模拟中医病因所致脾气虚、脾阳虚大鼠模型的证候比较研究 脾气虚和脾阳虚区别.docx

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1、模拟中医病因所致脾气虚、脾阳虚大鼠模型的证候比较研究 脾气虚和脾阳虚区别 摘 要：目的：以多因素复合法分别建立脾气虚证、脾阳虚证大鼠模型，对两组模型大鼠进行比较探讨以探讨脾气虚、脾阳虚的证候实质与差异。方法：动物随机分为正常组、脾气虚组和脾阳虚组，以相应造模方法进行模型复制，并以四君子汤和理中汤进行药物反证。结果：脾气虚和脾阳虚大鼠宏观证候计分高于正常组（P0.01），且以脾阳虚组为著（P0.01）；两组血清GAS均低于正常组（P0.01）；脾气虚组的血浆MTL低于正常组（P0.01），而脾阳虚组高于正常组（P0.01）；经健脾中药干预后，各项脾虚症状和体征渐渐缓解或消逝；血清GAS、血浆MT

2、L紊乱回复。结论：多因素复合法复制的脾气虚、脾阳虚证大鼠模型符合证候的生物学特征，稳定性良好，且经得起药物反证；脾气虚、脾阳虚大鼠的脾虚宏观证候呈递进关系；血浆MTL在脾气虚和脾阳虚中改变趋势不一样，可作为鉴别两证的微观指标。 关键词：多因素；脾气虚证；脾阳虚证；大鼠模型；血清GAS；血浆MTL 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2012)01-0104-04 Comparative Study on Model Rats with Spleen-qi Deficiency Syndrome and Spleen-yang Deficiency Syndr

3、ome WANG Ying, ZHENG Xiaowei, LI Xiuyue (Zhejiang Chinese Medical University,Hangzho 310053,Zhejiang,China) Abstract:Objective: By making a comparative study on rats with spleen-qi deficiency syndrome and spleen-yang deficiency syndrome, to seek the objective property of these two syndromes and thei

4、r differences. Methods: Animals were randomly divided into three groups in terms of control group, group of spleen-qi deficiency syndrome and spleen-yang deficiency syndrome. Model rats were induced by combination of multi-methods and testified with corresponding medicinals (with Sijunzi Decoction f

5、or spleen-qi deficiency syndrome and Lizhong Decoction for spleen-yang deficiency syndrome). Results: Scores of symptoms and signs in two model groups were significantly higher than those in control group (P 2.2给药试验第16天，正常组每日上午以3mL/只灌服生理盐水，日1次；脾气虚、脾阳虚大鼠每日上午以3mL/只分别灌服四君子汤和理中汤水煎剂，日1次。为便于分析统计，将进行药物干预的动

6、物组更名为脾气虚治疗组和脾阳虚治疗组。自由饮食，共14天。试验第30天，处理全部试验动物。 2.3模型宏观证候评定标准参考中药新药临床探讨指导原则2和中医试验动物模型方法学3，并结合大白鼠的生物学特征，拟定：（1）脾气虚证评定标准：体重增加缓慢或下降，同比消瘦；倦怠，懒动，扎堆；便形质软或溏；肛温无明显改变；食量削减；弓背，背毛无光泽；游泳耐力下降。（2）脾阳虚证评定标准：体重增加缓慢或下降，同比消瘦；倦怠，懒动，扎堆，神疲（眼睛无神，反应不灵敏）；肛温下降；粪便溏泻，肛门四周有污物；食量削减；弓背，背毛无光泽，沾有污物；游泳耐力明显下降。（3）评分标准：倦缩扎堆1分；弓背，背毛无光泽1分；食

7、量削减1分；体重减轻1分；便形质软1分；便形溏稀2分；肛温下降2分；游泳耐力下降1分；游泳耐力明显下降2分；久泄不止、脱肛2分。评分增加，提示症状加重。 2.4标本采集与指标检测试验动物依据试验设计分别于第15、30天分两次处理：动物于末次给药（或生理盐水）后，禁食不禁水12h，以10%水合氯醛0.3mL/100g腹腔麻醉，腹腔静脉取血，2mL血抗凝处理测血浆胃动素（MTL），3mL不做抗凝处理，用于测定血清胃泌素（GAS）。GAS、MTL用放射免疫法测定。 2.5统计学方法数据用“均数标准差（s）”表示，试验结果输入计算机，用SPSS 13.0统计软件进行处理。多组间均数比较采纳单因素方差分

