抗生素微生物检定标准操作规程dzxp.docx

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1、抗生素微微生物检检定标准准操作规规程1简述抗生素微微生物检检定法系系在适宜宜条件下下，通过过检测抗抗生素对对微生物物的抑制制作用，计计算抗生生素活性性（效价价）的方方法。依依试验设设计原理理不同，可可分为稀稀释法、比比浊法和和琼脂扩扩散法。后后二者被被列为抗抗生素微微生物检检定的国国际通用用方法。中中国药典典也采用用这两种种方法。抗生素微微生物检检定管碟碟测定法法系琼脂脂扩散法法，是利利用抗生生素在摊摊布特定定试验菌菌的固体体培养基基内成球球面形扩扩散，形形成含一一定浓度度抗生素素球形区区，抑制制了试验验菌的繁繁殖而呈呈现出透透明的抑抑菌圈。此此法系根根据抗生生素在一一定浓度度范围内内，对数数

2、剂量与与抑菌圈圈直径（面面积）呈呈直线关关系而设设计，通通过检测测抗生素素对微生生物的抑抑制作用用，比较较标准品品与供试试品产生生抑菌圈圈的大小小，计算算出供试试品的效效价。抗生素微微生物比比浊法是是将一定定量的抗抗生素加加至接种种有试验验菌的液液体培养养基内，混混均后，经经培养，测测量培养养基浊度度。此法法系根据据抗生素素在一定定的浓度度范围内内，其浓浓度或浓浓度的数数学转换换值与试试验菌生生长产生生的浊度度（浊度度与细菌菌群体质质量及细细菌细胞胞容积的的增加之之间存在在直接关关系）之之间存在在线性关关系而设设计，通通过测定定培养后后细菌浊浊度值的的大小，比比较标准准品与供供试品对对试验菌菌

3、生长抑抑制的程程度，计计算出供供试品的的效价。抗生素效效价以“单位（uu）”或“微克（g）”表示。抗生素管管碟测定定法2仪器与与用具2.1操操作室光线明明亮，操操作室应应分为两两部分，彼彼此分开开，其中中一部分分为一般般操作室室，一部部分为半半无菌操操作室。半半无菌操操作室应应设有紫紫外线灭灭菌灯，并并附设空空气净化化（空气气净化级级别为100级10，000级）及及空调设设备，控控制室温温在2025之间，达达到无菌菌或半无无菌状态态。操作作台应稳稳固，台台面用玻玻璃板，并并用水平平仪调节节至水平平。注意意操作，避避免室内内抗生素素污染。2.2双双碟内径约90mmm，高1617mmm硬质玻玻璃或

4、塑塑料培养养平皿，碟碟底厚薄薄均匀，水水平透明明，无色色斑气泡泡。碟底平度度检查，可可将双碟碟放在水水平台上上，下垫垫一张白白纸，碟碟内加水水23ml，再再滴加蓝蓝墨水，观观察蓝色色深浅是是否一致致。用过的双双碟经高高压灭菌菌倒出培培养基后后，置清清洗液中中浸泡过过夜，冲冲洗，沥沥干，至至15001600干热灭灭菌2小时或或高压1211蒸气灭灭菌30分钟，备备用。2.3陶陶瓦盖内径约1033mm，外外径1088mm，平平坦，吸吸水性强强，应定定期清洗洗、干燥燥或干热热灭菌。2.4钢钢管内径（6.000.1）mm，高高（10.00.1）mm；外外径（8.000.1）mm或（7.880.1）mm，

5、每每套钢管管重量差差异不超超过0.005g，内外外壁及两两端面光光洁平坦坦，管壁壁厚薄一一致。每每次使用用后应置1:10000新洁尔尔溶液内内，浸泡泡2小时以以上，灭灭菌后再再洗涤，先先用水洗洗涤，超超声波超超声30分钟或或用沾有有去污粉粉的纱布布条串擦擦内外壁壁，水冲冲洗，沥沥干，再再用蒸馏馏水冲洗洗3次后，置置带盖的的容器内内，在15001600干热灭灭菌2小时，备备用。2.5钢钢管放置置器有6孔和4孔两种种。放置置于无菌菌或半无无菌室的的操作平平台上，钢钢管下落落时应垂垂直平稳稳、位置置正确。双双碟升降降平稳。应应保持清清洁，防防止抗生生素污染染。可定定期用75%乙醇棉棉擦拭落落管筒及及

