[二丁酰环磷腺苷钙中有机残留溶剂的气相色谱法测定] 二丁酰环磷腺苷钙.docx

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1、二丁酰环磷腺苷钙中有机残留溶剂的气相色谱法测定 二丁酰环磷腺苷钙 摘 要 目的：建立二丁酰环磷腺苷钙中有机溶剂乙醚、乙醇、二氯甲烷、吡啶的分别测定方法。方法：采纳DB-1701毛细管色谱柱，程序升温，采纳FID检测器，溶液干脆进样气相色谱法，载气为氮气。结果：乙醚、乙醇、二氯甲烷、吡啶完全分别，其浓度分别在2.2240.6g/ml、14.3238.1ug/ml、2.09.8g/ml、6.028.8g/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数分别为0.9998、0.9998、0.9991、0.9994；最小检测浓度分别为0.6g/ml、4.7g/ml、1.9g/ml、0.6g/ml；回收率分

2、别为100.2%、102.9%、103.9%、103.2%。结论：本试验建立的方法简便灵敏，结果精确牢靠，适用于二丁酰环磷腺苷钙中的有机残留溶剂的检测。 关键词 二丁酰环磷腺苷钙 蛋白激酶激活剂 气相色谱法 有机溶剂残留 二丁酰环磷腺苷钙为化学合成的环磷腺苷衍生物，属蛋白酶激活剂，对细胞的渗透性比环磷腺苷强，可催化人体内一氧化磷酸反应和三羧酸循环，对抗体内磷酸二酯酶的降解作用，激活人体各种反应。同时产生大量ATP（三磷酸腺苷），改善细胞能量代谢，促进神经再生，扩张血管，舒张平滑肌，改善心肌缺氧缺血等作用1。本文针对原料制备工艺中运用到的乙醚、乙醇、二氯甲烷、吡啶四种有机溶剂采纳气相色谱法2，在

3、同一色谱系统中同时测定该四种有机残留溶剂。该方法快速、灵敏，结果精确、牢靠。 仪器与试药 Agilent 6890气相色谱仪（安捷伦公司）；FID检测器；G 2913A自动进样器；Agilent A.10.02色谱工作站。 二丁酰环磷腺苷钙原料药（紫源制药有限公司）；乙醇、乙醚、二氯甲烷、吡啶均为市售分析纯试剂。N,N-二甲基甲酰胺为Tedia色谱级试剂。 试验方法与结果 色谱条件:色谱柱：DB-1701毛细管柱（30mm0.32mm，涂层厚1m）。柱温：采纳程序升温，初始55保持1分钟以后，以5/分升温至110，保持1分钟，以40/分升温至250，保持5分钟。FID检测器，温度300。分流进

4、样，分流比151，进样量1l。进样器温度180。载气为氮气，流速2.5ml/分。 溶液的制备：分别精密称取乙醚、乙醇各0.2g，置100ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为乙醚、乙醇贮备液。精密称取二氯甲烷0.48g、吡啶0.16g，置100ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置20ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为二氯甲烷、吡啶贮备液。精密量取乙醚、乙醇贮备液和二氯甲烷、吡啶贮备液各5ml置50ml量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，即得乙醚、乙醇的浓度为0.20 mg/ml，二氯甲烷浓度为0.024mg/m

5、l，吡啶浓度为0.008mg/ml的混合标准溶液。取本品约0.2g，精密称定，置5ml容量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，振摇使溶解，即得供试品溶液。供试品浓度为40.00mg/ml。 测定方法：精密量取供试品溶液1l，注入气相色谱仪，记录色谱图；另取标准溶液同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。 系统适用性试验：在上述色谱条件下，将标准溶液与供试品溶液分别进样，各组分均完成分别，分别度分别为2.2、4.4、36.4，乙醇理论塔板数为6586，乙醚为47685，二氯甲烷为23372，吡啶为29979。色谱图见图1。 线性关系：配制各溶剂梯度浓度的溶液，以测得每个浓度点的平均峰面积Y为纵

6、坐标，以相对含量X为横坐标进行线性回来，计算回来方程及相应的线性回来系数。结果表明在各溶剂测定浓度范围内，浓度与其峰面积线性关系良好。见表1。 图1 乙醚、乙醇、二氯甲烷和吡啶标准溶液在气相色谱中的分别，1为乙醚；2为乙醇；3为二氯甲烷；4为吡啶。 检测限：分别配制各组分最小检测限浓度溶液，计算吡啶、乙醚、乙醇和二氯甲烷的峰高与噪声的比值（信噪比），其信噪比（S/N）在31的浓度为最小检测限浓度。吡啶的最小检测浓度是0.6g/ml。乙醚的最小检测浓度是0.6g/ml。乙醇的最小检测浓度是4.7g/ml。二氯甲烷的最小检测浓度是1.9g/ml。 定量限：分别配制各组分定量限浓度溶液，计算吡啶、乙

7、醚、乙醇和二氯甲烷的峰高与噪声的比值（信噪比），其信噪比（S/N）在101的浓度为定量限浓度。吡啶的定量限浓度是2.06g/ml。乙醚的定量限浓度是2.24g/ml。乙醇的定量限浓度是14.54g/ml。二氯甲烷的定量限浓度是6.51g/ml。 精密度测定：取一批供试品，连续配制六份供试品溶液，分别进样，六次测试的乙醚、吡啶含量的相对标准偏差分别为4.2%，9.1%，均小于10%，乙醇和二氯甲烷均未检测出。取一批供试品，连续配制12份供试品溶液，3份作为空白比照溶液，3份加入定量限浓度溶液，3份加入100%标准溶液，3份加入120%标准溶液，分别进样，计算各浓度点中样品含溶剂的量，计算加样回收

8、率。乙醚的回收率为100.2%，乙醇为102.9%，二氯甲烷为103.9%，吡啶为103.2%，回收率均在80%120%。日间精密度中，三批供试品连续测试3天，三批供试品乙醚含量RSD%分别为4.9%、5.3%、9.4%，小于10%；吡啶含量RSD%分别为8.6%、9.9%、7.0%，小于10%；乙醇和二氯甲烷未检测出。 方法耐用性：在测定条件微小变动时，柱温1，升温速率为8/分，柱流速为1ml/分，各溶剂峰分别度均大于1.5。 供试品测定 取三批供试品，按上述方法测定，按外标法计算各组分含量，结果见表2。三批供试品中乙醚、乙醇、二氯甲烷、吡啶的有机残留溶剂量均符合中国药典的限度规定（乙醚不得过0.5%、乙醇不得过0.5%、二氯甲烷不得过0.06%、吡啶不得过0.02%）。色谱图，见图2；结果，见表2。 讨 论 二丁酰环磷腺苷钙易溶于水，但水溶液用毛细管柱测定，不宜干脆进样。改用DMF溶解进样，分别完全，各溶剂峰互不干扰。采纳程序升温，缩短了分析时间。采纳本气相色谱法分析便利、结果精确。 参考文献 1 国家药品监督管理局.国家药品标准S,2002,9-109. 2 中华人民共和国药典2010年版（二部）S.2010:附录54. 图2 供试品（批号：100676）的有机残留溶剂色谱图 表1 四种溶剂线性测定结果 表2 三批二丁酰环磷腺苷钙供试品有机残留溶剂测定结果