应用微生物学hkpr.docx
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1、微生物的的可利用用性::利用微微生物的的菌体、代谢产产物、代谢活活力微生物应应用的一一般方法法:采样(富集集)初筛复筛小试中试大试正式生生产分离菌种种、试验、生产、初筛要求: 快快速,能能尽快检检出目的的微生物物, 敏敏捷,能能迅速处处理众多多样品; 经经济,一一次能筛筛选多个个目的微微生物 方法: 平平板培养养并检测测法; 摇摇瓶培养养平板检检测法利用溶解解、降解解、沉淀淀、显色色、生长长、抑菌菌等现象象指示目目的菌。如如用指示示剂发现现有机酸酸和胺类类,用碳碳酸钙法法检出有有机酸。但但若氮源源是酸性性盐或碱碱性盐则则可能造造成假产产酸产碱碱现象,需需进一步步用纸层层析法确确定。复筛:将将平
2、板初初筛的菌菌株用摇摇瓶液体体培养或或固体培培养后抽抽提物质质进行精精确定量量测定(如如蛋白酶酶用分光光光度法法;脂肪肪酶用NNaOHH滴定法法)筛选选高产菌菌株。一一个菌株株通常要要做35个重重复。精确测定定法可信信度大,但但操作繁繁琐,测测定时间间长,工工作量大大。因而而有时把把摇瓶复复筛的发发酵液用用平板法法和精确确法结合合进行测测定:把把所有摇摇瓶复筛筛菌株的的发酵液液,用平平板法测测定一遍遍(同步步重复223块块板),将将其中活活性圈大大而清晰晰的菌株株发酵液液进一步步用精确确法测定定,选出出较优良良的菌株株233株。酒的大类类:1、发发酵酒:发酵后后直接或或过滤后后饮用的的酒。该该
3、类酒营营养丰富富、酒精精浓度低低。2、蒸馏馏酒: 当酒酒精浓度度为188%左右右时,酵酵母的活活动就停停止,因因此只靠靠发酵不不能生产产酒精含含量高于于18%的酒精精饮料,但但可以用用蒸馏的的方法得得到。世界上六六大蒸馏馏酒:中中国白酒酒、白兰兰地、威威士忌、郎郎姆酒、伏伏特加、金金酒。3、配制制酒:在发酵酵酒和蒸蒸馏酒的的基础上上,采用用浸泡、混混合、勾勾兑等方方法添加加了色素素、甜味味剂、药药物或调调味料的的酒,如如各种药药酒和鸡鸡尾酒。葡萄酒的的种类:按含糖糖量分:红葡萄萄酒(用红皮皮葡萄连连皮一起起酿造、在在发酵后后进行压压榨、红红色色素素溶于酒酒中的葡葡萄酒。)、白葡萄酒(用白葡萄或
4、去皮红皮白肉葡萄酿造、在发酵前进行压榨、不含红色色素的葡萄酒。)、甜葡萄酒(含糖量大于50g/L的葡萄酒。)、干葡萄酒(酒精发酵完后含糖量小于4g/L的葡萄酒。)、半干葡萄酒(含糖4.1-12g/L。)、半甜葡萄酒(含糖12.1-50g/L)。自然发酵酵法:选选成熟、品品质好、清清洁的葡葡萄,破破碎(白白葡萄酒酒还要压压榨除渣渣)后添添加一定定量的二二氧化硫硫,自然然发酵(经经常搅拌拌)2-3天后后补加一一些糖和和硫酸铵铵,继续续发酵至至酒精浓浓度达110%以以上。纯酵母法法:在葡葡萄汁中中加入二二氧化硫硫3-44小时后后接入11-3%的纯酵酵母(一一般是椭椭圆酵母母),225-330发酵55
