培养基适用性检查及效期验证方案.docx

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1、培养基适用性检查及效期验证方案起草：日期：审核：日期：审核：日期：批准：日期：目录背景介绍附表02文件确认 目的：核对验证过程中引用或使用文件、图纸齐全。确认这些文件和图纸的位置。 测试方法：对现有的设计文件和图纸进行逐个确认，记录文件的标题、文件编号、发布日期、版本和相关的批准状态。序号文件内容存放位置是否符合备注1微生物限度检查操作规程质量部是否2是否3口是口否4口是否5是否6口是口否7口是口否可接收标准：检查结果均为是。结论：是否如果为否，记录异常情况编号：检查人/日期复核人/日期备注成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件附表03验证仪器检查 目的：对测试用仪器仪表进行检查，确认所用仪器仪表

2、均校验合格，且在校验周期内。确保检测项目的准确性。 测试方法：核对检测仪器的校验证书，查看其是否在效期内；检测仪器的相关功能，看 其是否正常。序号设备名称设备编号厂家校验证书编号是否在校验期内口是口否口是口否口是否口是口否口是口否口是否口是口否可接收标准：检查结果均为是。结论：是 口否如果为否，记录异常情况编号：检查人/日期复核人/日期成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件附表04R2A培养基（待验证）配制记录配制方 法：取本品18.2g,加IL纯化水，加热溶解，121 C高压灭菌15mino在百级环境下分装，每板2030ml。配制口期所用试剂配制总量灭菌条件实际铺 板数量有效期 至贮存条件名称批

3、号来源数量R2A琼脂 培养基北京三药科技 开发公司15min/2-8 纯化水/自制R2A琼脂 培养基北京三药科技 开发公司/纯化水/自制R2A琼脂 培养基北京三药科技 开发公司/纯化水/自制R2A琼脂 培养基北京三药科技 开发公司/纯化水/自制R2A琼脂 培养基北京三药科技 开发公司/纯化水/自制R2A琼脂 培养基北京三药科技 开发公司/纯化水/自制复核人:操作人:成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件附录05附录05TSA培养基（待验证）配制记录配制方 法：取本品44g,加1L纯化水，加热溶解，121高压灭菌15min。在百级环境下分装，每板2030ml。配制日期所用试剂配制 总量灭菌条件实际铺

4、 板数量有效期 至贮存条件名称批号来源数量TSA琼脂 培养基北京三药科技 开发公司12115min/2-8 C纯化水/自制TSA琼脂 培养基北京三药科技 开发公司/纯化水/自制TSA琼脂 培养基北京三药科技 开发公司/纯化水/自制TSA琼脂 培养基北京三药科技 开发公司/纯化水/自制TSA琼脂 培养基北京三药科技 开发公司/纯化水/自制TSA琼脂 培养基北京三药科技 开发公司/纯化水/自制复核人:操作人:成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件附表06对照培养基配制记录配制方 法：取R2A对照培养基一袋(4.6g),加300nli纯化水，加热溶解，121 高压灭菌15min。在百级环境 下分装，每板

5、20-30ml。配制日期所用试剂配制 总量灭菌条件实际铺 板数量有效期 至贮存条件名称批号来源数量R2A对照 培养基中国食品药品 检定研究院12TC15min/2-8 纯化水/自制配制方 法：取TSA对照培养基一袋(12.0g),加300ml纯化水，加热溶解，121c高压灭菌15min。在百级环境下 分装，每板2030ml。配制日期所用试剂配制 总量灭菌条件实际铺 板数量有效期 至贮存条件名称批号来源数量TSA对照 培养基中国食品药品 检定研究院12115min/2-8 纯化水/自制操作人：复核人:成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件附表07菌液接种记录（适用性检查）菌液接种量待验证TSA培养基

6、TSA对照培养基待验证R2A培养基R2A对照培养基金黄色葡萄球菌/铜绿假单胞菌白色念珠菌/枯草芽抱杆菌黑曲霉/操作人：复核人:成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件附表08附表08菌液接种记录（效期确认）TSA:菌液接种量培养基批号金黄色葡萄球 菌铜绿假单胞菌白色念珠菌枯草芽抱杆菌黑曲霉R2A：菌液接种量培养基批号铜绿假单胞菌枯草芽抱杆菌复核人:复核人:操作人:附表09培养结果观察与计数成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件TSA:菌种项目对照培 养基待验证培养基黄葡球 金色萄菌菌落形态大小应与对照 培养基上的菌落一致/4是口 否口菌落数(cfu/mi)平均值待验证：对照培养基绿单翳 铜假胞菌落形态大

