林木病理学实验指导书河北农业大学林学院林木病理学课程组eejj.docx

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1、河北农业业大学林林学院林木病理理学课程程组20066年6月月实验注意意事项一、进入入实验室室必须遵遵守纪律律，保持持室内整整洁安静静。二、每次次实验前前必须仔仔细阅读读实验指指导书和和有关的的内容，以以保证实实验顺利利进行。 三、实验验时树立立严谨的的科学态态度，完完全按照照实验指指导书所所列操作作步骤认认真进行行实验和和观察。四、爱护护实验仪仪器，节节约使用用实验用用具和材材料，如如有损坏坏和故障障，务必必报告指指导教师师，凡无无故损坏坏仪器设设备者应应予赔偿偿。五、实验验完毕时时，请将将仪器放放回原处处，擦净净桌面，收收拾整齐齐。按作作业要求求写出实实验报告告，方可可离开实实验室。离离开实

2、验验室前注注意关门门、窗、水水、灯等等，并用用肥皂洗洗手。六、每个个学生的的实验成成绩由实实验过程程表现和和实验报报告成绩绩两部分分组成，实实验成绩绩将带入入期末总总成绩。七、需要要进一步步培养观观察的实实验材料料应写好好标签，注注明实验验内容、日日期和试试验人员员姓名，以以防混淆淆或丢失失。八、学生生应准备备绘图纸纸、报告告纸、HHB和22H的绘绘图铅笔笔、直尺尺、小刀刀和橡皮皮等绘图图用具。林木病理理学实验验指南林木病理理学实验验是农业业植物病病理学课课程的重重要组成成部分，是是植物病病理学基基本概念念、基础础理论、基基本原理理的深化化理解、实实验应证证、增强强感性认认识和衔衔接补充充，是

3、理理论与实实践相结结合的具具体体现现。对学学好林木木病理学学具有重重要意义义。林木木病理学学实验的的目的是是以植物物病理学学和其它它关学科科知识为为基础，追追溯引起起植物病病害发生生的原因因及过程程，认识识不同病病原所致致病害的的症状特特点及病病原形态态特征。掌掌握植物物病害实实验及研研究的基基本技能能及方法法，注重重学生观观察、思思考、分分析、解解决实际际问题的的能力培培养，为为将来的的研究工工作打下下一定的的基础。林木病理理学实验验要求学学生在实实验之前前预习实实验指导导，明确确实验的的目的意意义，复复习实验验相关理理论知识识，了解解实验的的方法、步步骤及重重难点；认真、客客观、正正确地、

4、观观察、记记录实验验内容和和显微绘绘图，整整理、归归纳，分分析实验验数据和和结果，认认真完成成实验报报告，总总结成功功的经验验及找出出不足的的原因，培培养科学学态度。实验重点点要求学学生认知知和掌握握主要作作物、果果树和蔬蔬菜病害害的症状状和病原原物的形形态特点点、学习习显微绘绘图、制制片技术术；综合合性实验验要求学学生学习习和掌握握从植物物病害的的调查、标标本的采采集、鉴鉴定到灭灭菌、消消毒、培培养基制制作及病病原物的的分离和和培养等等实验技技能。该该实验指指导书对对症状和和病原形形态特征征进行了了描述，通通过提示示对重点点观察内内容与阐阐明并对对实验技技能进行行了简述述。作业业与思考考题，

5、主主要是实实验内容容的课堂堂作业及及复习时时的参考考。实验一 林木木病害症症状类型型的观察察症状是有有病植物物外部可可见的病病状和病病征的统统称。植植物生病病后，有有一定的的病理变变化程序序。无论论是侵染染性病害害或非浸浸染性病病害，首首先在植植物体内内发生一一系列外外部观察察不到的的生理生生化的变变化，继继而细胞胞和组织织开始发发生病变变，并出出现肉眼眼可见到到的变化化这就是是病状。有有些侵染染性病害害，主要要是真菌菌和细菌菌病害，不不仅表现现出病状状，在病病部还能能见到引引起植物物生病的的病原物物，它们们依附在在病植物物体人例例如，病病植物上上的霜霉霉、白粉粉、黑粉粉、茵核核、茵脓脓以及寄

6、寄生在植植物上的的寄生性性种子植植物等。这这些致病病生物出出现在病病变部分分即称“病征”。所以以，植物物病害的的症状应应该包括括“病征”和“病状”面部分分。但是是，植物物受病毒毒、菌原原体、类类细菌和和线虫等等危害后后，只能能看到植植物本身身的病状状，这些些病害习习惯上也也统称为为症状。人们对病病害的认认识和研研究，机机首先从从症状开开始，症症状有一一定的变变化幅度度，常因因品种抗抗性、环环境条件件以及发发病时期期(或后后期)不不同而有有变化，因因此观察察病害症症状应连连续观察察它在不不同时期期和不同同条件下下的表现现。一、实验验目的通过植物物病害症症状的观观察，学学习描述述和记载载植物病病害