5、-9天天。前发酵原料状况况红葡萄酒酒白葡萄酒酒无破损和和霉变,含含酸量高高30-55060-880无破损和和霉变,含含酸量低低50-110080-1100有破损和和霉变80-1150100-1200红、白葡葡萄酒常常用SOO2浓度度(mgg /LL )SO2的的作用:选择性性促发自自然酒精精发酵。多多数腐生生性微生生物对SSO2敏敏感,而而酵母菌菌有抗性性。抗氧氧化。 SO22形成的的亚硫酸酸盐比葡葡萄酒中中的其它它物质更更容易被被基质中中的氧氧氧化为硫硫酸盐,从从而抑制制或推迟迟葡萄酒酒中其它它成分的的氧化作作用。老熟(陈陈酿):刚发酵酵好的红红葡萄酒酒呈鲜红红色,有有涩味,几几乎无法法饮用
6、,至至少应放放置8-10个个月。 此间产产生各种种香气和和香味物物质,成成熟后变变成琥珀珀色。葡萄酒在在老熟达达到顶峰峰并稳定定一段时时间(一一般为55-100年)后后开始变变质。三、啤酒酒啤酒是以以麦芽(多多是大麦麦芽)为为主料,以以大米或或其它谷谷物、酒酒花为辅辅料,经经酵母发发酵酿制制而成的的含有二二氧化碳碳、起泡泡的低酒酒精度饮饮料 。啤酒的种种类:11、按酵酵母菌性性质分:上面啤啤酒:发发酵结束束后酵母母菌(如如卡尔斯斯伯酵母母S. carrlsbberggenssis )浮在在上面的的啤酒。下面啤酒:发酵结束后酵母菌(如酿酒酵母S. cerevisiae)沉于下面的啤酒。我国和其其
7、他多数数国家生生产的啤啤酒是下下面啤酒酒,只有有少数国国家(如如英国和和美国)生生产上面面啤酒。2、按保保鲜处理理分:鲜啤酒酒:不经经保鲜处处理,低低温下可可存放 1 星星期。熟啤酒酒:包装装后进行行巴氏灭灭菌,保保质期660天(二二级)至至1200天(一一级优级级)以上上。纯生啤啤酒:在在0左右用用孔径00.4-0.66微米的的膜过滤滤除菌,保保质期660天至至90天天以上 。啤酒生产产过程:浸泡:用用水浸泡泡大麦约约2天,使使其吸水水膨胀、变变软,注注意换水水通气。发芽:将水放干,12-20发芽5-8天,至芽长为麦粒长的2/3-3/4即可,注意保持水分和通气。焙燥:目的是停止麦芽生长和去除
8、麦芽的生青气味。先在50左右使水分降至8-10%,再在65使水分降至3%左右。制备麦芽(多用大麦)。加酒花:在糖化液中加入啤酒花,煮沸1-1.5小时,过滤冷却。 啤酒花赋予啤酒特有的苦味和芳香味后发酵:目的:去去除双乙乙酰、硫硫化氢、乙乙醛等造造成的“生酒味味”。使残残糖继续续发酵并并饱和二二氧化碳碳。使酒酒液澄清清。方法法:将主主发酵完完的嫩啤啤酒贮存存于地下下室的酒酒桶内,上上部留110-115厘米米空隙,敞敞口发酵酵2-33天以去去除生酒酒味,然然后封口口使二氧氧化碳逐逐渐饱和和,随着着时间的的延长和和温度的的降低,更更多复合合物析出出、沉降降,使酒酒澄清。贮贮酒时间间为1-5个月月。黄
9、酒的生生产流程程:1、制制麦曲22、制酒酒药(小小曲)33、制酒酒母4、发发酵。将小麦粉粉碎,加加30-35%的水,自自然发酵酵(约330天)或或加入纯纯种米曲曲霉发酵酵而成。以早籼米米粉、辣辣蓼草末末加水,接接种或自自然发酵酵而成。将糯米浸浸水400-455小时至至水分含含量约224-226%,蒸蒸煮155-300分钟,淋淋冷至77-9 ,拌拌入酒药药,堆成成空圆堆堆状,226-2282天后后即有甜甜液出现现,当甜甜液达44/5高高度时,加加入糯米米重量115%左左右的麦麦曲与水水的混合合物,搅搅拌均匀匀,保温温20天天左右即即可,其其间应适适当搅拌拌。清酒的生生产流程程:1、制制米曲22、
