实验一、细胞形态结构的观察和普通光学显微镜的使用.ppt

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1、实验一、细胞形态结构的观察和普通光学显微镜的使用 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望基础知识基础知识显微镜概述：显微镜概述：显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。1.1.光学显微镜光学显微镜 普通生物显微镜

2、由普通生物显微镜由3 3部分构成：部分构成：照明系统：包括光源和聚光器。照明系统：包括光源和聚光器。光学放大系统：由物镜和目镜组成，光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体。是显微镜的主体。机械装置：用于固定材料和观察方便，机械装置：用于固定材料和观察方便，包括镜台包括镜台(载物台载物台)、调节器和、调节器和、物镜转换器物镜转换器(旋转器旋转器)等。等。尼康E-600显微镜 2.荧光显微镜 尼康E800荧光DIC显微镜 荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）3.3.激光共聚激光共聚焦扫描显微镜焦扫描显微镜 LCSM照片蓝色为细胞核，绿色为微管 4.暗视野显微镜 暗视野显微镜（da

3、rk field microscope）的聚光镜中央有当光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。5.相差显微镜 一种介壳虫的染色体 6.偏光显微镜偏光显微镜 偏光显微镜（偏光显微镜（polarizing microscopepolarizing microscope）用于检测具有双折射性的物）用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。7.7.微分干涉差显微镜微分干涉差显微镜 DICDI

4、C显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。DIC显微镜下的硅藻（伪彩色）8.倒置显微镜 9.透射电子显微镜 JEM-1011透射电子显微镜 莱卡超薄切片机 内质网透射电镜图（伪彩色）内质网透射电镜图（伪彩色）冰冻蚀刻电镜照片冰冻蚀刻电镜照片 10.扫描电子显微镜 JEOLJEOL扫描电子显微镜扫描电子显微镜 人类血细胞SEM照片 11.显微操作技术 尼康尼康NT-88NENT-88NE显微操作显微操作/注

5、射仪注射仪 显微镜的分辨率显微镜的分辨率:也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离，也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离，分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨 距离来表示的。距离来表示的。其计算公式为其计算公式为:D=0.61:D=0.61入入/NA NA=n sina/2/NA NA=n sina/2 式中式中D D为分辨率，为分辨率，A A为光波波长，为光波波长，NANA为物镜的数值孔径为物镜的数值孔径(镜口率镜口率)。在在物物镜镜上上，有有镜镜口口率率(N.A.)(N.A.)的的标标志志，它它反反应应该该镜镜头头

6、分分辨辨力力的的大大小小，其其数数字字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：物镜物镜 镜口率镜口率(N.A.)(N.A.)工作距离工作距离(mm)(mm)10 0.25 5.40 10 0.25 5.40 40 0.65 0.39 40 0.65 0.39 100 1.30 0.11 100 1.30 0.11显微镜的总放大倍数显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积，公式为:M=K1xK2 焦点深度焦点深度:显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的 上下两侧也能看清楚两

7、侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全 厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。厚标本和薄标本厚标本和薄标本厚标本和薄标本厚标本和薄标本4-5 um4-5 um2um2um基础知识基础知识三三.实验步骤实验步骤(一一)显微镜的使用显微镜的使用1.观察前的准备工作 (1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要双 眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。(2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备好。(3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整 和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透

8、 镜进行必要的清洁工作。然后进行合轴调节。瞳瞳 距距 调调 节节2.2.显微镜的调节显微镜的调节屈屈 光光 度度 调调 节节调节调节粗粗 调调 松松 紧紧 调调 节节 旋旋 钮钮聚聚 光光 镜镜 中中 心心 调调 节节 光轴中心调节光轴中心调节光轴中心调节光轴中心调节螺钉螺钉螺钉螺钉 视场视场视场视场光栏光栏光栏光栏 孔径孔径孔径孔径光栏光栏光栏光栏10X10X10X10X物物物物镜镜镜镜 标标标标本本本本 聚光镜升降聚光镜升降聚光镜升降聚光镜升降旋钮旋钮旋钮旋钮孔径光栏调节孔径光栏调节N.A聚=(0 0.6-06-0.8 8)N.A物孔径光栏开度与图象孔径光栏开度与图象100%70%30%孔

9、径光栏的运用孔径光栏的运用操作步骤如下操作步骤如下:(1 (1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可如果可变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。(2)(2)载物台上放置观察标本，把聚光器上升到它上端透镜平载物台上放置观察标本，把聚光器上升到它上端透镜平面稍低于载物台平面的高度，并将它的可变光

10、栏开到最大，用低面稍低于载物台平面的高度，并将它的可变光栏开到最大，用低倍物镜，进行调焦到能看见标本，可调反射镜使视野得到最亮和倍物镜，进行调焦到能看见标本，可调反射镜使视野得到最亮和最均匀最均匀 的照明，或把光栏关小，最亮的照明区正处在视野的中央。的照明，或把光栏关小，最亮的照明区正处在视野的中央。(3)(3)转到高倍镜，并调焦到看清标本，然后去掉标本，拔出转到高倍镜，并调焦到看清标本，然后去掉标本，拔出目镜，眼睛直接向镜筒观察，并把可变目镜，眼睛直接向镜筒观察，并把可变 光栏关小，看其亮点是否光栏关小，看其亮点是否在视野中心，如果不是，就要转动聚光器的调节螺旋，把亮点调在视野中心，如果不是

11、，就要转动聚光器的调节螺旋，把亮点调到视野中到视野中 央，再慢慢开启可变光栏，使视野看到光栏边缘和聚光央，再慢慢开启可变光栏，使视野看到光栏边缘和聚光镜的边缘相接为止。镜的边缘相接为止。3.观察操作：观察操作：(1)(1)低、高倍镜的使用低、高倍镜的使用:先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片0.5cm0.5cm处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时，到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时，

12、把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高倍物镜，把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高倍物镜，然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。(2)(2)兔肝细胞苏木精兔肝细胞苏木精-伊红伊红(HE)(HE)染色玻片标本的观察染色玻片标本的观察 先在干燥系物镜下观察肝小叶的概况，辨认肝细胞，然后用油镜仔先在干燥系物镜下观察肝小叶的概况，辨认肝细胞，然后用油镜仔细观察肝细胞的显微结构。注意肝细胞的形状，细胞核和核仁的形状和细观察肝细胞的显微结构。注意肝细胞的形状，细胞核和核仁的形状和数量，细胞核和细胞质的染色区别等。数量，细胞核和细胞质的染色区别等。四四.注意事项注意事项1.1.低、高倍镜的使用。低、高倍镜的使用。2.2.合轴调节。合轴调节。五五.实验结果实验结果1.1.描绘一个兔肝细胞的基本形态结构。描绘一个兔肝细胞的基本形态结构。2.2.熟练显微镜的调节。熟练显微镜的调节。六六.思考题思考题 比较真核细胞和原核细胞的形态结构及其区别。比较真核细胞和原核细胞的形态结构及其区别。