实验设备及培养条.ppt

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1、（1 1）掌握组培室的功能布局与设计要求）掌握组培室的功能布局与设计要求（2 2）掌握组培常用的实验仪器设备及使用）掌握组培常用的实验仪器设备及使用（3 3）掌握调控组培的主要环境条件）掌握调控组培的主要环境条件目的要求：目的要求：第二章第二章 实验设备及培养条件实验设备及培养条件第一节第一节 实验室实验室第二节第二节 设备和器材设备和器材第三节第三节 培养条件培养条件第二章第二章 实验设备及培养条件实验设备及培养条件 配配置置室室洗洗涤涤室室接接种种室室培培养养室室观观察察室室组培实验室组培实验室驯驯化化室室第一节第一节 组培实验室组培实验室培养室培养室培养室培养室培养室培养室门门厅厅走廊走

2、廊准备室准备室观察室观察室接种室接种室洗涤室洗涤室 配置室配置室案例案例1 1：实验室平面设计：实验室平面设计配置室配置室灭菌室灭菌室观察室观察室驯化室驯化室走廊走廊洗涤室洗涤室培养室培养室接种室接种室培养室培养室案例案例2 2：实验室构成：实验室构成功能：功能：用于玻璃器具的用于玻璃器具的 清洗、干燥和贮清洗、干燥和贮 存；接种材料冲存；接种材料冲 洗。洗。配备：配备：上下水上下水；水槽水槽；塑料筐；干燥箱；塑料筐；干燥箱；晾干架等。晾干架等。1 1、洗涤室、洗涤室面积：面积：根据规模，可与根据规模，可与配置室合并，一般配置室合并，一般20m2。2.2.配置室配置室功能：功能：用于培养基的配

3、制、试管苗出瓶、用于培养基的配制、试管苗出瓶、清洗。清洗。配备：配备：药品柜，天平，药品柜，天平，工作台，蒸馏水器，磁工作台，蒸馏水器，磁力搅拌器，冰箱，电炉力搅拌器，冰箱，电炉或电饭锅，酸度计，培或电饭锅，酸度计，培养箱养箱设计要求：设计要求：明亮、通风、明亮、通风、洁净。洁净。药品柜药品柜冰箱冰箱天平天平磁磁力力搅搅拌拌器器恒温水浴锅恒温水浴锅酸度计酸度计电蒸馏水器电蒸馏水器水处理中心水处理中心恒温培养箱恒温培养箱电饭锅电饭锅电炉电炉人工气候室人工气候室功能：功能：完成培养基、接种完成培养基、接种工具等的高压灭菌过程。工具等的高压灭菌过程。配备：配备：高压灭菌器或微波高压灭菌器或微波炉，炉

4、，烘干箱。烘干箱。3.3.灭菌室灭菌室4 4、接种室、接种室功能功能：用于植物材料的无菌分离、接种用于植物材料的无菌分离、接种和转移培养物。和转移培养物。结构：结构：缓冲间缓冲间+接种室接种室配备：配备：超净台，工作台，搁架，医用平超净台，工作台，搁架，医用平车，车，细菌过滤器、解剖镜、紫外灯等。细菌过滤器、解剖镜、紫外灯等。面积：面积：一般一般10102020m2设计要求设计要求:地面平坦无缝、顶棚及墙壁密地面平坦无缝、顶棚及墙壁密闭光滑，干爽安静，清洁明亮，配置横闭光滑，干爽安静，清洁明亮，配置横拉门，门窗严密。拉门，门窗严密。超净工作台超净工作台电子灭菌器电子灭菌器臭氧灭菌机臭氧灭菌机5

5、.5.培养室培养室 配备：配备：培养架培养架 边台边台 解剖镜解剖镜 照明设备照明设备 定时器定时器 空调器空调器 干湿温度计干湿温度计 工作台工作台 除湿机除湿机 换气扇换气扇 面积：面积：根据规模定根据规模定 功能：功能：培养植物材料。培养植物材料。5.5.培养室培养室6.6.观察室观察室功能：功能：观察并研究观察并研究培养材料的生长培养材料的生长分化情况及其分化情况及其形态发生规律；检查形态发生规律；检查培养材料是否脱毒和发生变异。培养材料是否脱毒和发生变异。主要配备：主要配备：生物显微镜，切片机，生物显微镜，切片机，酶联免疫检测仪，酶联免疫检测仪，PCRPCR扩增仪等。扩增仪等。要求：