10、制酒酒母3、发发酵1.将精精白大米米浸透蒸蒸熟后冷冷却到335左右,接接种米曲曲霉,330左右堆堆积发酵酵,每隔隔6-88小时打打散翻曲曲,培养养30-40小小时。2. 将将冷至77-9的蒸米米和米曲曲、水混混合(77:3:11),77-8发酵。88-122小时后后每隔数数小时搅搅拌一次次,第四四天时品品温开始始上升,110天左左右温度度升至116-220 ,此此时产生生了足够够的乳酸酸抑制细细菌生长长,而酵酵母菌仍仍可生长长,再发发酵200天左右右即可。3. 将将摊冷的的蒸米和和米曲、酒酒母、水水一同落落缸,搅搅匀后118-220发酵,88小时后后开始搅搅拌,控控制温度度不超过过30 ,11
11、0-112天后后结束。六、中国国白酒:按糖化化剂和发发酵剂分分类别糖化剂发酵剂特点大曲酒大曲大曲周期长、产产率低、品品质好,多多为名优优白酒小曲酒小曲(见见黄酒生生产)小曲周期短、产产率高、质质量较好好,多产产于南方方麸曲酒麸曲(将将纯种曲曲霉接入入麸皮中中发酵而而成)纯酵母制制的酒母母周期短、产产率高、质质量一般般,多产产于北方方大曲:以以小麦、大大麦、豌豌豆为原原料,粉粉碎加水水制成块块状曲胚胚,自然然发酵33个月而而成按制曲过过程中的的最高温温度,大大曲主要要分为高高温曲(60以上)和中温曲(50以下)2、中国国白酒的的生产方方式:固体法法、液体法法、半固体体法糖化、发发酵、蒸蒸馏均为为
12、固体形形式,糖糖化和发发酵同时时进行,多多数白酒酒采用。又又分为糖糖化、发发酵、蒸蒸馏均为为液体形形式。原原料糖化化接酒母母发酵罐罐内发酵酵蒸馏塔塔蒸馏,较较少数白白酒采用用 。固态糖化化,液态态发酵、蒸蒸馏,部部分小曲曲酒采用用。食醋分为为酿造醋醋、再制制醋、合合成醋三三大类酿造醋是是在酿酒酒工艺基基础上,添添加醋酸酸菌将酒酒精氧化化成醋酸酸而成的的醋。再制醋是是以酿造造醋为基基料进一一步加工工而成的的醋,如如五香醋醋、蒜醋醋、姜醋醋、固体体醋等。合成醋是是以化学学合成的的醋酸配配制而成成的醋。2、醋酸酸发酵:当酒精精发酵55-7天天,缸温温达388 ,酒酒精含量量7-88%(夏夏天不低低于
13、6%,酒精精含量超超过8%将抑制制醋酸菌菌生长,可可降低原原料淀粉粉含量来来控制)时时拌入44%粗糠糠和3-4%成成熟醋醅醅。每天天倒缸翻翻醅(通通风散热热)一次次以控制制品温在在37-39。当醋醋醅温度度下降到到35 、酸酸度不再再上升时时表明醋醋酸发酵酵已经结结束。将将近结束束两天前前加盐(醋醋醅的11.5-2%)防防止过度度氧化。3、淋醋醋: 用三循环环法:成成熟醋醅醅用二醋醋浸泡220-224小时时后缓慢慢淋出的的醋为头头醋,即即食醋的的半成品品;头醋醋渣用三三醋浸泡泡淋出的的醋为二二醋;二二醋渣用用清水浸浸泡淋出出的醋为为三醋。若若不能及及时淋醋醋,应加加入食盐盐抑制醋醋酸菌继继续生
14、长长,防止止醋酸过过氧化。酱油制作作(低盐盐固态法法):制曲、发酵、浸油、灭菌、配配兑、装装瓶制曲一级种曲曲:85%麸皮加加15%豆饼粉粉,再加加入一倍倍的水拌拌匀后分分装200g/三三角瓶,灭灭菌打散散冷却后后接入22环米曲曲霉斜面面孢子,31培养,16小时后早晚各扣瓶一次,三天后孢子长满曲料即可。二级种曲曲:配料同同上,灭灭菌冷却却至355-388后接入入0.11%一级级种子,摊摊开1-2厘米米厚,室室温300左右保保温约116小时时后品温温升至338左右曲曲料表面面微白色色、开始始结块时时应搓碎碎摊平降降温。再再经6-8小时时后温度度又升至至36、全部部长满白白色菌丝丝、结块块良好时时划
