大花惠兰、石斛兰的组织培养14666.docx

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1、大花惠兰、石斛兰的组织培养（1）材料与方法材料：大花蕙兰大花品种嫩芽。将母株放在温室内盆栽培养,于25 月陆续从母株上取8 cm 左右的新芽,剥去最外几层叶片,去芽的上半段，然后在超净工作台上采用三步灭菌处理法处理:先在70 %的酒精中处理6 s ,立即投入10 %的次氯酸钠溶液中10 min ,稍加摇动,取出后用无菌水冲洗,剥去外层23 枚叶片;再放入5 %的次氯酸钠溶液中5 min ,取出后无菌水冲洗,剥至最后1 枚叶片;再放入1 %的次氯酸钠溶液中1 min ,取出后无菌水冲洗数次。以上次氯酸钠溶液中均加入Tween20 以利杀菌剂更有效地发挥作用,在无菌条件下剥出约5 mm长地茎尖,以

2、生长点为中心,用解剖刀把茎尖切成4 个小方块,分别接入已经准备好的培养基上。 培养养基： 原球茎茎诱导培培养基配配方: MS + 00. 55 mgg/ LL BAA +11. 00 mgg/ LL KTT + 2 gg/ LL 活性性炭（acttivee carrbonn，AC）。 原球茎茎增殖培培养基配配方为:MS + 00. 55 mgg/ LL BAA + 0. 8 mmg/ L2 ,422D +2 gg/ LL ACC,。 幼苗分分化及生生根养基基配方为为:MSS + KT 1 mmg/ L + NAAA 00. 55mg/ L +2 g/ L AAC。 培养养条件培养基pHH 5.

3、 45. 8 ,琼脂粉粉0. 6 %0. 8 %,活活性炭00. 22 %的的,防止止褐变,培养室室温度222225 ,相对对湿度440 %,光照照12 h/ d ,光照强强度为22 0000 llx。（2） 结果观察 原球茎茎诱导：把茎尖尖切成的的小块,接入圆圆球茎诱诱导培养养基上，20天天后（或或更长时时间）观观察有无无圆球茎茎出现。结结果调查查:圆球球茎的诱诱导率= 产生生圆球茎茎的茎尖尖数/ 接种茎茎尖数1000 %。 原球球茎增殖殖：将诱导导形成的的较大原原球茎块块切割成成直径338 mm左左右的小小块,接接种在圆圆球茎增增殖培养养基上。11 个月月后统计计增殖量量，结果调调查:原原

4、球茎增增殖率= 有新新原球茎茎的块数数/ 接接种块数数1000 %。 幼苗苗分化及及生根：将增殖殖的充分分成熟的的较大原原球茎块块切割成成直径338 mm的的小块,接种在在原球茎茎分化及及生根培培养基上上。455 d 后统计计分化率率、生根根率及根根系生长长状态。结结果调查查:幼苗苗分化率率= 出出芽数/ 圆球球茎个数数1000 %。幼幼苗生根根率= 生根幼幼苗数/ 幼苗苗数1000 %。 壮壮苗、驯驯化与移移栽：壮壮苗。11/2MSS，7 %琼脂, pHH 5.455.6，566周后植植株长出出粗壮的的根系。光照22 0000 llx；容器：23 cm 30 cm 8 ccm四周周镂空的的塑

5、料框框；将瓶苗苗从培养养室(恒恒温室)移至与与外界相相通的室室内放置置2 d后后,去瓶瓶盖炼苗苗3 - 7 d,洗洗净瓶苗苗根部的的培养基基,用110000倍甲基基托布津津或多菌菌灵浸泡泡组培苗苗根部,放置于于通风阴阴凉处晾晾干水分分至根系系发白变变软,即即可用于于移栽；基质。水苔和和谷(麦麦)壳22：河沙11：珍珠岩岩1（体积,是大花花蕙兰组组培苗假假植的理理想基质质；白天平平均温度度在200 以上,夜间温温度在115 左右。假假植相对对湿度控控制在880%以以上。晴晴天上午午10: 000至下午午5: 00,作700%的遮遮荫处理理，大花蕙蕙兰刚出出瓶的植植株很小小、十分分脆弱, 放置置处

