临床微生物学检验技术 (31).pdf

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1、临床标本的病原菌检验-血液标本一二血培养的操作规范血培养的结果分级报告一血培养的操作规范血培养的意义 目前我国社会老龄化日趋严重，慢性病及恶性肿瘤、器官移植不断增多，爱滋病和结核病病人也居高不下，侵袭性诊疗技术广泛应用，败血症发病率不断增加，败血症病死率30%以上。早期病原学诊断和合理用药，明显降低病死率。血液培养的采血指征 体温38或10109/L，特别有“核左移”时）或减少（20次/分或动脉血二氧化碳分压90次/分；血液培养的采血指征 皮肤粘膜出血；昏迷；多器官功能衰竭；血压降低；血液培养的采血指征 炎症反应参数升高，如C反应蛋白、降钙素原PCT、1-3-D葡聚糖G试验的结果升高；严重的局

2、部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染等)。血培养瓶 自动化血液培养仪器配套血培养瓶，一般包括成人需氧瓶、儿童需氧瓶、厌氧瓶、真菌瓶、分枝杆菌瓶。一般包括标准瓶和中和抗生素瓶（含树脂或碳颗粒等物质），目前普遍选取中和抗生素瓶。血培养瓶CHCHCH2CH2CHCH2CHCH2CH2CHCH2CHCHCH2CH2CHCH2SO3-H+SO3-H+阳离子交换树脂阳离子交换树脂多价吸附树脂多价吸附树脂 树脂包含有非离子树脂和阳离子交换树脂。中和患者血液中可能存在的各种抗菌药物和其它潜在抑制细菌生长的物质。溶解血细胞，释放被吞噬的细菌，使其更为快速生长。血培养瓶，中和抗生素-树脂颗粒血培

3、养瓶 需氧瓶可用于常见需氧菌、兼性厌氧菌、常见真菌培养，厌氧瓶可用于专性厌氧菌、兼性厌氧菌培养，真菌瓶可用于真菌培养，分枝杆菌瓶可用于结核杆菌等分枝杆菌培养。血培养瓶 各部位穿刺液标本也可用血培养瓶，需氧瓶和厌氧瓶床旁接种，提高阳性率并避免运送等污染。泌尿系厌氧菌培养，也可尝试留取中段尿，床旁接种入厌氧瓶。血培养瓶 血培养瓶中最常用的抗凝剂是聚茴香脑磺酸钠（SPS），可能抑制奈瑟菌、厌氧消化链球菌等生长，可能因缺乏X和V因子影响嗜血杆菌属生长。故怀疑穿刺液中上述菌感染时，除接种血培养瓶，还应增加穿刺液标本直接送检涂片及培养。血培养瓶 脑脊液量少可用儿童瓶，提高阳性率并避免运送等污染，但需同时送

4、脑脊液进行涂片及培养。尤其怀疑脑膜炎奈瑟菌和流感嗜血杆菌应直接送检接种相应选择性培养基为宜，怀疑新型隐球菌等真菌感染接种沙保培养基为宜。新型隐球菌在血培养瓶中生长较慢。血液标本采集时间 建议病人寒战或发热初起时采集；抗菌药物应用之前采集最佳；最好根据病人发热情况，24h内采集23次标本。血液标本采集次数及套数成人血流感染，至少采集1次，保证“双套双瓶”。成人最佳方案：每天“23次”（不同时间），每次“23套”（不同穿刺点），每套“2瓶”（需氧瓶和厌氧瓶）。一般25天内无需重复采集。血液标本采集次数及套数儿童通常仅采集需氧瓶。有以下高危险因素时考虑厌氧瓶培养：其母产褥期患腹膜炎，或慢性口腔炎或鼻

5、窦炎、蜂窝组织炎、有腹腔感染的症状和体征、咬伤、接受类固醇治疗的粒细胞缺乏患儿。考虑肺炎链球菌菌血症时，宜同时做脑脊液培养。血液标本采集次数及套数国内外指南均要求成人血培养至少“双套双瓶”。虽然临床专性厌氧菌感染率非常低（5%），但国内外大量研究表明，使用需氧瓶和厌氧瓶组合，增加厌氧瓶，不仅可培养出专性厌氧菌，还可培养出更多的兼性厌氧菌，如葡萄球菌、肠杆菌科等。增加厌氧瓶使血培养阳性率增加约20%。采血量成人每瓶一般310ml，最好810ml；儿童瓶一般13ml；或按照说明书采集。若采血量充足，注射器采集的血液先注入厌氧瓶，后注入需氧瓶。蝶形针采集的血液反之。若采血量不足，优先注入需氧瓶。采血