6、储管杯杯。置钢钢管的玻玻璃管应应定期干干烤灭菌菌。2.6恒恒温培养养箱以隔水水式为宜宜，温度度平稳，波波动小。设设置漂移移温度为为3537或2426，依各各品种要要求而定定，箱内内网状隔隔板上放放置带孔孔的玻璃璃板并调调整水平平。2.7灭灭菌刻度度吸管用于吸吸取菌液液及培养养基。使使用后应应立即置置5%石炭酸酸或1:10000新洁尔尔溶液中中消毒后后，再按按玻璃容容器的常常规洗涤涤法洗涤涤。洗涤涤沥干后后在吸口口处塞入入脱脂棉棉（松动动，透气气），置置适宜容容器中，在120以上干热灭菌2小时或121蒸气灭菌30分钟，烘干备用。2.8玻玻璃容器器包括定定量移液液管、刻刻度吸管管、容量量瓶等，均均

7、应符合合“常用玻玻璃量器器国家计计量检定定规程”的规定定。每次次使用前前用清洁洁液浸泡泡，水冲冲洗，并并用蒸馏馏水或去去离子说说冲洗3次，沥干干。2.9称称量瓶重量在10g以下。用用毕先用用水冲洗洗、沥干干，置清清洁液浸浸泡2小时以以上，然然后分别别用水、蒸蒸馏水或或去离子子说冲洗洗3次，置置洁净平平皿中，在120干热灭菌3小时，待冷至6070时，取出置于干燥中备用。2.100滴管用玻璃璃管拉制制，管口口光滑。使使用前在在清洁液液浸泡，分分别用水水、蒸馏馏水后去去离子水水冲洗3次，置置适宜容容器中，在120干燥3小时后备用。2.111天平分析天天平，精精密度0.11mg，经经计量检检定。2.1

8、22抑菌圈圈直径（面面积）测测量仪应符合“抑菌圈圈测量仪仪检定规规程”的规定定。2.133游标卡卡尺精度0.005mmm，长度1255mm。2.144超净工工作台有效工工作面局局部洁净度100级。用用于试验验菌的接接种传代代或菌悬悬液制备备。超净净工作台台须置洁洁净工作作室或半半无菌室室内。3试液3.1灭灭菌缓冲冲液制备缓缓冲液的的试剂应应为分析析纯，配配制后的的缓冲液液应澄明明，分装装于玻璃璃容器内内，经1211蒸气灭灭菌30分钟备备用。3.1.1磷酸酸盐缓冲冲液（ppH6.0）取磷酸酸氢二钾钾2g与磷酸酸二氢钾钾8g，加水水使成10000mll，滤过过。3.1.2磷酸酸盐缓冲冲液（ppH7

9、.0）取磷酸酸氢二钠钠（Na2HPOO412HH2O）9.339g与磷酸酸二氢钾3.55g，加水水使成10000mll，滤过过。3.1.3磷酸酸盐缓冲冲液（ppH7.8）取磷酸酸氢二钾钾5.559g与磷酸酸二氢钾钾0.441g，加水水使成10000mll，滤过过。3.1.4磷酸盐盐缓冲液液（pHH10.5）取磷酸酸氢二钾钾35g，加氢氢氧化钾钾液，加加水使成成10000mll，滤过过。4培养基基配制培培养基的的各成分分原料质质量对抑抑菌圈边边缘清晰晰度及试试验结果果影响较较大，因因此应对对原材料料进行预预试验，挑挑选适当当的品牌牌使用。制成的培培养基不不应有沉沉淀，如如产生沉沉淀，可可在配制制

10、培养基基后，于于1155加热20分钟溶溶化，趁趁热用纸纸浆减压压或适宜宜方法过过滤，调调整pHH值，分分装灭菌菌备用。中国药典典20005年版二二部附录录的抗生生素生物物检定法法中收载载了13种不同同处方的的培养基基及制备备方法。目目前，已已有市售售干燥培培养基，使使用方便便。临用用时按照照使用说说明进行行配制，但但应注意意核对培培养基的的pH，必必要时需需调节ppH，使使其符合合规定。另另外，市市售干燥燥培养基基的质量量也存在在差异，注注意选择择合适的的产品。5试验菌菌5.1菌菌种的复复苏检定用用标准菌菌种为冷冷冻干燥燥品，由由中国药药品生物物制品检检定所提提供。5.1.1取冻冻干菌种种管、

11、灭灭菌1ml毛细细滴管、双双碟、镊镊子、营营养肉汤汤培养基基、营养养琼脂斜斜面，移移入接种种室操作作台或超超净工作作台。5.1.2将冻干干菌种管管外壁用用碘酒（碘碘状）擦擦拭消毒毒，稍干干，用75%乙醇棉棉球擦净净，放在在灭菌双双碟内，待待干。点点燃酒精精灯，将将菌种管管的封口口一端在在火焰上上烧灼红红热，用用灭菌毛毛细滴管管吸取营营养肉汤汤培养基基，滴在在上述灼灼热的菌菌种管封封口端，使使其骤冷冷炸裂。5.1.3取灭灭菌镊子子，在酒酒精灯火火焰上方方，将炸炸裂的管管口打开开，放入入灭菌双双碟内，另另取1支灭菌菌毛细滴滴管，在在火焰旁旁吸取营营养肉汤汤少许，加加至菌种种管底部部，将冻冻干菌块块

