蛋白质的分离纯化与表征教学文稿.ppt

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1、蛋白质的分离纯化与表征二、蛋白质分子的大小与形状二、蛋白质分子的大小与形状（一）根据化学组成测定最低相对分子量（一）根据化学组成测定最低相对分子量如如MbMb含铁量为含铁量为0.335%0.335%，其最低相对分子质量为：，其最低相对分子质量为：MbMb最低相对分子质量最低相对分子质量铁的原子量铁的原子量铁的百分含量铁的百分含量10010055.8/0.33555.8/0.335 1001001670016700HbHb最低相对分子质量最低相对分子质量16700167004 4牛血清白蛋白含牛血清白蛋白含Trp0.58%Trp0.58%最低最低Mr=35200Mr=35200，实际为，实际为6

2、900069000，含，含2 2个个TrpTrp楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省（二）渗透压法测定相对分子量（二）渗透压法测定相对分子量用用半透膜半透膜将蛋白质溶液与纯水隔开，当将蛋白质溶液与纯水隔开，当渗透达平衡渗透达平衡时，测时，测定其渗透压，计算分子量：定其渗透压，计算分子量：M Mr rRTRTlimlimc cc c00C C：浓度（：浓度（g/mg/m3 3）R R：气体常数（：气体常数（8.314J/(Kmol)8.314J/(Kmol)T T：绝对温度（：绝对温度（K K）：以大气压

3、表示的渗透压：以大气压表示的渗透压(N/m(N/m2 2)11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省（三）蛋白质的扩散和扩散系数（三）蛋白质的扩散和扩散系数扩扩散散：由由于于浓浓度度差差引引起起的的溶溶质质分分子子的的净净迁迁移移。扩扩散散的的热热力学驱动力是熵的增加。力学驱动力是熵的增加。扩扩散散系系数数D D：等等于于当当浓浓度度梯梯度度为为一一个个单单位位时时，在在一一秒秒钟钟内通过内通过1cm1cm2 2面积所扩散的溶质量。面积所扩散的溶质量。扩扩散散系系数数随随MrMr的的增增加加而而降降低低，但但对对MrMr的的变变化化不不敏敏感感。对对球形的大分子来说，扩散系数与

4、球形的大分子来说，扩散系数与MrMr的立方根成反比。的立方根成反比。楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省（四）沉降分析法测定相对分子量（四）沉降分析法测定相对分子量楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省1.1.沉降速率法沉降速率法楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省2

5、.2.沉降平衡法沉降平衡法楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省（五）凝胶过滤法测定蛋白质相对分子量（五）凝胶过滤法测定蛋白质相对分子量11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省（六）（六）SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子量聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子量11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 （一）蛋白质的胶体性质（一）蛋白质的胶体性质蛋蛋白白质质分分子子直直径径在在1-100nm1-1

6、00nm之之间间，在在水水溶溶液液中中具具有有胶胶体体溶溶液液的的通性（布朗运动，丁达尔现象，不能通过半透膜）。通性（布朗运动，丁达尔现象，不能通过半透膜）。透透析析：将将含含小小分分子子杂杂质质的的蛋蛋白白质质放放入入透透析析袋袋中中，置置水水溶溶液液中中，小分子杂质不断从袋中出来，大分子蛋白质仍留在袋中。小分子杂质不断从袋中出来，大分子蛋白质仍留在袋中。11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省蛋白质在水中溶解度依赖于多肽链氨基酸残基侧链基团的相对蛋白质在水中溶解度依赖于多肽链氨基酸残基侧链基团的相对极性，离子化基团数量越多，溶解度越大。极性，离子化基团数量越多，溶解度越大

7、。稳定蛋白质胶体溶液的主要因素稳定蛋白质胶体溶液的主要因素蛋白质表面极性基团形成的蛋白质表面极性基团形成的水化膜水化膜将蛋白质颗粒彼此隔开，将蛋白质颗粒彼此隔开，不会互相碰撞凝聚而沉淀。不会互相碰撞凝聚而沉淀。两性电解质非等电状态时，两性电解质非等电状态时，带同种电荷带同种电荷，互相排斥不致聚集，互相排斥不致聚集而沉淀。而沉淀。一旦电荷被中和或水化膜被破坏，蛋白质颗粒聚集，便从溶液一旦电荷被中和或水化膜被破坏，蛋白质颗粒聚集，便从溶液中析出沉淀。中析出沉淀。楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省（二）蛋白

