微生物的培养基.ppt

《微生物的培养基.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物的培养基.ppt（30页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、第三节第三节 微生物的培养基微生物的培养基一、培养基的概念一、培养基的概念二、培养基的配制原则二、培养基的配制原则三、培养基的类型及应用三、培养基的类型及应用四、培养基的配制过程四、培养基的配制过程重点重点:掌握培养基的概念、配制原则和类型。掌握培养基的概念、配制原则和类型。难点难点：学习选择和配制培养基：学习选择和配制培养基一、培养基的概念一、培养基的概念 培养基：培养基：按照微生物生长繁殖所需要的，按照微生物生长繁殖所需要的，用人工方法配制而成的适合于微生物生长繁殖或产生用人工方法配制而成的适合于微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。代谢产物的营养基质。用途用途：1.1.促进特定微生物的

2、生长繁殖。促进特定微生物的生长繁殖。2.2.用于微生物纯种的分离、鉴定。用于微生物纯种的分离、鉴定。3.3.制造微生物制品。制造微生物制品。实现有效控制微生物生长繁殖前提条件是：实现有效控制微生物生长繁殖前提条件是：合理配制培养基合理配制培养基培养基应具有的条件：培养基应具有的条件：1.1.含含有有满满足足微微生生物物生生长长发发育育的的水水分分、碳碳源源、氮氮源源、生生长长因因子子及及基基本本的的离离子子（磷磷、硫硫、钠钠、钙钙、镁镁、钾钾、铁）及各种微量元素。铁）及各种微量元素。2.2.具有适宜的酸碱度具有适宜的酸碱度(PH)(PH)。3.3.具具有有一一定定的的缓缓冲冲能能力力及及一一定

3、定的的氧氧化化还还原原电电位位和和合合适的渗透压。适的渗透压。一、配制培养基的原则一、配制培养基的原则1.选择适宜的营养物质选择适宜的营养物质 根据不同微生物的营养需要配制根据不同微生物的营养需要配制不同不同的培养基。的培养基。如：自养、异养如：自养、异养 细菌细菌-牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨(普通肉汤普通肉汤)培养基；培养基；放线菌放线菌-高氏高氏1 1号合成号合成培养基；培养基；酵母菌酵母菌-麦芽汁麦芽汁培养基，培养基，马铃薯蔗糖马铃薯蔗糖 霉菌霉菌-查氏查氏培养基，培养基，马铃薯蔗糖马铃薯蔗糖2.2.控制营养物质浓度及配比控制营养物质浓度及配比合适合适（1 1）营养物的浓度）营养物的浓度

4、浓度大浓度大-抑制抑制作用，作用，如高糖，盐；如高糖，盐；浓度小浓度小-不能满足不能满足微生物生长的需要。微生物生长的需要。（2 2）营养物质配比）营养物质配比-影响微生物生长繁殖和代谢产物积累。影响微生物生长繁殖和代谢产物积累。碳氮比碳氮比（C/N=C/N=碳元素碳元素与与氮氮元素元素）碳源过多碳源过多-抑制作用；抑制作用；碳源过少碳源过少-菌种衰老和自溶菌种衰老和自溶 氮源过多氮源过多菌体生长旺盛，积累代谢产物少。菌体生长旺盛，积累代谢产物少。氮源过少氮源过少-菌体生长繁殖缓慢。菌体生长繁殖缓慢。谷氨酸发酵谷氨酸发酵：C/N=4:lC/N=4:l时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少。时，菌体大量

5、繁殖，谷氨酸积累少。C/N=3:1 C/N=3:1时，菌体繁殖受抑制，谷氨酸大量增加。时，菌体繁殖受抑制，谷氨酸大量增加。正常正常:细菌细菌：C:N=6:1 C:N=6:1 真菌真菌：C:N=10:1C:N=10:1 3.3.控制控制PHPH值值 各类微生物生长的最适各类微生物生长的最适pHpH各不相同。各不相同。细细 菌：菌：7 77.57.5 放线菌：放线菌：7.87.88.08.0 酵母菌、霉菌：酵母菌、霉菌：4.54.5 6.06.0 生长和代谢生长和代谢-改变培养基改变培养基pHpH。维持维持pHpH值的恒定方式值的恒定方式：在在培培养养基基里里加加PHPH缓缓冲冲剂剂(6.4(6.

