动物繁殖学实验指导8429.docx

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1、Evaluation Warning: The document was created with Spire.Doc for .NET.动物繁殖学学实验实实习指导导莱阳农学院院动物科科技学院院2004年年1月动物繁殖学学实验实实习指导导实验一 动动物生殖殖器官的的观察实验二 动动物睾丸丸、卵巢巢及附性性器官的的组织学学观察实验三 PPMSGG或FSSH的生生物测定定法实验四 精精液品质质常规检检查及理理化因素素的影响响实验五 精精子数量量计算和和畸形率率的测定定实验六 精精子顶体体完整率率的测定定实验七 人人工授精精器械的的认识及及假阴道道的准备备实验八 动动物精液液的冷冻冻操作实验九 动动

2、物的发发情鉴定定实验十 母母牛的直直肠检查查实验十一 动物物的采精精与输精精实验十二 动物物的胚胎胎观察与与鉴定实验十三 牛、羊羊的胚胎胎移植实验十四 卵母母细胞体体外培养养与体外外受精实验一 动物生生殖器官官的观察察一、实验目目的认识各种动动物生殖殖器官的的形态、大大小，及及其特点点，为生生殖器官官的直肠肠检查、阴阴道检查查、妊娠娠诊断及及人工授授精等操操作奠定定基础。二、实验材材料1、各种雄雄性动物物生殖器器官标本本、模型型及挂图图2、各种雌雌性动物物活体及及生殖器器官标本本、模型型及挂图图。3、解剖刀刀、剪刀刀、镊子子、卷尺尺、搪瓷瓷盘。4、腹腔镜镜：主件件（观察察镜、变变压器、光光源、

3、光光缆），附附件（套套管针、探探针、照照相设备备、监视视系统、手手术器械械、送气气设备、抽抽吸装置置）。三、实验内内容（一）雄性性动物生生殖器官官1、观察各各种动物物睾丸和和附睾的的形状、相相对位置置和大体体构造。睾丸均为长长卵圆形形，牛、羊羊、猪的的睾丸相相对较大大，尤其其是羊的的最大。马马睾丸的的纵轴方方向与地地面平行行；附睾睾位于睾睾丸的背背外缘，头头端在前前、尾端端在后。牛牛、羊睾睾丸的方方向与地地面垂直直；其附附睾位于于后缘，头头端在上上，尾端端在下。猪猪睾丸的的方向呈呈前低后后高倾斜斜，位于于股部之之后；附附睾位于于睾丸的的前上缘缘，头端端在下，尾尾端在上上。2、副性腺腺：比较较各

4、种动动物副性性腺的大大小、形形状、位位置及内内部构造造。精囊腺：成对位位于膀胱胱颈背面面的两旁旁，输卵卵管的末末端两侧侧。马的精囊腺腺为长圆圆形囊状状，牛、羊羊和猪的的精囊腺腺都是由由紧密的的腺体组组织所构构成，猪猪的特别别发达。前列腺：位于膀膀胱颈尿尿道开始始处精囊囊腺之后后。马的前列腺腺，由两两个侧叶叶和一个个峡所构构成，形形似蝴蝶蝶。牛和和猪的前前列腺分分为体部部和弥散散部两部部分，羊羊的前列列腺最不不发达，只只有弥散散部。尿道球腺腺：位于于骨盆出出口附近近的尿道道两旁，各各有一个个排出管管开口于于尿道内内。猪的尿道球球腺最为为发达，呈呈圆柱状状，上面面覆盖的的尿道肌肌很薄。其其它家畜畜

5、的呈球球状，上上面覆盖盖的尿道道肌较厚厚。在尿尿生殖道道骨盆部部的腹面面中线上上作纵切切口，观观察尿道道上壁的的精阜，上上有射精精孔。前前列腺的的开口在在两侧，尿尿道球腺腺的开口口在其后后方。3、阴茎和和龟头：阴茎由由白膜内内的两个个阴茎海海绵体和和其腹面面的尿道道海绵体体组成，为为阴茎的的勃起组组织。马马的阴茎茎长而粗粗大，龟龟头窝内内有尿道道突，牛牛的阴茎茎在阴囊囊之后形形成一“S”状弯曲曲。羊的的阴茎比比牛的细细小，尿尿道突细细而长，绵绵羊的较较长，山山羊的较较短。猪猪的阴茎茎“S”状弯曲曲在阴囊囊之前，龟龟头呈螺螺旋状。（二）雌性性动物生生殖器官官雌性动物可可以观察察生殖器器官的标标本