8、质的沉淀（二）蛋白质的沉淀盐盐析析法法向向蛋蛋白白质质溶溶液液中中加加入入大大量量的的中中性性盐盐（NHNH4 4）2 2SOSO4 4、NaNa2 2SOSO4 4、NaClNaCl，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法破坏水化膜，降低介电常数。破坏水化膜，降低介电常数。重重金金属属盐盐沉沉淀淀 pHpH大大于于等等电电点点时时，蛋蛋白白质质带带负负电电荷荷，可可与与重金属离子（重金属离子（HgHg2+2+.Pb.Pb2+2+.Cu.Cu2+2+等）结成不溶性沉淀等）结成不溶性沉淀生生物物碱碱试试剂剂和和某某些些酸酸类类沉沉淀淀法法 pH

9、pH小小于于等等电电点点时时，蛋蛋白白质质带带正正电电荷荷，易易与与生生物物碱碱试试剂剂和和酸酸类类的的负负离离子子生生成成不不溶溶性性沉沉淀淀。生生物物碱碱试试剂剂：是是指指能能引引起起生生物物碱碱沉沉淀淀的的一一类类试试剂剂，单单宁宁酸酸、苦味酸、钨酸。酸苦味酸、钨酸。酸类：三氯乙酸、磺基水杨酸。类：三氯乙酸、磺基水杨酸。加热变性沉淀加热变性沉淀 往往是不可逆的。往往是不可逆的。11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省四、蛋白质分离纯化的一般原则四、蛋白质分离纯化的一般原则纯化的实质：增加制品纯化的实质：增加制品(preparation)(preparation)的纯度或

10、比活性。的纯度或比活性。蛋白与非蛋白分开，蛋白与非蛋白分开，蛋白质之间分开蛋白质之间分开 一般程序：前处理、粗分级、细分级、浓缩与保存一般程序：前处理、粗分级、细分级、浓缩与保存楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省 电泳电泳 前前处处理理粗粗分分离离细细分分离离生物组织生物组织 无细胞提取液无细胞提取液破碎、溶破碎、溶 解、差速离心解、差速离心选择性沉淀法选择性沉淀法亲和亲和层析层析离子交离子交换层析换层析精制后的蛋白质精制后的蛋白质凝胶凝胶过滤过滤疏水疏水层析层析吸附吸附层析层析11/24/2022台

11、州学院生命科学与医药化工学院 柯世省1 1、前处理：、前处理：将组织和细胞破碎将组织和细胞破碎动物组织和细胞：电动捣碎机（动物组织和细胞：电动捣碎机（waring blender)waring blender)匀浆器（匀浆器（homogenizer)homogenizer)超声波处理（超声波处理（ultrasonication)ultrasonication)植物组织和细胞：石英砂植物组织和细胞：石英砂+提取液，研磨提取液，研磨 纤维素酶处理纤维素酶处理细菌：细菌：超声波震荡、与砂研磨、高压挤压、溶菌超声波震荡、与砂研磨、高压挤压、溶菌 酶处理（分解肽聚糖）酶处理（分解肽聚糖）差速离心法收集细

12、胞的某一组分（差速离心法收集细胞的某一组分（differential differential centrifugation)centrifugation)：在不同离心力下沉降的细胞组分在不同离心力下沉降的细胞组分如果提取膜蛋白：如果提取膜蛋白：超声波或去污剂使膜解聚，然后用适当的介质提取。超声波或去污剂使膜解聚，然后用适当的介质提取。楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省2 2、粗分级（、粗分级（rough fractionation)rough fractionation)一般用选择性沉淀法。一般用选

13、择性沉淀法。（NHNH4 4）2 2SOSO4 4分级沉淀法（盐析）分级沉淀法（盐析）等电点选择性沉淀法等电点选择性沉淀法有机溶剂分级沉淀法有机溶剂分级沉淀法热处理选择性沉淀法热处理选择性沉淀法生物碱或三氯乙酸选择性沉淀法生物碱或三氯乙酸选择性沉淀法3 3、细分级（、细分级（fine fractionation)fine fractionation)透析除盐透析除盐sephdex G-25sephdex G-25凝胶过滤除盐凝胶过滤除盐层析法：凝胶过滤层析、离子交换层析、吸附层析、亲和层层析法：凝胶过滤层析、离子交换层析、吸附层析、亲和层析、疏水层析（反相析、疏水层析（反相HPLCHPLC）电