7、小应与对照 培养基上的菌落一致/是口 否口是口 否口 是否是口 否口 是否 是否菌落数(cfu/M)平均值待验证：对照培养基草抱菌 枯芽杆菌落形态大小应与对照 培养基上的菌落一致/是口 否口是口 否口是口 否口7是口 否口是口 否口菌落数(cfu/nn.)平均值待验证：对照培养基色珠 白念菌菌落形态大小应与对照 培养基上的菌落一致/ 是否是口 否口 是否是口 否口是口 否口是口 否口菌落数(cfu/UIL)平均值待验证：对照培养基黑曲 霉菌落形态大小应与对照 培养基上的菌落一致/是口 否口是口 否口是口 否口是口否口是口 否口是口 否口菌落数(cfu/niD成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件平

8、均值待验证：对照培养基R2A：菌种项目对照培 养基待验证培养基绿单将 铜假晒菌落形态大小应与对照培 养基上的菌落一致/是口 否口是口 否口是口 否口是口 否口是口 否口是口 否口菌落数(cfu/Ull)平均值待验证：对照培养基枯草 芽抱 杆菌菌落形态大小应与对照培 养基上的菌落一致是口 否口是口 否口是口 否口是口 否口是口 否口 是否菌落数(cfu/mi)平均值待验证：对照培养基结论：1、待验证TSA培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值.在口/不在口().562范围内,且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致口/不一致,其效期可定为2、待验证R2A培养基上的菌落平均数与对照培

9、养基上的菌落平均数的比值在口/不在口 0.52范围内,且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致口/不一致,其效期可定为操作人：复核人：附录12异常情况(EC)记录表项目编号偏差情况描述：成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件偏差处理方案报告人/日期确认人/日期偏差处理结果执行人/日期确认人/日期偏差是否关闭口是否质量部负责人/日期成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件2 .验证目的33 .验证范围34 .合格标准35 .验证人员职责36 .参考文献37 .验证总则38 .异常情况处理59 .验证时间安排510 .验证内容511 .再验证周期712 .附件8GMIRAY成都恩普瑞生物工程有限公司培养基适

10、用性检查及效期验证方案页 码：3/19文件编码：VP-3L2015版本号：V00.背景介绍根据2015版中国药典的要求，计数用培养基应进行培养基适用性检查，本公司常用的计数培养 基有胰酪大豆陈琼脂培养基(TSA)和R2A琼脂培养基，前者主要用于洁净区微生物监测，后者主要用纯 化水微生物限度检查。1 .验证目的本方案旨在通过在预制好的培养基和标准对照培养基上接种一定量的定量菌株，对比两者长出的菌落 数，以证明培养基的适用性满足药典要求，并通过试验来确定培养基的效期。2 .验证范围TSA琼脂培养基和R2A琼脂培养基。3 .合格标准待验证培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5

11、2范围内，目菌落形态大 小应与对照培养基上的菌落一致。4 .验证人员职责部门职务职责职责及分工质量部QC负责方案及报告的撰写，负责验证的具体实施。质量部负责人负责方案及报告的审核，负贡验证实施过程的监督及 复核。5 .参考文献中国药典(2015版)6 .验证总则执行测试人员测试前需阅读本方案，然后再进行测试，最后填写测试报告，在各项测试表中 说明了各项具体验证测试的执行方法。成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件6.1. 良好测试规范在进行测试时，所有记录（含异常情况记录）和签字使用黑色笔，P& ID等TOP文件的检查 采用以下要求：使用绿色荧光笔标记检查过的部分，使用红色笔标记产生的异常情况位置

12、。不能使用可掩盖原始文字的修正液或其他修改方法。拼写错误和其他变更应参照如下方法修改，必要时，在划线处标记符号如，等，在本页 备注或空白处写明修改的具体原因。如：2011年01月01日 签字，日期本方案执行时所有不需要填写数据的表格均需要用斜划线划掉，测试报告中没有填写的地方清楚的表明“N/A”。本方案中日期的签署格式均表示为如下所示：2011年01月01日完成验证后，填写验证报告之前检查文档是否正确和完整。6.2. 如何填写测试报告（可根据具体测试项目适当调整表格）所需的文件/设备等支持测试目的测试步骤可接受标准1）本次测试是否+异常情况编号2）备注3）测试者签名/日期复核人签名/日期成都恩

13、普瑞牛.物工程布.限公司文件测试结果简单地写是或否是不充分的，应尽可能用数值表示测试情况。若满足验收标准的要求，则在“是”框中打勾，否则勾选“否”框并记录“异常情况编号”， 并在附表中详细记录异常情况。备注用于填写描述说明或其他相关信息，如有异常情况，填写异常情况报告。进行测试/检查的日期以及测试者的签名。验证过程中如供应商（第三方）参与，也需在此签名。否则填写“N/A”或“不适用”。7 .异常情况处理如果测试结果与验证标准不符，在测试表中填写异常情况编码，在异常情况记录表中记 录详情及处理措施（附表N）。异常情况编码规则：EC+验证文件附表编码+流水号，流 水号采用两位数字，从起始号位01至