6、、模模型及挂挂图，也也可以采采用腹腔腔镜法进进行活体体观察。1、生殖器器官的组组成及位位置雌性动物的的生物器器官包括括：卵巢巢、输卵卵管、子子宫、阴阴道、尿尿生殖前前庭、阴阴唇和阴阴蒂。前前四部分分称为内内生殖器器官，后后三部分分称为外外生殖器器官，也也称外阴阴部。雌性动物的的整个生生殖器官官都位于于骨盆腔腔和骨盆盆腔前方方的腹腔腔内，上上面为直直肠和小小结肠，下下面是膀膀胱。2、卵巢观察未孕孕动物性性周期各各时期卵卵巢的外外形并测测量其体体积。作卵巢的的水平切切面，观观察其内内部构造造。马的卵巢：为豆形形，体积积如鸽蛋蛋大，成成熟后卵卵巢的一一边（自自由边）内内陷形成成排卵窝窝，朝向向内侧的

7、的输卵管管伞。发发情周期期的不同同时期马马卵巢的的直径大大小不等等。牛的卵巢：为椭圆圆形，没没有排卵卵窝，如如青枣大大，排卵卵以后多多不形成成红体，黄黄体往往往凸出于于卵巢表表面。其其位置在在两侧子子宫角尖尖端的外外侧下方方。羊的卵巢：比牛的的圆，体体积也小小，其他他特点同同牛。猪的卵巢：有很发发达的卵卵巢囊，卵卵巢和输输卵管伞伞有时被被包在卵卵巢囊内内，其形形状随机机体成熟熟的程度度而有不不同。幼幼小母猪猪卵巢的的形状极极似肾脏脏，接近近性成熟熟时为桑桑椹形，达达到性成成熟时似似串状葡葡萄。3、输卵管管观察输卵管管的形状状及其与与卵巢、子子宫角的的关系。马的输卵管管有很多多弯曲，伞伞较发达达

8、。牛、羊的输输卵管弯弯曲较少少，伞不不发达。猪的输卵管管有许多多小弯曲曲，输卵卵管伞最最发达。其其伞的开开口接近近卵巢囊囊的底部部。各种动物输输卵管的的子宫端端均与子子宫角尖尖端相连连，马及及猪的输输卵管与与子宫角角之间具具有明显显界限，牛牛、羊的的则不明明显。4、子宫观察子宫宫角和子子宫体的的形状、粗粗细、长长度及粘粘膜上的的特点（沿沿子宫大大弯切开开）；观察子宫宫颈的粗粗细、长长度及其其构造特特点；沿阴道上上面纵切切，观察察阴道和和子宫颈颈及前庭庭的关系系。马：其整个个子宫呈呈“丫”形，子子宫角为为扁带状状。小弯弯在上，大大弯在下下，子宫宫颈外口口突入阴阴道，子子宫颈的的肌肉层层比较薄薄，

9、管道道比较粗粗。牛、羊：其其子宫角角的形状状如同弯弯曲的绵绵羊角，大大弯向上上，小弯弯向下，子子宫粘膜膜上有子子宫阜，且且羊子宫宫阜的中中央有一一个小的的凹陷。牛牛、羊子子宫颈的的肌肉层层发达，坚坚硬，管管道细且且有大而而厚的皱皱襞，子子宫颈外外口突出出于阴道道，但较较马的短短，似菜菜花样。猪：其子宫宫角长而而有许多多弯曲，子子宫颈与与子宫体体、阴道道都没有有明显的的界限，子子宫颈管管的粘膜膜上有两两排交错错的突起起。5、阴道是是由阴道道穹窿至至处女膜膜（阴道道外口）的的管道部部分。6、外生殖殖器官：包括尿尿生殖前前庭、阴阴唇及阴阴蒂。尿生殖前前庭：由由处女膜膜至阴门门的部分分。阴唇及阴阴蒂是

10、雌雌性动物物生殖道道的最后后一部分分。实验二 动物睾睾丸、卵卵巢及其其他性器器官的组组织学观观察一、目的要要求：通过对雄性性动物睾睾丸和雌雌性动物物卵巢、子子宫、输输卵管组组织切片片的观察察，了解解睾丸、卵卵巢、子子宫、输输卵管的的组织结结构及其其形态。了了解精子子的发生生过程，卵卵子的发发生、卵卵泡的发发育过程程及其形形态。二、实验材材料：1、显微镜镜。2、动物睾睾丸、卵卵巢、子子宫、输输卵管的的标本及及组织切切片。3、动物睾睾丸、卵卵巢、子子宫、输输卵管的的组织图图片（幻幻灯片）。三、实验内内容：（一）雄性性动物睾睾丸的组组织学观观察：1、低倍镜镜观察：（1）被膜膜：由浆浆膜和白白膜构成成

11、。外层层膜为一一层较薄薄的固有有鞘膜，内内层白膜膜为较厚厚的致密密结缔组组织构成成。（2）纵隔隔和中隔隔：纵隔隔为由睾睾丸的一一端伸向向睾丸实实质的结结缔组织织索，并并向四周周发出许许多放射射状的结结缔组织织小梁直直达白膜膜，形成成中隔。（3）小叶叶：由中中隔将睾睾丸实质质分成许许多基部部向外，顶顶端向内内的锥形形小叶，每每个小叶叶由2-3条盘盘曲的精精细管组组成。精精细管之之间有疏疏松的结结缔组织织，内含含有血管管和间质质细胞。（4）附睾睾：由精精细管汇汇合成的的直精细细管，穿穿入睾丸丸纵隔的的结缔组组织，形形成弯曲曲的睾丸丸网，睾睾丸网又又分出110-220条睾睾丸输出出管形成成附睾，附附