6、47.27.2)或或不不溶溶性性的的碳酸盐。碳酸盐。磷酸二氢钾磷酸二氢钾(碱性碱性)或磷酸氢二钾或磷酸氢二钾(酸性酸性)PH=6.8PH=6.8（CaCO3）4.4.原料来源的选择原料来源的选择 微生物学实验微生物学实验-便于观察实验现象便于观察实验现象 原料原料：选择易加工，使用方便的原料。选择易加工，使用方便的原料。碳源碳源-试剂纯葡萄糖、蔗糖、淀粉等。试剂纯葡萄糖、蔗糖、淀粉等。氮源氮源-蛋白胨、牛肉膏、酵母膏。蛋白胨、牛肉膏、酵母膏。发酵生产发酵生产 原料原料-廉价且易于获得的原料廉价且易于获得的原料 生产酱油生产酱油：碳源碳源:麸皮麸皮 氮源氮源:豆粕豆粕。甲烷发酵甲烷发酵废水、废渣

7、废水、废渣;人畜粪便及禾草人畜粪便及禾草 常用的发酵工业原料常用的发酵工业原料：麸皮：麸皮 、米糠、玉米浆、酵、米糠、玉米浆、酵母浸膏、酒糟、豆饼、花生饼等。母浸膏、酒糟、豆饼、花生饼等。.选择适宜的灭菌处理方法选择适宜的灭菌处理方法 获得纯种微生物，必须避免杂菌污染，获得纯种微生物，必须避免杂菌污染，需对所用器材和工作场所进行消毒与灭菌。需对所用器材和工作场所进行消毒与灭菌。培养基培养基:高压蒸汽高压蒸汽1.05kg/cm1.05kg/cm2 2(121.3(121.3，151530min30min）不耐热含糖培养基不耐热含糖培养基:0.56kg/cm:0.56kg/cm2 2(112.6,

8、15(112.6,1530min)30min)对糖要求较高的可用对糖要求较高的可用过虑除菌过虑除菌或或间歇灭菌间歇灭菌。高温灭菌（磷酸盐、碳酸盐与钙、镁铁离子）易产高温灭菌（磷酸盐、碳酸盐与钙、镁铁离子）易产生沉淀的需加入螯合剂生沉淀的需加入螯合剂EDTA(EDTA(乙二胺四乙酸乙二胺四乙酸)对于不同种类的培养基、内含不同杂菌的器具和对于不同种类的培养基、内含不同杂菌的器具和场所等应当采用不同的灭菌方法。场所等应当采用不同的灭菌方法。配制培养基的原则配制培养基的原则1.1.选择适宜的营养物质选择适宜的营养物质2.2.营养物质的浓度及配比合适营养物质的浓度及配比合适3.3.控制培养基的控制培养基

9、的PHPH值值4.4.原料来源的选择原料来源的选择5.5.选择适宜的灭菌处理方法选择适宜的灭菌处理方法二、培养基的种类及应用二、培养基的种类及应用1.分类原因分类原因(1)(1)微生物种类不同，需要的营养物质不同。微生物种类不同，需要的营养物质不同。(2)(2)同一种微生物，培养或研究目的不同，配制的同一种微生物，培养或研究目的不同，配制的培养基也不同。培养基也不同。2.分类角度分类角度按按组成成分组成成分分：合成、天然、半合成培养基分：合成、天然、半合成培养基按按物理状态物理状态分：固体、半固体、液体培养基。分：固体、半固体、液体培养基。按按功能功能分：基础、选择、加富、鉴别培养基。分：基础

10、、选择、加富、鉴别培养基。按照培养按照培养微生物微生物的种类分：细菌、霉菌、酵母菌、的种类分：细菌、霉菌、酵母菌、放线菌培养基。放线菌培养基。（一）根据培养基成分（一）根据培养基成分1.1.合成培养基合成培养基 又又称称限限定定性性培培养养基基，指指由由化化学学成成分分的的营营养养物物质质（已已知知营营养养物物质质的的成成分分的的化化学学性性质质和和数数量量）配配制制而而成成的培养基的培养基。优点优点:化学成分精确、重复性强化学成分精确、重复性强。缺点缺点:配制过程复杂，微生物生长较慢，价格昂贵。配制过程复杂，微生物生长较慢，价格昂贵。应应用用：实实验验室室内内，研研究究微微生生物物营营养养、

