兽医药理学实验.ppt

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1、兽医药理学实验兽医药理学实验 本课程实验内容n n实验一实验一 药理实验基础知识药理实验基础知识n n实验二实验二 药物的剂量与剂型对药物效应的影响药物的剂量与剂型对药物效应的影响n n实验三实验三 毛果芸香碱与阿托品对瞳孔及对光反射的影响毛果芸香碱与阿托品对瞳孔及对光反射的影响n n实验四实验四 药物急性半数致死量的测定药物急性半数致死量的测定n n实验五实验五 肝脏损伤对药物作用的影响肝脏损伤对药物作用的影响n n实验六实验六 药物敏感性实验药物敏感性实验n n实验七实验七 磺胺类药物内服给药后的血中药物浓度测定磺胺类药物内服给药后的血中药物浓度测定n n实验八实验八药物对家兔的利尿作用的

2、影响药物对家兔的利尿作用的影响n n实验九实验九 有机磷酸酯类中毒及解救有机磷酸酯类中毒及解救实验一实验一 药理实验基础知识药理实验基础知识目的掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；更好地掌握药理学基本理论知识；培养科学思维基本要求 实验前：预习实验内容并复习相关理论知识；实验时 实验器材要妥善保管；实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录；注意节约实验药品；维持良好的课堂纪律。实验后各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室；值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所；书写实验报告。实验报告的书写 题目 目的 原理 材料：实验动物，器材，药品 方法：用自

3、己的语言简单扼要描述出来；结果：要求真实、清楚；讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。实验设计基本原则随机原则使每一实验对象都有同等的机会抽到实验组或对照组中，除处理因素外其他因素尽可能均衡一致，从而抵消非实验因素的影响。对照原则组间对照：阴性对照，阳性对照，同因素不同水平对照；自身前后对照重复原则实验动物动物的选择 小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利

4、胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。实验动物动物的选择 豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感，常用于抗结核病药的实验。家兔：常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查。狗：狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。动物捉拿及固定方法小白鼠 右手提起鼠尾,左手拇指和食指捏住双耳及头部皮肤，无名指、小指和掌心夹其背部皮肤及尾部,便可将小鼠完全固定。如图

5、1。单手捉持，用拇指和食指抓住小鼠尾巴，用小指、无名指和手掌压住尾根部，再用腾出的拇指、食指及中指抓住鼠双耳及头部皮肤而固定。如图2。图2图1动物捉拿及固定方法豚鼠 豚鼠性情温和不咬人，用手握住躯干即可。家兔 可用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作时，可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定。动物的给药方法小白鼠灌灌胃胃法法（i.g.i.g.）：以左手固定小鼠后，使其腹部朝上，颈部伸直。右手持配有灌胃针头的注射器，自口角插入口腔，再从舌面沿上腭进入食道。小鼠灌胃容量一般为10g。动物的给药方法小白鼠 腹腹腔腔注注射射(i.p.

6、)(i.p.)：以左手固定小鼠，方法同灌胃，右手持注射器，取30度角将针头从下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜过高，刺入不宜太深，以免伤及内脏。小鼠腹腔注射量一般为l0g。肌肌肉肉注注射射（i.m.i.m.）：小鼠因肌肉较少，很少采用肌肉注射，若有需要可注射于股部肌肉，多选后腿上部外侧，一处注射量不超过0.1mL。动物的给药方法小白鼠 皮皮下下注注射射(s.c.)(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可。静静脉脉注注射射(i.v.)(i.v.)：将小鼠置于特制的固定筒内或倒置的大漏斗下，让其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或将鼠尾在50C热水中浸泡半分钟使

7、血管扩张。左手拉尾端，右手持注射器将针头刺入尾静脉，推入药液。动物的给药方法家兔 灌灌胃胃：需两人合作进行。一人取坐位用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌头并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔插入食道。插管时如误入气管会出现动物的挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中，如有气泡吹出，表示插在气管内，此时应拔管重插。当判明导尿管在食道以内后，用注射器接通导尿管将药液推入。动物的给药方法家兔 皮皮下下、肌肌肉肉、腹腹腔腔注注射射：给药方法基本上同小鼠，唯针头可稍大，给药量可稍多。皮下与肌内为，腹腔为 静静脉脉注注射射：将家兔置固定箱内，拨去耳

8、壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉（兔耳外缘的血管为静脉，中央的血管为动脉，如图），用酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指垫在兔耳注射处的下面，右手持注射器，将针头从近耳尖处刺入，当确认针头在血管中后，将药液推入。实验二实验二 药物的剂量与剂型对药物效应的影响药物的剂量与剂型对药物效应的影响 实验目的观察不同剂型与剂量对药物效应的影响。实验材料 l.0ml注射器、针头、小鼠灌胃针头、烧杯、普通天平、3.5硫酸镁溶液（注射液和口服溶液）观察指标 动物活动增加情况、呼吸急促、反射亢进、震颤、惊厥及死亡时间、炭末推进率等。实验方法 取禁食12h的昆明种小鼠3只，称重