6、要求求光照弱弱，种后用用喷雾器器将苗株株与植材材喷洒到到湿润为为止。每每天向叶叶片喷水水数次, 保持持湿润, 切忌忌过干或或过湿。110 天天后才逐逐渐增加加给水量量。良好好的浇水水管理措措施、可可大大提提高瓶苗苗移栽成成活率。瓶瓶苗移栽栽20 天以后后新根长长出, 可逐渐渐增加光光照强度度。每周周进行11 次根根外追肥肥，可用“花宝11 号”或“通用肥肥”20000 倍倍液喷洒洒。 （33）讨论论 在在原球茎茎增殖的的继代培培养中,2025 d 继继代1 次较为为合适,此时产产生的原原球茎未未充分成成熟,增增殖率较较高,且且颜色为为鲜绿色色;300 d 以后新新生的原原球茎充充分成熟熟,增殖

7、殖率会有有所降低低,颜色色转为深深绿色;原球茎茎切割块块的大小小以直径径0. 5 ccm为适适宜,过过小易死死亡降低低增殖率率,过大大增殖率率也有所所降低；在培养养基中加入22 g/ L AC活活性碳可可以有效效的降低低褐变率率；分化及及生根培培养时原原球茎切切割的块块越大分分化的越越早,幼幼苗长得得越壮;同一培培养基中中培养的的时间越越长分化化率越高高;分化化和生根根可以同同步进行行。 （44）实例例 大花蕙蕙兰杂交交新品种种西维亚亚、玛利莲莲梦露、蒙米拉拉丝、女皇为材料料，把母株株放在温温室内盆盆栽培养养,于22 月底底4 月初陆陆续从母母株上取取8 ccm 左左右的新新芽,从从基部切切离

8、,用用自来水水冲洗,再用洗洗洁净溶溶液浸泡泡5 mmin ,自来来水冲洗洗10 minn ,剥剥去最外外几层叶叶片,并并剪去芽芽的上半半段. 然后在在超净工工作台上上采用33 步灭灭菌处理理法处理理:先在在70 %的酒酒精中处处理6 s ,立即投投入100 %次次氯酸钠钠溶液中中10 minn ,稍稍加摇动动,取出出后用无无菌水冲冲洗,剥剥去外层层233 片叶叶; 再再放入55 %的的次氯酸酸钠溶液液5miin ,取出后后无菌水水冲洗,剥至最最后一枚枚叶片;再放入入1 %的次氯氯酸钠溶溶液1 minn ,取取出后无无菌水冲冲洗数次次.以上上次氯酸酸钠溶液液中均加加入Twweenn - 60 以

9、利杀杀菌剂更更有效地地发挥作作用. 在无菌菌条件下下剥出约约5 mmm 长长的茎尖尖,以生生长点为为中心,用解剖剖刀把茎茎尖切成成4 个个小方块块,分别别接入已已准备好好的培养养基上.培养养条件：pH 5. 255. 66 ,蔗蔗糖2 % ,琼脂条条0. 6 %0. 855 % ,温度度2225 ,光照照强度22 0000 llx ,每日光光照122 h。培养基基配方：诱导原原球茎最最佳激素素配比为为KT 0. 05 mg/L ,NAAA 0. 5 mg/L，利于原原球茎增增殖的培培养基为为改良KKC + KTT 0. 055 mgg/L + NAAA 00. 55 mgg/L ,以半固固体培