6、要求：室内清洁、明亮、安静，设室内清洁、明亮、安静，设备先进。备先进。7.7.驯化棚室驯化棚室要求：要求：能够控温调湿、控光通风。能够控温调湿、控光通风。面积：面积：据规模来定。据规模来定。注：注：室内驯化与设施下驯化均可。室内驯化与设施下驯化均可。功能：功能：提供组培苗炼苗的环境。提供组培苗炼苗的环境。7.7.驯化棚室驯化棚室第二节设备和器材第二节设备和器材一、玻璃器皿一、玻璃器皿 二、器械用具二、器械用具三、仪器设备三、仪器设备（一）对玻璃器皿要求：（一）对玻璃器皿要求：1.1.耐腐蚀；耐高温、耐腐蚀；耐高温、高压；高压；2.2.透明度好；透明度好；3.3.便于接种。便于接种。三、玻璃器皿

7、三、玻璃器皿三角瓶：三角瓶：5050、100100、250250、500ml500ml或用或用250250mlml罐头瓶罐头瓶代代替。替。培养皿：培养皿：6 6、9 9、12cm12cm试管：试管：1818180mm180mm或或2020200mm200mm量筒：量筒：1010、5050、100100、500500、1000ml1000ml烧杯：烧杯：5050、100100、200200、500500、1000ml1000ml容量瓶：容量瓶：100100、200200、500500、1000ml1000ml试剂瓶（棕色）：试剂瓶（棕色）：5050、100100、250250、500500、10

8、00ml1000ml移液管：移液管：0.20.2、0.50.5、1.01.0、2 2、5 5、1010mlml 微量移液器微量移液器 玻璃棒、酒精灯玻璃棒、酒精灯（二）玻璃器皿的规格：（二）玻璃器皿的规格：1 1、镊子类：、镊子类：接种、转移接种、转移材料或分离茎尖用，以材料或分离茎尖用，以100ml100ml三角瓶为培养瓶，三角瓶为培养瓶，可用可用20cm20cm长。长。二、器械用具二、器械用具二、器械用具二、器械用具2 2、剪刀类：、剪刀类：医用剪刀，剪医用剪刀，剪切割外植体或继代培养时分切割外植体或继代培养时分离材料。离材料。3 3、解剖刀：、解剖刀：切割芽、茎段、切割芽、茎段、愈伤组织

9、等，愈伤组织等，继代时分离继代时分离材料材料，也可用于微小外植也可用于微小外植体的接种等。体的接种等。4 4、解剖针：、解剖针：转移细胞或愈转移细胞或愈伤组织，微茎尖分离及接伤组织，微茎尖分离及接种等。种等。二、器械用具二、器械用具5.5.其它：其它：周转筐周转筐 搪瓷盘搪瓷盘 移液管架移液管架 、玻璃棒、酒精、玻璃棒、酒精灯、试管架等。灯、试管架等。一、仪器设备一、仪器设备1 1、恒温培养箱、恒温培养箱 2 2、烘箱、烘箱 3 3、空调、空调4 4、高压灭菌锅、高压灭菌锅 5 5、冰箱、冰箱 6 6、天平、天平7 7、酸度计、酸度计 8 8、显微镜、显微镜 9 9、水浴锅、水浴锅1010、蒸

10、馏水器、蒸馏水器 1111、磁力搅拌器、磁力搅拌器1212、人工气候室、人工气候室 1313、摇床转床、摇床转床 1414、干燥箱、干燥箱 15.15.细菌过滤器细菌过滤器 第三节培养条件第三节培养条件 1.1.一般控制在一般控制在252252C C。2.2.植株种类及外植体植株种类及外植体的不同，其最适温度的不同，其最适温度也是不同的。如百合也是不同的。如百合2020；月季；月季25252727；番茄；番茄2828。一、温度一、温度二、光照二、光照1.1.光强光强影响外植体细影响外植体细胞的增殖、组织胞的增殖、组织和器官的分化。和器官的分化。有的材料愈伤组织的诱导需光或需暗；有的材料愈伤组织