15、割成成小块以以利通风风降温,保保持品温温34-36 ,总总计约772小时时后成熟熟。成曲:豆豆饼与麸麸皮8:2至66:4混混匀,加加一倍水水,300分钟后后蒸煮灭灭菌,迅迅速冷却却至355-400接入00.3%二级种种曲,摊摊料255-300厘米厚厚,通风风并保持持品温335左右,至至普遍长长出淡黄黄绿色孢孢子(约约需244-288小时)即即可。豆酱制作作:制曲、制酱豆腐腐乳制作作:菌种准准备、前发酵酵、后发酵酵菌种准备备毛霉(或或根霉)孢孢子悬液液或干粉粉。2、面面黄:用用面粉培培养米曲曲霉而成成。3、红红曲:用用大米培培养紫红红曲霉而而成。面包制作作:发酵、烘烤、发酵先将1/3的面面粉加水
16、水和酿酒酒酵母(11-2%)混合合成面团团发酵22h,称称为小发发酵。然然后将其其余面粉粉加水,再再加入经经小发酵酵的面团团,混合合均匀,进进行大发发酵,发发酵温度度30 ,时时间1-4h。酵母菌分分解面粉粉中的葡葡萄糖、果果糖和蔗蔗糖,再再加上淀淀粉酶与与转化酶酶的作用用,产生生CO22、醇和和一些有有机酸。 CO22被面团团中的面面筋包围围,不易易跑出,因因而面团团逐渐胀胀大。烘烤发酵后的的面团经经加工造造型后放放在2220以上的的高温炉炉中烘烤烤,面团团内COO2受热热膨胀逸逸出,造造成了面面包多孔孔海棉状状结构。面面团中的的其他发发酵产物物,构成成了面包包特有的的香昧。若若发酵面面团经
17、加加工造型型后在1100蒸汽中中蒸熟,即即成馒头头。泡菜制作作:泡菜水水配制、加料发发酵泡菜的制制作原理理:主要是是在厌氧氧条件下下利用乳乳酸细菌菌进行乳乳酸发酵酵和少量量的酵母母菌进行行乙醇发发酵的作作用。发酵:将将蔬菜洗洗净,剔剔除粗皮皮、须根根、老叶叶及病叶叶,沥干干或晾干干后装入入坛中,装装至半坛坛时将香香料包放放入,装装至离坛坛口6ccm处,用用竹片将将原料压压住。随随即注入入已配制制好的泡泡菜水,务务必将原原料淹没没,最后后将坛口口密封,置置阴凉处处自然发发酵。11-2dd后打开开坛口,适适当添加加原料和和泡菜水水,装满满至坛口口下 33 cmm时为止止。泡菜的成成熟时间间因原料料
18、的种类类及泡制制时的气气温而异异。一般般新配制制的泡菜菜在夏天天需要55-7 d,冬冬天需要要 122-166 d。叶叶菜类比比根、茎茎类泡制制时间短短。加入入陈泡菜菜水可以以大大缩缩短泡制制时间。甜酒制作作:蒸米、装坛、发酵、后熟食用药用用菌栽培培:纯种分分离(一一级种、母母种):孢子分分离法、涂抹法法、钩悬法法、组织分分离法、菌体组组织分离离法、椴木组组织分离离法表面消毒毒:用775酒酒精擦洗洗或0.1升升汞冲洗洗表面一一至二次次后,再再用无菌菌水冲洗洗几次。微生物饲饲料:调制干干草、青贮饲饲料、秸秆微微贮饲料料、发酵粗粗饲料、饲料酵酵母、白地霉霉饲料、光合细细菌饲料料、微藻饲饲料、烃蛋白