14、泳法：自由界面电泳、区带电泳（凝胶电泳、滤纸和薄膜电泳法：自由界面电泳、区带电泳（凝胶电泳、滤纸和薄膜电泳、粉末电泳、细丝电泳等）、盘状电泳、等电聚焦、双向电泳、粉末电泳、细丝电泳等）、盘状电泳、等电聚焦、双向电泳电泳密度梯度离心密度梯度离心11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省4 4、浓缩与保存、浓缩与保存浓缩方法：浓缩方法：保存方法：保存方法：晶体保存：晶体保存：结结晶晶过过程程本本身身也也伴伴随随着着一一定定程程度度的的提提纯纯。能能否否结结晶晶不不仅仅是是纯纯度度 的的一一个个指指标标，也也是是判判断断制制品品是是否否有有活活性性的的指指标标。纯纯度度越越高高，溶溶

15、液越浓，越容易结晶。液越浓，越容易结晶。结结晶晶方方法法：使使溶溶液液略略处处于于过过饱饱和和状状态态。降降低低温温度度、盐盐析析、加加有有机溶剂、调节机溶剂、调节pHpH、接入晶种。、接入晶种。冻干粉保存：冻干粉保存：溶液保存：溶液保存：加入抗冻剂（加入抗冻剂（50%50%甘油）后甘油）后-20-20-70-70保存。保存。11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省五、蛋白质的分离纯化方法五、蛋白质的分离纯化方法（一）根据分子大小不同的纯化方法（一）根据分子大小不同的纯化方法1.1.透析和超滤透析和超滤透析：半透膜阻留蛋白质分子，而让小的溶质分子和水通透析：半透膜阻留蛋白质分

16、子，而让小的溶质分子和水通过，以除去蛋白质溶液中小分子（盐、低分子酸等）。过，以除去蛋白质溶液中小分子（盐、低分子酸等）。11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省超滤：施以一定的压力超滤：施以一定的压力使小分子溶质通过半透使小分子溶质通过半透膜，而按半透膜的筛孔膜，而按半透膜的筛孔大小截留相应的蛋白质大小截留相应的蛋白质分子分子楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省沉降的速度与颗粒的重量、密度和形状有关。沉降的速度与颗粒的重量、密度和形状有关。离心后按其沉降离心后按其沉降的速度不同，彼此

17、分开形成区带。再进行光学定位，针刺或冰的速度不同，彼此分开形成区带。再进行光学定位，针刺或冰冻切片采样分析。冻切片采样分析。2.2.密度梯度（区带）离心密度梯度（区带）离心11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省蔗糖密度梯度蔗糖密度梯度聚蔗糖密度梯度聚蔗糖密度梯度楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省3.3.凝胶过滤凝胶过滤11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省交交联联葡葡聚聚糖糖（Sephadex）;聚聚丙丙

18、烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶（Bio-Gel P）；琼脂糖凝胶（）；琼脂糖凝胶（Sepharose，Bio-Gel A）楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省交联葡聚糖（交联葡聚糖（Sephadex）楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省（二）利用溶解度差别的纯化方法（二）利用溶解度差别的纯化方法1.1.等电点沉淀和等电点沉淀和pHpH控制控制在等电点条件下，蛋白质的

19、电导性、溶解度最小，粘度最大。在在pIpI时时，分分子子电电荷荷为为零零，蛋蛋白白质质分分子子间间的的静静电电排排斥斥消消失失，从从而而蛋蛋白白质质出出现现聚聚集沉淀。集沉淀。楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省2.2.蛋白质的盐溶和盐析蛋白质的盐溶和盐析盐盐溶溶：低低盐盐浓浓度度时时，蛋蛋白白质质溶溶解度增加。解度增加。盐盐析析：高高盐盐浓浓度度时时，使使蛋蛋白白质质溶解度降低析出。溶解度降低析出。盐盐析析多多用用溶溶解解度度大大的的中中性性盐盐，如如(NH(NH4 4)2 2SOSO4 4、NaCl