12、搅动是是其溶解解，随即即吸出管管内菌液液，分别别接种至至营养琼琼脂斜面面及普通通肉汤内内，并将将毛细滴滴管及菌菌种管投投入消毒毒液内，将将已接种种的营养养琼脂斜斜面置3537培养2224小时。5.1.4取出出培养物物，仔细细观察菌菌苔形态态、有无无杂菌，涂涂片并进进行革兰兰氏染色色镜检，如如呈典型型菌落，则则转种3代即可可使用。菌菌落不典典型时，可可进行平平板分离离单菌落落。5.2菌菌种的接接种与保保存5.2.1准备备需用的的培养基基，培养养基应新新鲜制备备，如斜斜面已无无冷凝水水者，不不宜再使使用。在在标签上上注明菌菌名及接接种日期期。从冷冷藏箱中中取出菌菌种斜面面后，应应在室温温放置约约3

13、0分钟，待待温度平平衡后再再移入接接种室或或超净工工作台。5.2.2点燃燃酒精灯灯或煤气气灯等，左左手握住住菌种斜斜面，将将管口靠靠近火焰焰上方，右右手拿接接种棒后后端，将将接种环环烧红约约30秒种，随随后将接接种棒金金属部分分在火焰焰上烧灼灼，往返返通过3次。右右手用无无名指、小小指及掌掌部夹住住管塞，左左手将管管口在火火焰上旋旋转烧灼灼，右手手再轻轻轻拔开管管塞，将将接种环环伸入管管内先在在近壁的的琼脂斜斜面上靠靠一下，稍稍冷却再再移至菌菌苔上，刮刮取少量量菌苔，随随即取出出接种棒棒，并将将菌种管管口移至至火焰上上方。塞塞上管塞塞，左手手将菌种种管放下下，取营营养琼脂脂斜面1支，照照上述操

14、操作打开开管塞，将将接种环环伸入管管内至琼琼脂斜面面的底部部，由底底向上，将将接种环环轻贴斜斜面的表表面曲折折蛇形移移动，使使细菌接接种在斜斜面的表表面上。5.2.3取出出接种环环，在火火焰上方方将培养养基管盖盖上塞子子，然后后将接种种过细菌菌的接种种环在火火焰上烧烧灼灭菌菌。5.2.4将已已接种的的细菌管管置3537培养2224小时，霉霉菌管一一般置2425霉菌培培养箱内内培养7天。培培养后放放入4冷藏箱箱内保存存，一般般13个月转转种一次次。5.3菌菌悬液的的制备5.3.1枯草草芽孢杆杆菌Baccilllusssubttiliis CCMCCC（B）63 5011悬液取枯草草芽孢杆杆菌工作

15、作用菌种种营养琼琼脂斜面面培养物物，加灭灭菌水12ml将菌菌苔洗下下，制成成悬液，用用吸管将将此悬液液接种至至盛有营营养琼脂脂培养基基的扁培培养瓶内内，均匀匀摊布，在3537培养7天。取菌苔少许涂片，革兰氏染色镜检，应有芽孢85%以上，用灭菌水10ml将芽孢洗下，制成芽孢悬液，合并至灭菌大试管内，在65水浴中加热30分钟将菌体杀死，待冷后置4冷藏箱贮藏。此菌液为浓菌液。日常试验验用菌液液取上述述浓溶液液，用灭灭菌水1:3稀释至至灭菌试试管中，冷冷藏箱保保存备用用。5.3.2短小小芽孢杆杆菌Baccilllusssubttiliis CCMCCC（B）63 2022悬液取短小小芽孢杆杆菌工作作用

16、菌种种营养琼琼脂斜面面培养物物，照上上述方法法制备芽芽孢悬液液。5.3.3金黄黄色葡萄萄球菌StaaphyyloccocuusauureuusCMMCC（B）26 0033悬液取金黄黄色葡萄萄球菌工工作用菌菌种营养养琼脂斜斜面培养养物，用用接种环环取菌苔苔少许接接种至营营养琼脂脂斜面上上，在3537培养2224小时，临临用时，用用灭菌水水将菌苔苔洗下，制制成悬液液。置4冷藏箱箱保存，可可使用3天。5.3.4藤黄黄微球菌菌Miccroccocccuslluteeus CMCCC（B）28 0011悬液取藤黄黄微球菌菌工作用用菌种营营养琼脂脂斜面培培养物，用1ml培养基将菌苔洗下，用吸管移至盛有营