7、症状状的方法法，掌握握植物病病害的症症状类型型、特点点以及了了解症状状在病害害诊断中中的作用用。加深深对植物物病害的的感性认认识，认认识植物物病害的的主要症症状类型型，为进进一步诊诊断和研研究植物物病害打打下坚实实基础。二、材料料和用具具 各种类型型的病害害标本、幻幻灯片和和挂图等等。扩大大镜、小小刀及记记载用具具。 三、实验验内容与与方法（一）病病状类型型 1. 变变色：植植物受到到外来有有害因素素的影响响后，常常导致色色泽的改改变，如如褪色、条条点、白白化、色色泽变深深或变浅浅等，统统称为变变色。主主要表现现有：1) 褪褪绿或黄黄化：褪褪绿和黄黄化是由由于叶绿绿素的减减少而叶叶片表现现为浅

8、绿绿色或黄黄色。如如植物的的缺铁、缺缺氮等。2) 花花叶与班班驳：如如苹果花花叶病、月月季花叶叶病、黄黄杨花叶叶病等。3) 变变红色或或紫色，如如玉米植植物生病病后，病病部细胞胞内的叶叶绿素被被破坏或或形成受受到抑制制而呈现现出不正正常的颜颜色。变色以叶叶片变色色为最常常见，通通常为全全株性的的，叶片片颜色深深浅不匀匀、深绿绿浅绿或或黄绿相相嵌，有有时还出出现红紫紫等颜色色。花朵朵变色在在林木中常常见的有有郁金香香碎锦病病，缺素素和病毒毒侵染都都可以形形成这种种症状。观察标本本：苹果果花叶病病 月季季花叶病病 大叶叶黄杨花花叶病 杨树花花叶病2、坏死死和腐烂烂： 坏死死是由于于受病植植物组织织

9、和细胞胞的死亡亡而引起起的。1) 斑斑点：根根、茎、叶叶、花、果果实的病病部局部部组织或或细胞坏坏死产产生各种种形状和和大小颜颜色不同同的斑点点，如大大叶黄杨杨叶斑病病、月季季黑斑病病、山柳柳漆斑病病、柿（黑黑枣）角角斑病、柿柿园斑病病。2) 枯枯死：芽芽、叶、枝枝、花局局部或大大部分组组织发生生变色、焦焦枯死死亡。如如丁香疫疫病、核核桃枝枯枯病。3) 穿穿孔和落落叶落果果：在病病斑外围围的组织织形成离离层，使使病斑从从健康组组织中脱脱落下来来，形成成穿孔，如如桃细菌菌性穿孔孔病等；有些植植物的花花、叶、果果等受害害后，在在叶柄或或果梗附附近产生生离层而而引起过过早的落落叶、落落果等。4) 疮

10、疮痂：果果实、嫩嫩枝、块块茎等的的受病组组织局部部木栓化化，表面面粗糙，病病部较浅浅，如柑柑桔疮痂痂病、梨梨黑星病病等。 5) 溃溃疡：病病部深入入到皮层层，组织织坏死或或腐烂，病病部面积积大，稍稍凹陷，周周围的寄寄主细胞胞有时增增生和木木栓化，多多见于木木本植物物的枝干干上的溃溃疡症状状。如杨杨树溃疡疡病、杨杨树腐烂烂病、柑柑桔溃疡疡病、番番茄溃疡疡病等。观察标本本：苹果果腐烂病病、杨树树腐烂病病。6）果实实腐烂：如苹果果炭疽病病。观察标本本：苹果果炭疽病病。3、萎蔫蔫：植物物茎部腐腐烂，根根部坏死死都能引引起萎蔫蔫。典型型的萎蔫蔫是指植植物根部部或茎部部的维管管束组织织受到侵侵染而发发生的

11、萎萎蔫现象象根据受受害的部部位不同同，萎蔫蔫可以是是全株性性的或是是局部性性的。观察标本本：落叶叶松枯梢梢病，苗苗木立枯枯病 ；4、畸形形：感病植植物受病病原物刺刺激，细细胞和组组织过度度增生或或发育不不良，形形成肿瘤瘤丛枝枝、卷叶叶、扭曲曲、矮化化等观察标本本：根癌癌病、泡泡桐丛枝枝病、枣枣疯病、桃桃缩叶病病（二）病病征类型型 病征是指指在植物物病部形形成的、肉肉眼可见见的病原原物的结结构。识识别各种种不同类类型的病病征对诊诊断病害害很有帮帮助。细菌性病病害，通通常是在在受伤的的病部出出现粘稠稠的液体体菌脓脓。但真真菌在病病部产生生的病征征较复杂杂依其形形态不同同，可区区分为多多种类型型：大

12、致致分为霜霜状物、粉粉状物、霉霉状物、锈锈状物、小小黑粒和和线状物物，块状状物、伞伞状物等等，并常常以这些些特征来来命名这这些病害害。有些些类型的的病征可可根据其其他特征征进一步步区分，如如粉状物物可根据据其色泽泽不同，分分为白粉粉、黑粉粉等。霉状物：瓜类腐腐霉病、柑柑桔青霉霉病、紫紫薇煤污污病、夹夹竹桃煤煤污病粉状物，山山楂白粉粉病、黄黄栌白粉粉病、苹苹果白粉粉病、丁丁香白粉粉病、小小麦黑粉粉病锈状物：牵牛花花白锈病病，玫瑰瑰锈病、苹苹果锈病病、马兰兰锈病 煤污状物物，茶煤煤污、桑桑污叶病病、油茶茶煤污病病。块状物：菌核，白白绢菌引引起的丝丝核立枯枯病、白白绢病线状物：果树根根朽病、根根状菌

