实训四微生物细胞数的计数.ppt

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1、实训四微生物细胞数的计数 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望 使用血球计数板计数单细胞微生使用血球计数板计数单细胞微生物的数量。物的数量。一、实验目的一、实验目的 血球计数板是一块比普通载玻片厚的特血球计数板是一块比普通载玻片厚的特制玻片制制玻片制成。玻片中央刻有四条槽，中央两成。玻片中央刻有四条槽，中央两条槽之间的平面比其它平面略低，中央有一条槽之间的平面比其它平面略低，中央有一小槽，槽的两边的平面上各刻有小槽，槽的两边的平面上各刻有9 9个大方格。

2、个大方格。中间的一个大方格为计数室，它的长、宽各中间的一个大方格为计数室，它的长、宽各为为1mm1mm，深度为，深度为0.1mm,0.1mm,容积为容积为0.1mm0.1mm3 3。计数室。计数室有两种规格，一种是把大方格分成有两种规格，一种是把大方格分成1616个中格，个中格，每一中格分成每一中格分成2525小格，共计小格，共计400400小格；另一种小格；另一种规格是把大方格分成规格是把大方格分成2525中格，每一中格分成中格，每一中格分成1616小格，总共也是小格，总共也是400400小格。小格。二、实验原理二、实验原理血细胞血细胞血细胞血细胞计数板计数板计数板计数板正面、正面、正面、正

3、面、侧面与侧面与侧面与侧面与正面方正面方正面方正面方格放大格放大格放大格放大示意图示意图示意图示意图 因此，在计算上可按下列两种公式进行：因此，在计算上可按下列两种公式进行：1.16251.1625计数板的计算：计数板的计算：细胞数细胞数/mL=/mL=（100100小格内的细胞数小格内的细胞数/100/100）400 10000 400 10000 稀释倍数稀释倍数 2.25X162.25X16计数板的计算：计数板的计算：细胞数细胞数/mL=/mL=（8080小格内的细胞数小格内的细胞数/80/80）400 10000 400 10000 稀稀释倍数释倍数 式中，式中，400400为计数板的

4、小格总数；为计数板的小格总数；1000010000为由计数室为由计数室0.1mm0.1mm3 3换算成换算成lmLlmL体积的体积的系数系数二、实验原理二、实验原理1.1.材料材料 酵母菌悬液酵母菌悬液2.2.用具用具 显微镜、血球计数板显微镜、血球计数板三、实验材料和用具三、实验材料和用具四、实验方法四、实验方法 1.1.取清洁干燥的血球计数板，在计数室取清洁干燥的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。在显微镜下找到计数室。上面加盖玻片。在显微镜下找到计数室。2.2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴边缘滴一小滴(不宜过多不宜过多)。菌液可自行渗。菌液可

5、自行渗入计数室。计数室不得有气泡，然后置高入计数室。计数室不得有气泡，然后置高倍镜下计数。倍镜下计数。3.3.3.3.样品浓度要求每小格内有样品浓度要求每小格内有样品浓度要求每小格内有样品浓度要求每小格内有5 5 5 510101010个菌体为宜。个菌体为宜。个菌体为宜。个菌体为宜。4.4.4.4.计数时，用计数时，用计数时，用计数时，用1625162516251625的计数板要按对角线方位，的计数板要按对角线方位，的计数板要按对角线方位，的计数板要按对角线方位，取左上、左下、右上，右下四个中方格取左上、左下、右上，右下四个中方格取左上、左下、右上，右下四个中方格取左上、左下、右上，右下四个中

6、方格(即即即即100100100100小格小格小格小格)计数酵母菌液，用计数酵母菌液，用计数酵母菌液，用计数酵母菌液，用2516251625162516的计数板，除的计数板，除的计数板，除的计数板，除计数上述对角线的四个方格外，还需数中央一计数上述对角线的四个方格外，还需数中央一计数上述对角线的四个方格外，还需数中央一计数上述对角线的四个方格外，还需数中央一个方格的酵母菌数个方格的酵母菌数个方格的酵母菌数个方格的酵母菌数(即即即即80808080小格小格小格小格)。四、实验方法四、实验方法5.5.每个样品重复计数每个样品重复计数2 23 3次，取其平均值，次，取其平均值，按上述公式计算每毫升菌

7、液所含的酵母细按上述公式计算每毫升菌液所含的酵母细胞数。胞数。6.6.计数完毕，将计数板在水龙头上冲洗，切计数完毕，将计数板在水龙头上冲洗，切勿用硬物洗刷，自行晾干或吹风机吹干，勿用硬物洗刷，自行晾干或吹风机吹干，或用擦镜头纸轻轻擦拭。或用擦镜头纸轻轻擦拭。四、实验方法四、实验方法 使用血球计数板对样品酵母菌液进行计使用血球计数板对样品酵母菌液进行计数，并计算菌液浓度。数，并计算菌液浓度。五、实验内容五、实验内容 将微生物计数的结果填入下列空白将微生物计数的结果填入下列空白1.1.第一次计数的酵母细胞数目第一次计数的酵母细胞数目 个。个。2.2.第二次计数的酵母细胞数目第二次计数的酵母细胞数目 个。个。3.3.从两次的计数结果中求出酵母细胞的平均数目从两次的计数结果中求出酵母细胞的平均数目4.4.稀释倍数稀释倍数 倍。倍。5.5.求出每毫升酵母菌液中的细胞数求出每毫升酵母菌液中的细胞数 个。个。六、实验报告六、实验报告七、思考题七、思考题 1.1.为什么两种不同规格的血球计数板测为什么两种不同规格的血球计数板测定同一样品时，其结果是一样的？定同一样品时，其结果是一样的？2.2.使用细胞计数板应注意什么问题使用细胞计数板应注意什么问题?