12、睾头也也由结缔缔组织分分成若干干附睾小小叶，各各附睾小小叶的管管子汇成成附睾管管，经附附睾体，附附睾尾最最后过渡渡为输精精管。2、高倍镜镜观察：从睾丸丸小叶中中仔细观观察精细细管及间间质细胞胞的结构构和形态态。精细细管的管管壁的外外向由结结缔组织织、基膜膜和复层层的生殖殖上皮构构成。生生殖上皮皮又由生生精细胞胞和支持持细胞组组成。仔仔细观察察精子发发生周期期中主要要阶段和和支持细细胞形态态：（1）支持持细胞：又称足足细胞和和塞托利利氏细胞胞。为高高柱状或或锥状细细胞。从从基膜一一直伸达达精细管管的管腔腔，该细细胞高低低不等，界界限不清清，细胞胞核较大大位于细细胞基部部，着色色浅，核核仁明显显。

13、支持持细胞的的游离端端常嵌含含有许多多精子，其其侧面嵌嵌含各个个发育阶阶段的生生精细胞胞，并对对生精细细胞起支支持、营营养、保保护、促促使其发发育的作作用。（2）精原原细胞：是精子子形成过过程的干干细胞，位位于基膜膜，细胞胞为多边边形或圆圆形，核核大而圆圆，染色色较深。仔仔细观察察A、BB、中间间型三类类。（3）初级级精母细细胞：由由精原细细胞分裂裂而成，位位于精原原细胞内内侧，排排列成几几层，细细胞呈圆圆形，体体积较大大，着色色深，经经第一次次成熟分分裂形成成二个次次级精母母细胞。（4）次级级精母细细胞：由由初级精精母细胞胞分裂而而成，位位于初级级精母细细胞内侧侧，细胞胞体积较较小，呈呈圆形

14、，细细胞核为为球形，染染色质呈呈细粒状状，不见见核仁，由由于其存存在时间间很短，很很快经过过第二次次成熟分分裂成为为二个精精子细胞胞，因而而在切片片上很难难找到。（5）精子子细胞：由次级级精母细细胞分裂裂而成，位位于精母母细胞内内侧，靠靠近细管管的管腔腔，排成成数层，细细胞呈圆圆形，体体积更小小，核小小呈球状状，染色色深，核核仁清晰晰。精子子细胞不不再分裂裂，在支支持细胞胞顶部经经过变态态过程成成为精子子。（6）精子子：由精精子细胞胞变态形形成，位位于精细细管的管管腔内，刚刚形成的的精子头头部常深深入支持持细胞游游离端，尾尾部朝管管腔，随随着精子子发育成成熟，便便脱离支支持细胞胞，游离离在管腔

15、腔内，精精子分头头、颈、尾尾三部分分，形似似蝌蚪，头头部多呈呈扁卵圆圆形，染染色深。（7）附睾睾管：管管壁由环环形平滑滑肌纤维维和假复复层柱状状纤毛细细胞和基基底细胞胞组成，柱柱状细胞胞有分泌泌作用，基基底细胞胞紧贴基基膜，外外形为圆圆形或卵卵圆形，染染色较浅浅，核呈呈球形，精精子在附附睾管内内借助分分泌液，纤纤毛运动动和管壁壁蠕动来来运行。（二）雌性性动物卵卵巢的组组织学观观察：卵巢的组织织由被膜膜、皮质质和髓质质组成。1、低倍镜镜观察：（1）被膜膜：卵巢巢表面由由特殊的的生殖上上皮被覆覆，生殖殖上皮多多为单层层立方形形细胞组组成。生生殖上皮皮下面有有一层致致密结缔缔组织形形成的白白膜。（2

16、）皮质质：位于于卵巢的的外周，占占大部分分，与髓髓质无明明显界限限，由许许多不同同发育期期的卵泡泡和少量量黄体等等组成。（3）髓质质：位于于卵巢的的中央（马马属动物物例外），由由富有弹弹性纤维维的疏松松结缔组组织构成成。内有有大量的的血管、淋淋巴管和和少量平平滑肌纤纤维。2、高倍镜镜观察：主要观观察卵巢巢皮质部部不同发发育阶段段的卵泡泡，每个个卵泡都都由位于于中央的的卵母细细胞和围围绕在卵卵母细胞胞周围的的卵泡细细胞组成成。（1）原始始卵泡：位于生生殖上皮皮层内，中中间为一一卵原细细胞，周周围由一一层扁平平卵泡细细胞所围围绕。（2）初级级卵泡：卵泡呈呈球形，卵卵原细胞胞位于卵卵泡中央央，周围围

