肺气虚和肺阴虚的症状_肺气虚证和肺阴虚证蛋白芯片研究.docx

《肺气虚和肺阴虚的症状_肺气虚证和肺阴虚证蛋白芯片研究.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《肺气虚和肺阴虚的症状_肺气虚证和肺阴虚证蛋白芯片研究.docx（9页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、肺气虚和肺阴虚的症状_肺气虚证和肺阴虚证蛋白芯片研究 (1.安徽省中医院呼吸内科,安徽合肥 230031; 2.淮南市中医院呼吸内科,安徽淮南 232006; 3.北京华大吉比爱生物有限公司,北京101300) 摘 要:目的:探讨蛋白质芯片技术对肺气虚证和肺阴虚证的探讨意义以及两证的血清IL-1、IL-8、TNF-表达水平。方法:将肺气虚证和肺阴虚证患者的血清通过Array- ELISA蛋白芯片平台检测。结果:COPD肺气虚组、COPD肺阴虚组、支气管哮喘肺气虚组、支气管哮喘肺阴虚组的血清IL-1、IL-8、TNF-水平明显高于健康组水平,差异有统计学意义(P0.05)。COPD肺气虚组、CO

2、PD肺阴虚组、支气管哮喘肺气虚组、支气管哮喘肺阴虚组点的灰度值(发光信号值)明显比健康组点的灰度值高;COPD肺阴虚组和支气管哮喘肺阴虚组点的灰度值比COPD肺气虚组和支气管哮喘肺气虚组的高;COPD肺气虚组点的灰度值与支气管哮喘肺气虚组的、COPD肺阴虚组点的灰度值与支气管哮喘肺阴虚组的相近。结论:蛋白质芯片技术用于肺气虚证和肺阴虚证是可行的;肺气虚和肺阴虚证是一种慢性以肺部为主的全身炎症综合症,且肺阴虚较肺气虚有加重趋势。 关键词:肺气虚证;肺阴虚证;蛋白质芯片 中图分类号:R2-03 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2010)04-0705-03 Invastigation

3、 on Protein-microarray of Fei-Qi Deficiency Syndrome and FeiYin Deficiency Syndrome LI Zegeng1,WANG Guojun2,PENG Bo1,TONG Jiabing1, YANG Cheng1,ZHANG Nianzhi1,JI Hongyan1,ZHANG Sichun1,ZHANG Wei3 (1. Department of Respiratory Medicine, the Chinese Traditional Medicine Hospital of Anhui Province,Hefe

4、i 230031,Anhui,China; 2. Department of Respiratory Medicine, the Chinese Traditional Medicine Hospital of Huainan,Huainan 232006,Anhui,China; 3.Beijing BGI-GBI Biotech Co.Ltd.,Beijing 101300,China) FQ(5。52,X-W 收稿日期:2009-11-22 基金项目:国家自然科学基金资助项目(30572387) 作者简介:李泽庚(1962-),男,安徽桐城人,主任医师,硕士,探讨方向:中医药防治呼吸系统

5、疾病。 通讯作者:王国俊(1974-),男,安徽舒城人,主治医师,硕士,探讨方向:中医药防治呼吸系统疾病。 Abstract:Objective:Exploring the protein-microarray technology on Fei-Qi deficiency Syndrome and Fei-Yin deficiency Syndrome,and investigating the expression levels of IL-1,IL-8,TNF- in the serum.Methods:Detecting the serum of the patients of Fei

6、-Qi deficiency Syndrome and Fei-Yin deficiency Syndrome through the Array-ELISA of protein-microarray platform.Results:The expression levels of IL-1,IL-8,TNF- in the serum of Fei-Qi deficiency Syndrome and Fei-Yin deficiency Syndrome in COPD group and Fei-Qi deficiency Syndrome and Fei-Yin deficienc

7、y Syndrome in bronchial asthma group are significantly higher than the levels of the healthy group(P Key words:FeiQi deficiency syndrome;FeiYin deficiency syndrome;proteinmicroarray 近年来对于肺气虚证和肺阴虚证的探讨许多,但将蛋白质芯片技术应用于其探讨尚属少见。因此,笔者在大样本证候学调查的基础上,选择了肺气虚证和肺阴虚证蛋白质芯片探讨。为了便利于对比,笔者选择了两证中具有代表性的两种疾病慢性堵塞性肺病(COPD)

8、和支气管哮喘来进行探讨。 1 资料与方法 1.1诊断标准西医诊断标准:(1)COPD诊断标准参照:中华医学会呼吸病学分会慢性堵塞性肺疾病学组慢性堵塞性肺疾病诊治指南中华结核和呼吸杂志,2007,30(1):7-16;(2)支气管哮喘诊断标准参照:中华医学会呼吸病学分会哮喘学组支气管哮喘防治指南中华结核和呼吸杂志,2003,26(3):132-138。中医证候诊断标准:(1)肺气虚证参照中药临床探讨指导原则(中国医药科技出版社,2002:390);(2)肺阴虚证参照中华人民共和国卫生部中药新药治疗肺阴虚证的临床探讨指导原则(1995:20)。 1.2纳入标准 (1)符合西医诊断标准;(2)符合中

