微生物学实验教学大纲grfw.docx

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1、微生物学学实验教教学大纲纲课程名称称：微生生物学实实验 课程编编码：00431103007066英文名称称：Miicroobioologgicaal eexpeerimmentt学 时：36学 分：22适用专业业：制药药工程及及相关专专业课程程类别：必修课程性质质：专业基基础课先先修课程程：微生生物学参考教材材：杜连连祥，路路福平主主编。微微生物学学实验技技术，中中国轻工工业出版版社，220055，8.一、 制定本大大纲的依依据 本教学学大纲是是根据教教学目的的、要求求以及实实际教学学学时制制定的，课课程总学学时为336学时时。在不不妨碍教教学内容容的系统统性与逻逻辑性的的前提下下（包括括前后

2、实实验内容容的衔接接关系），主主讲教师师可以按按照自己己的具体体教学情情况或经经验，适适当地将将某些内内容的次次序加以以变更或或调整。二、 本实验课课程的具具体安排排实验项目目的设置置及学时时分配（表表）序号实验项目目名称内容简介介（500字左右右）实验学时时实验要求求实验类型型实验类别别每组人数数1细菌培养养基的配配制与灭灭菌(1) 培养基的的概念和和种类(2) 培养基的的配制原原则、方方法和注注意事项(3) 高压蒸汽汽灭菌的的原理、操操作步骤骤 和注注意事项项(4) 培养基的的灭菌2必修验证专业22细菌的接接种与培培养(1) 无菌菌操作(2) 细菌接接种方法法: 斜斜面接种种, 平平板划线

3、线接种, 穿刺刺接种, 液体体试管接接种(3) 细菌菌的培养养2必修验证专业23显微镜的的构造及及使用技技术(1) 显微镜镜的种类类(2) 显微镜镜的工作作原理(3) 显微镜镜的构造造：光学学系统和和机械系系统(4) 干燥系系物镜的的使用和和注意事事项2必修验证专业24细菌染色色与形态态观察(1) 细菌的的染色方方法：简单染染色、革革兰氏染染色; 芽孢染染色。(2) 革兰氏氏染色的的原理、步步骤和注注意事项项(3)细细菌个体体形态的的观察(5) 细菌群群体形态态菌落特特征的观观察(5) 穿刺接接种和液液体接种种菌体生生长特征征观察2必修验证专业25真菌培养养基的配配制与灭灭菌(1) 酵母菌菌培

4、养基基的配制制与灭菌菌(2) 霉菌培培养基的的配制与与灭菌2必修验证专业26真菌的接接种与培培养(1) 酵母菌菌接种与与培养：斜面接接种、平板划线线、液体体接种(2) 霉菌的的接种与与培养：斜面点点接和平板接种种2必修验证专业27酵母菌水水浸片的的制备和和形态观观察(1) 酵母菌菌水浸片片的制备备(2) 酵母个个体形态态的观察察(3) 酵母菌菌菌落形形态观察察(4) 酵母液液体培养养特征2必修验证专业28酵母菌细细胞计数数、出芽率率和死亡亡率的测测定(1) 血球计计数板的的使用(2) 酵母菌菌计数(3) 酵母菌菌出芽率率的测定定(4) 酵母菌菌活体染染色和死死亡率的的测定2必修验证专业29酵母

5、菌细细胞大小小的测定定(1)显显微测微微尺的使使用(2) 目镜测测微尺的的标定(3) 酵母细细胞大小小的测定定2必修验证专业210霉菌的形形态观察察(1)毛毛霉、根根霉、黑黑曲霉、青青霉的个个体形态观察察(2) 毛霉、根根霉、黑黑曲霉、青青霉的群群 体体形态观观察2必修验证专业211细菌生理理生化实实验(1) 培养基基、各种种试剂的的配制与与灭菌(2) 各种试试验菌的的接种与与培养(3) 结果果观察与与分析6必修综合专业212细菌总数数和大肠肠菌群的的测定(1) 培养基、试试剂的配配制与灭灭菌(2) 样品品处理(3) 接种种与培养养(4) 细菌菌菌落计计数(5)大大肠菌群群测定8必修综合专业2