9、，分别标为对照组、灌胃组和腹腔注射组按以下给药：A：对照组：灌胃给生理盐水0.2ml/10g；B：灌胃组：灌胃给3.5硫酸镁溶液0.2ml/10g；C：腹腔注射组：腹腔注射给3.5硫酸镁溶液0.2ml/10g。给药后注意观察动物的活动情况，是否有肌肉松弛的表现。15min后每只小鼠均灌胃给予5%炭末阿拉伯胶混悬液0.2ml。炭末灌胃后15min，将小鼠脱臼处死，剖开腹腔，取出胃肠道。剪去附着在肠管上的肠系膜,将肠管不加牵引地轻轻地平铺在玻璃板上(玻璃板上滴少许盐水)。以幽门为起点,测量炭末在肠管内的移动距离和小肠(自幽门至回盲部)的全长,计算每只小鼠炭末的移动距离占小肠全长百分率，比较3组动物

10、的活动状况和胃肠炭末推进率有何不同。实验结果 实验结果填入下表中鼠鼠号号 体体重重(g)(g)药药物物及及剂剂量量 给给药药途途径径 动动物物反反应应 炭炭末末推进率（推进率（%）ABC不同剂型对药物效应的影响 思考讨论题 灌胃和腹腔注射给硫酸镁的效应有哪些不同？为什么？本次实验结果对临床用药有何提示？实验三 毛果芸香碱与阿托品对瞳孔及对光反射的影响 目的了解毛果芸香碱的副交感神经节后拟胆碱作用和阿托品的对抗作用。材料兔子只，0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%盐酸肾上腺素注液,0.2%硝酸毛果芸香碱注射液 方法 取兔放于兔固定箱内固定，避免阳光直射眼睛，用毛剪剪去兔两眼睫毛，然后用瞳孔量尺测

11、量瞳孔大小，连续三次，取平均值。在兔左眼滴入.2%毛果芸香碱3滴，滴药时用姆指和食指将下眼睑提起,使成囊状,再用中指压住鼻泪管开口处,防止药液流入鼻泪管而不起作用，再用右手滴入药液。15分钟后再测量瞳孔大小，连续三次，取平均值，并进行比较。滴入毛果芸香碱20分钟后，分别在两眼滴入0.1%肾上腺素3滴，15分钟后测量两瞳孔大小，连续3次，取平均值并进行比较。滴入肾上腺素15分钟后，分别于两眼滴入0.05%硫酸阿托品注射液3滴，15分钟后观察两眼瞳孔变化，并测量其大小，连续3次，并取平均值项目正常毛 果 芸香碱肾 上 腺素阿托品瞳孔大小左 眼右 眼 记录记录 讨论题 从实验结果中如何说明药物的协同

12、作用和拮抗作用？实验四实验四药物急性半数致死量的测定药物急性半数致死量的测定n n实验目的实验目的 通过实验，学习测定药物的半数致死量的方法、步骤通过实验，学习测定药物的半数致死量的方法、步骤和计算过程，了解测定药物半数致死量的意义。和计算过程，了解测定药物半数致死量的意义。n n实验要求实验要求 半数致死量（半数致死量（LDLD5050）是衡量药物毒性大小的重要标志，）是衡量药物毒性大小的重要标志，LDLD5050表示能使全部实验动物死亡半数的药物剂量，是以表示能使全部实验动物死亡半数的药物剂量，是以动物死亡或存活作为质反应标志。动物死亡或存活作为质反应标志。LDLD5050小说明药物的小说

13、明药物的毒性大，毒性大，LDLD5050大表明药物毒性小。大表明药物毒性小。n n实验器材与药物实验器材与药物 注射器，乙酰甲喹注射器，乙酰甲喹n n试验方法试验方法预备试验预备试验 取雏鸡取雏鸡2020只，以只，以5 5只为只为1 1组，分成组，分成4 4组。分别灌服不同剂量组。分别灌服不同剂量的药物，连续观察的药物，连续观察24 h24 h，出现中毒症状并记录死亡数。找出，出现中毒症状并记录死亡数。找出引起引起0%0%及及100%100%死亡率剂量的所在范围。预试验组中给予雏鸡死亡率剂量的所在范围。预试验组中给予雏鸡500 mg/Kg500 mg/Kg剂量剂量5 5只雏鸡全部死亡，而给予只