10、养养,加香香蕉泥为为佳,增增殖率为为4. 1. 利于生生根壮苗苗的培养养基为改改良KCC + NAAA 0. 2 mg/L ,以固体体培养为为佳。讨论： 灭灭菌处理理：大花蕙蕙兰属热热带气生生兰,靠靠根系附附着在林林中树木木及岩石石上生长长,多数数种类有有内生菌菌共生. 因此此外植体体灭菌采采用3 步处理理. 据据笔者经经验,大大花蕙兰兰外植体体灭菌比比其它植植物有一一定难度度. 我我们曾采采用抗生生素处理理,效果果不佳. 对于于供试品品种是否否由于存存在内生生菌而引引起外植植体灭菌菌处理困困难,以以及内生生菌在植植物体内内的分布布传播情情况有待待进一步步研究； 培养养基添加加香蕉泥泥：对大花

11、花蕙兰增增殖和分分化有明明显的促促进作用用,这与与香蕉泥泥中的有有机质和和天然激激素有关关,同时时能使培培养物在在适宜的的酸性条条件下生生长；原球茎茎切块细细小、稀稀疏的培培养瓶内内,群体体生长较较慢,而而切块较较大且密密集的瓶瓶内,生生长十分分健壮,表现类类似于群群体生长长效应. 因此此切割时时不可过过细,直直径要在在2 mmm 以以上,每每瓶可接接种300 多个个培养块块,可使使瓶内营营养得以以充分利利用；接种时时,采用用大罐头头瓶把培培养块11 次夹夹入或铲铲入,稍稍加晃动动半固体体培养基基即可使使培养块块分散开开来,既既节约时时间、成成本,又又降低了了污染率率； 用改改良KCC(无机机

12、盐减半半) 培培养大花花蕙兰,无机盐盐用量比比其它报报道用MMS 培培养基大大大减少少,增殖殖分化效效果均佳佳. 采采用降低低琼脂用用量制成成半固体体培养基基可简化化接种步步骤,而而且培养养块浸在在培养基基内,降降低了培培养块黄黄枯和切切口褐化化的机会会. 定定期摇动动培养瓶瓶,能使使培养瓶瓶内营养养得以充充分利用用. 无无机盐和和琼脂在在培养成成本中占占有很高高的比例例,采用用以上技技术可大大大节约约成本,利于大大规模生生产应用用；用自来来水代替替蒸馏水水,用绵绵白糖代代替蔗糖糖,用廉廉价的琼琼脂条代代替琼脂脂粉,降降低了成成本,效效果没有有丝毫降降低. 由于大大花蕙兰兰原球茎茎增殖不不必用

13、小小容器和和相对较较高的罐罐头瓶,可用透透光性好好的大容容器代替替； 采用用1 次次定植,不经移移栽,可可以减少少对幼苗苗根系的的损伤和和节约人人力. 只要保保证温室室内相对对湿度,对成活活率无显显著影响响,但组组培苗前前期生长长缓慢。石斛兰的组组织培养养 石斛斛兰为兰兰科(OOrchhidaaceaae)石石斛属(Denndroobiuum )植物,为附生生兰,与与卡特兰兰(Caattlleyaa) 、蝴蝴蝶兰( Phhalaaenoopsiis) 、万代代兰(VVandda)并并列为观观赏价值值最高的的“四大观观赏洋兰兰”。石斛属属是兰科科中仅次次于石豆豆兰属(B uulboophyyll

14、uum )的第二二大属,全世界界共有11 0000多个个原生种种,分布布区域广广,主要要在亚洲洲的热带带和太平平洋岛屿屿的东亚亚、东南南亚及澳澳大利亚亚等地区区。我国石斛斛属植物物共有774种22变种,主要分分布于秦秦岭以南南诸省区区,尤以以云南南南部最多多。石斛中中的铁皮皮石斛、金金钗石斛斛等是名名贵药材材，石解兰兰却是一一种观赏赏价值很很高的花花卉, 其花色色繁多艳艳丽、 花型型大、 花枝枝长、 花多多。 春石石斛节生生型主要要作为盆盆栽品种种, 秋秋石斛蝶蝶花型主主要作为为切花， 也可可以用来来进行造造型后盆盆栽。在繁殖殖上, 因为几几乎所有有的观赏赏类石解解都是杂杂种, 不能用用种子播