6、13微生物菌菌种保藏藏(1) 菌种保保藏原理理和方法法(2) 真空冷冷冻干燥燥保藏菌菌种(3) 清点仪仪器、洗洗刷玻璃璃器皿2必修验证专业2三、 本实验课课在该课课程体系系中的地地位与作作用微生物学学实验课课是与微微生物学学理论课课同学期期开设的的一门重重要的技技术基础础课。通通过本课课程的教教学，使使学生较较熟练的的掌握微微生物学学实验的的基本操操作技术术和初步步掌握研研究微生生物的基基本方法法。通过过对具体体微生物物材料的的观察、分分析，进进一步加加深和巩巩固对微微生物学学理论课课所学知知识的理理解并提提高学生生分析和和解决实实际问题题的能力力。四、 学生应达达到的实实验能力力与标准准通过

7、本课课程的教教学，使使学生掌掌握进行行常规常常见微生生物检测测的实验验原理和和基本方方法，具具有独立立进行微微生物学学检测实实验方案案的设计计、初步步具备利利用微生生物学手手段分析析和解决决发酵生生产过程程中有关关实际问问题和从从事有关关科学研研究工作作的能力力。要求学生生了解实实验室的的布置以以及实验验室的规规则；使使学生熟熟练掌握握显微镜镜的使用用技术并并熟悉显显微镜的的使用技技术并熟熟悉显微微镜的构构造及保保养方法法；学会会干热灭灭菌箱、高高压蒸汽汽灭菌锅锅、恒温温培养箱箱的使用用；具有有选择和和制备培培养基的的能力；掌握基基本染色色原理和和方法以以及制片片技术；熟悉细细菌、酵酵母菌、霉

8、霉菌的基基本形态态结构、生生理生化化特征和和血清学学特性，具具有菌种种初步鉴鉴定的基基本技能能；通过过实验，使使学生学学会无菌菌操作方方法，掌掌握微生生物的分分离、筛筛选和育育种的基基本知识识和技能能，了解解菌种保保藏的一一般方法法。五、 讲授实验验的基本本理论与与实验技技术知识识实验一细细菌培养养基的配配制与灭灭菌1.实验验内容与与要求：（1）了了解加热热灭菌的的基本原原理，掌掌握实验验室常用用的几种种加热灭灭菌技术术（2）了了解配制制培养基基的基本本材料，学学习配制制肉汤培培养基的的方法并并掌握其其要点。2.实验验材料：（1）培培养基组组成 牛肉膏膏0.55%，蛋蛋白胨11%，NNaCll

9、0.55%，ppH值77.2，固固体时加加琼脂22%。（2）试试剂 6mool/llHCll、100%NaaOH。（3）其其它工具具：台秤秤、量筒筒、试管管、三角角瓶、烧烧杯、分分装架等等。实验二细细菌的接接种与培培养1.实验验内容与与要求：（1）掌掌握无菌菌操作的的概念和和基本操操作技术术；（2）了了解细菌菌常用的的培养基基以及培培养条件件；（3）了了解平板板划线分分离菌种种的原理理和操作作要点。2.实验验材料：（1）菌菌种：大大肠杆菌菌(Esscheericchiaa cooli)，枯草草芽孢杆杆菌(BBaciilluus ssubttiliis)，八八叠球菌菌(Saarciina sp.