13、索索、紫纹纹羽病点状物：病原真真菌在病病部产生生的黑色色、褐色色小点，多多为真菌菌的繁殖殖体观察标本本：核桃桃枝枯病病、苹果果腐烂病病、月季季黑斑病病、杨树树腐烂病病伞状物、马马蹄状物物：病原原真菌在在病部产产生的大大型子实实体，多多为担子子菌亚门门，如木木耳、银银耳、平平茹、灵灵芝、草草菇、松松白腐病病的子实实体。脓状物：细菌病病害特有有病症（三）综综合症 在同一寄寄主植物物上一种种病害可可能表现现出几种种症状类类型，这这几种症症状同时时表现或或先后接接连表现现出来，称称为综合合症。例例如大豆豆花叶病病毒病可可以有变变色、花花叶、顶顶芽坏死死和畸形形等几种种类型的的症状在在同一植植株上出出现

14、。水水稻白叶叶枯病可可以有叶叶枯、枯枯心、黄黄叶等症症状在同同一植株株上出现现。掌握握这些症症状特征征对于正正确诊断断病害是是十分重重要购。（四）复复合症 由两种或或两种以以上的病病原物(或害虫虫)同时时或先后后侵染寄寄主而表表现的复复合症状状。四、实验验时间 2学学时。五、作业业与思考考题作业：根根据温室室和田间间的参观观，实验验室标本本的观察察以及幻幻灯片、照照片等观观察到的的不同症症状类型型的病害害，扼要要描述其其症状特特点，将将观察结结果填入入下表 (要求求至少描描述六种种病害)寄主名称称病害名称称发病部位位病状类型型病症类型型思考题：1) 植物病病害的定定义是什什么? ，2) “病状

15、”、“病征”“症状状”、“综合症症的定义义，并举举例说明明。3) 症状在在病害诊诊断上有有什么作作用？4) 为为什么种病害害可以表表现出不不同的症症状?实验二鞭鞭毛菌、接接合菌、子子囊菌亚亚门真菌菌及所致致病害鞭毛菌亚亚门真菌菌是一类类低等真真菌，其其中多数数是水生生的。它它们的共共同特征征是无性性繁殖时时产生有有鞭毛的的游动孢孢子。主主要引起起苗木猝猝倒病、白白锈和霜霜霉。接合菌亚亚门真菌菌人多数数是腐生生的，少少数可以以引起农农产品的的腐烂。其其中最重重要的是是根霉属属(Rhhizoopuss)的匍匍枝根霉霉(R.stoolommifeer)可可引起种种实霉烂烂。子囊菌是是一类高高等真菌菌

16、。菌丝丝体一般般都很发发达，有有隔膜，有有分枝，有有的菌丝丝体可以以形成菌菌核、子子座等机机构。子子囊菌的的共同特特点是有有性生殖殖产生子子囊和子子囊孢子子。子囊囊菌亚门门是根据据子囊果果的有无无、子囊囊果的形形态特征征、子囊囊着生位位置、子子囊孢子子的特征征进行分分类的。子子囊菌所所致的病病害很多多，其中中代表性性的病害害有核果果类缩叶叶病、各各种植物物的白粉粉病、黑黑斑病、赤赤霉病、苹苹果腐烂烂病、苹苹果黑星星病和菌菌核病等等。一、目的的要求 通过观察察，认识识病原真真菌的营营养体及及其变态态，认识识真菌的的子实休休、有性性繁殖、无无性繁殖殖产生的的各种类类型孢子子，掌握握各亚门门的主要要

17、特征。二、用具具 挑针、刀刀片、木木板、酒酒精灯、火火柴、载载玻片、盖盖玻片、纱纱布、乳乳酚油、二二甲苯、显显微镜、擦擦镜纸、吸吸水纸等等。有关关病害的的标本、挂挂图、幻幻灯片三、内容容与方法法（一） 病原真真菌的营营养体真菌营养养生长阶阶段的结结构统称称为真菌菌的营养养体。典典型的营营养体是是丝状，少少数为单单细胞。单根丝状状的营养养体称为为菌丝；许多菌菌丝在一一起就称称为菌丝丝体。用用挑针挑挑取在培培养皿内内的瓜果果腐霉病病菌(PPythhiumm apphannideermaatumm)和立立枯丝核核菌(RRhizzocttoniia ssolaani)或镰刀刀菌的菌菌丝体用用蒸馏水水或