14、雏鸡全部死亡，而给予100 mg/Kg100 mg/Kg剂量组剂量组的的5 5只雏鸡全部存活。通过预试验结果按照下面公式算出剂只雏鸡全部存活。通过预试验结果按照下面公式算出剂量间的等比值（量间的等比值（1 1：r r）r0.7 式中式中N N为分组组数，为分组组数，DmDm是估计是估计100%100%死亡的致死量，死亡的致死量，DnDn是估是估计计0%0%死亡的致死量，死亡的致死量，r r为比值。为比值。计算各组剂量：计算各组剂量：第一组第一组 500 mg/kg500 mg/kg 第二组第二组 350 mg/kg350 mg/kg 第三组第三组 245 mg/kg245 mg/kg 第四组第

15、四组 171.5 mg/kg171.5 mg/kg 第五组第五组 120.05 mg/kg120.05 mg/kg 第六组第六组 空白对照组空白对照组 n n正式试验正式试验 一个班分两大组，每大组用一个班分两大组，每大组用5050只雏鸡（只雏鸡（50-60g50-60g）进行急性）进行急性LD50LD50测定。每大组将雏鸡测定。每大组将雏鸡5050只分为只分为5 5组，每组组，每组1010只，按上述只，按上述计算的剂量口服灌服给药，每只给计算的剂量口服灌服给药，每只给1 mL1 mL。空白组不给药。空白组不给药。n n实验记录实验记录组别组别剂剂量量mg/kgmg/kg动动物数物数死亡数死亡

16、数死亡率死亡率P P存活率存活率q q第一第一组组第二第二组组第三第三组组第四第四组组第五第五组组第六第六组组n n计算计算1 1.LD50.LD50的计算按综合计算法公式计算的计算按综合计算法公式计算2 2计算计算logLD50logLD50的标准误的标准误S S3.3.计算计算95%95%置信区界（置信区界（FLFL）上述公式中：上述公式中：XmXm为最大死亡率组剂量对数；为最大死亡率组剂量对数；i i为组距（相邻为组距（相邻两组剂量比值的对数）；两组剂量比值的对数）；P P为各组死亡率总和（用小数表为各组死亡率总和（用小数表示）；示）；X50X50为为logLD50logLD50；XiX

17、i相邻对数剂量差。相邻对数剂量差。如果试验结果最高死亡率在如果试验结果最高死亡率在8080100%100%之间，最低死亡率在之间，最低死亡率在20200%0%之间，可用下列公式求得校正值：之间，可用下列公式求得校正值：LD50=logLD50=log-1-1Xm-i(p-(3-Pm-Pn)/4Xm-i(p-(3-Pm-Pn)/4式中：式中：PmPm最高死亡量组最高死亡量组 PnPn最低死亡量组最低死亡量组实验五肝脏损伤对药物作用的影响n n实验目的实验目的 通过实验，观察肝损伤后对药物作用的影响通过实验，观察肝损伤后对药物作用的影响。n n实验目的实验目的 肝脏是药物代谢的主要器官，而药物的代

18、谢主要靠酶的催化。在肝细肝脏是药物代谢的主要器官，而药物的代谢主要靠酶的催化。在肝细胞内有专门催化药物等外源性化学物质代谢的微粒体酶，简称药酶。四胞内有专门催化药物等外源性化学物质代谢的微粒体酶，简称药酶。四氯化碳是一种对肝细胞有严重毒害作用的化学物质，可引起中毒性肝氯化碳是一种对肝细胞有严重毒害作用的化学物质，可引起中毒性肝炎，使肝脏对药物的代谢能力降低。本实验用四氯化碳损害小白鼠的肝炎，使肝脏对药物的代谢能力降低。本实验用四氯化碳损害小白鼠的肝脏，使肝药酶活性受到抑制，从而减缓对硫喷妥钠的代谢，使麻醉时间脏，使肝药酶活性受到抑制，从而减缓对硫喷妥钠的代谢，使麻醉时间延长。延长。n n实验仪

19、器、设备实验仪器、设备 仪器：注射器，针头，天平，鼠笼。仪器：注射器，针头，天平，鼠笼。药物：四氯化碳、硫喷妥钠药物：四氯化碳、硫喷妥钠n n实验内容实验内容 给健康小白鼠注射四氯化碳（给健康小白鼠注射四氯化碳（0.1 mL/10g)0.1 mL/10g)，造成肝损伤，造成肝损伤，后用后用0.3%0.3%硫喷妥钠注射硫喷妥钠注射(0.15 mL/10g)(0.15 mL/10g)，与健康小白鼠对，与健康小白鼠对照，照，比较它们麻醉出现及维持的时间的不同；比较它们麻醉出现及维持的时间的不同；解剖所有小白鼠，分别观察它们肝和肾的病理变化，并解剖所有小白鼠，分别观察它们肝和肾的病理变化，并与健康小白