10、)。（2）培培养基：肉汤固固体斜面面（2个个/菌），肉肉汤液体体试管（22管/菌菌），平平板划线线接种肉肉汤固体体培养基基（100-15mml/皿皿，2块块/菌），平平板点接接肉汤固固体培养养基（110-15mml/皿皿，3支菌用用1块），穿穿刺用肉肉汤半固固体培养养基（22管/菌菌）。（3）其其它工具具：接种种针，接接种环，酒酒精灯或或煤气灯灯，消毒毒酒精棉棉球，镊镊子，试试管架，标标签纸，培培养箱（37）实验三显显微镜的的构造及及使用技技术1.实验验内容与与要求：（1）了了解普通通光学显显微镜的的构造、原原理、维维护及保保养方法法；（2）学学会使用用普通光光学显微微镜观察察生物标标本片。2

11、.实验验材料：普通光学学显微镜镜，擦镜镜纸，标标本片（可可以用做做好的酵酵母水浸浸片）等等。实验四细细菌染色色与形态态观察1.实验验内容与与要求：（1）掌掌握简单单染色法法的操作作技术；（2）了了解革兰兰氏染色色的基本本原理，并并掌握革革兰氏染染色的操操作技术术；（3）掌掌握油镜镜的使用用方法；（4）了了解细菌菌的个体体形态和和菌落培培养特征征。2.实验验材料：（1）菌菌种：大大肠杆菌菌（Esscheericchiaa cooli）、枯枯草芽孢孢杆菌（Bacillus subtilis）和八叠球菌(Sarcina sp.)的培养物。（2）染染色液：草酸铵铵结晶紫紫染色液液，路哥哥氏碘液液，番红

12、红染色液液，955%乙醇醇。（3）其其他：显显微镜，载载玻片，接接种环，镊镊子，香香柏油，玻玻璃缸，二二甲苯、酒酒精灯、擦擦镜纸、吸吸水纸。实验五真真菌培养养基的配配制与灭灭菌1.实验验内容与与要求：（1）了了解天然然培养基基的制备备原理，掌掌握麦芽芽汁天然然培养基基的配制制方法；（2）掌掌握土豆豆葡萄糖糖琼脂培培养基的的配制方方法。2.实验验材料：（1）培培养基：麦芽汁汁培养基基，土豆豆葡萄糖糖琼脂培培养基。（2）其其他工具具：接种种环，试试管，培培养皿，三三角瓶，玻玻璃U形形管，酒酒精灯或或煤气灯灯，酒精精棉球，镊镊子，滤滤纸等。实验六、真菌的接种与培养1.实验验内容与与要求：（1）掌掌握

13、酵母母菌和霉霉菌的接接种方法法，生长长的培养养基和培培养条件件；（2）掌掌握小室室培养方方法；（3）进进一步掌掌握无菌菌操作的的概念和和基本操操作技术术。2.实验验材料：（1）菌菌种：酿酿酒酵母母（Saacchharoomycces cerreviisiaae），热热带假丝丝酵母（Candida tropicalis），八孢裂殖酵母 （Schizosaccharomyces octosporus）,总状毛霉（Mucor racemosus），黑根霉（Rhizopus nigricans），黑曲霉(Aspergillus niger)、桔青霉（Penicillium citrinum）。（2）培

14、培养基：固体麦芽芽汁斜面面（2个个/菌），液液体麦芽芽汁试管管（2管管/菌，酵酵母），平平板麦芽芽汁划线线接种（110-15mml/皿皿，1块/菌菌，酵母母），平平板点接接麦芽汁汁固体培培养基（110-15mml/皿皿，3个酵母母菌用11块，霉霉菌1个个/皿），用于于小室培培养的土土豆葡萄萄糖琼脂脂培养基基（2ml/管，1管/菌，共共3管/组）。（3）其其它工具具：接种种环，接接种钩、玻璃UU形管，酒精灯或煤气灯，消毒酒精棉球，镊子，滤纸，试管架，标签纸，培养箱（酵母28，霉菌30）。实验七、酵母菌水浸片的制备和形态观察1.实验验内容与与要求：（1）掌掌握酵母母菌水浸浸片的制制备；（2）进进一