17、包有一一层立方方或柱状状的卵泡泡细胞。卵卵原细胞胞的体积积较大，中中央有个个圆形的的泡状核核，核内内染色质质较少，着着色较浅浅，核仁仁明显。（3）次级级卵泡：其主要要变化是是卵原细细胞体积积增大，卵卵母细胞胞和颗粒粒细胞共共同分泌泌出粘多多糖，聚聚集在颗颗粒细胞胞与卵黄黄膜之间间形成透透明带。（4）三级级卵泡：出现小小的卵泡泡腔，随随着卵泡泡的生长长，许多多小腔合合并为一一个大的的卵泡腔腔；卵母母细胞被被挤向一一边，并并包裹在在一团颗颗粒细胞胞中，形形成半岛岛突出在在卵泡腔腔内，称称卵丘；在颗粒粒层外周周形成两两层卵泡泡膜；卵卵的透明明带周围围的柱状状上皮细细胞呈放放射状排排列，称称为放射射冠

18、，放放射冠细细胞有微微绒毛，并并伸入透透明带内内。（5）成熟熟卵泡：三级卵卵泡继续续生长，卵卵泡液增增多，卵卵泡腔增增大，卵卵泡扩展展到整个个皮质部部而突出出卵巢表表面。（6）黄体体：是排排卵后的的卵泡转转变成的的富于血血管的内内分泌器器官，牛牛、羊、猪猪的黄体体位于卵卵巢皮质质，突出出于卵巢巢表面，马马的黄体体则完全全埋藏在在卵巢基基质内。黄黄体由颗颗粒黄体体细胞和和泡膜黄黄体细胞胞组成，颗颗粒黄体体细胞占占多数，大大部分位位于黄体体中间，细细胞呈多多面体，着着色浅，排排列紧密密，含有有球形细细胞核；泡膜黄黄体细胞胞则小，大大部分位位于黄体体外周，包包在颗粒粒黄体细细胞外周周或位于于其之间间

19、，核占占胞体的的大部分分，核与与胞质染染色较深深。（7）闭锁锁卵泡：卵巢内内在各个个发育阶阶段逐渐渐退化的的卵泡叫叫闭锁卵卵泡，即即退化的的卵母细细胞存在在于未破破裂的卵卵泡中，可可观察到到萎缩的的卵母细细胞和膨膨胀塌陷陷的透明明带。（三）雌性性动物子子宫、输输卵管的的组织学学观察：1子宫子宫的组织织构造从从外向里里为浆膜膜、肌层层和粘膜膜。肌肉肉层的外外层薄，为为纵行的的肌纤维维；内层层厚，为为螺旋形形的环状状肌纤维维。子宫宫颈肌可可看作子子宫肌的的附着点点，同时时也是子子宫的括括约肌，其其内层特特别厚，且且有致密密的胶原原纤维和和弹性纤纤维，是是子宫颈颈皱襞的的主要构构成部分分，内外外两层

20、交交界处有有交错的的肌束和和血管网网，固有有层含有有子宫腺腺，子宫宫腺以子子宫角最最发达，子子宫体较较少，子子宫颈则则在皱襞襞之间的的深处有有腺状结结构，其其余部分分为柱状状细胞，能能分泌粘粘液。2输卵管管输卵管的管管壁组织织结构从从外向内内由浆膜膜、肌层层和粘膜膜组成，肌肌层可分分为内层层环状或或螺旋状状肌束和和外层纵纵行肌束束，其中中混有斜斜行纤维维，使整整个管壁壁能协调调的收缩缩。肌层层从卵巢巢端到子子宫端逐逐渐增厚厚，输卵卵管粘膜膜形成若若干初级级纵襞，在在壶腹部部又分出出许多次次级纵襞襞。输卵卵管上皮皮细胞有有柱状纤纤毛细胞胞和无纤纤毛细胞胞，柱状状纤毛细细胞在输输卵管的的卵巢端端，

21、特别别在伞，越越向子宫宫端越少少，这种种细胞伸伸入管腔腔。实验三 PMSSG或FFSH的的生物测测定法一、实验目目的测定PMSSG（或或FSHH）的活活性，掌掌握该激激素的简简易效价价测定方方法。二、实验原原理FSH为垂垂体促性性腺激素素，作用用于即将将达到性性成熟年年龄的雌雌性小白白鼠，可可促进卵卵巢上的的卵泡发发育，分分泌雌激激素。在在雌激素素的作用用下，又又可促进进子宫、卵卵巢及整整个生殖殖器官的的发育、增增大。PPMSGG因为也也含有FFSH，因因此具有有与FSSH相同同的生物物学作用用，也能能促进性性成熟前前的小白白鼠子宫宫发育增增大。PMSG在在机体内内的作用用期比FFSH长长，因