8、析，组间均数两两比较采纳q检验。 3结 果 3.1模型宏观证候评定脾气虚和脾阳虚造模大鼠均逐步出现便软、甚至稀溏，成群蜷缩，倦怠懒动，毛发枯槁，反应迟钝等状况。（1）体重增加量：造模前后各组大鼠体重均有不同程度的增长，正常组大鼠体重增加快，脾气虚组和脾阳虚组体重虽有增加，但缓慢，与同阶段的正常组比较，表现为消瘦，差异均有统计学意义（P0.01）；脾气虚组和脾阳虚组之间比较，以脾阳虚组增值更小；但其差异无统计学意义（P0.05）。（2）肛温：脾气虚组、脾阳虚组的肛温低于正常组，差异均有统计学意义（P0.01）；且脾阳虚组更低于脾气虚组，两者差异亦有统计学意义（P0.01）。（3）宏观证候计分：脾

9、气虚组、脾阳虚组高于正常组，差异均有统计学意义（P0.01）；且脾阳虚组更高于脾气虚组，两者差异亦有统计学意义（P0.01），评分增加，提示症状加重，故以脾阳虚组的症状更为严峻（图13，表1）。 3.2模型大鼠GAS、MTL水平造模14天后，两组模型动物的血清GAS和血浆MTL水平紊乱。（1）血清GAS：脾气虚组和脾阳虚组低于正常组，差异均有统计学意义（P0.01）；脾气虚组和脾阳虚组之间比较，虽然脾阳虚组更低，但差异无统计学意义（P0.05）。（2）血浆MTL：脾气虚组低于正常组，差异有统计学意义（P0.01）；而脾阳虚组高于正常组，差异亦有统计学意义（P0.01）；可见，脾气虚和脾阳虚对大

10、鼠的血浆MTL影响不同（图45，表2）。 3.3补脾中药对脾虚宏观证候的影响经中药干预后，两个治疗组的各项脾虚症状和体征渐渐缓解或消逝。（1）体重增加量：两个治疗组大鼠的体重增长加快，至试验第30天，其增长值与同阶段的正常组比较，差异无统计学意义（P0.05）。（2）肛温：治疗组大鼠的肛温渐渐复原正常，至试验第30天，各组大鼠的肛温差异均无统计学意义（P0.05）。此外，两个治疗组之间的体重增加量和肛温差异亦无统计学意义（P0.05）。说明补脾中药对两组脾虚动物都有复建作用，从而亦反证了模型胜利（表3）。 3.4补脾中药对GAS、MTL的影响经中药治疗后，两个治疗组大鼠的血液GAS、MTL紊乱

11、得到改善。（1）血清GAS：两个治疗组大鼠的血清GAS水平均上升而接近于正常，差异无统计学意义（P0.05）；（2）血浆MTL：脾气虚治疗组大鼠的血浆MTL水平上升，而脾阳虚治疗组大鼠的血浆MTL水平下降，与正常组之间的差异无统计学意义（P0.05）。此外，两个治疗组之间的血清GAS、血浆MTL水平在治疗后差异亦无统计学意义（P0.05）。说明补脾中药对脾虚动物的胃肠激素紊乱有调整作用（表4）。 4讨 论 4.1脾虚模型的造模方法自1980年北京师范高校生物系报道脾虚证动物模型4以来，脾虚证动物模型研制工作取得了较大的成果，其探讨工作量居中医动物模型之首。郭氏5统计脾虚证的造模方法多达24种，

12、如苦寒泻下法、偏食法、饮食失节法、耗气破气法、利血平法等，但是大部分造模方法在选用上存在着争议。 中医证候动物模型胜利与否，与以下三方面休戚相关：造模因素，动物体征，该证主要病理与症状、体征之间的关系。困难的病因是中医临床症候的一大特点，本探讨模拟中医病因，以大黄泻下法、游泳力竭法和饥饿法三因素复合建立脾气虚大鼠模型，同时，依据“脾阳虚多因脾气虚进一步发展，产生虚寒表现6”的临床症候特点，在脾气虚造模方法的基础上，对脾阳虚造模大鼠设定低温游泳环境，这是在中医理论的指导下从本质上对证候进行诱导，并充分体现了中医致病因素的多重性。造模后，大鼠相继出现消瘦、大便溏泄、倦怠、毛发不荣、蜷缩、扎堆、肛温

13、下降等脾气虚、脾阳虚的症状与体征，符合本探讨拟定的脾气虚证、脾阳虚证评定标准，其评分结果亦反映了两者在宏观证候上的递进关系。 4.2GASGAS是由主要分布于胃窦部和十二指肠近端1/3的G细胞所分泌，具有多种生理作用，如刺激胃酸及多种消化液的分泌，促进胃肠运动，养分胃肠粘膜等。刺激GAS分泌的最强因素是食物中经过消化的蛋白质分解产物7。本试验复制的脾气虚、脾阳虚大鼠模型，其血清GAS水平低于正常，差异均有统计学意义（P0.01）；将脾气虚和脾阳虚之间进行比较，虽然以脾阳虚更低，但两者间的差异并无统计学意义（P0.05）；经相应健脾中药治疗后，原模型大鼠的血清GAS含量上调。说明血清GAS降低可