17、养琼脂培养基的扁培养瓶中，均匀摊布，将培养瓶倒置于培养箱中2627培养24小时取出，用吸管吸取培养基或0.9%灭菌氯化钠溶液5ml至培养瓶中，将菌苔洗下，合并菌液至灭菌大试管中备用。置4冰箱中保存，可使用12个月。5.3.5大肠肠杆菌Escchehhchiiacooli CMCCC（B）44 1033悬液取大肠肠杆菌工工作用菌菌种营养养琼脂斜斜面培养养物，照照金黄色色葡萄球球菌菌悬悬液项下下的方法法制备菌菌悬液，供供当日使使用。5.3.6肺炎炎克雷伯伯氏菌Kleebossielllappneuumonniaee CMMCC（B）46 1177悬液取肺炎炎克雷伯伯氏菌工工作用菌菌种营养养琼脂斜斜

18、面培养养物，照照金黄色色葡萄球球菌菌悬悬液项下下的方法法制备菌菌悬液，供供当日使使用。5.3.7啤酒酒酵母菌菌Saccchaarommyceesceerevvisiiae997366悬液取啤酒酒酵母菌菌的V号培养养基琼脂脂斜面培培养物，用用接种环环取菌苔苔少许接接种于号培养养基斜面面上，在在3235培养24小时，用用灭菌水水将菌苔苔洗下，放放至含有有灭菌玻玻璃珠的的试管中中，振摇摇均匀，以以当日使使用为宜宜。试验菌的的菌龄对对抑菌圈圈边缘清清晰度有有一定影影响，应应保持菌菌种新鲜鲜。对易易变异的的菌株如如藤黄微微球菌等等，宜在在制备菌菌液前进进行单菌菌落的分分离，选选择典型型菌落以以保持菌菌悬

19、液中中菌群的的一致性性，以使使所得的的抑菌圈圈边缘清清晰、整整齐。6操作法法6.1称称量6.1.1称量量前先将将标准品品从冰箱箱中取出出，使其其温度与与室温平平衡。6.1.2供试试品与标标准品的称量量应使用用用一架架天平；对于吸吸湿性较较强的抗抗生素，应应在称量量前12小时更更换天平平内干燥燥剂。6.1.3标准准品与供供试品的的称量尽尽量一次次取样称称取，不不得将已已取出的的称取物物倒回原原容器内内。标准准品的称称取量不不得少于于20mgg，取样样后立即即将盛有有样品的的称量瓶瓶或适宜宜的容器器用盖盖盖好，以以免吸水水。称样量的的计算：W= VVC PP式中W为为需称取取标准品品或供试试品的重

20、重量（mmg）；V为溶解解标准品品或供试试品制成成浓溶液液时用容容量瓶的的体积（ml）；C为标准准品或供供试品浓浓溶液的的浓度（u/ml或g/ml）；P为标准准品的纯纯度或供供试品的的估计效效价（uu/mgg或g/mg）。6.2稀稀释稀释操操作应遵遵照容量量分析的的操作规规程进行行。6.2.1用于于溶解及及稀释标标准品或或供试品品的容量量瓶和移移液管等等玻璃量量器，应应按“常用玻玻璃量器器国家计计量检定定规程”进行标标定，符符合A级的要要求。每每步稀释释，量取取量不得得少于2ml，稀稀释步骤骤一般不不超过3步。举例：量量取贮备备液（10000u/ml），进进行以下下稀释。50mll量瓶，稀稀释

21、至刻刻度第一步精精密量取取5ml（10000u/ml） 1000 uu/mll50mll量瓶，稀稀释至刻刻度第一步精精密量取取5ml（10000u/ml） 100 u/ml（H）100mml量瓶瓶，稀释释至刻度度第一步精精密量取取5ml（10000u/ml） 5 u/mml（L）6.2.2量取取供试品品溶液尽尽量使用用刻度移移液管，正正式量取取前要用用供试液液流洗233次，吸吸取供试试溶液后后，用滤滤纸将外外壁多余余液体拭拭去，从从起始刻刻度开始放放溶液。6.2.3标准准品溶液液和供试试品溶液液应使用用同一缓缓冲液（溶溶剂）稀稀释，以以避免因因pH或浓浓度不同同而影响响测定结结果。6.2.4稀