11、的诱导需光或需暗；光照强，幼苗生长健壮；光照弱，幼光照强，幼苗生长健壮；光照弱，幼苗生长弱小，容易徒长。苗生长弱小，容易徒长。不同波长的光对细胞的分裂和器官的不同波长的光对细胞的分裂和器官的 分化有影响。分化有影响。2.2.光质光质 白光促进小花天竺葵愈伤组织白光促进小花天竺葵愈伤组织 的生长，蓝光则无作用。的生长，蓝光则无作用。如：如：红光促进杨树愈伤组织的生长，红光促进杨树愈伤组织的生长，蓝光阻碍其生长。蓝光阻碍其生长。3.3.光照时间光照时间根据植物生物学特性根据植物生物学特性决定；决定；光照长短对试管内花光照长短对试管内花的形成有重要影响；的形成有重要影响；在胡萝卜组织培养中在胡萝卜组

12、织培养中随着日照长度的增加，随着日照长度的增加，而促进生长。而促进生长。三、湿度三、湿度1.1.瓶内的湿度：瓶内的湿度：主要受到培养基含水量和主要受到培养基含水量和封口膜透性的影响。如培封口膜透性的影响。如培养基过硬，则不利于外植养基过硬，则不利于外植体接触和插入培养基，导体接触和插入培养基，导致生长迟缓；封口膜过于致生长迟缓；封口膜过于透气，也会使瓶内湿度下透气，也会使瓶内湿度下降。降。2.2.环境湿度：环境湿度：过低会使培养基丧失过低会使培养基丧失大量水分，渗透势升大量水分，渗透势升高，影响材料对营养高，影响材料对营养物质的吸收，也会阻物质的吸收，也会阻碍外植体的生长。碍外植体的生长。一一

13、般为般为707080%80%。三、湿度三、湿度1.1.瓶内的湿度瓶内的湿度1.1.培养基适宜培养基适宜PHPH值值5-6.55-6.5，一般为，一般为5.85.8，调整用调整用0.1M0.1M的的NaOH和和HCl溶液溶液 。四、四、pHpH值值2.2.H H影响培养基的硬度。影响培养基的硬度。H H 6.5 6.5 培养基会变硬；培养基会变硬；H H 5.0 5.0 培养基不易凝固。培养基不易凝固。3.3.灭菌之前，培养基的灭菌之前，培养基的H H要比标准提高要比标准提高0.20.20.30.3个单位。个单位。五、气体五、气体(必要条件必要条件)1.1.培养瓶内氧气的培养瓶内氧气的充足与否与

14、封口材充足与否与封口材料有关。料有关。可用棉塞或特制的可用棉塞或特制的封口塑料。通气最封口塑料。通气最好的是棉塞，但棉好的是棉塞，但棉塞易使培养基干燥，塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。夏季易引起污染。2.2.培养基内氧气充足与否与培养基培养基内氧气充足与否与培养基的种类和培养方式有关。的种类和培养方式有关。固体培养基可加进活性炭来增加固体培养基可加进活性炭来增加 通气度通气度,以利于发根。以利于发根。液体培养时，可考虑采取振荡培液体培养时，可考虑采取振荡培 养的方式，以增加通气性养的方式，以增加通气性。五、气体五、气体(必要条件必要条件)2.2.个大气压以上个大气压以上就对生长有阻碍作就对生长有阻碍作用，用，5 5个大气压个大气压生长就完全停止，生长就完全停止，个大气压细胞就个大气压细胞就不能生存。不能生存。六、渗透压六、渗透压1.1-21.1-2个大气压促进生长。个大气压促进生长。复习思考题：复习思考题：1.1.你认为组培实验室在规划布局上应你认为组培实验室在规划布局上应考虑哪些问题？并尝试设计考虑哪些问题？并尝试设计1 1个组培个组培实验室。实验室。2.2.按类别列举组培实验室所需设备按类别列举组培实验室所需设备 3.3.如何理解温度、光照条件对组培的如何理解温度、光照条件对组培的影响？影响？