9、医证候诊断标准;(3)年龄在4555周岁;(4)知情同意者。 1.3解除标准 (1)并发严峻心肺功能不全者;(2)合并心血管、肾、肺、造血系统等严峻原发性疾病及精神病患者;(3)妊娠或哺乳期妇女;(4)合并有严峻呼吸衰竭、肺脑及严峻肺部感染者;(5)除肺气虚证和肺阴虚证外,有明显兼挟证者。 1.4一般资料 本探讨病例全部来自安徽省中医院呼吸科门诊和病房。选取肺气虚证患者26例,其中COPD 14例,其中男性8例,女性6例,年龄最小46岁,最大55岁,平均为(50.63.7)岁,病程49年,平均(6.82.6)年;支气管哮喘12例,其中男性7例,女性5例,年龄最小45岁,最大53岁,平均为(49

10、.13.9)岁,病程410年,平均(6.32.9)年。选取肺阴虚证患者22例,其中COPD 12例,其中男性7例,女性5例,年龄最小47岁,最大54岁,平均为(50.93.8)岁,病程39年,平均(6.12.7)年;支气管哮喘10例,其中男性6例,女性4例,年龄最小45岁,最大55岁,平均为(50.93.6)岁,病程411年,平均(6.74.1)年。COPD患者病情处于稳定期,支气管哮喘患者病情处于缓解期。并将其分为4组,分别记为COPD肺气虚组(CQ组),COPD肺阴虚组(CY组),支气管哮喘肺气虚组(ZQ组),支气管哮喘肺阴虚组(ZY组),另选择30例无心肺等基础疾患、无吸烟史,近一月无感

11、冒、咳嗽等症状的健康体检者作为健康比照组(JK组),各组性别、年龄、病程差异无统计学意义(P0.05)。 1.5探讨方法 住院患者在证候学调查后第2天早晨在病房宁静状态下采集外周静脉血5mL,门诊患者在完成证侯学调查后采集外周静脉血5mL,马上送至本院试验中心3000r/min离心10min,常规分别血清,于-80冰箱内冻存,集中待检。检测指标血清IL-1、IL-8、TNF-水平。采纳北京华大吉比爱生物有限公司的Array- ELISA蛋白芯片平台检测。主要试剂由美国Biosource公司、BECKMAN COULTER公司供应。数据和图片由AE-1000生物芯片分析仪分析。 1.6统计方法应

12、用SPSS 11.5统计软件分析,全部计量数据s表示,两组间比较用t检验,多组间比较采纳单因素方差分析(One-Way ANOVA)。P0.05)。 从Array- ELISA蛋白芯片图1可以看出,COPD肺气虚组、COPD肺阴虚组、支气管哮喘肺气虚组、支气管哮喘肺阴虚组点的灰度值(发光信号值)明显比健康组点的灰度值高;COPD肺阴虚组和支气管哮喘肺阴虚组点的灰度值比COPD肺气虚组和支气管哮喘肺气虚组的高;COPD肺气虚组点的灰度值与支气管哮喘肺气虚组的、COPD肺阴虚组点的灰度值与支气管哮喘肺阴虚组的相近。 表1各组血清IL-1 IL-8 TNF-水平 (pg/mL,xs) 3 探讨 蛋白

13、质芯片技术用于肺气虚证和肺阴虚证是可行的。首先理论上的可行性,从中西医结合的角度看,中医证本质的含义是指引起证发生发展的物质基础,这些物质确定着证发生发展的动态改变过程,是在证发生发展过程中产生的特别物质1。采纳对整个细胞甚至整个组织的全套蛋白质的蛋白组学探讨方法,对证候探讨有着重要意义2。次之技术上的可行性,蛋白质芯片技术可以把数以万计的蛋白质高密度排列在固相支持物表面,通过探针蛋白特异性的捕获样品中的靶蛋白,洗去未结合的其他蛋白质,经相应的检测系统即可对靶蛋白进行定性及定量分析。这种技术可以快速、高效、高通量的分析蛋白质组,并能鉴定出蛋白质间的相互作用,利用此技术可以将一个细胞或组织的疾病