11、代代谢谢、菌菌种种选选育育、菌种鉴定、生物测定等定量要求较高的研究。、菌种鉴定、生物测定等定量要求较高的研究。2.2.天然培养基天然培养基 又称复杂培养基，采用动植物组织或微生物细胞又称复杂培养基，采用动植物组织或微生物细胞或其提取物和粗消化产物制成的。或其提取物和粗消化产物制成的。营养物质来源于天然物质。营养物质来源于天然物质。天然物质：天然物质：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、麦芽汁、玉米粉、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、麦芽汁、玉米粉、马铃薯、牛奶和血清等。马铃薯、牛奶和血清等。蒸熟的马铃薯、豆芽汁、麦芽汁蒸熟的马铃薯、豆芽汁、麦芽汁-霉菌、酵母菌霉菌、酵母菌 普通牛肉汤、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨等普通

12、牛肉汤、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨等-细菌细菌。优点优点：配制方便，营养丰富，：配制方便，营养丰富，价格低廉。价格低廉。缺点缺点：成分不稳定，营养成分难以控制，结果复重性差。：成分不稳定，营养成分难以控制，结果复重性差。应用应用：生产上大规模培养菌种。：生产上大规模培养菌种。3.3.半合成培养基半合成培养基 即有天然有机物，又有已知成分化学药品的培养基即有天然有机物，又有已知成分化学药品的培养基。在天然培养基的基础上适当加入无机盐类或在合在天然培养基的基础上适当加入无机盐类或在合成培养基的基础上添加某些有机物。成培养基的基础上添加某些有机物。如如马铃薯蔗糖马铃薯蔗糖培养基培养基。马铃薯蔗糖培养基成

13、分马铃薯蔗糖培养基成分:去皮马铃薯去皮马铃薯200200克，葡萄糖克，葡萄糖2020克，水克，水1000mL.1000mL.优点优点：有效地满足微生物对营养物质的要求，适：有效地满足微生物对营养物质的要求，适合大多数微生物。合大多数微生物。应用应用：生产上、实验室：生产上、实验室（二）（二）根据培养基的物理状态分根据培养基的物理状态分 1.1.固体培养基固体培养基 在在液液体体培培养养基基中中加加入入凝凝固固剂剂（1.51.52.0%2.0%的的琼琼脂脂），使使液液体体培培养养基基凝凝固固呈呈固固体体状状态态，或或直直接接由由天天然然的的固固体体营养物质制成的培养基，营养物质制成的培养基，如白

14、酒、固体食醋生产。如白酒、固体食醋生产。用途用途：分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等。凝固剂凝固剂：琼脂、明胶和硅胶三种。：琼脂、明胶和硅胶三种。凝固剂凝固剂要求要求:不被微生物利用分解，生长温度范围为固体。不被微生物利用分解，生长温度范围为固体。凝固点温度不能太低。琼脂凝固点温度不能太低。琼脂:96:96，45 无毒，灭菌不会破坏。无毒，灭菌不会破坏。透明及粘着力强。透明及粘着力强。配制方便；便宜。配制方便；便宜。2.2.半固体培养基半固体培养基 在液体培养基中加入少量凝固剂在液体培养基中加入少量凝固剂,使之呈柔软的糨使之呈柔软的糨糊状或直接将营养物质配制成半流

15、体状态的培养基。糊状或直接将营养物质配制成半流体状态的培养基。凝固剂加量凝固剂加量：0.2%0.2%0.7%0.7%的琼脂。的琼脂。应用应用:观察细菌的观察细菌的运动特征运动特征(有无鞭毛有无鞭毛)、培养微好氧培养微好氧细菌，检验噬菌体。细菌，检验噬菌体。小曲白酒小曲白酒-边糖化边发酵、酱油边糖化边发酵、酱油-高盐稀醪发酵高盐稀醪发酵 3.3.液体培养基液体培养基 把各种把各种营养物质营养物质都溶解于都溶解于水水中，中，混合混合制成的制成的液液体体状态的培养基。状态的培养基。培养基中培养基中不加任何凝固剂。通过振荡和搅拌增加通不加任何凝固剂。通过振荡和搅拌增加通气量。气量。特点：特点：成分均匀

16、，便于灭菌处理、运输和监测。成分均匀，便于灭菌处理、运输和监测。应用：应用：微生物生理生化特性研究、大规模的工业生微生物生理生化特性研究、大规模的工业生产（产（啤酒、葡萄酒、乳制品生产啤酒、葡萄酒、乳制品生产）。（三）按照培养基的功能分（三）按照培养基的功能分 (1)(1)基础培养基基础培养基:含有一般微生物生长繁殖所需的含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基。基本营养物质的培养基。用途用途:作为一些特殊培养基的基础成分。作为一些特殊培养基的基础成分。细菌细菌:牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 霉菌霉菌:马铃薯葡萄糖琼脂培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基 酵母菌酵母菌:麦芽汁琼脂培养基