22、释时时，每次次加液至至接近量量瓶刻度度前，稍稍放置片片刻，待待瓶壁的的液体完完全流下下，再准准确补加加至刻度度。6.2.5二剂剂量（2.2）法的的标准品品溶液及及供试品品溶液高高、低浓浓度之比比为1:0.8。但所所选用的的浓度必必须在剂剂量反应应直线范范围内。6.3双双碟制备备6.3.1双碟碟的制备备应在半半无菌室室或洁净净室内进进行，并并注意避避免微生生物及抗抗生素的的污染。培培养基应应在水浴浴中或微微波炉内内融化，避避免直火火加热。6.3.2底层用灭菌菌大口20mll吸管或或其他灭灭菌分装装器，吸吸取已融融化的培培养基20mll注入双双碟内，待待凝固后后更换干干燥的陶陶瓦盖，放放置于353

23、7培养箱箱中保温温，使菌菌层易于于摊布。6.3.3菌层取出试试验用菌菌悬液，按按预试好好的加菌菌量（2.2）法标标准品溶溶液的高高浓度所所致的抑抑菌直径径在1822mmm，（3.3）法标标准品溶溶液的中中心浓度度所致的的抑菌圈圈直径在在1518mmm，用灭灭菌吸管管吸取悬悬液适量量，加入入已融化化并保温温在水浴浴中（水水浴温度度，细菌菌为4850。芽孢孢可至60）的培培养基内内，摇匀匀，作为为菌层培培养基用用。取出出加有底底层培养养基的双双碟，用用灭菌大大口5ml、10mll吸管或或其他适适宜分装装器，吸吸取菌层层培养基基5ml，加加于底层层培养基基上，使使其均匀匀摊布，用用干燥陶陶瓦盖覆覆盖

24、，放放置2030分钟，待待凝固。6.3.4放置置钢管用钢管管放置器器，将灭灭菌的钢钢管放入入贮管筒筒（杯）内内，按说说明书的的要求操操作，使使钢管平平稳地落落在培养养基上，注注意使各各钢管下下落的高高度基本本一致。如如无钢管管放置器器，可用用小眼科科镊子夹夹持钢管管，轻轻轻地放置置在培养养基上，相相应剂量量的钢管管对角均均匀放置置。钢管管放妥后后，应使使双碟静静置510分钟，钢钢管在琼琼脂上沉沉稳后，再再开始滴滴加抗生生素溶液液。6.4滴滴加抗生生素溶液液6.4.1每批批供试品品取不少少于6个双碟碟，滴加加溶液用用灭菌毛毛细滴管管或微量量加样器器（调节节加样量量约为2003000l），在在滴加

25、之之前须用用溶液洗洗23次。6.4.2滴加加标准品品及供试试品溶液液顺序，因因实验设设计方法法不用而而异。（2.2）法，在在双碟的的4个钢管管中分别别成“Z”字形滴滴加标准准品（S）及供供试品（T）高（H）、低低（L）两种种浓度的的溶液，即即滴加溶溶液的顺顺序为SHTHTLSL；（3.3）法的6个钢管管中间隔隔3个钢管管中分别别滴加标标准品及及供试品品高（H）、中中（M）、低低（L）3种浓度度溶液，并并使相同同浓度成成对角，滴滴加顺序序为SHTHSMTMSLTL。滴加溶液液至钢管管口平满满，注意意滴加溶溶液的间间隔不可可过长，否否则因钢钢管内溶溶液的扩扩散时间间不同会会影响测测定结果果。6.4

26、.3每份份滴加的的溶液为为同一单单位，但但双碟数数每次不不超过5个，如如果1份溶液液滴加双双碟数目目多，可可分次滴滴加。每每种溶液液各用1支毛细细滴管。6.4.4滴加加完毕，用用陶瓦盖盖覆盖双双碟，平平稳置于于双碟托托盘内，双双碟叠放放不可超超过3层，以以免受热热不均，影影响抑菌菌圈大小小。将双双碟托盘盘水平平平稳地移移入培养养箱中间间位置，在3537或该药品标准规定的温度下培养至所需时间。6.5抑抑菌圈测测量6.5.1将培培养好的的双碟取取出，拿拿掉陶瓦瓦盖，将将钢管倒倒入盛有有1:10000新洁尔尔灭（苯苯扎溴铵铵）溶液液或其他他消毒液液内灭菌菌，换以以玻璃盖盖；测量量抑菌圈圈前，应应检查