15、播种得到到大量与与亲代形形状一致致的植株株，分株和和高位芽芽扦插繁繁殖则速速度很慢慢，一般在在1年中的的繁殖速速度为22-3倍倍， 通过过茎尖组组织培养养技术产产生原球球茎，在原球球茎阶段段进行增增殖培养养和分化化 ，使原球球茎繁育育成小植植株，效效率很高高。石斛斛兰增殖殖的另一一途径就就是用通通过芽的的增殖方方式形成成再生植植株。 1 石斛斛兰组培快快繁 材料与与方法 材料料：选取生生长健壮壮的3-5cmm石斛兰兰新生芽芽，取茎茎尖为材材料，先先用自来来水冲洗洗干净，再再用755的酒酒精处理理8s；后后用0.1升升汞灭菌菌10mmin，最最后用无无菌水冲冲洗4、55次，在在无菌的的环境里里在

16、显微微镜下剥剥取茎尖尖组织作作为外植植体，接接种于无无菌的设设计的培培养基上上。 培培养基及及培养条件件： 芽芽的诱导导。MsNAAA1.00mg/L66-BAA4.00mg/LKKT1.0mgg/L，ppH5.0-55.4，温度为252，漫射光（不开日光灯）。 芽芽的增殖殖和分化化。MsNAAA1.00mg/L66-BAA4.00mg/LKKT1.0mgg/L，ppH5.0-55.4。壮苗生根。1/22MsIBAA2.00mg/L 肌醇22.0mmg/LL 水水解酪蛋蛋白1.0g/L+ 香蕉泥泥1.00g/LL 。移栽基质。砖粒：木炭： 椰糠为4：1：1（体积比） 结果观观察 芽的的诱导。将

17、茎尖尖接于芽芽的诱导导培养基基，经过400d的培培养，诱诱导出不不定芽。石石斛兰为为复茎性性兰花，较较适于用用茎尖作作为其快快速繁殖殖的外植植体。研研究表明明，带11-2个个叶原基基的茎圆圆锥成活活率高，不不易褐化化而致死死亡。 芽的增增殖培养养。将生长长至1-1.55cm 的不定定芽切下下，分别别转接于于芽的增增殖和分分化培养养基，30dd，芽芽增殖倍倍数为12倍倍。 壮苗生生根。选取生生长健壮壮、高22cm以以上的单单个芽体体接入壮壮苗生根根培养基基，60dd，生根根率达1100，且植植株根系系发达粗粗壮，形形成完整整的石斛斛兰小植植株。由由于根的的分化形形成，加加快了植植株对营营养的吸吸

18、收，促促进了茎茎叶的生生长，达达到了壮壮苗生根根的目的的。添加加一定量量的香蕉蕉泥有助助于石斛斛兰根系系的分化化。 试试管苗的的移栽。当石斛斛兰试管管苗长55-7ccm 高高， 有3片以上上真叶/ 时，就就可进行行移栽。出出瓶前将将瓶苗移移至自然然漫射光光的室内内炼苗77d，以以增强试试管苗对对室外环环境的适适应力，提提高其移移栽成活活率。移移栽前先先洗净试试管苗根根部培养养基，用用0.22甲基基托布津津溶液浸浸泡155minn，然后后移栽基基质中。小小苗移栽栽后应浇浇透水，放放入温室室大棚内内，定根根前要控控制水分分，只要要保持叶叶面及基基质湿润润即可。石石斛兰较较适宜生生长的温温度为115