20、NaCl、MgClMgCl2 2、NHNH4 4ClCl、KClKCl等的饱和溶液。等的饱和溶液。楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省3.3.有机溶剂分级分离法有机溶剂分级分离法与与水水互互溶溶的的有有机机溶溶剂剂(如如甲甲醇醇、乙乙醇醇和和丙丙酮酮等等)能能使使蛋蛋白白质质在在水水中中的的溶溶解解度度显显著著降降低低。在在室室温温下下，这这些些有有机机溶溶剂剂不不仅仅能能引引起起蛋蛋白白质质沉淀，而且伴随者变性。沉淀，而且伴随者变性。在在一一定定温温度度、pHpH和和离离子子强强度度条条件件下下，引引

21、进进蛋蛋白白质质沉沉淀淀的的有有机机溶溶剂剂的浓度不同，因此控制有机溶剂浓度也可以分离蛋白质。的浓度不同，因此控制有机溶剂浓度也可以分离蛋白质。有有机机溶溶剂剂引引起起蛋蛋白白质质沉沉淀淀的的主主要要原原因因之之一一是是改改变变介介质质的的介介电电常常数数；另另一一重重要要方方式式可可能能与与盐盐析析相相似似，与与蛋蛋白白质质争争夺夺水水化化水水，致致使使蛋蛋白白质聚集体的形成并沉淀。质聚集体的形成并沉淀。水水溶溶性性非非离离子子聚聚合合物物如如聚聚乙乙二二醇醇（PEGPEG）也也能能引引起起蛋蛋白白质质沉沉淀淀。聚聚乙乙二二醇醇的的主主要要作作用用可可能能是是脱脱去去蛋蛋白白质质的的水水化化

22、层层。聚聚乙乙二二醇醇与与蛋蛋白白质质亲亲水水基基团团发发生生相相互互作作用用并并在在空空间间上上阻阻碍碍蛋蛋白白质质与与水水相相接接近近。蛋白质在聚乙二酵中的溶解度明显地依赖于聚乙二醇的分子量。蛋白质在聚乙二酵中的溶解度明显地依赖于聚乙二醇的分子量。11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省4.4.温度对蛋白质溶解度的影响温度对蛋白质溶解度的影响在在一一定定的的温温度度范范围围内内，大大部部分分球球状状蛋蛋白白质质的的溶溶解解度度随随温温度度升升高而增加。高而增加。大多数蛋白质在低温下比较稳定，因此蛋白质的分级分离操大多数蛋白质在低温下比较稳定，因此蛋白质的分级分离操作一般都

23、在作一般都在00或更低的温度下进行。或更低的温度下进行。楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省（三）根据电荷不同的纯化方法（三）根据电荷不同的纯化方法1.1.电泳电泳在在外外电电场场的的作作用用下下，带带电电颗颗粒粒，例例如如不不处处于于等等电电状状态态的的蛋蛋白白质质分分子子，将将向向着着与与其其电电性性相相反反的的电电极极移移动动，这这种种现现象象称称电泳电泳(electrophoresis)(electrophoresis)或离子泳或离子泳(ionphoresis)(ionphoresis)。电电泳

24、泳不不仅仅是是分分离离蛋蛋白白质质混混合合物物和和鉴鉴定定蛋蛋白白质质纯纯度度的的重重要要于于段，而且也是研究蛋白质性质很有用的一种物理化学方法。段，而且也是研究蛋白质性质很有用的一种物理化学方法。楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省普普通通电电泳泳、等等电电聚聚焦焦、双双向向电电泳泳、脉脉冲冲电电泳泳、毛细管电泳毛细管电泳从从电电泳泳结结果果分分：自自由由界界面面电电泳泳、区区带带电电泳泳、盘盘状电泳状电泳从从装装置置上上分分：圆圆盘盘电电泳泳（柱柱状状）、水水平平板板电电泳、垂直板电泳。泳、垂直板电

25、泳。从从支支持持物物分分：自自由由界界面面电电泳泳、纸纸电电泳泳（或或薄薄膜膜电电泳泳）、凝凝胶胶电电 泳泳（PAGE PAGE，琼琼脂脂糖糖胶胶，淀粉胶等）淀粉胶等）楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省2.2.聚丙烯酰胺凝胶电泳（聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGEPAGE）11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省3.3.毛细管电泳毛细管电泳楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省4.4.等电聚焦电泳等电