14、99。每次测试可能不止一项异常情况记录，每项异 常情况都在附件异常情况跟踪表中进行登记。8 .验证时间安排预计验证时间安排：2016年11月到12月9 .验证内容9.1. 验证前确认9.1.1. 人员资质确认目的：证明参与验证的人员是符合整个确认过程的要求，熟悉验证的内容和流程。确认方法：验证开展之前，查阅培训记录，确认参与验证的工作人员均经过相关培训。 可接受标准：所有人员均己经过培训，且培训考核结果合格。确认记录：见附表01。9.1.2. 文件确认目的：确认验证所需文件规范是否适用齐全。测试方法：对现有的文件或图纸进行逐个确认。可接受标准：现有的文件齐全、格式规范、内容准确且已均被批准。确

15、认记录：见附表029.1.3. 验证仪器检查目的：证明验证过程中所使用仪器均在有效期内，保证所得数据的准确性和有效性。 确认方法：验证工作开展之前，查阅计量器具校验记录，确认验证过程中使用 的计量器具己经过第三方检定机构检定，并出具有相应的校准报告书。成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件 可接受标准：所有的仪器仪表、计量器具等均经过第三方检定机构检定，且检定合格。 确认记录：见附表03。9.1.4. 硬件设施目的：证明硬件设施（厂房设施、HVAC系统、反渗透纯化水系统、关键生产设备等） 己经验证合格。并对员工进行了培训。生产所用主要原辅料、包装材料供应厂 家均经过审计合格，计量器具经校验合格、生

16、产用物料经检验符合厂定质量标 准，相关人员经培训合格并取得上岗证，符合工艺验证前提条件。可接受标准：所有相关硬件设施已经完成确认，并取得验证合格报告书。 确认记录：见附录049.2. 验证方法9.2.1. 验证前准备所需设备：压力蒸汽灭菌器、生物安全柜、微生物过滤系统、生化培养箱等。所需物料：R2A培养基干粉、TSA培养基干粉、TSA对照培养基、R2A对照培养基、金黄色葡萄球菌标 准定量菌株、铜绿假单胞菌标准定量菌株、白色念珠菌标准定量菌株、枯草芽泡杆菌标准定量菌株、黑曲 毒标准定量菌株等。9.2.2. 验证实施10.221.按说明书的要求复溶金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、枯草芽抱

17、杆菌、 黑曲霉等五种菌种的标准菌株，复溶后的菌液含菌量约为l（）00cfu/ml。适用性检查：取新制（制备时间为一周内）的待验证培养基和对照培养基各10个， 在生物安全柜内接种，分别接种标准菌株复溶出的菌液各0.1ml （含菌量约lOOcfu）, 每种菌液接种待验证TSA培养基和TSA对照培养基各两个。其中TSA培养基需接 种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、枯草芽泡杆菌、黑曲霉五种菌株， R2A培养基需接种枯草芽胞杆菌和铜绿假单胞菌两种菌株。接种的方法按“薄膜过 滤法”执行，具体的接种量参见表1。表1：菌液接种量待验证TSA培养基TSA对照培养基待验证R2A培养基R2A对照培养基金黄

18、色葡萄球菌0.1ml0.1ml/铜绿假单胞菌0.1 ml0.1 ml0.1ml0.1 ml白色念珠菌0.1 ml0.1 ml/成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件枯草芽泡杆菌0.1 ml0.1 ml0.1ml0.1 ml黑曲霉0.1 ml0.1ml/10.2.2.3. 效期确认：分别取制备时间为1周、2周、3周、4周、5周、6周的待验证培养基, 按表2所示进行接种。表2：菌液接种量待验证TSA培养基待验证R2A培养基金黄色葡萄球菌0.1ml/铜绿假单胞菌0.1ml0.1ml白色念珠菌0.1 ml/枯草芽胞杆菌0.1ml0.1 ml黑曲霉0.1 ml/培养及计数所有的培养基，统一放入培养箱中培养，

19、培养温度30-35C,接种有金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 枯草芽胞杆菌的培养基培养时间为3天，接种有黑曲霉和白色念珠菌的培养基培养时间为5天。培养结束后，取出计数，要求待验证培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.52范围内, 且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。11.再验证周期每批干粉培养基均需验证。成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件12.附件附录()1人员确认附录02文件确认附录03验证仪器检查附录12异常情况(EC)记录表成都恩普瑞牛.物工程力限公司文件附表01人员确认目的：识别对本方案任何数据表进行签字确认的所有人员。培训记录复印件作为附件附于方案后。姓名部门/职务签名是否接受方案培训（是/否）备注是否口是否口是口否口是否口是否是否口是否口是否口是否口是口否可接收标准：”是否接受方案培训”均为是。结论：是否如果为否，记录异常情况编号：检查人/日期复核人/日期成都恩普瑞牛.物工程布.限公司文件