18、乳酚酚油作浮浮载剂，制制临时破破片镜检检，观察察菌丝有有无隔膜膜?菌丝丝体直径径变化是是否明显显？颜色色有无差差别？（二）鞭鞭毛菌亚亚门卵菌纲有有发达的的菌丝体，菌菌丝没有有隔膜。无无性繁殖殖形成游游动孢子子囊,其其中产生生多个游游动孢子。1）霜霉霉目 许多霜霜霉目真真菌是更更要的植植物病原原菌，无无性繁殖殖通常产产生卵形或梨形的的抱子囊囊。孢子囊成熟十可释放放游动孢孢子，或或直接萌萌发形成成芽管,游动孢子子无两游现象。藏卵卵器内只只有一个个卵球。霜霉科主主要属的的检索表表A孢囊囊梗粗壮壮，上部部为重复复23次的的不规则则二叉分分枝指指梗霉属属(Scclerrospporaa)AA孢孢囊梗较较

19、细BB孢囊囊梗单轴轴分枝,小枝与与主轴成成直角，分分枝末端平纯单轴轴霉属(Plaasommparra)BB。孢孢囊梗成成锐角二二叉分枝枝CC分枝枝两侧不不对称，顶顶端尖锐锐假霜霉属属(Pseeudooperronoospoora)CC分分枝两侧侧对称DD分技技顶端尖尖细霜霜霉属(Perronoospoora)DD分分枝顶细细，具334个指指状周生生小梗盘梗梗霉属(Breemiaa)（三）接接合菌亚亚门1匍枝枝根霉菌菌的镜检检 观察菌丝丝、假根根孢子囊囊、孢囊囊孢子 用挑挑针仔细细地从培培养的匍匍枝根霉霉菌中挑挑取少许许连有培培养基培培养物，制制成临时时玻片，在在低倍镜镜下检查查。观察察菌丝的的

20、形态和和具有335个分分枝的孢孢囊及其其基部的的假根，从从孢囊梗梗之间有有匍枝状状的菌丝丝相连，在在孢囊梗梗基部有有深入寄寄主细胞或或基质中中分枝状状的假根根，起吸吸收营养养和固定定孢囊梗梗的作用用。在每每一抱囊囊梗的顶顶端都产产生一个个圆球形形的孢子子囊用用高倍镜镜观察孢孢子囊内内部的构构造。在在末成熟熟的孢子子囊内，往往往只有有大量的的小颗粒粒体，接接近成熟熟或成熟熟的孢子子囊则充充满了许许多褐色色圆形的的孢囊孢孢子。孢孢子囊壁壁破裂后后，孢子子散出，露露出锣锤锤形的囊囊轴。注注意孢子子囊的形形态和颜颜色。2接合合孢子 取根霉属属和犁头头霉属接接合孢子子玻片观观察原配配于囊、配配囊柄及及配

21、子囊囊的发育育过程。成成熟的接接合孢子子深褐色色，表面面粗糙。犁犁头霉菌菌的接合合孢子在在配子囊囊柄的着着生处有有附属丝丝，注意意观察配配囊柄的的形状及及大小。（四）子子囊菌亚亚门1 半半子囊菌菌纲 属低等子子囊菌,子囊不不是由产产囊细胞胞发育而而来,而而是由双双核菌丝丝上的双双核细胞胞发育形形成的。子子囊裸生生，无子子囊果。子子囊壁簿簿，没有有孔口，靠靠壁的胀胀裂或消消解来释释放于囊囊孢子。观察材料料：外囊囊菌属(Tappharriann)，取取桃缩叶叶病(TTdeeforrmanns)做做临时玻玻片，在在显微镜镜下检查查。观察察桃缩叶叶病害标标本,注注意受害害叶片形形态颜色色有何变变化?叶

22、叶片正、背背面有无无霉层?该霜层层是由什什么构成成的?2 核核菌纲 核菌纲真真菌的子子囊果是是子囊壳壳,在子子囊果的的顶部有有固定的的孔口。子子囊单层层壁,有有的子囊囊间有侧侧丝。生生活史中中有发达达的无性性阶段。白白粉菌目目(Errysiiphaaless)和小小煤炱目目(Meel1aaless)的子子囊果是是闭裹壳壳,没有有孔口，这这与不整整囊菌纲纲的子囊囊果相似似，但是是白粉菌菌的子囊囊壁不消消解,在在成熟的的闭囊壳壳内能清清楚地看看见于囊囊和子囊囊孢子。1）白粉粉菌目(Eryygipphalles) 本本目是专专性寄生生菌。菌菌丝蔓延延于寄主主体表，并并产生白白色粉状状物，引引起植物物

23、白粉病病。有性性阶段产产生闭囊囊壳，闭闭囊壳外外有附属属丝，附附属丝形形状不一一。闭囊囊壳内子子囊数目目也不一一样，由由一个至至多个。附附属丝的的形状和和子囊数数目的多多少是分分属的依依据。取下列病病害材料料，挑取取闭囊壳壳作临时时玻片，在在显微镜镜下检查查，注意意子囊果果有无孔孔口。轻轻轻挤压压盖玻片片，使闭闭囊壳破破裂，观观察子囊囊果内是是单子囊囊还是多多子囊，子子囊果表表面生有有附属丝丝，形状状如何？用下列列材料按按检索表表进行属属的鉴定定。白粉菌主主要属检检索表A闭囊囊壳内单单个子囊囊B附属属丝菌丝丝状单囊囊壳属(Sphhaerrothhecaa) BB附属丝丝刚直较粗，顶顶端二又又状

