性抗体的葡萄球菌与相应的抗原结合时,就可互相连结引起协同凝集反应,简称COAG。Company Logo免疫血清学实验免疫血清学实验-沉淀试验沉淀试验临临床床免免疫疫学学检检验验可溶性抗原(如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液,病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出液等)与相应抗体结合,在适量电解质存在下,形成肉眼可见的白色沉淀,称为沉淀试验(precipitationtest)。Company Logo免疫血清学实验免疫血清学实验-沉淀试验沉淀试验临临床床免免疫
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- 血清学 检验 及其 新技术 教学 提纲
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