20、鼠比较。与健康小白鼠比较。n n实验记录实验记录 肝脏损伤对药物作用的影响肝脏损伤对药物作用的影响 鼠号鼠号体重（体重（g g）硫喷妥钠剂硫喷妥钠剂量（量（mLmL）注射时间注射时间麻醉开始时麻醉开始时间间麻醉维持时麻醉维持时间间健康鼠健康鼠肝损鼠肝损鼠注意事项“麻醉开始时间“为小鼠从腹腔注射硫喷妥钠溶液后至翻正反射消失时间；“麻醉消失时间”为从翻正反射消失至翻正反射恢复的时间。实验六 药物敏感性实验n n学习内容学习内容 药物敏感实验药物敏感实验纸片法纸片法 定量药敏实验定量药敏实验试管二倍稀释法试管二倍稀释法n n学习要求学习要求 掌握两种药物敏感实验的原理、方法及注意事项。掌握两种药物敏

21、感实验的原理、方法及注意事项。n n抗菌药物敏感性试验（抗菌药物敏感性试验（ASTAST，简称药敏试验），简称药敏试验）：用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。常用最低抑菌浓度（常用最低抑菌浓度（MICMIC）表示，即体外能够抑制细菌）表示，即体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度。通常根据生长的最低药物浓度。通常根据MICMIC结合常用剂量时体结合常用剂量时体内该药所能达到的血药浓度，划定细菌对各种抗生素敏内该药所能达到的血药浓度，划定细菌对各种抗生素敏感或耐药的界限，给出感或耐药的界限，给出S S（敏感）、（敏感）、I I（中介）、（中

22、介）、R R（耐（耐药）等定性的结果，方便临床用药。药）等定性的结果，方便临床用药。检测病原菌对各种抗生素的敏感性，指导临床合理用药。检测病原菌对各种抗生素的敏感性，指导临床合理用药。用于流行病学调查及院内感染的监控，控制和预防耐药用于流行病学调查及院内感染的监控，控制和预防耐药菌株的流行。菌株的流行。为经验用药提供参考依据。为经验用药提供参考依据。方法：扩散法（纸片法）、稀释法（有琼脂稀释法和液方法：扩散法（纸片法）、稀释法（有琼脂稀释法和液体稀释法）体稀释法）n n药敏纸片的人工制作药敏纸片的人工制作 定性滤纸用打孔器打成直径定性滤纸用打孔器打成直径6mm6mm的圆片，每的圆片，每1001

23、00片放入片放入一小瓶中，一小瓶中，160160干热灭菌干热灭菌1-21-2小时，或用高压灭菌小时，或用高压灭菌（6.8kg30min6.8kg30min）后在）后在6060条件下烘干。（此应提前做条件下烘干。（此应提前做好）好）抗菌药物的浓度（指有效药物浓度）抗菌药物的浓度（指有效药物浓度）青霉素青霉素青霉素青霉素 200U/ml 200U/ml 200U/ml 200U/ml 其它抗菌药物其它抗菌药物其它抗菌药物其它抗菌药物 1000ug/ml1000ug/ml1000ug/ml1000ug/ml磺胺类药物磺胺类药物磺胺类药物磺胺类药物10mg/ml 10mg/ml 10mg/ml 10m

24、g/ml 中草药制剂中草药制剂中草药制剂中草药制剂 1g/ml1g/ml1g/ml1g/ml庆大霉素庆大霉素4 4万单位万单位/ml/ml，稀释为，稀释为10001000单位单位/ml/ml。（临床上可按照药品使用说明书，如上面标明（临床上可按照药品使用说明书，如上面标明5 5克本品可拌克本品可拌5050千克千克饲料，其换算方法为饲料，其换算方法为l l克本品可拌克本品可拌1010千克饲料，也就是千克饲料，也就是1 1克本品拌克本品拌l0000l0000克饲料，相当于药品浓度为克饲料，相当于药品浓度为l l克本品加克本品加l0000l0000毫升蒸馏水。）毫升蒸馏水。）n n用无菌操作法将欲测

25、的抗菌药物溶液用无菌操作法将欲测的抗菌药物溶液1ml1ml，加入，加入100100片纸片中，置冰箱内片纸片中，置冰箱内1212小时，用下列方法烘小时，用下列方法烘干：干：培养皿烘干法：将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿培养皿烘干法：将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿中，于中，于3737的温箱内保持的温箱内保持2-32-3小时即可干燥，或放在小时即可干燥，或放在无菌室内过夜干燥。无菌室内过夜干燥。n n将制好的各种药物纸片装入无菌小瓶中，置冰箱将制好的各种药物纸片装入无菌小瓶中，置冰箱内保存备用。并用标准敏感菌株做敏感性实验，内保存备用。并用标准敏感菌株做敏感性实验，记录抑菌环的直径。记录抑菌环的直