24、重复复分枝，分分枝末端端螺旋状状卷曲叉丝丝单囊壳壳属(PPodoosphhaerra)AA闭闭囊壳内内多个子子囊 B附附属丝菌菌丝状，发发育不良良白粉粉菌属(Eryysipphe) (又又称Bllumeeriaa)BB附附属丝非非菌丝状状 C附属属丝刚直直，基部部膨大，顶顶端尖锐锐球针针壳属(Phyyllaactiiniaa)CC附附属丝基基部不膨膨大 D附属属丝粗、刚刚直，顶顶端二叉叉状重复复分枝，分分枝末端端卷曲叉丝壳壳属(MMicrrospphaeera)DD附附属丝不不分枝顶端卷卷曲钩丝壳壳属(UUnicculaar) 2） 球球壳菌目目(Sphhaerrialles) 子子囊果是是子

25、囊壳壳，子囊囊壳具有有真正壳壳壁，单单生或丛丛生于子子座上。壳壳壁(包包被)有有鲜色肉肉质或暗暗色膜质质或炭质质的。子子囊一般般排列成成子实层层，少数数是分散散的。一一般都有有发达的的无性阶阶段。黑腐皮壳壳属(VValssa)，取取苹果树树腐烂病病菌(VValssa mmalii)切片片镜捡，注注意子囊囊壳的形形态和着着生位置置，子囊囊及子裹裹孢子的的形态如如何？如如何排列列？再视视察苹果果树腐烂烂病病害害标本，有有什么症症状特点点？1)鞭毛毛菌亚门门与接合合菌亚门门真菌有有什么区区别?2)绘匍匍枝根霉霉菌(RRhizzopuus sstolloniiferr) 孢孢子囊、孢孢囊梗、假根匍匐菌

26、丝图。3)绘你你所见到到的接合合孢子图图4）绘白白粉属、叉叉丝单囊囊壳属、球球针壳属属、钩丝丝壳属的的形态图图实验三半半知菌、担担子菌亚亚门真菌菌及所致致病害半知菌的的种类很很多，是是植物病病害的重重要病原原菌，可以以引起斑斑点、腐腐烂和萎萎蔫等症症状。半半知菌大多以以分生孢孢子繁殖殖，少数数半知菌菌不产生生任何孢孢子，而而只有菌菌丝扣菌核两种种形态，所所以无性性阶段的的形态结结构就成成为分类类的重要要依据。担子菌是是高等真真菌,包包括许多多形态很很不相似似的真菌菌。从无无担子果的的黑粉菌菌、锈菌,到子实实体很大大的伞菌菌、腹菌、较低等等的担子子菌几乎乎全为寄寄生菌，引引起植物物的黑粉粉病和锈

27、锈病。高高等担子子菌大多多是土壤壤、朽木上上的腐生生菌,有有些能寄寄生树木木引起林林木病害害.还有有许多是是食用菌菌，但一一些真菌菌有毒一、目的的要求认识半知知菌、担子菌菌亚门中中主要病病原菌的的形态特特征及其其所致病病害的症症状类型型，掌握握分类依依据，尤尤其是锈锈菌目各各主要属属的形态态特征和和典型生生活史。二、材料料和用具具有关病害害标本、病原菌菌永久病病害标本本和各种种类型的的子实体体标本.显微镜镜、擦镜纸纸、乳酚油油、挑针、载玻片片、盖玻片片、小纱布布。（一）丝丝孢纲(Hypphommyceetess) 丝孢纲纲真菌的分生生孢子着生生在丝状状的分生生孢子梗上上，而不不是着生生在特定定

28、形态(如球状状或盘状状)的分分生孢子子器内或或分生孢孢子盘上上，或者者不产生生任何类类型的分分生孢子。1）粉孢孢属(Oiddiumm)引起植植物白粉粉病。观观察小麦麦白粉病病的标本本，注意意叶片表表面上白白色粉状状物。挑挑取少许许粉状物物制片镜镜检观察察，注意意分生孢孢子梗和和分生孢孢子的形形态及分分生孢子的排排列方式式.2）青霉霉属(Penniciilliium)柑桔青青霉菌(Pittaliicumm)是柑柑桔贮藏藏和运输输期中的的重要病病原菌。观观察果腐腐症状和和青霉菌菌分生孢孢子梗及及孢子，注注意观察察分生孢孢子梗顶顶端的形形态特征征。3）镰孢孢属(Fussariium)是瘤座座菌目的代

29、代表菌。特点点是分生生孢了梗着着生在分分生孢子子座上。4）丝核核菌属(Rhiizocctonnia) 本本属真菌菌不产生生任何无无性孢子子，观察察人工培培养的立立枯丝核核菌(RR.soolanni)菌菌丝体.幼龄菌菌丝无色色，后期期呈褐色色，菌丝丝粗，直直角分枝枝，分枝枝处有缢缢缩，分分枝附近近有隔膜膜。（二）腔腔胞纲(Coeelommyceetess)腔胞纲真真菌的分分生孢子子梗和分分生孢子子产生在在分生孢孢子盘或或分生孢孢子器内内。1）大茎茎点属(Maccropphomma) 观察察大叶黄黄杨病叶叶材料，作作徒手切切片，镜镜检。观观察分生生孢子器器、分生孢孢子梗、分生孢孢子并与与茎点霉霉属