26、聚焦电泳11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省等电聚焦电泳法测定蛋白质等电聚焦电泳法测定蛋白质pI11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省5.SDS-PAGE5.SDS-PAGE11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省6.6.离子交换层析离子交换层析离子交换纤维素：离子交换纤维素：离子交换交联葡聚糖：兼有分子筛效应离子交换交联葡聚糖：兼有分子筛效应离子交换交联琼脂糖：离子交换交联琼脂糖：11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省11/24/2022台州学院生命科学与

27、医药化工学院 柯世省楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省（四）利用选择性吸附的纯化方法（四）利用选择性吸附的纯化方法极性：硅胶、氧化铝、岩藻土（离子吸引和氢键）极性：硅胶、氧化铝、岩藻土（离子吸引和氢键）非极性：活性炭（范德华力、疏水作用）非极性：活性炭（范德华力、疏水作用）最最广广泛泛最最有有效效：羟羟基基磷磷灰灰石石（hydroxyapatite)hydroxyapatite)，即即结结晶晶磷磷酸酸钙钙CaCa1010（POPO4 4）6 6（OHOH）2 2，可可分分离离蛋蛋白白质质、核核酸酸，与

28、与DNADNA的亲和力最高的亲和力最高层析介质：苯基琼脂糖（层析介质：苯基琼脂糖（phenyl-sephadex)phenyl-sephadex)辛基琼脂糖辛基琼脂糖(octa-sephadex)(octa-sephadex)洗脱：洗脱：低盐高低盐高pHpH 非离子型去污剂（非离子型去污剂（triton x-100)triton x-100)脂肪醇（丁醇、乙二醇）脂肪醇（丁醇、乙二醇）11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省（五）利用对配体的特异生物学亲和力的纯（五）利用对配体的特异生物学亲和力的纯化方法化方法配基：配基：酶酶的的底底物物、辅辅酶酶、抑抑制制剂剂、效效应应物物

29、及及其其结结构构类类似似物物，激激素素与与受受体体蛋蛋白白，抗抗原原与与抗抗体体，生生物物素素与与亲亲和和素素（抗抗亲亲和和素素蛋蛋白白），凝凝集集素。素。免疫亲和层析免疫亲和层析凝集素亲和层析凝集素亲和层析金属螯和层析金属螯和层析染料配体层析染料配体层析楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定（一）蛋白质含量测定（一）蛋白质含量测定

30、总蛋白含量分析：总蛋白含量分析：凯凯氏氏定定氮氮法法、Folin-Folin-酚酚法法（LowryLowry法法）、双双缩缩脲脲法法、考考马马斯斯亮蓝法、紫外吸收法。亮蓝法、紫外吸收法。特定蛋白组分的含量分析：特定蛋白组分的含量分析：酶和激素等：酶活性或激素活性表示（比活性）酶和激素等：酶活性或激素活性表示（比活性）其它蛋白：抗原抗体反应其它蛋白：抗原抗体反应(western blot)(western blot)楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学

31、系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省楚雄师范学院化学与生命科学系楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国范树国11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省（二）纯度鉴定（均一性）（二）纯度鉴定（均一性）基本手段：基本手段：电泳分析：单条带。电泳分析：单条带。N N端测定：端测定：1 1种种N N端氨基酸。端氨基酸。选选用用手手段段：沉沉降降分分析析、溶溶解解度度分分析析、结结晶晶分分析析（能能结结晶晶的的一一般般比较纯，具有活性）比较纯，具有活性）其它鉴定工作：其它鉴定工作：1.1.分子量的测定；分子量的测定；2.2.等电点测定；等电点测定；3.

32、N-3.N-末端末端AAAA测定；测定；4.C-4.C-末端末端AAAA的测定（肼解法）；的测定（肼解法）；5.5.分分子子中中糖糖链链：血血球球凝凝集集反反应应；糖糖蛋蛋白白电电泳泳（甲甲苯苯胺胺兰兰、R R山兰、山兰、schiffschiff试剂）；试剂）；糖组分分析（层析、液相色谱）糖组分分析（层析、液相色谱）6.6.含脂成分：苏丹黑预染、电泳。含脂成分：苏丹黑预染、电泳。7.7.光吸收：全波长扫描。找出它的吸收峰位置和最大吸收值。光吸收：全波长扫描。找出它的吸收峰位置和最大吸收值。8.AA8.AA组分分析。组分分析。11/24/2022台州学院生命科学与医药化工学院 柯世省此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