22、此此在测试试效价过过程中，PPMSGG可作一一次注射射，而FFSH需需经多次次注射。三、实验材材料1、实验动动物 健康康无伤残残的188-233日龄（即即将达到到性成熟熟日龄）、体体重9-13gg的同源源雌性小小白鼠。各各测试组组实验鼠鼠出生日日龄相差差不得越越过三天天，体重重相差不不得超过过2g。2、测定样样品 PMMSG（或或FSHH）、生生理盐水水。3、测定器器具 1mml注射射器、44号针头头、0.1mll微量注注射器、11ml和和2mll吸管、吸吸耳球、酒酒精棉球球、剪刀刀、镊子子、搪瓷瓷盘、解解剖板、鼠鼠罐和青青霉素瓶瓶（稀释释瓶）。四、测试方方法1、测试组组的确定定为了测得精精确

23、效价价，应先先将各测测试样品品浓度组组距加大大进行粗粗测，从从而确定定样品的的大致效效价范围围，再将将测试样样品浓度度组距减减少，以以测得样样品较为为精确的的效价，可可按下表表选择确确定测试试组。PMSGG测试组组的确定定每0.1mmlPMMSG，按按下表加加入不同同量的生生理盐水水，稀释释成不同同浓度作作为各测测试组。PMSG稀稀释浓度度换算小小白鼠单单位每mlPMMSG中中加入生生理盐水水量稀释液中PPMSGG浓度PMSG小小白鼠单单位（MMu/mml）111/1260151/1680191/20100231/24120271/28140311/32160351/36180391/4020

24、0431/44220471/48240FSH测测试组的的确定FSH是瓶瓶装粉剂剂，故在在配制不不同浓度度的测试试组之前前，需用用一定量量的生理理盐水稀稀释成溶溶液，测测出每mml溶液液中的效效价值后后，即可可换算出出该瓶装装内FSSH的效效价值。每每只鼠注注入总剂剂量需分分作五次次注射，每每天注射射两次。在在常温条条件下，稀稀释后的的FSHH容易失失活，效效价降低低。因此此在注射射期间的的FSHH溶液应应在低温温下保存存。在测测试中，每每瓶FSSH准确确取5mml生理理盐水稀稀释作为为母液，于于0-55下存放放。用FFSH母母液为小小白鼠作作五次注注射，故故每次注注射剂量量应是总总剂量的的五分

25、之之一。因因此取配配制好的的母液00.2mml加生生理盐水水0.88ml，经经一次稀稀释成工工作液，再再取0.1mll工作液液，按下下表所示示加入不不同量的的生理盐盐水，即即可配制制成不同同浓度的的测试组组。加生理盐水水（mll）溶液量（mml）溶液浓度注射鼠数（只只）母液/只鼠鼠（mll）Mu/mll1.11.51.92.32.73.13.53.94.34.71.21.62.02.42.83.23.63.64.44.81/121/161/201/241/281/361/361/401/441/4855555555551/601/801/10001/12001/14001/16001/1800

26、1/20001/22001/24006080100120140160180200200240一瓶装的FFSH经经1mll生理盐盐水稀释释成母液液，可配配制成110个测测试组，为为50只只小白鼠鼠注射。2、小白鼠鼠称重分分组各测试组小小白鼠组组内体重重的差异异不得超超过2gg，将小小白鼠分分为5组组，每组组5只，分分别编号号，其中中一组为为对照组组，注射射同样剂剂量的生生理盐水水。其余余四组为为测试不不同浓度度样品的的测试组组。3、注射将稀释好的的药剂分分别给各各组的小小白鼠腹腹部皮下下注射00.2mml，对对照组注注射生理理盐水，注注意注射射量力求求准确，不不得使药药液注射射胸腔或或腹腔或或逸

27、出体体外。4、剖检于注射药液液后722766小时，先先用颈椎椎脱臼法法或撞击击头部法法处死小小白鼠，用用图钉将将小白鼠鼠固定于于解剖板板上，用用剪刀剪剪开腹腔腔，将子子宫卵巢巢剥离取取出，观观察子宫宫增大情情况。5、效价确确定将各组子宫宫与对照照组比较较，每组组5只小小白鼠中中有3只只或3只只以上子子宫增大大一倍以以上，则则定为阳阳性反应应。根据据各测试试组中呈呈阳性反反应的最最低浓度度组效价价值，换换算出被被测样品品中PMMSG（或或FSHH）的小小白鼠单单位。假设稀释液液中PMMSG浓浓度为11/x，若若稀释后后浓度在在1/xx以上各各组均呈呈阳性反反应，则则1/xx浓度的的测试组组为呈阳

28、阳性反应应的最低低浓度。实实际注入入鼠体内内的供试试品药液液量为11/x1/55ml=1/55x mml，则则1mll供试品品药液中中含有的的生物效效价为55x小白白鼠单位位（Muu）。实验四 精液品品质常规规检查及及理化因因素的影影响一、实验目目的掌握检查精精子密度度、活率率的方法法，熟悉悉肉眼检检查精液液品质的的方法，验验证实验验观察理理化因素素对精子子运动及及生存能能力的影影响。二、实验材材料1、动物：种公羊羊、母羊羊、种公公牛、母母牛。2、药械用用品：牛牛、羊假假阴道全全套、33%和00.9%氯化钠钠溶液、浸浸润剂（111份石石蜡油+2份凡凡士林）、温温度计、镊镊子、漏漏斗、玻玻璃棒、