6、前先在培养瓶标签纸左侧空白处（箭头所指处）填写抽血时间和病人科别、床号和姓名；不要在培养瓶条形码上涂写，以免影响扫描。条码分生成条码和预制条码，各有优缺点。采血前，将血培养瓶塑料瓶盖去除，切勿打开金属封口环和胶塞。胶塞表面用75%乙醇或70%异丙醇消毒，自然干燥60s。注射器采血后，注射器针头刺穿胶塞将血注入培养瓶内。立即轻轻颠倒混匀，防止血液凝固。胶塞裸露送检即可，无需盖盖子、缠胶布等操作。穿刺点皮肤消毒（三步法）75%乙醇擦拭静脉穿刺部位，待干30s以上；1%2%碘酊作用30s或1%碘伏作用60s，从穿刺点向外画圈消毒，消毒区域直径达3cm以上；75%乙醇檫拭碘酊或碘伏消毒过的区域进行脱碘

7、。穿刺点皮肤消毒（三步法）75%乙醇擦拭静脉穿刺部位，待干30s以上；对碘过敏的患者，在第一步基础上，再用75%乙醇消毒60s，待酒精挥发干燥后采血。穿刺点皮肤消毒（一步法）0.5%葡萄糖酸洗必泰作用30s（不适用于2个月以内的新生儿）；或70%异丙醇消毒后自然干燥（适用于2个月以内的新生儿）。注意穿刺点消毒后不可再碰触。穿刺点皮肤消毒（一步法）肝素、柠檬酸盐和乙二胺四乙酸（EDTA）对于微生物是有毒的，故含有上述抗凝剂的采血管中的血液，不能直接注射入血培养瓶中。血培养瓶保存提前领取血培养瓶，按说明书要求的温度保存，一般225保存。如放冰箱保存，则采血前血培养瓶需在室温半小时以上，平衡至室温后

8、使用；如血培养瓶室温保存，则需保证房间温度合适，尤其夏天房间需开空调保证温度合适。血培养瓶送检血培养瓶应在2h内送到检验科，并立即放入血液培养仪，自动培养并实时检测。应采用密封的塑料袋和硬质防漏的容器运送标本，符合生物安全防护要求。血培养瓶送检如不能及时运送，则室温（约20）保存，不要放冰箱，以免怕冷的细菌冻死。也不要放35孵箱中，以免细菌生长过多，可能上机后生长曲线异常，导致假阴性。血培养，最好利用自动血培养仪。采集静脉血，穿刺接种入血培养瓶（双套双瓶），2h内送到检验科，接收标本后尽快放入仪器，自动培养及实时检测，结果准确快速。血培养为急诊项目自动血培养仪国际大品牌BD公司和梅里埃公司即便

9、严格遵守无菌操作，仍有至少3%5%血培养瓶，培养出皮肤常见菌（表皮葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌、梭菌、类白喉棒状杆菌），或周围环境中常见菌（不动杆菌属、芽孢杆菌属）。血培养污染血培养污染这些菌大部分为污染菌，但不同部位血培养标本培养出同一种菌、或多次分离出同一种菌且药敏结果相同，则可能为致病菌。成人血培养“双套双瓶”有助于判断污染菌或致病菌。二血培养的结果分级报告血培养阳性报告程序一级报告（初步报告，第1天）血培养阳性，应立即进行涂片和革兰染色，尽量在1h内报告给临床医师，内容包括：患者姓名、阳性血培养瓶类型、瓶数、报警时间、涂片革兰染色特性及形态。血培养阳性报告程序 一级报告（初步报告，第1天）涂

10、片结果要求按检验危急值报告程序进行，立即接种血平板等平板，也可以基于涂片结果用阳性血培养液进行直接药敏试验，检验科夜班值班人员也应具备该岗位能力。血培养阳性标本涂片取洁净玻片，在磨砂端，用铅笔，标记标本号。将阳性血培养瓶，上下颠倒数次，混匀后，酒精灯灼烧瓶口灭菌后，用一次性灭菌注射器，抽取瓶内血液，滴数滴血液于玻片上，用针头将血液涂开，涂片应使血膜平整、厚薄适宜。血培养阳性标本涂片 将使用后的注射器针头弃于锐器盒中，千万不要回套针帽，以避免针刺伤。待涂片自然干燥后，在酒精灯火焰外焰处通过三次，固定。建议用烘片机，干燥及固定，快速安全。烘片机，放生物安全柜内，涂片后干燥及固定阳性报警血液涂片阳性

11、报警血液涂片阳性报警血液涂片阳性报警血液涂片阳性报警血液涂片阳性报警血液涂片血培养阳性报告程序 二级报告（补充报告，第2天）如有微生物质谱（MALDI-TOF MS），第2天可对血平板上生长的菌落，进行快速准确鉴定并发报告。如第1天已进行直接药敏试验，应报告药敏结果，但部分药敏结果可能不准确。血培养阳性报告程序 三级报告（终报告，第3天）包括菌种名称、血培养阳性时间（以小时计算）、标准药敏试验结果。药敏试验最好利用全自动细菌鉴定及药敏仪，进行MIC药敏试验，比K-B纸片法的结果更加快速准确，MIC值有利于临床合理使用抗菌药物。阴性结果报告 报告内容“血培养经XX天培养阴性”。自动化仪器细菌培养一般设定周期为5d，真菌14d，分枝杆菌42d。感谢您的聆听！