防腐剂合成工艺说明.docx

《防腐剂合成工艺说明.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《防腐剂合成工艺说明.docx（2页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、防腐剂合成工艺介绍主要作为食品防腐剂使用，也应用在生物材料和药物载体领域。E -PL在日本早已形成了工业化生产，而我国这方面的研究起步较晚。因 此，选育E-PL高产菌株并优化发酵工艺以提高E-PL发酵水平,对我国 实现&-PL工业化生产提供技术支撑具有重要意义。本论文以白色链 霉菌(Streptomyces albulus)FQ-23作为出发菌株，采用硫酸二乙酯 (DES)诱变结合抗性筛选，并优化诱变菌株的发酵培养基;通过利用摇 瓶补料实验才采究e-PL合成的最正确补料成分，并测定其关键酶活性;在 菌体生长阶段，利用5L发酵罐探究了最正确的pH调控工艺，同时考察了 流加不同有机氮源e-PL产量

2、之间的差异，具体研究内容如下:(1)通过 DES化学诱变并结合甘氨酸(Gly)、L-赖氨酸(L-Lys)、磺胺服(SG)抗 性筛选，得到一株诱变菌株FQF-3gPL产量为0.976g/L,与出发菌株 相比,其产量提高了 8.93%。(2)通过对有机氮源的筛选,选择玉米浆和 鱼粉作为P L发酵的混合有机氮源，利用单因素实验，确定了碳氮源的 最正确浓度。利用Central Composite中心组合设计(CCD),通过响应Y=1.370-0.006A-0.004B-0.010C+0.027D-0.006AB+0.005AC-0.004AD+0.010BC+0.009BD-0.007CD-0.083

3、A2-0.087B2-0.0 81c2-0.110D2,优化后的培养基为(g/L):葡萄糖 49.70,(NH_4)_2SO_4 9.95,玉米浆 7.79,鱼粉 12.52ZKH_2PO_4-12H_2O1.36,MgSO_4-7H_2O0.5,K_2HPO_4-3H_2O 0.8,FeSO_4-7H_2O0.03,ZnSO_4-7H_2O 0.04,此时e-PL 产量最大值为 L373g/L,比优化之前提高了 40.7%。(3)通过摇瓶补料实验，研究了补料成分不同对a-P L合成的影响同时补葡萄糖及硫酸镀与酵母粉混合液的效果最好, -PL最高产量达1.75 g/L0在此基础之上把有机氮源变

4、成鱼粉产量 有所提高旨PL最高产量为1.89 g/Lo为了改善补鱼粉在菌体浓度方 面的缺乏，采用玉米浆与鱼粉复配，结果显示，玉米浆与鱼粉的浓度比 为1:2时,e-PL最高产量为2.13 g/L,在补鱼粉的基础上提高了 13%。测定了补有机氮源后天冬氨酸激酶(ASK)及”合成酶(Pls)的活性，补 混合有机氮源和补鱼粉的AS K酶活性相当,都比补酵母粉的高;补混合有机氮源的Pls活性在补这几种有机氮源中时最高的,分别是补酵母 粉的2.7倍和补鱼粉的1.2倍，验证了补混合有机氮源的效果是最好的。(4)研究了在菌体生长阶段,当初始pH 6.8分别自然下降到6.5、6.0、5.5、5.0时，用12.5

5、%的氨水溶液维持12h,最终确定pH维持在5.0最有利于菌体的生长及-PL的累积。在此基础上,研究了当初始 pH下降到5.0时，分别用氨水维持6h、12h、18h,结果证实了 pH 5.0维持12h的效果最好旨PL最高产量为2.81g/L,最高菌体浓度为16.96g/Le基于上述pH调控下，在间歇流力嘀萄糖的同时，分别间歇流加硫酸镀与酵母粉、鱼粉、玉米浆、牛肉膏4种不同有机氮源的 混合液，流加鱼粉的产量最高，达29.30g/L,与酵母粉相比，产量提高了10%。在此基础之上，流加玉米浆和鱼粉浓度之比为1:2的混合有机氮源，此时最大产量为34.19g/L,在鱼粉的基础上,产量又提高了17%。结合pH调控策略连续流加补充全料，最终菌体浓度到达53.78g/L,最大产量为 37.58g/L