26、径。干燥的药敏纸片可保存干燥的药敏纸片可保存6 6个月。个月。使用前用标准的敏感菌株做药物敏感实验，若抑菌环使用前用标准的敏感菌株做药物敏感实验，若抑菌环比原来小，则表明该纸片已失效。比原来小，则表明该纸片已失效。n n纸片法 每组约每组约7-87-8个平皿（每人个平皿（每人1 1个），每个平皿约个），每个平皿约2020毫升琼毫升琼脂培养基，即约脂培养基，即约200ml200ml。按照每组。按照每组500500毫升琼脂培养基、毫升琼脂培养基、100100毫升肉汤培养基准备。每平皿约毫升肉汤培养基准备。每平皿约4 4张纸片，每班约张纸片，每班约240240张以上。张以上。将琼脂培养基熔融后，每个

27、平皿倒入约将琼脂培养基熔融后，每个平皿倒入约2020毫升，晾干毫升，晾干后，用玻棒蘸含菌棉球（玻棒、棉球均事先消毒）涂后，用玻棒蘸含菌棉球（玻棒、棉球均事先消毒）涂抹均匀后晾干。抹均匀后晾干。用镊子夹纸片，每个平皿贴用镊子夹纸片，每个平皿贴4 4张纸片，要使纸片全部紧张纸片，要使纸片全部紧贴培养基。为保证均匀，可于平皿背部划出贴纸片点。贴培养基。为保证均匀，可于平皿背部划出贴纸片点。3636摄氏度培养过夜。测量宽度。摄氏度培养过夜。测量宽度。n n试管稀释法 每组每组2 2排试管，每排排试管，每排1010支。共支。共8080支。支。将庆大霉素用肉汤稀释液成将庆大霉素用肉汤稀释液成6464微克微

28、克/毫升。每班毫升。每班2020毫升毫升即可。即可。挑选挑选1010支无菌试管编号支无菌试管编号110110。无菌加入无菌加入1.01.0毫升肉汤至第毫升肉汤至第2 2到到1010管内。管内。将将6464微克微克/毫升庆大霉素液体，分别加毫升庆大霉素液体，分别加1.01.0毫升至第毫升至第1 1、2 2管，将第管，将第2 2管混合后取管混合后取1.01.0毫升至第毫升至第3 3管，依次至第管，依次至第9 9管，管，再从第再从第9 9管取管取1.01.0毫升丢去，第毫升丢去，第1010管不加抗生素作阳性管不加抗生素作阳性对照。对照。n n试管稀释法 另准备肉汤管不加抗生素、细菌作阴性对照。另准备

29、肉汤管不加抗生素、细菌作阴性对照。第第110110管分别加入已增菌管分别加入已增菌6 6小时的细菌浓度约为小时的细菌浓度约为105-105-106cfu/ml106cfu/ml菌液菌液1.01.0毫升（细菌菌龄为毫升（细菌菌龄为16-1816-18小时，小时，McFarland No 0.5McFarland No 0.5管管 细菌浓度细菌浓度1.5108cfu/ml1.5108cfu/ml，然后，然后用用肉汤用用肉汤1 1：200200稀释）。稀释）。培养和结果判读：培养和结果判读：3535培养培养16-2416-24小时，肉眼观察有无小时，肉眼观察有无细菌生长。阳性可见混浊生长，阴性可见澄

30、清。细菌生长。阳性可见混浊生长，阴性可见澄清。最终各试管庆大霉素浓度：最终各试管庆大霉素浓度：32 16 8 4 2 1 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25 0 0.5 0.25 0 微克微克/毫升毫升实验七实验七 磺胺类药物内服给药后的血中药物磺胺类药物内服给药后的血中药物浓度测定浓度测定n n目的目的 了解磺胺嘧啶非血管内一次给药后血药浓度随时间变了解磺胺嘧啶非血管内一次给药后血药浓度随时间变化的规律。化的规律。n n原理原理 已知磺胺嘧啶等磺胺类药物在酸性环境下其苯环上的已知磺胺嘧啶等磺胺类药物在酸性环境下其苯环上的氨基（氨基（NH2NH2）将被离子化而生成铵类化合物（）将被离

31、子化而生成铵类化合物（NH3+NH3+）。后者与亚硝酸钠反应可发生重氮化反应进而）。后者与亚硝酸钠反应可发生重氮化反应进而生成重氮盐（生成重氮盐（NNN+N+）。该化合物在碱性条件下可）。该化合物在碱性条件下可与麝香草酚生成橙黄色化合物。在与麝香草酚生成橙黄色化合物。在525nm525nm波长下比色，波长下比色，其光密度与磺胺嘧啶的浓度成正比。其光密度与磺胺嘧啶的浓度成正比。n n根据上述原理根据上述原理,在给受试家兔一次静脉注射一定剂在给受试家兔一次静脉注射一定剂量的磺胺嘧啶后量的磺胺嘧啶后,于不同时间点采集其静脉血样于不同时间点采集其静脉血样,采用比色法对各样品中磺胺嘧啶的血药浓度进行采用