27、抑抑菌圈是是否圆整整，如有有破圈或或圈不圆圆整，应应舍弃该该碟，切切忌主观观挑选双双碟或抑抑菌圈，以以免造成成测定结结果的偏偏倚。6.5.2测量量抑菌圈圈可以使使用抑菌菌圈测量量仪，也也可用游游标卡尺尺；使用用的抑菌菌圈测量量仪应经经过检定定，并符符合检定定规程的的要求，操操作时应应按仪器器的操作作规程进进行：使使用游标标卡尺测测量时，眼眼睛视线线应与读读数刻度度垂直，用用卡尺的的尖端与与抑菌圈圈直径的的切点成成垂直方方向测量量。7记录与与计算7.1记记录试验记记录应包包括抗生生素药品品名称、规规格、批批号、生生产厂、检检查编号号、检查查依据、检检验日期期、温度度、相对对湿度、标标准品名名称、

28、标标准品批批号、标标准品来来源及标标准品标标示含量量、试验验菌名称称及菌悬悬液浓度度、培养养基名称称、来源源及批号号、缓冲冲液名称称及pHH、供试试品估计计效价、抑抑菌圈测测量仪型型号及编编号、标标准品与与供试品品的称量量、稀释释步骤、试试验人与与校核人人、抑菌菌圈测量量及数据据处理结结果。当当用游标标卡尺测测量抑菌菌圈直径径时，应应将测得得数据按按相应剂剂量浓度度以列表表形式记记录。用用测量仪仪测量抑抑菌圈面面积或直直径时，应应将仪器器的测量量、数据据处理、统统计分析析及计算算结果打打印后贴贴附于记记录页上上。7.2计计算7.2.1二剂剂量法（2.2法）效效价计算算公式P=loog-11T2

29、+T1S2S1 =II1000%T2+SS2T1S1式中P为为供试品品效价（相相当于标标示量或或估计效效价的百百分数）；S2为标标准品高高浓度溶溶液所致致抑菌圈圈直径（或或面积）的的总和； S1为为标准品品低浓度度溶液所所致抑菌菌圈直径径（或面面积）的的总和；T2为标标准品高高浓度溶溶液所致致抑菌圈圈直径（或或面积）的的总和；T1为标标准品低低浓度溶溶液所致致抑菌圈圈直径（或或面积）的的总和；I为高、低低剂量之之比的对对数值，2:1时，I=0.3011。4:1时，I=0.6022。举例乳糖糖酸红霉霉素效价价测定结结果计算算（见表表1）表1 抑抑菌圈面面积测量量结果抑菌圈面面积碟数 SS1 SS

30、2 T2 T111 15571 112766 115811 1126882 14481 111999 115233 1117333 15523 113022 114977 1126334 15518 112144 115333 1122665 15573 112377 115433 1126886 15546 112199 115800 1122447 14495 112600 115266 1124008 15530 112377 115488 1126339 16605 112566 115933 11293310 116499 12772 16008 13220 1554911 1124

31、772 1155332 1125228估计效价价（AT）=6003u/mg剂距（II）=0.3011P=loog-11155532+125528-154491-1244720.33011000%=1101.1%154991+1155332-1124772-1125228效价（PPT）=PAT=6003u/mg1011.1%=6009.88u/mmg7.2.2 三三剂量法法计算公公式P=loog-110.112922（T3+T2+T1S3S2S1）1000% S3+T3S1T1式中S33为标准准品高浓浓度所致致抑菌圈圈直径（或或面积）的的总和； S2为为标准品品中间浓浓度所致致抑菌圈圈直径（或或

32、面积）的的总和；S1为标标准品低低浓度所所致抑菌菌圈直径径（或面面积）的的总和； T3为为供试品品高浓度度所致抑抑菌圈直直径（或或面积）的的总和； T2为为标准品品中间浓浓度所致致抑菌圈圈直径（或或面积）的的总和；T1为标标准品低低浓度所所致抑菌菌圈直径径（或面面积）的的总和；I为高、低低浓度剂剂量之比比的对数数值，1:08时，I=0.09669。举例新霉霉素效价价测定结结果计算算（见表表2）。表2 抑抑菌圈直直径测量量结果抑菌圈直直径碟数S11S2 SS3 TT1 T2 T331 16.05 16.20 16.50 15.80 16.35 16.602 16.20 16.45 16.65 1

33、6.20 16.45 16.703 16.00 16.45 16.70 16.05 16.35 16.704 15.95 16.35 16.60 16.00 16.25 16.605 15.70 16.25 16.60 15.85 16.25 16.606 15.55 16.20 16.55 15.70 16.20 16.607 15.65 16.20 16.40 15.80 16.15 16.408 15.90 16.10 16.45 15.80 16.10 16.509 15.60 16.00 16.30 15.70 15.95 16.30 1142.60 1146.20 1148.75