19、-225，空气气相对湿湿度为770-880。 讨论：春石斛用芽芽增殖方方式获得得再生植植株以春石斛盆盆苗的茎茎段侧芽芽为材料料。剪取取春石斛斛的茎,剥离叶叶片后流流水冲洗洗30 minn 以上上,700 %的的酒精浸浸数秒,用无菌菌水冲洗洗1次,再用00. 11 %的的升汞液液浸8mmin ,最后后用无菌菌水冲洗洗8 次次,获得得无菌外外植体。将将经过灭灭菌处理理后的春春石斛的的茎在无无菌培养养皿内切切成22. 5 ccm的茎茎段,每每一茎段段上有11 个茎茎节。将将此茎段段接种在在培养基基中诱导导侧芽生生长,培培养条件件均为:温度(25 2) ,光照照为122 h/ d，光光强16600LL

20、x，诱诱导培养养基：MSS + BA00. 55 mgg/ LL + NAAA0. 1 mmg/ L。90dd后诱导导出芽，转转接至MS + BBA0. 5 mg/ L + 22 ,44-D 00. 22 mgg/ LL促芽生长长，90dd长至约约2cmm，转接接于增殖殖培养基基MS + BBA 33. 00 mgg/ LL + NAAA 0. 2 mg/ L，30dd，增殖殖约2倍；铁皮石斛根根尖诱导导后用芽芽增殖选择生长健健壮、根根长为33 cmm 左右右的铁皮皮石斛无无菌苗, 用刀刀片小心心切除根根冠后, 取长长约0. 30. 5 ccm 的的根尖分分生组织织平放于于培养基基中培养养。基

21、本本培养基基为B55，入蔗糖糖30 g/L , 琼脂脂6.11 g/L , pHH 5.8。 培养养条件为为(2551) , 光光照强度度为8000Lx, 持续光光照。诱导培培养基：B5+0. 5mgg/L224-DD+ 0. 5mmg/LLNAAA+ 3. 0mmg/LL6-BBA，出出愈率、类原球球茎形成成率、芽形成成率最好好。将类原原球茎转转接到BB5+ NNAA 0. 5mgg/L + 100% 椰椰子汁的的培养基基中进行行分化增殖殖培养, 类原原球茎逐逐渐变长长, 其其顶端分分生组织织先分化化出芽, 然后后叶原基基进一步步发育成成幼叶。稍稍后, 在其基基部出现现根原基基, 根根原基细

22、细胞分裂裂延伸为为根, 内部分分化出维维管束, 最后后形成完完整的幼幼苗。同同时，类类原球茎茎在分化化的同时时, 也也会不断断增殖, 产生生许多新新的类原原球茎, 最后后逐渐形形成丛生生小芽。两两种不同同途径产产生的类类原球茎茎的分化化能力有有明显不不同, 由根尖尖直接产产生的类类原球茎茎在分化化培养基基中绝大大多数都都能分化化成小苗苗, 而而由愈伤伤组织分分化而来来的类原原球茎分分化能力力很弱, 大多多数最终终褐化死死亡。根根尖直接接再生芽芽:根尖尖, 除除产生一一定比例例的类原原球茎外外, 还还出现根根尖分生生组织直直接分化化成芽的的现象，适宜培培养基是是B5 (微微量元素素减为11/3

23、) + 1% 芋头汁汁，但频频率低；铁皮石斛丛丛生芽的的增殖：将从日本引引进的生生长旺盛盛的铁皮皮石斛健健康植株株,以茎茎芽为中中心剪下下,芽的的上下各各留0. 5 cm的的茎段,用洗衣衣粉浸泡泡20 minn左右, 取出出后再用用自来水水反复冲冲洗数次次,用775%的的酒精溶溶液灭菌菌30 s,然然后用无无菌水冲冲洗1次次,将茎茎段腋芽芽的苞叶叶拨去,然后将将0. 1%的的HgCCl2 溶液液倒入烧烧杯中灭灭菌100 miin,灭灭菌过程程中不断断摇动烧烧杯使灭灭菌更加加彻底,最后用用无菌水水冲洗556次次将HggCl22 溶液液冲净并并接种到到培养基基上。培培养条件件，温度222 ,光照照