32、比色法对各样品中磺胺嘧啶的血药浓度进行定量分析定量分析,并以血药浓度对相应时间作图并以血药浓度对相应时间作图,从而获从而获得磺胺嘧啶的静脉给药后的药时曲。得磺胺嘧啶的静脉给药后的药时曲。n n动物动物 3kg3kg左右家兔一只左右家兔一只n n药品药品 2020磺胺嘧啶（磺胺嘧啶（sulfadiazinesulfadiazine，SDSD）、）、7.57.5三氯醋酸、三氯醋酸、0.10.1SDSD标准液、标准液、0.50.5亚硝酸钠、亚硝酸钠、0.50.5麝香草酚（用麝香草酚（用2020NaOHNaOH配制）、配制）、1000u/mL1000u/mL肝素生理盐水、肝素生理盐水、3 3戊巴比戊巴

33、比妥钠、蒸馏水。妥钠、蒸馏水。n n器材器材 721721分光光度计、离心机、磅秤、手术器械、动脉夹、分光光度计、离心机、磅秤、手术器械、动脉夹、尼龙插管（或玻璃插管、硅胶管）、兔手术台、注射尼龙插管（或玻璃插管、硅胶管）、兔手术台、注射器（器（5mL5mL）及针头、移液器（）及针头、移液器（0.010.011mL1mL）、吸头、试）、吸头、试管、离心管、试管架、玻璃记号笔、药棉、纱布、计管、离心管、试管架、玻璃记号笔、药棉、纱布、计算机。算机。n n方法与步骤血中药物浓度测定血中药物浓度测定n n麻醉：全麻或局麻均可。取兔一只（实验前禁食麻醉：全麻或局麻均可。取兔一只（实验前禁食1212小时

34、不禁水），记录体重和性别，耳缘静脉注射小时不禁水），记录体重和性别，耳缘静脉注射3 3戊巴比妥钠戊巴比妥钠0.80.81.0 mL/kg1.0 mL/kg麻醉，仰位固定于兔手麻醉，仰位固定于兔手术台上。术台上。n n手术：颈部手术区剪毛，切皮约手术：颈部手术区剪毛，切皮约6cm6cm左右，钝性分离左右，钝性分离皮下组织和肌肉，气管插管，分离出颈总动脉约皮下组织和肌肉，气管插管，分离出颈总动脉约2 23 cm3 cm左右，在其下穿两根细线，结扎远心端，保留左右，在其下穿两根细线，结扎远心端，保留近心端。近心端。n n耳缘静脉注射耳缘静脉注射1000u/mL1000u/mL肝素肝素1 mL/kg1

35、 mL/kg。n n插管：用动脉夹夹住动脉近心端，再于两线中间的插管：用动脉夹夹住动脉近心端，再于两线中间的一段动脉上剪一一段动脉上剪一“V”V”型切口，插入尼龙管，用线结型切口，插入尼龙管，用线结扎牢固，以备取血用。扎牢固，以备取血用。n n方法与步骤血中药物浓度测定血中药物浓度测定n n取血：打开动脉夹放取空白血样取血：打开动脉夹放取空白血样0.4mL0.4mL，分别放入，分别放入1 1号管（空白号管（空白管）和管）和2 2号管（标准管）各号管（标准管）各0.2mL0.2mL摇匀静置。而后腹腔注射摇匀静置。而后腹腔注射2020SD 1.5mL/kgSD 1.5mL/kg，分别于注射后，分别

36、于注射后5 5、1515、3030、4545、7575、120120、180180、240240、300300分钟时由动脉取血分钟时由动脉取血0.2mL0.2mL加到含有加到含有7.57.5三氯醋酸三氯醋酸2.7mL2.7mL的试管中摇匀。标准管加入的试管中摇匀。标准管加入0.10.1SDSD标准液标准液0.1mL0.1mL，其余，其余各管加蒸馏水各管加蒸馏水0.1mL0.1mL摇匀。摇匀。n n显色：将上述各管离心显色：将上述各管离心5 5分钟（分钟（1500-20001500-2000转转/分），取上清液分），取上清液1.5mL1.5mL，加，加0.50.5亚硝酸钠亚硝酸钠0.5mL0.5

37、mL，摇匀后，再加入，摇匀后，再加入0.50.5麝香草麝香草酚酚1mL1mL后溶液为橙色。后溶液为橙色。n n测定：于分光光度计在测定：于分光光度计在525nm525nm波长下测定各样品管的光密度值。波长下测定各样品管的光密度值。n n计算血中药物浓度：根据同一种溶液浓度与光密度成正比的原计算血中药物浓度：根据同一种溶液浓度与光密度成正比的原理，可用空白血标准管浓度及其光密度值求算出样品管的磺胺理，可用空白血标准管浓度及其光密度值求算出样品管的磺胺药物浓度。药物浓度。n n结果与处理 将所得数据用计算机软件绘制药物的药时曲线。将所得数据用计算机软件绘制药物的药时曲线。n n注意事项 每次取血前