34、1142.90 1146.05 1149.00估计效价价（AT）=6770u/mg剂距（II）=0.09669P=loog-110.11292（1422.9+1466.055+1449.000-1142.6-1146.2-1148.751000%148.75+1499.000-1442.66-1442.99P=1001.11%效价（PPT）=PAT=1001.11%6700u/mmg =6766.7uu/mgg8结果判判定8.1可可靠性测测验管碟法法系根据据量反应应平行线线原理而而设计，并并要求在在试验所所用的剂剂量（浓浓度）范范围内，对对数剂量量（浓度度）与反反应呈直直线关系系。可靠靠性测验

35、验即通过过对剂间间变异的的分析，以以测验标标准品和和供试品品的对数数剂量与与反应的的关系是是否显著著偏离平平行直线线。（2.2）法的的剂间变变异分析析为试品品间、回回归和偏偏离平行行三项；（3.3）法还还需再分分析二次次曲线和和反向二二次曲线线，如用用游标卡卡尺测量量抑菌圈圈直径，可可用（2.2）法和和（3.3）法的的专用数数据处理理软件对对测量数数据进行行统计学学处理和和结果计计算。用用抑菌圈圈测量仪仪测量抑抑菌圈时时，测量量与统计计学处理理一次完完成，统统计学分分析按药药典附录录的生物物检定统统计法进进行F的显著著性测验验。（2.2）法要要求直线线回归和和剂间要要非常显显著（P0.005）

36、；（3.3）法除除（2.2）法的的上述规规定外，尚尚需考察察二次曲曲线和反反向二次次曲线，且且二者均均应不显显著（P0.005），符符合以上上各项规规定后，才才能认为为试验结结果可靠靠，方可可进行效效价和可可信限率率计算。8.2可可信限率率考核试试验的精精密度。除除药典各各论另有有规定外外，管碟碟法的可可信限率率不得超超过5%。上述各项项都能符符合者，试试验结果果成立。8.3试试验计算算所得效效价低于于估计效效价的90%或高于于估计效效价的1100%，则检检验结果果仅作为为初试，应应调整供供试品估估计效价价，予以以重试。8.4原原料药效效价测定定一般需需做双份份样品平平行试验验，以使使核对。对

37、对于检验验结果不不符合规规定的样样品，应应有可靠靠性测验验及可信信限率均均符合规规定，且且测定结结果在估估计效价价（原料料药）或或标示量量（制剂剂）10%范围内内的至少少2个效价价测定结结果，必必要时应应请其他他检验人人员复核核，才能能发出检检验报告告。8.5效效价测定定结果的的有效数数字按药药典规定定及数字字的原则则取舍。9操作要要点9.1抗抗生素原原料药不含辅辅料的药药物制剂剂原料，一一般其效效价以纯纯度（uu/mgg或g/mg）表表示。检检验时，可可参考该该品种的的药品标标准纯度度限度规规定或厂厂方提供供的纯度度估计效效价，取取样试验验，如估估计效价价与实际际效价相相差较远远时，即即测定

38、所所得效价价超出估估计效价价的10%时，则则重新估估计效价价，再做做准确测测定。原料药一一般皆以以干燥品品或无水水物折算算效价，须须先测其其含水或或未折干干效价，再再根据供供试品的的水分或或干燥失失重测定定结果折折算成无无水物或或干燥品品的效价价。干燥品或或无水物物效价（u/mg）= 湿品（或未折干品）效价（u/mg） 11-供试品品干燥失失重或水水分%9.2抗抗生素制制剂9.2.1粉针针剂指注射射用无菌菌粉末或或冻干品品，用西西林瓶橡橡胶塞铝铝盖封装装或熔封封在安瓿瓿内，一一般测定定其纯度度（u/mg或或g/mg）或或整瓶效效价。取装量差差异项下下的内容容物，称称取适量量（50mgg以上，根

39、根据标示示量及平平均装量量折算估估计效价价，并按按估计效效价及量量瓶体积积计算取取样量），置置量瓶中中，加标标准中规规定的溶溶剂溶解解，稀释释，测定定，计算算出1mg的效效价单位位数，再再根据平平均装量量及标示示量计算算平均每每瓶的百百分含量量。9.2.2水针针剂（注注射液）即抗生生素的灭灭菌水溶溶液，标标示量一一般按每每毫升含含效价单单位计。效效价测定定时，量量取平均均装量项项下的内内容物或或510支的内内容物，混混匀，用用干燥的的刻度吸吸管吸取取一定量量的供试试品，将将吸管外外壁用滤滤纸拭净净，再弃弃去多余余的溶液液，使供供试品至至吸管刻刻度，沿沿量瓶颈颈部内壁壁缓缓流流放入已已盛有一一定