29、大大搪瓷盘盘、热水水、显微微镜、载载玻片、盖盖玻片、乙乙醚、纱纱布、试试管、22%煤酚酚皂液、11/10000新新洁尔灭灭、保温温箱、冰冰、酒精精、美兰兰。3、冻精颗颗粒三、实验内内容（一）精液液的肉眼眼检查 1、射精量量：将采采得的精精液倒入入有刻度度的试管管或杯中中，测其其容量。各各种家畜畜的平均均射精量量为：马马70（330-1100）毫毫升；驴驴50（220-880）毫毫升；牛牛（2-10）毫毫升；羊羊1（00.7-2）毫毫升；猪猪2500（1550-5500）毫毫升。2、观察精精液的色色泽并嗅嗅闻气味味。3、云雾状状的观察察：观察察精液的的云雾状状翻腾滚滚动。按按以下符符号记入入表内

30、，云云雾状显显著者，以以“+”表示，有有云雾状状以“+”表示；云雾状状不明显显者以“+”表示。（二）精子子密度检检查及活活率评定定1、检查精精子的密密度：取取一小滴滴精液于于清洁的的载玻片片上，加加上盖玻玻片，使使精液分分散成均均匀一薄薄层，但但不得有有气泡，也也不能使使精液外外流或溢溢于盖玻玻片上，置置显微镜镜下放大大4000-6000倍观观察，按按下列等等级评定定其密度度。密在整整个视野野中精子子密度很很大，彼彼此间空空隙很小小，看不不清各个个精子运运动的活活动情况况，这一一级属于于“密”，每毫毫升含精精子数约约在100亿以上上。中精子子之间的的空隙明明显，精精子彼此此之间距距离约有有一个

31、精精子的长长度。有有些精子子的活动动情况可可以清楚楚地看到到。这种种精液的的密度评评为“中”，每毫毫升所含含精子数数约在22-100亿之间间。稀精子子分散存存在，精精子间的的空隙超超过一个个精子长长度，这这种精液液每毫升升所含精精子在22亿以下下。2、评定精精子的活活率：必必须于采采精后立立刻在118-225实验室室中进行行，最好好在377保温箱箱内进行行，同时时也可以以测定精精子的密密度。用玻棒蘸取取一滴原原精液或或稀释的的精液（马马、猪精精液密度度低不须须稀释，牛牛、羊密密度大，需需用0.9%氯氯化钠溶溶液稀释释，其温温度相近近），滴滴在载玻玻片上，也也可滴在在载玻片片上翻放放于凹玻玻片的

32、凹凹窝上，最最后置于于显微镜镜下，放放大2550-4400倍倍检查，显显微镜载载物台须须放平。并并最好在在暗视野野中进行行。精子的活动动有三种种类型：前进运运动、旋旋转运动动和振摆摆运动，评评价精子子活率是是根据前前进运动动精子数数多少而而定。目前评定精精子活率率等级的的方法有有两种：十级制在显微微镜下估估计直线线前进运运动精子子所占百百分数，直直线前进进运动精精子为1100%者评为为1.00级；990%者者评为00.9级级，依此此类推。五级制全部精精子呈前前进运动动者属于于“5”级，绝绝大多数数精子（约约80%）呈前前进运动动者为“4”级，前前进运动动的精子子略多于于半数者者（约660%）为

33、为“3”级；不不及半数数者为“2”级，呈呈前进运运动的精精子数目目极少者者属“1”级。牛及羊的精精液中由由于副性性腺分泌泌物少，要要求“密5”即密度度为“密”，活率率为“5”级及“密4”或“中5”及“中4”一级才才能作为为输精之之用。马马与猪的的精液中中副性腺腺分泌多多，就是是“稀5”甚至“稀3”的亦可可用于输输精。（三）理化化因素对对精子的的影响1、温度的的影响取采得的的原精液液一滴滴滴在载玻玻片上，放放在显微微镜下观观察其活活率，再再放在445-550下2分分钟观察察精子活活率有何何变化。将新采得得精液立立即检查查其活率率后，随随后即移移入0-5温度下下2-33分钟，温温度回升升到377-

34、388后再检检查精子子活率，注注意降温温前后精精子活率率变化情情况。2、渗透压压的影响响：观察察原精液液的活率率后，分分别在三三滴原精精液内各各加入11%氯化化钠溶液液、3%氯化钠钠溶液和和蒸馏水水，观察察其活率率及形态态有何变变化。3、取1-2毫升升经稀释释过的精精液放入入小试管管中，经经检查活活率后，用用手上下下剧烈振振动2-3分钟钟，再观观察精子子活率有有何变化化。4、取1-2毫升升稀释过过的精液液放入小小试管中中，经检检查活率率后，在在太阳光光下照射射10分分钟，观观察精子子活率有有何变化化。5、化学药药品的影影响：取取一滴精精液于载载玻片上上，用滴滴管分别别滴入以以下药液液混合后后复