15、步熟熟悉低倍倍镜和高高倍镜的的使用方方法；（3）了了解酵母母菌的个个体形态态和群体体形态特特征。2.实验验材料：（1）菌菌种：酿酿酒酵母母（Saacchharoomycces cerreviisiaae），热热带假丝丝酵母（Candida tropicalis），八孢裂殖酵母 （Schizosaccharomyces octosporus）（2）培培养基：麦芽汁汁培养基基，土豆豆葡萄糖糖琼脂培培养基。（3）其其他工具具：镊子子，载玻玻片，盖盖玻片，玻玻璃棒，显显微镜，滤滤纸，擦擦镜纸等等。实验八酵酵母菌细胞计计数、出芽率率和死亡亡率的测测定1.实验验内容与与要求：（1）了了解血球球计数板板的构

16、造造、使用用及计算算方法，并并利用血血球计数数板对酵酵母细胞胞进行计计数；（2）对酵酵母细胞胞进行出出芽率、死死亡率的的测定；（3）学学会并掌掌握酵母母菌的活活体染色色方法。2.实验验材料：（1）菌菌种：酿酒酵酵母（SSacccharromyycess ceerevvisiiae）28下恒温温培养448h的的液体试试管一支支。（2）试试剂：以以pH66.0的的0.002mool/LL磷酸缓缓冲液配配制的00.055%美蓝蓝染色液液。（3）其其它工具具：显微微镜，血血球计数数板，盖盖玻片，酒酒精灯，无无菌吸管管，滤纸纸条等。实验九酵酵母菌细胞大大小的测测定1.实验验内容与与要求：（1）学学会测微

17、微尺的使使用和计计算方法法；（2）掌掌握酵母母细胞体体积的测测定方法法。2.实验验材料：（1）菌菌种：酿酿酒酵母母（Saacchharoomycces cerreviisiaae）液液体培养养液（2）其其它：显显微镜，目目镜测微微尺，镜镜台测微微尺，载载玻片，盖盖玻片，酒酒精灯，无无菌吸管管，滤纸纸条等。实验十霉霉菌的形形态观察察1.实验验内容与与要求：（1）掌掌握常见见霉菌的的具体形形态；（2）学学会霉菌菌浸片的的制作方方法。2.实验验材料：（1）菌菌种：总状毛毛霉（MMucoor rraceemossus），黑黑根霉（Rhizopus nigricans），黑曲霉(Aspergillus

18、niger)、桔青霉（Penicillium citrinum）。（2）培培养基：10Briix麦芽芽汁斜面面培养基基和固体体平板培培养基。用用于小室室培养的的PDAA（或察察氏固体体培养基基）。（3）乳乳酸苯酚酚油棉蓝蓝染色液液。（4）器器具： 接种种钩、显显微镜，载载玻片，酒酒精灯，盖盖玻片，吸吸水纸，大大头针，玻玻璃纸，镊镊子，刮刮棒，玻玻棒，220%甘甘油（可可以用水水代替）等等。实验十一一细菌生生理生化化实验1.实验验内容与与要求：（1）了了解微生生物在不不同基质质中的各各种代谢谢途径和和产生的的不同代代谢产物物，明确确生理生生化反应应在微生生物菌种种鉴定中中的重要要性；（2）根根据

19、生理理生化反反应特点点，掌握握微生物物的鉴定定方法。（3）了了解糖发发酵试验验的作用用及原理理，学习习糖发酵酵试验的的操作技技术，观观察细菌菌发酵糖糖能力的的区别。（4）了了解三糖糖铁高层层琼脂斜斜面实验验的应用用及反应应原理，学学习三糖糖铁高层层琼脂斜斜面的使使用方法法。（5）了了解柠檬檬酸盐试试验的用用途和原原理，学学习柠檬檬酸盐试试验的技技术操作作。（6）了了解甲基基红试验验的反应应原理和和用途，学学习甲基基红试验验的操作作技术。（7）了了解V-P试验验的反应应原理及及用途，学学习V-P试验验的操作作技术。（8）了了解吲哚哚试验的的反应原原理和用用途，学学习吲哚哚试验的的操作技技术。（9