30、比较较,注意意比较分分生孢子子的大小小。2）色二二孢属(Dipploddia) 观观察松枯枯枝病。分分生孢子子器球形形。分生生孢子处处为单细细胞，无无色，成成熟后为为双细胞胞，褐色色，椭圆圆形或卵卵形。（三）冬冬孢菌纲纲(Teelioomyccetees)本纲真菌菌的特征征是不形形成担子子果，担担子从冬冬孢子上上产生，冬冬孢子成成堆或分分散。这这是一类类较低等等的担子子菌，包包含两个个目：锈锈菌目和和黑粉菌菌目,其其中绝大大多数种种类均寄寄生于植植物上，是是一类重重要的植植物病原原菌。1）胶锈锈菌属(Gymmnossporranggiumm)没有夏夏孢子阶阶段；冬冬孢子双双细胞，有有可以胶胶化

31、的长长柄， 观察梨梨胶锈菌菌(G.harraeaanumm)所形形成的锈锈病症状状。镜检检锈孢子子器和性性孢子器器切片。挑挑取桧柏柏上吸水水膨大的的冬孢子子堆(角角)镜检检。2）柱锈锈菌属（Croonarrtiuum）冬冬孢子排排列成柱柱状。三、作业业与思考考题1）半知知菌亚门门根据什什么特征征分类？有几个个纲，举举出代表表性的病病害和病病菌。2）半知知菌的学学名和中中文属名名的名称称中包含含着什么么内容。3）绘胶胶锈菌属属的形态态图。4）分清清长生活活史、短短生活史史、多型型现象、转转主寄主主、专性性寄主、锁锁状联合合等术语语概念。实验四 林木木病害的的其他病病原观察察一、实验验目的1了解解

32、植物病病原细菌菌及线虫虫所致病病害症状状特点。2学习习镜检细细菌、线线虫的基基本方法法。3认识识植物病病毒形态态和病毒毒病主要要症状类类型，二、实验验内容1细菌菌是单细细胞的原原核生物物，有细细胞壁、细细胞质和和细胞器器，有的的细菌有有鞭毛、荚荚膜和芽芽孢的结结构。细细菌个体体微小，往往往需制制成涂片片并经染染色后，在在显微镜镜油浸的的物镜下下观察。植植物病原原细菌都都是杆状状菌，其其分属依依据是鞭鞭毛数及及着生方方式、格格兰氏染染色反应应、在培培养基上上长成的的菌落色色泽、形形状和生生理生化化反应。2一般般细菌病病害病斑斑或病部部周围组组织呈水水渍状，在在潮湿条条件下可可在病部部溢出菌菌脓，

33、干干后形成成菌胶。菌菌脓在清清晨或潮潮湿天气气较易观观察到。将将病部特特别是病病键交接接处切片片镜检时时，一般般可见到到大量细细菌从病病部（特特别是维维管束向向外涌出出），像像烟囱冒冒出的烟烟雾，这这种菌溢溢现象是是诊断细细菌病害害的简便便而可靠靠的方法法。3植物物寄生线线虫是又又一类重重要病原原物。除除直接致致病外，有有的线虫虫可以传传带病毒毒，或造造成植物物伤口以以利于其其它病原原微生物物侵染。植植物线虫虫主要在在寄主的的根际或或根内、茎茎、叶和和种子内内生存，有有的形成成虫瘿（如如根结线线虫）。引引起植物物病害的的症状主主要是营营养不良良、生长长衰弱或或畸形，从从而降低低产量或或品质。植

34、物寄生线虫是病原物中个体较大的，但是多数仍不能用肉眼看到或看清楚，需用低倍显微镜观察。线虫虫体分头、颈、腹、尾4部分。头部有唇、口腔、吻针和侧器；颈部包括食道、神经环和排泄孔；腹部有肠管和生殖器官，后端有肛门；尾部有侧尾腺和尾腺。分辨科、属、种的主要依据是体形、食道、头和尾部的主要形态特征。4病毒毒颗粒很很小，必必须用电电子显微微镜才能能观察到到。植物物病毒颗颗粒可以以分为圆圆球状（或或等边多多面体）、炮炮弹状、长长杆状和和线条状状4种。这这些在课课堂和本本次实验验课上只只能通过过观看电电镜照片片或幻灯灯片来了了解。5植物物病毒病病的主要要症状类类型有花花叶、变变色、条条纹、枯枯斑或环环斑坏死

35、死、畸形形。应该该注意：一方面面这些症症状类型型的分辨辨在病毒毒病鉴定定上具有有比起它它病害更更重要的的意义，另另一方面面在实际际观察中中，也会会发现同同一种病病毒病在在发病过过程中或或在不同同环境条条件下会会有不同同的表现现（不同同病状甚甚至隐症症）。6病毒毒病多为为系统性性侵染，没没有病征征，易与与非侵染染性病害害相混淆淆，往往往需要通通过一定定方式的的传染试试验证实实其传染染性。三、实验验材料及及用具植物病原原细菌、病毒毒和寄生生线虫所所致病害害症状标标本、显显微镜、玻玻片、酒酒精灯、培培养皿、化化学试剂剂（碱性性品红、苯苯酚、亚亚甲蓝、氢氢氧化钾钾、酒精精）。四、实验验步骤1观察察下列