38、要先将插管中的残血放掉。每次取血前要先将插管中的残血放掉。每吸取一个血样时，必须更换吸量管，若只用一支吸每吸取一个血样时，必须更换吸量管，若只用一支吸量管时必须将其中的残液用生理盐水冲净。量管时必须将其中的残液用生理盐水冲净。将血样加到三氯醋酸试管中应立即摇匀，否则易出现将血样加到三氯醋酸试管中应立即摇匀，否则易出现血凝块。血凝块。实验八 药物对家兔的利尿作用的影响n n实验目的根据尿液的多少，了解几种利尿药的利尿作用根据尿液的多少，了解几种利尿药的利尿作用n n实验原理尿液的生成过程受多种因素的影响。本实验通尿液的生成过程受多种因素的影响。本实验通过改变某些影响肾小球滤过或肾小管、集合管过改

39、变某些影响肾小球滤过或肾小管、集合管重吸收的因素，观察对尿液的影响。重吸收的因素，观察对尿液的影响。n n实验仪器、设备 器材：兔手术台，哺乳动物手术器械一套，膀胱套管，器材：兔手术台，哺乳动物手术器械一套，膀胱套管，记滴器，培养皿。记滴器，培养皿。药物：药物：20%20%乌拉坦，生理盐水，抗利尿素，乌拉坦，生理盐水，抗利尿素，50%50%葡萄糖，葡萄糖，20%20%明胶，速尿。明胶，速尿。n n实验内容 兔的麻醉兔的麻醉 用用20%20%乌拉坦溶液（乌拉坦溶液（1 g/Kg)1 g/Kg)沿耳缘静脉注射沿耳缘静脉注射麻醉后，将兔仰卧固定于手术台上，剪下腹部的毛。麻醉后，将兔仰卧固定于手术台上

40、，剪下腹部的毛。尿液收集方法尿液收集方法 从耻骨联合向上沿正中线作约从耻骨联合向上沿正中线作约4cm4cm长的皮肤长的皮肤切口，再沿腹白线剪开腹壁及腹膜，将膀胱翻至体外（勿切口，再沿腹白线剪开腹壁及腹膜，将膀胱翻至体外（勿使肠管外泄，以免血压下降）。在膀胱底部找到两侧输尿使肠管外泄，以免血压下降）。在膀胱底部找到两侧输尿管，认清两侧输尿管在膀胱的开口部分。小心地在两侧输管，认清两侧输尿管在膀胱的开口部分。小心地在两侧输尿管下方穿一棉线，将膀胱上翻，结扎尿道。再在膀胱顶尿管下方穿一棉线，将膀胱上翻，结扎尿道。再在膀胱顶部血管较少的地方做一荷包缝合，中心作一小切口，插入部血管较少的地方做一荷包缝合

41、，中心作一小切口，插入膀胱插管或塑料管，插管口需对准两输尿管出口，收缩缝膀胱插管或塑料管，插管口需对准两输尿管出口，收缩缝线结扎固定，导管的另一端连至计数器。轻轻将膀胱连同线结扎固定，导管的另一端连至计数器。轻轻将膀胱连同膀胱导管送入腹腔，腹部切口处用止血钳轻轻夹住，并用膀胱导管送入腹腔，腹部切口处用止血钳轻轻夹住，并用温生理盐水纱布覆盖手术部位。温生理盐水纱布覆盖手术部位。n n观察项目l l记录正常的尿量。记录正常的尿量。l l静脉注射静脉注射10 mL/kg10 mL/kg生理盐水，观察尿量变化，同记录生理盐水，观察尿量变化，同记录3 3分钟分钟并于并于2 23 3分后开始下一步实验。分

42、后开始下一步实验。l l静脉注射抗利尿素静脉注射抗利尿素2 2单位，观察尿量变化。单位，观察尿量变化。l l静脉快速注射静脉快速注射50%50%葡萄糖（葡萄糖（4 mL/kg4 mL/kg），观察尿量变化。），观察尿量变化。l l静脉注射预先加热的静脉注射预先加热的3737明胶明胶1015 mL1015 mL，观察尿量变化，观察尿量变化l l静脉注射速尿静脉注射速尿0.5 mL0.5 mL，观察尿量变化。，观察尿量变化。l l静脉注射静脉注射1 1：10 00010 000盐酸肾上腺素盐酸肾上腺素0.20.3 mL0.20.3 mL，观察尿量，观察尿量变化。变化。n n实验记录 记录用药前后家

