小鼠骨髓间充质干细胞.docx

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1、小鼠骨髓间充质干细胞 摘要目的：探讨探讨小鼠骨髓间充质干细胞对自然苍老小鼠T细胞的节作用影响状况。方法：通过流式细胞术探讨对比苍老小鼠和年轻小鼠T细胞培育48h后CD8+CD28+的共表达率差异，依据以上探讨结果分别对比隔离共培育组、混合共培育组和比照组之间T细胞上CD8+CD28+的共表达率差异。结果：试验一中苍老组培育48h后CD8+CD28+共表达率为（4.080.3493）%，年轻组培育48h后CD8+CD28+共表达率为（5.040.5741）%。两者相比有统计学差异（P 目前人们对骨髓间充质干细胞的生物学特性和作用的探讨逐步深化。它不仅具有强大的自我更新实力，同时它还具有成骨、成软

2、骨、成脂肪7-8、成肌9等向中胚层组织细胞分化的潜能，甚至具有向神经样细胞10-11等跨胚层分化实力。本试验拟在探讨小鼠骨髓间充质干细胞对正常苍老小鼠的T细胞的调整作用，为下一步深化探讨骨髓间充质干细胞对苍老的调整作用奠定基础。 1材料和方法 1.1试验动物：C57BL/6N小鼠12月龄15只，雌性，体重约30g。C57BL/6N小鼠68周龄5只，雌性，体重约20g。以上动物均为SPF级动物。 1.2仪器、试剂：CO2细胞培育孵箱（日本Hirasawa Works 公司）、Biofuge离心机（德国Heraeus公司）、Transwell培育皿（美国corning公司）、FACS Aria流式

3、细胞仪（美国BD公司）、RPMI1640培育基（美国Hyclone公司）、DMEM/F12培育基（美国Hyclone公司）、特级胎牛血清（美国Gibco公司）、PE-anti-mouse CD8（美国biolegend公司）、FITC-anti-mouse CD28（美国biolegend公司）、小鼠淋巴分别液（中国医学科学院生物工程探讨所）、200目细胞筛、10ml玻璃注射器。 1.3方法 1.3.1BM-MSCs细胞培育和传代：BM-MSCs购自于广州Cyagen公司，取自68周C57BL/6N雌性小鼠第六代细胞，先将BM-MSCs复苏，移入10cm培育皿中，加入含有10%胎牛血清的DME

4、M/F12培育基10ml，细胞融合70%80%后传代，取出第九代细胞计数后，分成每106一份，10份备用。 1.3.2小鼠淋巴细胞悬浮液制备：麻醉小鼠，用碘汀消毒酒精脱碘后，断颈处死小鼠左下腹部剪开皮肤进入腹腔，分别出脾脏，PBS冲洗两遍，放到200目细胞筛上用10ml玻璃注射器内芯进行研磨，研磨后用RPMI1640培育基冲洗两边，放入5ml小鼠淋巴细胞分别液中，2 500rpm、20min慢加速慢减速离心，吸取其次层白色浑浊层，加入含有15%胎牛血清的RPMI1640培育基10ml，1 500rpm、10min离心，移去上清，用15%胎牛血清的RPMI1640培育基10ml重新悬置，细胞计数

5、后备用。 1.3.3分组和处理 1.3.3.1 试验一：苍老组：五只12月龄的不同小鼠的106淋巴细胞放入培育皿加入含有15%胎牛血清的RPMI1640培育基培育；年轻组：五只68周龄的不同小鼠的106淋巴细胞放入培育皿加入含有15%胎牛血清的RPMI1640培育基培育。 1.3.3.2 试验二：隔离共培育组：BM-MSCs与淋巴细胞以1:1比例放入Transwell系统，淋巴细胞取自不同的五只小鼠，加入含有15%胎牛血清的RPMI1640培育基共培育；混合共培育组：BM-MSCs与淋巴细胞以1:1比例放入六孔板中，淋巴细胞取自不同的五只小鼠，加入含有15%胎牛血清的RPMI1640培育基共培

6、育；比照组：五只不同小鼠的106淋巴细胞放入培育皿加入含有15%胎牛血清的RPMI1640培育基培育。 1.3.4检测：以上试验组和比照组在37、5% CO2细胞培育孵箱里培育48h后，吸出淋巴细胞，离心后加入100l细胞染色缓冲液，隔离共培育组、混合共培育和比照组加入PE-anti-mouse CD8、FITC-anti-mouse CD28。4孵育40min，细胞染色缓冲液冲洗两遍，用流式细胞仪检测。 1.3.5 统计学方法：采纳SPSS 13.0统计软件，全部数据用(xs)表示，组间比较采纳独立样本t检验。P 综上所述，骨髓间充质干细胞可以使苍老T细胞变“年轻”。虽然机制还不清晰，但是在

7、抗苍老方面必将拥有广泛的探讨前景。 参考文献 1Haynes L,Eaton SM,Burns EM,et a1.Newly generated CD4 Tcells in aged animals do not exhibit age-related defects in response to antigenJ.J Exp Med,2005,201:845-851. 2Lacorazza HD,Guevara Patino JA,Weksler ME.Failure of rearranged T CR transgenes to prevent age-associated thymic

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