36、病病害标本本，区分分各类症症状。桃桃细菌性性穿孔病病、青枯枯病等。附附带观察察寄生性性种子植植物大豆豆菟丝子子。注意意观察细细菌性病病害的菌菌脓和菌菌胶、线线虫的虫虫瘿。2取细细菌性病病害的标标本，最最好是新新鲜的，在在病斑边边缘或病病健交接接处切开开，或将将较小的的叶段移移到玻片片上的水水滴里，加加盖玻片片，稍停停片刻在在显微镜镜下观察察菌溢现现象。3涂片片固定定染色色观察细细菌形态态1）涂片片 取一一干净的的载玻片片，在中中央偏左左处滴一一滴无菌菌水，然然后用接接种针在在细菌病病害腐烂烂部分或或溢脓上上挑取一一点脓状状物，移移至水滴滴中混匀匀，用另另一张在在玻片的的一端与与细菌悬悬浮液滴滴

37、接触，并并沿底边边平行方方向向右右移动，涂涂布后的的片子须须在空气气中来回回晃动，以以加速其其干燥。另另一种做做法是将将有细菌菌悬浮滴滴的玻片片直立，使使菌液流流动，形形成一条条细菌悬悬浮液膜膜，让其其自然干干燥。2）固定定 用拇拇指和食食指拿住住涂好的的玻片一一端，有有菌面朝朝上，在在酒精灯灯上往返返通过334次次，注意意通过火火焰时要要使玻片片各处受受热均匀匀，不可可固定烘烘烤一处处，温度度也不要要太高。进进行鞭毛毛染色的的玻片一一般不用用火焰加加热法固固定，而而用1%福尔马马林溶液液固定。3）染色色 常用用于细菌菌染色的的染色剂剂和染色色法有以以下两种种：苯酚品红红染色法法：溶液液I：碱

38、碱性品红红 0.3g，酒酒精（995%） 10mmL；溶溶液III：苯酚酚（结晶晶）5gg，蒸馏馏水 995mLL。将溶溶液I和和溶液III分别别配好后后混合，用用滴管移移到涂片片上染色色1分钟钟，然后后用清水水冲洗，直直至水中中没有红红色为止止。亚甲蓝染染色法：溶液II：亚甲甲蓝 00.3gg，酒精精（955%） 30mmL；溶溶液III：氢氧氧化钾溶溶液（00.011%）1100mmL。溶溶液I和和II分分别配好好后混合合放置备备用。染染色时将将上述染染色剂移移到涂片片上静置置1分钟钟后，用用清水冲冲洗直至至水中看看不到蓝蓝色为止止。用吸吸水纸吸吸去水分分或风干干，即可可供镜检检。4）镜检

39、检 先将将物镜中中的油镜镜（900）转至至镜筒正正下方，在在染色的的细菌涂涂片标本本上滴一一滴香柏柏油，将将油镜降降至香柏柏油中，再再侧视，把把物镜降降至十分分贴近载载玻片的的高度，然然后用眼眼睛对准准目镜，边边观察边边转动粗粗调节轮轮使镜筒筒徐徐上上升，看看到标本本后转动动细调节节轮调整整焦距，使使物像清清晰。如如果没有有找到细细菌，则则要重新新再侧视视的情况况下将物物镜降至至贴近载载玻片的的位置，重重复上述述操作。切切不可用用粗调节节轮由上上向下降降低物镜镜，以免免损伤镜镜头和玻玻片。油油镜用毕毕，须用用擦镜纸纸沾二甲甲苯擦净净。4线虫虫形态的的观察 将线虫虫虫瘿浸浸在水中中约1小小时，用

40、用解剖针针挑取种种皮内的的白色物物移到载载玻片上上的水滴滴中，盖盖上盖玻玻片镜检检。用低低倍镜找找到适合合观察的的线虫后后再换高高倍镜观观察各种种器官的的形态。五、作业业与思考考1完成成2片以以上的细细菌涂片片（经染染色）。2绘制制显微镜镜下观察察到的细细菌菌溢溢现象示示意图。3绘制制线虫结结构简图图。实验五病病原物的的分离与与培养基本原理理：柯赫赫氏法则则（Koochs PPosttulaate）是是通过一一系列步步骤确定定引起病病害的病病原物的的原则和和方法，是是诊断病病害中的的证病律律。其基基本步骤骤如下：1在染染病组织织上用显显微镜经经常检查查到某种种微生物物；2从病病组织中中分离得得