14、作为脾气虚证和脾阳虚证的微观辨证指标，但尚不能用以鉴别该二证。 脾气虚证又称为脾不健运证6，而脾阳虚证即是在脾不健运的基础上出现虚寒之象。故脾气虚、脾阳虚大鼠的血清GAS水平降低，可能是由于脾虚运化失职，食欲减退，胃内容物削减，经过消化的蛋白质分解产物也削减，使GAS的分泌量降低，血清GAS水平下降。但又因为两证在“主运化”方面的功能异样在程度上并无明显差异，所以反映在血清GAS水平上两者之间亦区分不大。 4.3MTLMTL主要由十二指肠和近端空肠黏膜隐窝内的Mo细胞及肠神经丛中的肽能神经元分泌，通过作用于平滑肌细胞的特异性受体引起平滑肌收缩，促进胃肠运动，提高胃肠道、胆道、oddis括约肌的

15、收缩力和张力。引起MTL释放的主要因素有胃腔内刺激物、胃扩张、迷走神经兴奋、蛙皮素等。国外有探讨表明，功能性消化不良患者或试验动物血浆MTL水平降低，而促胃动素药物能增加血浆MTL浓度，改善症状8-10。Simren等11探讨发觉，肠易激综合征（IBS）患者血浆MTL含量显著高于健康比照组。国内学者亦发觉脾虚患者或大鼠的血浆MTL水平紊乱，但探讨结果并不一样。徐世军12等发觉脾虚泄泻大鼠血浆MTL水平下降，而徐珊等的探讨结果则提示脾虚大鼠的血浆MTL水平上升13。本探讨发觉不同脾虚证型其血浆MTL的改变趋势不一样：脾气虚大鼠的血浆MTL水平低于正常，差异有统计学意义（P0.01）；而脾阳虚大鼠

16、的血浆MTL水平高于正常，差异亦有统计学意义（P0.01），两者改变趋势相反；经相应健脾中药治疗后，原模型大鼠的血浆MTL紊乱状况得以复健。说明检测血浆MTL水平可作为脾气虚证和脾阳虚证的微观辨证指标，其在脾气虚证中表现为下降，而在脾阳虚证中表现为上升；且血浆MTL可用以鉴别该二证。 脾气虚时，食欲减退，胃内容物削减，使MTL的释放削减，血浆MTL水平下降；脾阳虚时，虽然亦出现纳呆，进食削减等运化障碍之症，但并存畏寒肢冷，大便稀溏，甚至尿少、肢肿等虚寒之象，而这些虚寒之象则因于脾阳失于温煦及升清。由此推想，脾阳虚时，一方面，由于升清降浊不利，阳不化气、水湿内停，导致胃肠道扩张，腔内充溢未消化的

17、食物、液体、气体等，肠壁水肿、充血，张力增加，反馈性使MTL分泌增加，以促进胃肠活动和内容物的运行；另一方面，由于胃肠道内环境严峻失调及某些代谢产物的蓄积，可能抑制胃肠道平滑肌MTL受体的敏感性，从而导致血浆MTL水平的反馈性增高。因此，血浆MTL在脾气虚和脾阳虚证中的改变不一样，可作为二证的鉴别指标。 参考文献 1 多因素复合建立脾气虚证大鼠模型及以方测证探讨J.浙江中医杂志，2008，23（3）：136-138. 2 郑筱萸.中药新药临床探讨指导原则（试行）S.北京：中国科技出版社，2002：361-364. 3 郑小伟.中医试验动物模型方法学M.上海：上海中医药高校出版社，1999：63

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20、07, 79(4): 223-35. 10 Kamerling I M, VanHaarstA D, Burggraaf J, et al. Motilin Effects on the Proximal Stomach in Patients with Functional Dyspepsia and Healthy VolunteersJ. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2003, 284(5): 776-781. 11 Simren M, Bjornsson E S, Abrahamsson H. High Interdi-gestive and Postprandial Motilin Levels in Patients with Irritable Bowel SyndromeJ. Neurogastroenterol Motil 2005, 17(1): 51-57. 12 徐世军，汤朝晖，李秀亮，等.益气增液颗粒对脾虚泄泻大鼠血清胃泌素及血浆胃动素影响的探讨J.中国中西医结合消化杂志，2003，11（1）：9-11. 13 徐珊，杨青，成信法，等.乐胃饮对脾虚试验大鼠胃泌素和胃动素的影响J.中国医药学报，2004，19（1）：20-22.