14、和健康状态的蛋白质图谱进行比较,找出差异蛋白质,鉴定疾病过程中的标记物,也可通过对疾病发生的不同阶段蛋白质的改变进行分析,发觉疾病不同时期的蛋白质标记物,为临床诊断供应量化指标3。 本探讨结果显示,肺气虚证和肺阴虚证,无论是COPD患者,还是支气管哮喘患者患者,血清IL-1、IL-8、TNF-水平均明显高于健康比照组。而现代医学认为血清IL-1、IL-8、TNF-是人体参加炎症反应的主要细胞因子,在炎症的级联放大反应中起重要作用。多项探讨显示上述炎症细胞因子在COPD4-6和支气管哮喘7-9呈高表达。另外有探讨认为COPD和支气管哮喘不仅仅是肺部炎症,而且是一种全身性炎症10-11。由以上可知

15、肺气虚证和肺阴虚证都是一种慢性以肺部为主的全身炎症综合症。这与祖国医学强调整体观念,肺部炎症必定通过脏脏、脏腑、经络等关系影响全身的理论是一样的。炎症因子在健康人体内常低水平表达,对机体内环境稳定有着重要意义,而在病理状况下,它不仅高表达,而且表达水平与炎症程度呈正相关12。肺阴虚组血清IL-1、IL-8、TNF-水平高于肺气虚组,这说明肺阴虚证的炎症程度较肺气虚证严峻。这与祖国医学的“虚证”表现的病理机制是一样的。肺阴虚患者多“阴虚阳亢”,所以较肺气虚患者更加“阳亢”。但这样的阳气是脆弱的,是不能正常抵挡外邪的,而且“阳亢”对机体是有害的,虚热必定进一步耗气伤津。仝建峰等在探讨肾阴虚也有同样

16、结果出现13。因此阴虚相对气虚来讲,应当是病情的进一步发展。COPD肺气虚组与支气管哮喘肺气虚组、COPD肺阴虚组与支气管哮喘肺阴虚组血清IL-1、IL-8、TNF-水平差异不大,说明两证的发生,发展与疾病的种类无关。 总之,蛋白质芯片技术用于肺气虚证和肺阴虚证是可行的;肺气虚和肺阴虚证是一种慢性以肺部为主的全身炎症综合征,且肺阴虚较肺气虚有加重趋势。 参考文献 1 申维玺.论中医“证本质”的科学内涵J.中国中医基础医学杂志,2001,7(6):410. 2 刘为民.中医证候学探讨与证候蛋白质组学J.中医药学报,2003,31(3):1. 3 Lin SR,Tseng FG,Hung HM,e

17、t al. Microsized 2D protein arrays inmobilized by micro-stamps and micro-wells for disease diagnosis and drug screeningJ. Fresenius J Anal Chem,2001,371(2):202. 4 Allison J. Wojcik, Marcus D, et al.A Critical Role for ABCG1 in Macrophage Inflammation and Lung HomeostasisJ. J. Immunol, 2008, 180(3):

18、4273-4282. 5 S-L Cheng, H-C Wang, C-J Yu, et al.Increased expression of placenta growth factor in COPDJ.Thorax, 2008,63(6): 500-506. 6 Karin H. Groenewegen, Dirkje S. Postma, Wim C. J. Hop,et al.Increased Systemic Inflammation Is a Risk Factor for COPDExacerbationsJ.Chest, 2008, 133(2): 350-357. 7 T

19、acy E. Downing, Thomas A. Sporn, R. Randal Bollinger, et al.Pulmonary Histopathology in an Experimental Model of Chronic Aspiration Is Independent of AcidityJ.Experimental Biology and Medicine,2008,233(10): 1202-1212. 8 J. E. Ward, T. Harris, T. Bamford, et al.Proliferation is not increased in airwa

20、y myofibroblasts isolated from asthmaticsJ.Eur. Respir. J,2008,32(10): 362-371. 9 David Itiro Kasahara, Matthew E. Poynter, Ziryan Othman, et al.Acrolein Inhalation Suppresses Lipopolysaccharide-Induced Inflammatory Cytokine Production but Does Not Affect Acute Airways NeutrophiliaJ.J. Immunol, 2008

21、, 181(7): 736-745. 10 Robert E,Walter,MD,et al.Systemic Inflammation and COPDJ.CHEST,2008,133(1):19-25. 11 Tim J. T. Sutherland, Jan O. Cowan, Sarah Young, et al.The Association between Obesity and Asthma: Interactions between Systemic and Airway InflammationJ.Am. J. Respir. Crit. Care Med, 2008, 178(9): 469-475. 12 Thrse S. Lapperre, Luuk N. A. Willems, Wim Timens, et al. Small Airways Dysfunction and Neutrophilic Inflammation in Bronchial Biopsies and BAL in COPDJ.Chest, 2007, 131(1): 53-59. 13 仝建峰,吴晓康,孙晓红.肾阴虚患者的血清免疫球蛋白GAM及补体C3C4相关性探讨J.现代中医药, 2004, 5: 53-54.