41、到该微微生物，并并获得纯纯培养；3将纯纯培养的的微生物物接种到到健康的的感病寄寄主植物物后，发发生原先先观察到到的症状状；4从接接种发病病的组织织中，再再分离，又又得到相相同的微微生物。全过程拟拟分两次次实验完完成，本本次完成成第一和和第二步步。包括括实验十十三培养养基的制制作和本本次实验验病原物物的分离离、培养养及纯化化。一、实验验目的掌握病原原物分离离、培养养和纯化化的一般般方法。二、实验验内容（一）真真菌的分分离1分离离前的准准备工作作分离和培培养应在在很清洁洁，甚至至无菌的的条件下下进行。如如在无菌菌室、无无菌操作作箱、超超净工作作台和清清洁的室室内。无无菌操作作箱的内内壁可以以用升汞

42、汞液（11：10000）擦擦洗，使使用超净净工作台台应事先先开动运运行155分钟左左右。在在屋顶四四壁清洁洁而空气气较静止止的房间间进行时时，要将将地面扫扫净擦湿湿，用11：10000的的升汞液液或清水水擦净工工作台，并并在台上上铺一块块干净湿湿白布，将将所需物物品都放放在台布布上，工工作时避避免走动动，以减减少污染染。2分离离材料的的选择选择新近近发病的的植株、器器官或组组织作为为分离材材料，可可以减少少腐生菌菌的污染染。从病病健交界界处分离离这一原原则对于于大部分分病害的的分离都都是适用用的。而而有些有有晕圈的的斑点病病（如野野火病），病病菌局限限在斑点点中央的的坏死组组织中，从从斑点边边

43、缘是分分离不到到病菌的的。3组织织表面消消毒从植株或或组织上上取下的的分离材材料，必必须进行行表面消消毒，以以杀死或或减少病病组织表表面的腐腐生菌，保保留组织织内部的的病原菌菌。常用用的表面面消毒液液有：1）升汞汞消毒液液配方为：升汞 1g， 浓盐酸酸 2.5mLL， 水水 10000mmL。将升汞溶溶于浓盐盐酸中，待待其充分分溶解后后，用水水稀释。升升汞剧毒毒、无色色，为便便于认识识，可在在溶液中中加几滴滴红染料料。消毒毒时间因因材料质质地、发发病部位位深浅及及污染情情况而异异，一般般355分钟。消消毒后用用无菌水水冲洗334次次。2）漂白白粉消毒毒液有些真菌菌对汞、铜铜等金属属离子敏敏感，

44、可可用漂白白粉消毒毒液。其其配方为为：漂白粉 10gg， 水水 1440mLL。选用新鲜鲜漂白粉粉，将漂漂白粉溶溶于水中中，过滤滤后使用用，随用用随配，不不能久留留，否则则因挥发发而失去去杀菌能能力。一一般处理理355分钟，消消毒时间间亦因材材料而异异，处理理种子用用5110分钟钟。消毒毒后用无无菌水冲冲洗，有有时也可可不必冲冲洗。3）酒精精和其它它消毒剂剂70%酒酒精也是是常用的的表面消消毒液。将将材料在在酒精溶溶液中浸浸数秒钟钟到一分分钟，然然后水洗洗。有些些幼嫩组组织只需需用脱脂脂棉蘸酒酒精溶液液少许，擦擦涂表面面，待酒酒精挥发发后，即即可放在在培养基基上培养养。对于特别别幼嫩的的病组织

45、织，因对对药物敏敏感，可可以用灭灭菌水洗洗899次。4分离离方法常用的分分离方法法分为两两大类：1）组织织分离法法分离一小小块染病病组织，经经表面消消毒后，移移植于平平板培养养基上培培养。很很多材料料适用此此法，下下面介绍绍几种：斑点病病病原菌的的分离：挑取新新鲜典型型的病斑斑，在病病健交界界处，剪剪取5mmm2的染病病组织，在在70%酒精中中浸数秒秒钟，然然后移入入0.11%的升升汞溶液液中处理理355分钟，用用无菌水水冲洗33次，移移入平板板培养基基上培养养。维管束病病菌的分分离：先先用700%的酒酒精将根根茎表面面擦拭消消毒，然然后用灭灭过菌的的解剖刀刀剥去表表皮，再再切取其其中一小小块

46、变色色的部分分，用升升汞液或或漂白粉粉液消毒毒，用无无菌水冲冲洗几次次后，移移到培养养基上培培养。种子内病病原菌的的分离：用升汞汞溶液或或漂白粉粉溶液进进行种子子表面消消毒，然然后用无无菌水冲冲洗，再再移于平平板培养养基上。2）稀释释分离法法用无菌水水从发病病组织表表面冲下下孢子，配配成孢子子悬浮液液，用无无菌移液液管或滴滴管吸取取一定体体积的菌菌液至平平板培养养基上，然然后用无无菌玻璃璃棒将菌菌液轻轻轻的均匀匀涂布在在整个平平板上，或或将菌液液移至无无菌培养养皿中，然然后倾入入融化后后冷却至至45的培养养基，轻轻轻振荡荡、平置置、凝固固后倒置置培养。并并在皿盖盖上写上上日期、分分离物名名称、分分离者姓姓名。分分离工作作有时并并不顺利利，要从从分离材材料、培培养基、培培养条件件及操作作处理方方法等方方面找原原因，改改变工作作方法，不不断进行行试验（二）菌菌种的纯纯化