ABO血型鉴定试验.ppt

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1、 ABO血型鉴定试验吉林省临床输血质量控制中心吉林大学中日联谊医院输血科血样本血样本ABO血型鉴定试验ABO血型鉴定试验ABO血型鉴定试验ABO血型鉴定试验ABO血型鉴定试验红细胞悬液制备红细胞悬液制备抗凝或不抗凝的血标本抗凝或不抗凝的血标本洗涤洗涤压积红细胞压积红细胞配制红细胞悬液配制红细胞悬液2-3%2-3%的红细胞悬液的红细胞悬液 试管法血型鉴定、效价滴定试管法血型鉴定、效价滴定5%5%的红细胞悬液的红细胞悬液 玻片法血型鉴定、间接玻片法血型鉴定、间接抗抗人球蛋白试验人球蛋白试验10%10%的红细胞悬液的红细胞悬液 抗体亲和力测定抗体亲和力测定血清标本血清标本抗凝或不抗凝血标本抗凝或不抗

2、凝血标本3737水浴箱水浴箱玻棒玻棒使血块与使血块与 试管壁分离试管壁分离离心离心将血清吸至干净试管待用将血清吸至干净试管待用ABO血型鉴定血型鉴定原理：原理：根据根据ABO血型的分型原则及其独特的性质，利血型的分型原则及其独特的性质，利 用凝集试验技术通过正定型（红细胞定型）和反定用凝集试验技术通过正定型（红细胞定型）和反定 型（血清定型）两组试验可准确鉴定型（血清定型）两组试验可准确鉴定ABO血型。血型。试剂：试剂：抗抗A、抗、抗B 试剂血清试剂血清A型、型、B型和型和O型试剂红细胞悬液型试剂红细胞悬液2-3%受检者红细胞悬液和血清或全血受检者红细胞悬液和血清或全血ABO血型鉴定试验方法：

3、方法：玻片法玻片法 不适于血清抗体鉴定不适于血清抗体鉴定试管法试管法 正定型、反定型正定型、反定型结果解释结果解释凝集为阳性凝集为阳性 即被检红细胞膜上有与该试剂血清抗体相对即被检红细胞膜上有与该试剂血清抗体相对应的抗原；或被检血清中有与该试剂红细胞抗原应的抗原；或被检血清中有与该试剂红细胞抗原相对应的抗体。相对应的抗体。不凝集为阴性不凝集为阴性加试剂抗体血清加试剂抗体血清ABO血型鉴定试验加被检红细胞悬液加被检红细胞悬液ABO血型鉴定试验离心离心ABO血型鉴定试验相对应的抗原抗体反相对应的抗原抗体反应应ABO血型鉴定试验观察结果观察结果ABO血型鉴定试验 ABO血型判断血型判断 血血 正定型

4、正定型 反定型反定型 型型 抗抗-A 抗抗-B AC BC OC A +B +O +AB +ABO血型鉴定试验思考题思考题ABO血型的分类原则是什么？血型的分类原则是什么？A BO 血血型型的的分分类类原原则则是是根根据据红红细细胞胞膜膜上上所所存存在在的的抗抗原原，血血清清中中所所存存在在的的抗抗体体来来进进行行分分类类的的。通通常常使使用用抗抗-A 和和抗抗B 两两种种血血清清及及 A 型型、B 型型和和 O 型型三三种种试试剂剂红红细细胞胞来来鉴鉴别别。如如受受检检者者红红细细胞胞被被抗抗血血清清凝凝集集，说说明明红红细细胞胞膜膜上上存存在在相相应应的的抗抗原原；如如不不发发生生凝凝集集

5、说说明明不不存存在在相相应应抗抗原原；如如受受检检者者血血清清与与试试剂剂红红细细胞胞发发生生凝凝集集，说说明明血血清清中中存存在在相相应应的的抗抗体体；如不发生凝集，说明不存在相应抗体。如不发生凝集，说明不存在相应抗体。ABO血型鉴定试验为什么为什么ABO血型鉴定应采用血型鉴定应采用“正反定型正反定型”两种方法？两种方法？因因为为 ABO 血血型型鉴鉴定定,主主要要依依据据受受检检者者红红细细胞胞与与抗抗A、抗抗B 试试剂剂血血清清反反应应结结果果确确定定,此此法法称称正正定定型型法法；也也可可通通过过受受检检者者的的血血清清与与A型型、B型型和和O型型试试剂剂红红细细胞胞反反应应结结果果确

