(8.4.1)--核酸的理化性质.pdf

《(8.4.1)--核酸的理化性质.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《(8.4.1)--核酸的理化性质.pdf（19页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、核酸的理化性质主要内容核酸的一般理化性质1核酸的紫外吸收2DNA的变性3DNA的复性与分子杂交4核酸分子：DNA与RNA核酸的一般理化性质 酸度：较强的酸性(磷酸骨架)粘度：DNARNA，dsDNAssDNA 沉降行为：不同构象或分子量的核酸分子在超速离心形成的引力场中沉降速率差异很大。这一特点可用于核酸的提取和纯化。稳定性：碱性条件下，RNA不稳定。可用于测定RNA碱基的组成，或是除去DNA中混杂的RNA。核酸的紫外吸收 核酸具有强烈的紫外吸收碱基是含有杂环的分子。碱基分子内的共轭双键使得核酸在260 nm波长处具有强烈的紫外吸收。该吸收可以看做是核酸的特征吸收，常用作核酸的定性和定量分析。

2、核酸的紫外吸收 核酸具有强烈的紫外吸收由于组成核酸分子的5种核苷酸对260 nm的光的吸收能力不同，导致：单核苷酸 ssDNA(或RNA)dsDNA这与分子的空间结构和碱基暴露程度相关。紫外吸收的应用 确定样品中DNA或RNA的含量 确定样品中DNA或RNA的纯度A260=1.0 相当于50 g/ml 双链DNA(dsDNA)40 g/ml 单链DNA(ssDNA or RNA)20 g/ml 寡核苷酸纯 DNA:A260/A280=1.8纯 RNA:A260/A280=2.0核酸的紫外吸收DNADNA变性 DNA变性(denaturation)在某些理化因素作用下，一条双链DNA(doubl

3、e strand DNA，dsDNA)分子中互补碱基对之间的氢键发生断裂,解离成为两条单链DNA(single strand DNA，ssDNA)的过程。DNA变性改变的是DNA的空间结构，而不改变其核苷酸序列。DNADNA变性 DNA变性过程 变性的本质是：双链间氢键的断裂DNA变性的电镜图片双链DNA部分解链大部解链单链DNADNADNA变性 变性的方法：变性后理化性质的变化：加热，过量酸或碱；变性试剂如尿素、酰胺；某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。A260(OD260)增高粘度明显下降比旋度下降浮力密度升高酸碱滴定曲线改变生物活性丧失DNADNA变性 DNA变性的增色效应天然天然状态状态(ds

4、DNA)变性变性状态状态(ssDNA)DNA变性过程中，其溶液在260nm处的吸光度值A260(OD260)增高的现象称为增色效应(hyperchromic effect)。生色基团，即碱基外露的原因。增色效应可用来作为监测DNA是否变性的指标。DNADNA变性 DNA的解链曲线 DNA的热变性 解链曲线(melting curve)：连续加热DNA变性的过程中，A260(OD260)随温度变化的曲线。解链温度(melting temperature,Tm)：DNA的解链过程中，紫外光吸收值达到最大变化值的50%时的温度。DNADNA变性 解链曲线的变化影响Tm值高低的因素：所含G+C碱基所占

5、比例，G+C含量越高，Tm越高 DNA分子大小 pH 离子强度DNADNA的复性和分子杂交 DNA的复性 当变性条件缓慢地除去后，两条解离的互补链可重新配对，恢复原来的双螺旋结构，这一现象称为DNA复性(renaturation)。热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing)。退火温度比Tm值低25。减色效应：DNA复性时，其溶液A260降低。DNA的变性和复性是不同条件下的逆向过程。DNADNA的复性和分子杂交 DNA变性与复性 DNA变性：本质是双链间氢键的断裂。DNA复性：双链间碱基配对，氢键重新生成。加热缓慢冷却DNADNA的复性和分子杂交 核酸的分子杂交

6、 在复性过程中，只要核苷酸序列含有碱基互补片段，不同来源、不同种类的单链核酸分子(ssDNA或RNA)之间形成杂化双链(heteroduplex)。这种杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成，也可以在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。DNADNA的复性和分子杂交 核酸的分子杂交 检测待测核酸分子和已知核酸分子之间是否存在互补序列。DNADNA的复性和分子杂交 核酸分子杂交的应用 基因结构分析：研究DNA分子中某一种基因的位置 PCR扩增技术 基因诊断：检测靶基因在待检样品中存在与否 基因治疗 mRNA分离感谢您的耐心观看Thank you for your attention！