40、量溶溶剂（以以免抗生生素结晶晶析出）的的量瓶内内，混匀匀，继续续加溶剂剂至刻度度，摇匀匀，再量量取适量量稀释至至规定的的浓度。9.2.3片剂包括素素片、薄薄膜衣片片、糖衣衣片及肠肠溶片。素片、薄薄膜衣片称取20片的总总量，求求出平均均片重，研研细混匀匀后，精精密称取取适量（约约相当于于1片的重重量或根根据标示示量按平平均片重重及所用用量瓶体体积折算算取样量量），置置量瓶中中，用标标准中规规定的溶溶剂溶解解，并稀稀释至刻刻度，摇摇匀。再再量取适适量稀释释至规定定浓度。注意点：研磨时时应注意意环境干干燥，可可在干燥燥操作柜柜内操作作，研磨磨要迅速速，避免免吸湿，因因片剂内内含辅料料较多，辅辅料可能

41、能漂浮于于溶液表表面，稀稀释时量量取供试试溶液应应读取辅辅料下层层的溶液液切面；如沉淀淀较多，须须待其下下沉后再再量取上上层液；有些辅辅料吸附附抗生素素，应加加以注意意。为节节约供试试品，可可与重量量差异检检查结果果进行。糖衣片、肠肠溶片取标准准中规定定的片数数，置于于乳钵中中，研细细，分次次加入规规定的溶溶剂，研研磨使其其溶解，将将研磨液液转移至至瓶口放放有小漏漏斗的量量瓶中，量量瓶体积积根据供供试品标标示量、所所取片数数及抗生生素储备备液浓度度（一般般为10000单位/mml）选选定，用用规定溶溶剂稀释释至刻度度，摇匀匀，静置置，使辅辅料下沉沉而抗生生素已溶溶解在溶溶液内，精精密吸取取量瓶

42、中中的上层层液适量量，作进进一步稀稀释。个个别品种种标准如如同时收收载了糖糖衣片和和薄膜衣衣片，可可能规定定薄膜衣衣片也取取整片制制备供试试品溶液液。9.2.4胶囊囊剂取装量量差异项项下的内内容物，混混合均匀匀，研细细，根据据平均装装量，精精密称取取约相当当于1粒胶囊囊的量或或按标示示量、量量瓶体积积及抗生生素储备备液浓度度等计算算的取样样量，置置于量瓶瓶中，加加规定的的溶剂溶溶解并稀稀释至刻刻度，摇摇匀，如如供试品品含有较较多的辅辅料，则则照片剂剂项下的的方法进进行。9.2.5颗粒粒剂、干干混悬剂剂取装量量差异项项下的内内容物，混混匀，根根据平均均装量，精精密称取取约相当当于1袋（包包）的量

43、量或按标标示量、量量瓶体积积及抗生生素储备备液浓度度等计算算的取样样量，置置于量瓶瓶中，加加规定的的溶剂溶溶解并稀稀释至刻刻度，摇摇匀。量量取适量量稀释制制成供试试品溶液液。测得得效价后后，再根根据装量量差异项项下的平平均装量量，计算算出平均均每袋（包包）的效效价，根根据标示示量即可可算出含含量。9.2.6软膏膏剂、眼眼膏剂擦净软软膏剂或或眼膏剂剂软管的的外壁，切切开封口口，置于于干燥器器内约1小时，取取干燥的的洁净分分液漏斗斗，带手手套操作作，将膏膏剂软管管连同内内容物在在天平上上称重，取取出，将将内容物物挤入分分液漏斗斗，量约约2g，再称称取膏剂剂软管的的重量，按按减重法法以前后后称量之之

44、差计算算分液漏漏斗内膏膏剂供试试品的量量，以不不号过氧氧化物的的乙醚或或石油醚醚等作溶溶剂溶解解基质，但但基质中中抗生素素则应不不溶于或或几乎不不溶于该该有机溶溶剂中，以以避免提提取过程程中抗生生素的损损失。按按标准中中的规定定加提取取溶剂至至分液漏漏斗中，振振摇，使使基质溶溶解，用用规定的的缓冲溶溶液提取取抗生素素至说相相中，用用缓冲溶溶液提取取3次，合合并3次的提提取液，置置量瓶中中，加缓缓冲溶液液至刻度度，摇匀匀，量取取适量稀稀释至规规定的浓浓度，滴滴加双碟碟，培养养，测量量抑菌圈圈，数据据处理，可可靠性测测验及可可信限率率判断，计计算效价价。抗生素微微生物比比浊法10仪器器与用具具10.11操作室要求同同管低法法10.22分光光光度计应有数数字显示示功能和和自动记记录装置置，数显显精度应应在小数数点后三三位。10.33玻璃大大试管 220.55mm2.55mm或适适宜的试试管，