6、确定定,此此法法称称反反定定型型法法，同同时时采采用用正正反反定定型型法法,并互相核对其结果是否一致是一个可靠的血型鉴定法。并互相核对其结果是否一致是一个可靠的血型鉴定法。为什么在反定型中使用为什么在反定型中使用O型红细胞？型红细胞？因为有些受血者或供血者血清中存在因免疫、妇女妊娠或不当输血而因为有些受血者或供血者血清中存在因免疫、妇女妊娠或不当输血而引起的抗引起的抗A、抗抗B以外的抗体，这些抗体不是自然所期望存在的。血以外的抗体，这些抗体不是自然所期望存在的。血清反定型时，使用清反定型时，使用O型红细胞可在型红细胞可在 ABO 血型鉴定试验过程中检测出血型鉴定试验过程中检测出受检血清中是否有

7、受检血清中是否有“不规则不规则”抗体的存在。抗体的存在。ABO血型鉴定试验为什么红细胞悬液过浓或过淡均可出现假阴性反应结果？为什么红细胞悬液过浓或过淡均可出现假阴性反应结果？因因为为抗抗原原、抗抗体体在在适适当当的的比比例例下下，反反应应最最强强。若若红红细细胞胞悬悬液液过过浓浓，则则抗抗原原过过剩剩，抗抗体体不不足足，每每个个红红细细胞胞均均只只能能吸吸收收少少量量抗抗体体，不不足足以以形形成成凝凝集集。若若红红细细胞胞悬悬液液过过淡淡，则则红红细细胞胞间间距距离离较较大大，不不易易集集聚聚在在一一起起，不不形形成成凝凝集集。在在实实际际血血型型鉴鉴定定时时，玻玻片片法法用用 5%红红细细胞

8、胞悬悬液液敏敏感感性性较较强强，并并应应在在鉴鉴定定过过程程中中不不断断摇摇动动玻玻片片以以促促使使其其相相互互接接触触。试试管管法法用用 2%浓度的红细胞悬液浓度的红细胞悬液敏感性较好，容易观察凝集。敏感性较好，容易观察凝集。ABO血型鉴定试验为什么玻片法血型鉴定要严格规定观察结果的时间？为什么玻片法血型鉴定要严格规定观察结果的时间？凝凝集集反反应应出出现现的的快快慢慢与与强强弱弱是是由由抗抗原原抗抗体体的的性性质质决决定定的的,如如果果抗抗原原的的抗抗原原性性强强，抗抗体体效效价价高高，凝凝集集反反应应的的第第一一，第第二二阶阶段段可可以以在在数数秒秒内内完成；如抗原的抗原性弱，抗体效价也

9、低，则凝集反应不明显，完成；如抗原的抗原性弱，抗体效价也低，则凝集反应不明显，反应需要一段时间才能完成。反应需要一段时间才能完成。因因为为血血清清在在空空中中暴暴露露时时间间过过长长，发发生生浓浓缩缩，从从而而使使红红细细胞胞聚聚集集，造造成成假假阳阳性性结结果果；如如果果不不等等反反应应完完成成便便判判定定反反应应结结果果，可可使使阳阳性性结结果果误误报成阴性结果，造成假阴性。所以玻片法血型鉴定要严格规定报成阴性结果，造成假阴性。所以玻片法血型鉴定要严格规定观察结果的时间观察结果的时间凝胶试验使用的试剂和器材凝胶试验使用的试剂和器材凝胶技术凝胶技术凝胶技术凝胶技术凝胶法鉴定凝胶法鉴定ABO血

10、型血型凝胶法鉴定凝胶法鉴定ABO血型血型优点：优点：敏感敏感：在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。结果可保存结果可保存：凝凝胶胶试试验验的的结结果果可可在在冰冰箱箱中中保保存存数数日日，并并且且较较容容易易被被拍成照片。拍成照片。操作技术要求较低操作技术要求较低：凝凝胶胶试试验验的的操操作作主主要要是是简简单单的的加加样样和和判判读读，孵孵育育、离离心心过程都有专门的设备。其中能被人为改变的因素较少。过程都有专门的设备。其中能被人为改变的因素较少。无需洗涤的抗球蛋白试验无需洗涤的抗球蛋白试验：缺缺点点凝凝胶胶试试验验方方法法成成本本较较高高，

11、需需要要特特殊殊设设备备。高高度度敏敏感感有有时也会造成不便。时也会造成不便。ABO血型鉴定试验注意事项1、所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。快放回冰箱保存。2、加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，、加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。以便核实是否漏加血清。3、虽然、虽然IgM抗抗A

12、和抗和抗B与相应红细胞的反应温度以与相应红细胞的反应温度以4最最强，医学教育网收集整理但为了防止冷凝集现象干扰，一强，医学教育网收集整理但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温般在室温2024内进行试验，而内进行试验，而37条件，可使反条件，可使反应减弱。应减弱。4、幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，、幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。最好采用试管法鉴定血型。ABO血型鉴定试验5、玻片法反应时间不能少于玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。出现，造成假阴性。6、正、反定型结果一致才可发报告。、正、反

13、定型结果一致才可发报告。7、反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免、反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗及（或）抗B抗体，可引起假阴抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。性或血型鉴定错误。