35、以盖盖玻片。2%煤酚酚皂液。1/30000新新洁尔灭灭液。75%酒酒精。分别观察其其精子活活率及形形态有何何变化。四、作业将本次实验验所测结结果分别别填入下下列表内内。理化因素对对精子活活率影响响记载表表处理前活率评分处理后活率评分3738840455降温处理前前降温处理后后加入不同浓浓度溶液液前加入1%NNacll溶液后后加入3%NNacll溶液后后加入蒸馏水水后振荡前经剧烈振动动阳光照射前前阳光照射后后加入药液前前加入2%棉棉酚皂液液加入1/110000新洁尔尔灭溶液液加入75%酒精后后43实验五 精子数数量计算算和畸形形率的测测定一、实验目目的掌握用血球球计数板板检查单单位容积积（毫升升

36、）中所所含精子子数的方方法，以以及测定定精子畸畸形率的的操作要要点。二、实验材材料1、材料：公牛、公公羊、公公马、公公猪精液液。2、器械及及用品：显微镜镜、载玻玻片、玻玻棒、00.9%Naccl溶液液、955%和775%的的酒精、染染色缸、33%盐水水、兰墨墨水、00.5%龙胆紫紫酒精溶溶液、红红、白血血球稀释释管、血血球计数数板、55ml试试管、血血吸管和和1mll吸管。3、畸形精精子形态态图。三、实验内内容血球计算盘盘构造模模式图。（一）精子子数量计计算1、精液稀稀释：用1mll吸管吸吸3%NNaCll 0.2mll或2mml，放放入小试试管中，（根根据稀释释倍数确确定）用用血吸管管吸出1

37、10或220mllNaCCl抛掉掉。用血吸管管将精液液吸至刻刻度100或200ml处处。用纱布擦擦去吸管管尖端所所附的精精液。用拇指按按住试管管口，振振荡2-3分钟钟使其均均匀混合合。2、精子的的计数：将擦洗干干净的计计数板放放于显微微镜的载载物台上上，盖上上盖玻片片。将试管中中稀释好好的精液液滴一滴滴于计数数板盖玻玻片的边边缘使精精液自动动渗进计计数室，注注意不要要使精液液溢出于于盖玻片片处，并并不可使使精液不不够而致致计数室室内有气气泡或干干燥之处处，如有有这些现现象应重重做。静置3分分钟便可可在4000-6600倍倍的显微微镜下检检查。数出计数数室的四四角及中中央共五五个大方方格即880

38、个小小方格内内的精子子数。计数每小小格内的的精子，只只数格内内及压在在左线和和上线者者。由五个大大方格（880个小小方格）所所数到的的精子数数代入下下式，即即得出每每毫升的的精子数数：1ml原精精液内的的精子数数 = x（55个大方方格内的的精子数数）5（等等于255个大方方格内的的精子数数）10（等等于1mmm3内内的精子子数）10000（等等于1mml被检检稀释精精液样品品内精子子数）被检精精液稀释释倍数为了减少误误差，必必须进行行两次计计数，如如果前后后两次误误差大于于10%，应作作第三次次检查。最最后在三三次检查查中取两两次误差差不超过过10%的，求求出平均均数，即即为所确确定的精精子

39、数。52（二）直线线运动精精子数的的计算（精精子活率率的计算算）方法基本和和精子数数量计算算法相同同，有以以下几点点不同。1、用0.9%生生理盐水水作为稀稀释剂，以以保持正正常活精精子运动动。2、显微镜镜置于保保温箱中中，保持持37-38。3、计数四四角及中中央五个个方格中中的非直直线运动动精子数数（包括括死精子子，摆动动旋转运运动的精精子），求求出每毫毫升精液液中非直直线运动动的精子子数。5、计算直直线运动动精子的的百分数数（三）测定定精子畸畸形率1、以细玻玻璃棒蘸蘸精液一一滴，滴滴于载玻玻片上一一端，如如果是牛牛羊精液液应再加加1-22滴0.9%氯氯化钠溶溶液。2、以另一一载玻片片的顶端端

40、呈355角抵于于精液滴滴上，并并向另一一端推去去，将精精液均匀匀涂抹于于载玻片片上。3、将抹片片放于空空气中干干燥。4、用下列列方法中中的任一一方法固固定染色色。用0.55%的龙龙胆紫酒酒精染色色三分钟钟，水洗洗，待干干后即可可镜检（也也可用由由普通红红蓝墨水水代替）置95%酒精中中（或55%福尔尔马林溶溶液）固固定5-6分钟钟，取出出以水冲冲洗后，凉凉干或烘烘干，用用蓝、红红墨水等等染色33-5分分钟，再再用水冲冲洗，干干燥后置置于显微微镜下检检查。5、镜检：将制好好的抹片片置于显显微镜下下，查数数不同视视野的5500个个精子，计计算出其其中所含含畸形精精子数，求求出畸形形百分率率。四、作业