43、兔的泌尿量记录用药前后家兔的泌尿量项目 正正常常 生生理理盐盐水水 抗抗利利尿尿激激素素 50%50%葡葡萄萄糖糖明明胶胶 速速尿尿 肾肾上上腺腺素素尿量(滴/min)实验九 有机磷酸酯类中毒及解救n n实验目的 有机磷酸酯类中毒的症状和血液胆碱酯酶活力的抑制有机磷酸酯类中毒的症状和血液胆碱酯酶活力的抑制情况。情况。握较阿托品和解磷定解救有机磷酸酯类中毒的作用原握较阿托品和解磷定解救有机磷酸酯类中毒的作用原理。理。n n实验原理 有机磷酸酯类中毒后，胆碱酯酶有机磷酸酯类中毒后，胆碱酯酶(chE)(chE)活性受到抑制，活性受到抑制，失去水解乙酰胆碱失去水解乙酰胆碱(Ach)(Ach)的能力，的

44、能力，AchAch在体内蓄积，引在体内蓄积，引起一系列中毒症状起一系列中毒症状(M(M样、样、N N样和中枢神经系统症状样和中枢神经系统症状)。抗胆碱药阿托品能拮抗抗胆碱药阿托品能拮抗AchAch的作用，解除有机磷酸酯类的作用，解除有机磷酸酯类中毒中毒M M样症状。胆碱酯酶复活药解磷定能使被有机磷酸样症状。胆碱酯酶复活药解磷定能使被有机磷酸酯类抑制的胆碱酯酶活性恢复，对酯类抑制的胆碱酯酶活性恢复，对M M及及N N样症状有效。样症状有效。两药合用可提高解救效果。两药合用可提高解救效果。n n实验材料 实验动物：实验动物：实验动物：实验动物：家兔，家兔，2.52.53.0kg3.0kg 仪器设备

45、：仪器设备：仪器设备：仪器设备：恒温水浴，分光光度计，试管架，中试管，恒温水浴，分光光度计，试管架，中试管，吸管吸管(0.2ml,lml(0.2ml,lml，2ml2ml，5m1)5m1)，滤纸，漏斗，兔盒，注，滤纸，漏斗，兔盒，注射器射器(5ml(5ml，10m1)10m1)，测瞳孔尺，刀片，采血杯，动脉夹，测瞳孔尺，刀片，采血杯，动脉夹，棉球。棉球。药品：药品：药品：药品：0.10.1硫酸阿托品硫酸阿托品(atropine sulfate)(atropine sulfate)，5 5敌敌百虫百虫(dipterex)(dipterex)，1 1肝素肝素(heparin)(heparin)，2

46、.52.5解磷定解磷定(pyraloxime methoiodide(pyraloxime methoiodide，PAM)PAM)。n n实验方法 家兔家兔2 2只，称重，观察并记录活动情况、呼吸只，称重，观察并记录活动情况、呼吸(频率、有无呼吸困频率、有无呼吸困难，呼吸道有无分泌等难，呼吸道有无分泌等)、瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌张力、瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌张力及有无肌震颤等。及有无肌震颤等。用酒精棉球擦拭兔耳处缘静脉，当其充血明显时，用刀片横断耳用酒精棉球擦拭兔耳处缘静脉，当其充血明显时，用刀片横断耳缘静脉，使血液缘静脉，使血液(0.5(0.51.0m1)1.0m1)自然流人

47、采血杯自然流人采血杯(杯内预先滴人杯内预先滴人2 2滴滴heparinheparin，自然于燥后备用，自然于燥后备用)中，并轻轻振荡采血杯，防止凝血。中，并轻轻振荡采血杯，防止凝血。依上述方法取甲乙两兔耳静脉血各一份，供测正常胆碱酯酶活性依上述方法取甲乙两兔耳静脉血各一份，供测正常胆碱酯酶活性用。用。分别给甲乙两兔耳缘静脉注射分别给甲乙两兔耳缘静脉注射5 5dipterex 75mgdipterex 75mgkgkg。按前述指。按前述指标观察并记录中毒症状。待中毒症状明显时，依上法再次采血供标观察并记录中毒症状。待中毒症状明显时，依上法再次采血供测中毒后胆碱酯酶活性用。然后，甲兔立即静脉注射测

48、中毒后胆碱酯酶活性用。然后，甲兔立即静脉注射atropine atropine lmglmgkgkg，乙兔立即静脉注射，乙兔立即静脉注射PAMl00mgPAMl00mgkgkg，观察并记录甲乙两兔，观察并记录甲乙两兔的中毒症状有何变化，特别注意甲兔和乙兔的区别。在症状改善的中毒症状有何变化，特别注意甲兔和乙兔的区别。在症状改善明显时，采血供测解救后胆碱酯酶活性用。明显时，采血供测解救后胆碱酯酶活性用。实验结束后，甲、乙两兔应分别补注解磷定与阿托品。实验结束后，甲、乙两兔应分别补注解磷定与阿托品。n n实验结果 根据本实验的观察项目，列表记录甲乙两只家兔中毒根据本实验的观察项目，列表记录甲乙两只家兔中毒前后和用不同药物解救后症状及血液胆碱酯酶活性的前后和用不同药物解救后症状及血液胆碱酯酶活性的改变。改变。