20、）了了解石蕊蕊牛乳试试验的反反应原理理及用途途，学习习石蕊试试验的操操作技术术。（10）了了解明胶胶液化试试验的应应用及反反应原理理，学习明明胶液化化试验的的操作技技术。（11）了解硝酸盐还原试验的应用及反应原理，学习硝酸盐还原试验的操作技术。（12）了解硫化氢产生试验的用途及原理，学习硫化氢产生试验的操作技术。2.实验验材料：（1）菌菌种：大肠杆杆菌（EEschheriichiia ccolii）、枯草芽芽孢杆菌菌（Baacillluss suubtiiliss）、伤寒寒沙门氏氏菌（SSalmmoneellaa tyyphii）、产产气肠杆杆菌（EEnteerobbactter aerrog

21、eeness）、枯枯草杆菌菌（Baacillluss suubtiiliss）、八八叠球菌（SSprccinaa spp.）。（2）培培养基：葡萄糖糖、乳糖糖发酵培培养基，三糖铁铁琼脂高高层斜面面、西蒙蒙氏柠檬檬酸盐培培养基、缓缓冲葡萄萄糖蛋白白胨水培培养基、蛋蛋白胨水水培养基基、石蕊蕊牛乳培培养基试试管、明明胶培养养基、硝硝酸盐培培养基、硫硫酸亚铁铁琼脂培培养基。（3）试试剂：甲甲基红试试剂、66%萘酚酚酒精溶溶液、440%氢氢氧化钾钾溶液、吲吲哚试剂剂有两种种：柯凡凡克氏试试剂、欧欧-波试试剂、亚亚硝酸试试剂和（4）其其他：酒酒精棉球球，酒精精灯，接接种针，接种环、恒温箱、锌粉、干净试管，

22、洗耳球，1毫升吸管、电冰箱等实验十二二细菌总总数和大大肠菌群群的测定定1.实验验内容与与要求：（1）学学习并掌掌握测定定菌落总总数的基基本方法法；（2）学学会微生生物实验验中菌落落总数的的报告方方式；（3）学学习并掌掌握大肠肠菌群的的测定方方法；（4）了了解测定定过程中中每一步步的反应应原理。2.实验验材料：（1）被被检样品品： 根据据不同需需要选择择被检样样品（如如鲜奶，酱酱油，醋醋，啤酒酒等）。（2）培培养基：营养琼脂脂培养基基或肉汤固固体培养养基、乳糖胆胆盐发酵酵培养基基、乳糖EMMB培养养基、乳糖发发酵培养养基。（3）试试剂：3.生理理盐水 9mml/支支10，2225mml/瓶瓶1，

23、革兰氏氏染色液液，芽孢染染色液。（4）其其它1ml无菌菌吸管数支支，培养养皿数套套，水浴浴锅，酒酒精灯，试试管架，培培养箱、显微镜镜，研钵钵，杜氏管，试试管，涂涂布管等等。实验十三三微生物物菌种保保藏1.实验验内容与与要求：（1）了了解菌种种保藏的的基本原原理；（2）初初步掌握握各种菌菌种保藏藏的操作作技术。2.实验验材料：（1） 普通冰冰箱、液液体石蜡蜡。（2） 微生物物：细菌菌、放线线菌、酵酵母菌、霉霉菌六、 实验的考考核与成成绩评定定本课程的的成绩包括括理论知知识的考考试（闭闭卷），平平时成绩绩两部分。其其中，理理论知识识考试占占全课程程70%，平平时成绩绩占30%（其中出出勤和课课堂纪律律占100分，实验操操作技能能占100分，实实验报告告占100分），共共计100分分。七、主要要参考书书1. 杜杜连祥等等主编。工工业微生生物实验验技术，天天津市科科学技术术出版社社，19992，110.制定人：骆健美美审定：批准：20077年9月14