41、1、列表记记载本次次实习所所得数值值。2、分析所所得数值值和一般般常数的的差异。实验六 精子顶顶体完整整率的测测定一、实验目目的1、学习精精液抹片片染色方方法。2、观察正正常精子子顶体和和异常精精子顶体体状态，计计算精子子顶体完完整率。二、实验材材料（一）精液液样品：液态精液或或解冻精精液。（二）福尔尔马林磷磷酸盐固固定液配配制1、取2.25ggNaHH2POO412HH2O和和55ggNaHH2POO42H22O于1100mml容量量并加入入0.889%NNaCll溶液约约30mml，在在30温度下下静置33-4hh使之溶溶解。2、加入经经MgCCO3饱饱和的甲甲醛溶液液8毫升升，其配配制方

42、法法是在5500mml甲醛醛中加入入8gMMgCOO3，须须在一周周前配制制好，使使PH值值由原来来3.884提高高到5.0左右右。3、加0.89%NaCCl液至至1000ml，静静置244h，PPH值为为7.00-7.2。（三）磷酸酸盐缓冲冲液配制制取2.2ggNa22HPOO412HH2O和和0.555gNNaH22PO442H22O置于于1000ml容容量瓶中中，加入入约300ml蒸蒸馏水溶溶解后用用蒸馏水水定容至至1000ml，PPH值为为7.00-7.2。（四）姬姆姆萨原液液配制称取姬姆萨萨染料11g，甘甘油666ml，甲甲醇666ml，将将研细的的姬姆萨萨染料加加入少量量温热（66

43、0）的甘甘油，在在研钵内内研磨直直至完全全无颗粒粒呈匀浆浆而止，再再将剩余余全部甘甘油倒入入置566恒温箱箱中2hh，分次次用甲醇醇清洗容容器于棕棕色瓶保保存，二二周后使使用，此此原液放放置时间间越长越越好，使使用前过过滤。（五）姬姆姆萨染液液的配制制根据每个抹抹片需染染液2mml来确确定所需需染液量量，配置置好的染染液需立立即使用用染色，放放置时间间过长会会使染色色效果减减退。姬姆萨染液液的配制制方法为为原染液液、缓冲冲液、蒸蒸馏水的的比例为为2：33：5。（六）苏木木精伊红染染液的配配制 1.苏木精精染液2.伊红染染液：00.5%伊红溶溶液（七）生物物显微镜镜（10000油镜）（八）血球球

44、计数板板（九）载玻玻片、盖盖玻片、滴滴管、红红布、染染色缸、染染色架、玻玻片镊三、实验内内容（一）抹片片将需测定精精液样品品摇匀，在在精液的的中层用用吸管吸吸取一小小滴精液液，平滴滴在载玻玻片的右右端，取取另一边边缘光滑滑平直的的载玻片片呈355角自精精液滴的的左面向向右接触触样品，样样品精液液即呈条条状分布布在两个个载玻片片接触边边缘之间间，将上上面的载载玻片贴贴着平置置的载玻玻片表面面自右向向左移动动，带着着精液滴滴均匀地地涂抹在在载玻片片上，切切忌将精精液滴“推”过去，否否则易造造成精子子的人为为损伤，制制作另一一抹片时时，须重重新换取取载玻片片，在抹抹片的右右端背面面用特种种铅笔注注明

45、标号号，每份份精液样样品须同同时制作作两个抹抹片。（二）风干干自然干燥55-200分钟后后即固定定染色，不不可久置置。（三）固定定将风干抹片片平置于于染色架架上，用用滴管吸吸取1-2mll福尔马马林磷酸酸盐缓冲冲固定液液，滴在在抹片上上，轻轻轻摇动，使使固定液液布满在在整个抹抹片表面面，静置置固定115分钟钟。（四）水洗洗用玻片镊夹夹住抹片片一端，将将固定液液弃至染染色缸内内，在蒸蒸馏水缸缸中涮洗洗，取出出立于瓷瓷盘边待待干。（五）染色色将经固定风风干后的的抹片平平置于染染色架上上，选用用下列任任意一种种染色液液进行染染色。1、用滴管管吸取新新配制的的姬姆萨萨染色液液2mll，自左左向右滴滴在涂片片上，使使染液均均匀布满满抹片上上，静置置染色990分钟钟。2、取苏木木精染液液，滴于于风干后后的抹片片上，静静置155分钟，用用蒸馏水水洗去染染色液体体，待其其自然风风干后，再再用0.5%伊伊红复染染液滴于于经苏木木精初染染的抹片片上复染染2-33分钟。（六）水洗洗用（四）的的方法水水洗除去去抹片上上的染色色体液，每每张抹片片经数次次涮洗，直直至水洗洗液无色色为止，风风干待镜镜检观察察。（七）精子子顶体的的观察将精液样品品抹片置置于10