24、12 h/dd,光照照强度为为2 0000 lx。铁铁皮石斛斛丛生芽芽的增殖殖培养基基为MSNAAA0. 3 mmg/LL 6-BA55 mgg/L，一个芽芽30 d后芽增殖殖数可达155个。当当生长到到60 d时达达到铁皮皮石斛的的最高生生长点。将大小小达34 ccm的无无根苗切切割成单单苗，转转培养基基为MSS + 6-BA22 mgg/L+ 200%香蕉蕉汁，20 d左右右小苗的的茎节上上开始出出现根的的分化,接种330 dd后小苗苗长出浅浅绿色长长度0. 81 ccm、直直径0. 10. 2 ccm的小小根, 60 d后根根长度最最长可达达5 ccm以上上，生根率率95%，平均根根数4

25、. 5条条。2实例 铁皮石石斛的愈愈伤组织织的诱导导 铁皮皮石斛采采自野生生。嫩叶叶用自来来水冲洗洗干净，先用775%的的乙醇对对铁皮石石斛嫩叶叶进行表表面消毒毒, 再再用0.1%的的HgCCl2 灭菌菌588minn, 用用无菌水水冲洗33次。将将已灭菌菌的石斛斛嫩叶, 在无无菌条件件下切成成3mmm2。培养养基为N6 6-BA11.0mgg/L蔗糖220 gg/L和和琼脂88 g/L, pH55.8，培养温温度255 , 日日光灯照照射, 光照强强度1 50002 0000 lx, 122 h /d。接接种9 d后,嫩叶开开始出现现愈伤组组织。 紫皮石石斛兰其其原球茎茎的增殖殖和分化化 材

26、料料是紫皮石石斛兰的的种子无无菌苗 ，将紫紫皮石斛斛兰无菌菌苗的原原球茎接接入增殖殖培养基基中，培养基基为MS，pH 5. 4 ,蔗糖220330 gg/ LL , 活性碳碳5 gg/ LL,琼脂脂7 gg/ LL 。温度224226 ,133 h /d,光光照强度度3 0000 lx。11 个月月后增殖殖倍数为9. 5 倍。将增殖殖后的紫紫皮石斛斛兰原球球茎接种种于分化化培养基基上：6-BA 0. 2 mmg/ L + NAAA 11. 55 mgg/ LL ，40 d 后后调查分分化率，达到887.55%。将将分化的苗苗转入440g/ L MS 脱水培培养基（商商店可买买）作为为生长培培养

27、基 ,1个个月后苗苗粗壮、根系发发达、叶片紫紫绿,长长势比较较好。移栽栽，将组培培所得的的紫皮石石斛兰苗苗移入温温室,练练苗3 d 后后移栽。移移栽前先先洗净组组培苗根根部培养养基,用用50 %的多多菌灵可可湿性粉粉剂1 0000 倍液液浸泡110 mmin ,然后后移入苔苔藓基质质中,移移栽成活活率为332 %。 广东石石斛的组组织培养养 将约约3 ccm长且且生长健健壮的幼幼芽从母母株上采采下，自自来水冲冲洗1 h，去去掉外部部叶片，先先用755% 酒酒精消毒毒30 s，再再用0.1% 升汞溶溶液(加加1 滴滴吐温)消毒110 mmin，无无菌水冲冲洗68次，用用消毒滤滤纸吸干干表面水水分

28、，接接种到原原球茎诱诱导培养养基：11/2MMS+66-BAA3.00 mgg/L+NNAA 0.55mg/L，蔗糖浓浓度3.0%，琼琼脂7.0 gg/L，ppH 55.8。培培养温度度(2662)，连续续光照112 hh/d，光光照强度为22 0000Lx。115 dd 左右右茎节处处开始膨膨大，330 dd 以后后逐渐有有绿色原原球茎长长出。将将获得的的原球茎茎转接丛丛生芽诱诱导及增增殖培养养基：花花宝1 号3 g/L+66-BAA 1.0 mmg/L+NNAA00.055 mgg/L+ 椰汁1100 g/L+ 活性炭炭(ACC) 00.5 g/L，蔗糖浓浓度3.0%，琼琼脂7.0 gg/