19、白饲料二、青贮贮饲料:把新鲜鲜的青饲饲料,如如玉米杆杆、根茎茎类、栽栽培牧草草等,经经切碎并并填入和和压紧在在青贮窖窖或青贮贮塔中,密密封后经经过微生生物的发发酵作用用而调制制成的一一种多汁汁、耐贮贮藏、能能供家畜畜全年使使用的饲饲料。这这种调制制饲料的的方法称称为青贮贮。原理:青青贮原料料上附着着的乳酸酸菌等微微生物在在厌氧条条件下,将将青贮原原料中的的碳水化化合物(主主要是糖糖类)变变成有机机酸(主主要是乳乳酸),抑抑制了有有害细菌菌(如腐腐败菌和和丁酸菌菌等)和和霉菌的的生长,从从而使青青贮料得得以保存存并带有有芳香酸酸甜的味味道,提提高了适适口性。八、微藻藻饲料:小球藻藻饲料、螺旋藻藻
20、饲料微藻会大大量富集集一些对对人和动动物有害害的物质质如重金金属,因因此不能能用含有有重金属属或其他他有害物物质的废废水来培培养。小球藻饲饲料:小球藻藻含有550(干干)的蛋蛋白质、丰丰富的维维生素和和叶绿素素,是优优良的蛋蛋白质饲饲料。培养液:每千克克水加入入尿素00.6克克、磷酸酸二氢钾钾0.225克、硫硫酸镁00.255克。此此外,人人畜粪尿尿、堆肥肥浸汁、无无毒的有有机物废废水也是是培养小小球藻的的良好培培养液。池池深100厘米,接接种34天后后,当水水变成浓浓绿色时时即可收收获。收收获时,每每次舀出出3/44的绿水水,剩下下1/44的绿水水加入新新鲜培养养液后继继续培养养。螺旋藻饲饲
21、料:螺旋藻藻是常用用微藻(小小球藻、绿绿藻、螺螺旋藻)中中蛋白质质含量最最高(660770)、营营养最全全面、消消化吸收收及适口口性最好好、无毒毒无副作作用 、安全全性最高高的藻种种。培养养螺旋藻藻的池深深10厘厘米,ppH8 100,温度度30,为了了获得高高产,应应通入 二氧化化碳,同同时要进进行搅拌拌。当培培养条件件适宜时时,产量量(干重重)可达达40吨吨/公顷顷。饲料添加加剂:饲用抗抗生素、饲用酶酶制剂、微生态态制剂饲用酶制制剂:聚糖酶酶、植酸酶酶、淀粉酶酶和蛋白白酶、酯酶和和环氧酶酶植酸酶:所有植植物性饲饲料都含含有1-5的植酸酸盐,它它们含有有占饲料料总磷量量60-800的磷磷,但
22、单单胃动物物无法分分解利用用植酸盐盐。植酸酸酶能水水解植酸酸盐,一一方面使使其中的的磷以无无机磷的的形式释释放出来来,被单单胃动物物所吸收收;另一一方面使使得与植植酸盐结结合的锌锌、铜、铁铁等微量量元素及及蛋白质质释放,提提高利用用率。植植酸酶还还能降低低粪便含含磷量约约30,减少少磷对环环境的污污染。霉菌毒素素如玉米米赤酶烯烯酮,细细菌毒素素如单孢孢菌素,是饲料在潮湿环境下易产生的微生物毒素。酯酶能破破坏玉米米赤酶烯烯酮,环环氧酶能能分解单单孢菌素素,生成成无毒降降解产物物。2、微生生态制剂剂是活的的微生物物制剂,可可以调整整和维持持消化道道微生物物区系的的平衡,提提高动物物生产性性能和抗抗
23、病能力力。微生态制制剂菌种种的要求求是对致致病菌有有较强的的抑制作作用(竞竞争或拮拮抗);营养要要求低;对胃肠肠道酸碱碱环境有有较强耐耐受力;对磺胺胺有一定定的耐药药性;用用于家禽禽的菌种种还应能能耐受441443 的培养养条件。目前应用用较多的的菌种有有嗜酸乳乳杆菌、枯枯草芽孢孢杆菌、蕈蕈状芽孢孢杆菌、需需氧性放放线菌、酵酵母菌等等。微生态制制剂一般般应密封封保存在在阴凉环环境,温温度不宜宜超过445,并尽尽量避免免与抗生生素混用用或接触触消毒剂剂。微生物医医药:抗生素素、免疫制制品、酶抑制制剂、受体拮拮抗剂、维生素素抗生素:-内酰酰胺抗生生素、大环内内酯类抗抗生素、多烯大大环内酯酯类抗生生
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