29、L，ppH 55.8，进行丛丛生芽诱诱导培养养，培养环境境同上，220 dd 时由由原球茎茎上长出出绿色丛丛生芽。将将丛生芽芽再次转入入新鲜丛丛生芽诱诱导及增增殖培养养基：即即花宝11 号33 gL-11+6-BA 1.00mg/L+NNAA00.055mg/L+ 椰汁1100 g/L+ 活性炭炭(ACC) 00.5 g/L中继继续培养养，300 d 为1 个继代代增殖周周期，增增殖倍数数可达55倍。将丛丛生芽接接到壮苗苗培养基基：1/2MSS+6-BA 0.55mg/L+NNAA 0.005mgg/L+ 椰汁1100 g/L+AAC 00.5 g/L，蔗蔗糖浓度度3.0%，琼脂脂7.00 g

30、/L，ppH 55.8培培养丛生生芽逐渐渐长大成成苗。将将大约33 cmm长且生生长健壮壮的无根根苗切割割成单个个苗接入入生根培培养基：1/22MS+IBAA 0.5mgg/L+ 香蕉汁汁1000 g/L，蔗糖浓浓度2.0%，琼脂脂7.00 g/L，ppH 55.8中中进行生生根培养养，200 d 时开始始生根，330d 时幼苗苗生根率率达955%。根根数可达达344 条，根根长2 3 cm，根根系粗壮壮。 炼炼苗与移移栽 移移栽时特特别注意意要提前前将瓶盖盖打开，让组组培苗适适应一下下外界的的环境。22 d 后再将将小苗取取出，洗洗净根部部琼脂，栽栽入湿润润但拧不不出水的的水苔中中，不需需盖

31、膜保保湿，保保持环境境温度220225即可，成成活率可可达900%。待待新根长长出后再再浇水。 春春石斛离离体培养养 材料料为春石斛斛，取春石石斛的侧侧芽， 剥离离老叶和和根， 流水水冲洗22 h， 沿茎茎纵轴剥剥离叶片片，切成00. 55 cmm 长的的茎尖和和茎段。无菌苗苗的培养养：茎尖和和茎段经经HgCCl2 表面面消毒66 m in，生生理年龄龄较老的的表面消消毒8 m in，20 d 后后，外植体体成活率率80。将112 mm 长长的茎尖尖接种于于茎尖诱诱导不定定芽培养养基上：12 MM S1. 0 mmgL BBA + 0. 5 mgL NNAA椰乳66 % 食用糖糖30 gL ,

32、 琼脂脂8. 0 ggL , pHH 5. 2, 温度度251 , 光光强1 6000 lxx, 每每天光照照16 h，诱诱导出不不定芽。不定芽增殖壮苗：将35 株苗为一丛, 接种于M S0. 2mgLNAA1. 5mgL BA 0. 5mgLGA 3或以M S+ 3 mg/L 亚精胺，1 个月后增殖率大于 10 倍.当苗长2 3 cm 时, 接种到12 M S+ 0. 2 mgL IBA生根培养基中， 20 d 后, 全部苗能长出5 8 条3 4cm 长的粗壮根, 可供移栽。应根据苗的具体状况，在小苗长根生长前一个阶段, 丛生芽应放在M S+ 3 mg/L 亚精胺培养基中生长一个阶段,当苗长2 3 cm 时, 接种到1/2 M S + 0. 2 mg/LIBA 长根培养基中. 20 d 后, 全部苗能长出5 8 条34 cm 长的粗壮根, 可供移栽.