17、麦芽汁琼脂培养基 (2)(2)选择培养基选择培养基 在培养基中加入某些在培养基中加入某些化学药品化学药品以以抑制抑制不需要的微不需要的微生物生长，而生物生长，而促进促进需要的微生物生长的培养基。需要的微生物生长的培养基。化学药品化学药品-抑菌剂和杀菌剂抑菌剂和杀菌剂 常用染色剂常用染色剂（结晶紫、亮绿、孟加拉红）结晶紫、亮绿、孟加拉红）或或抗抗生素生素（青霉素、链霉素）（青霉素、链霉素）.分离分离革兰氏阴性革兰氏阴性菌菌-加青霉素或结晶紫加青霉素或结晶紫(抑制抑制G+).分离分离酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌-加抗生素加抗生素(青霉素、链霉素，青霉素、链霉素，抑制细菌和放线菌抑制细菌和放线菌)。用途

18、用途:将所需要的微生物从混杂的微生物中分离将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。出来。培养基中加入某些化学药品抑制不培养基中加入某些化学药品抑制不需要的微生物生长，促进需要的微需要的微生物生长，促进需要的微生物生长。生物生长。(3)(3)加富培养基加富培养基 在基础培养基里专门加入在基础培养基里专门加入待分离微生物特别需要待分离微生物特别需要的的营养物质，而使待分离微生物达到选择的目的。营养物质，而使待分离微生物达到选择的目的。如：血清、血液、动植物组织液、酵母浸膏等。如：血清、血液、动植物组织液、酵母浸膏等。用途用途：培养营养要求比较培养营养要求比较苛刻苛刻的异养微生物。的异养微生物。富

19、集或富集或分离分离某种微生物。某种微生物。纤维素纤维素-富集纤维素降解微生物富集纤维素降解微生物 石蜡油石蜡油-富集分解石油的微生物富集分解石油的微生物 与选择培养基区别与选择培养基区别：加富培养基加富培养基：增加增加所要分离的微生物数量，成为所要分离的微生物数量，成为优势菌，逐步淘汰其他微生物。优势菌，逐步淘汰其他微生物。选择培养基选择培养基：抑制抑制不需要微生物的生长，使所需不需要微生物的生长，使所需要菌成为优势菌。要菌成为优势菌。(4)(4)鉴别培养基鉴别培养基 培养基中加有指示剂，从而用肉眼就能使目的培养基中加有指示剂，从而用肉眼就能使目的微生物或待分离微生物的菌落与其他微生物菌落区别

20、开来。微生物或待分离微生物的菌落与其他微生物菌落区别开来。用途用途：微生物的分类、鉴定或筛选菌种。：微生物的分类、鉴定或筛选菌种。常用的鉴别培养基常用的鉴别培养基：伊红伊红-美蓝琼脂培养基（美蓝琼脂培养基（EMPEMP）成分：蛋白胨成分：蛋白胨1010克克 乳糖乳糖5 5克克 蔗糖蔗糖5 5克克 K K2 2HPOHPO4 42 2克克 *伊红伊红Y0.4Y0.4克克 美蓝美蓝0.060.06克克 蒸馏水蒸馏水1000ml1000ml伊红和美蓝作用伊红和美蓝作用:抑菌某些细菌生长和鉴别染色，产酸指示剂。抑菌某些细菌生长和鉴别染色，产酸指示剂。区分区分大肠杆菌和大肠杆菌和沙门氏菌和志贺氏菌沙门氏

21、菌和志贺氏菌大肠杆菌大肠杆菌：发酵乳糖产酸，使伊红与美蓝结合生成沉淀，呈现发酵乳糖产酸，使伊红与美蓝结合生成沉淀，呈现紫黑色菌落，经反射可看到绿色金属光泽。紫黑色菌落，经反射可看到绿色金属光泽。沙门氏菌和志贺氏菌沙门氏菌和志贺氏菌:不能发酵乳糖不能发酵乳糖,形成无色菌落形成无色菌落.区分大肠杆菌和区分大肠杆菌和产气肠杆菌产气肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌:在在EMBEMB上上,菌落较小菌落较小,有绿色金属光泽。有绿色金属光泽。产气杆菌：产气杆菌：菌落较大，湿润，呈灰棕色菌落较大，湿润，呈灰棕色 培养基中加有能与某一菌的无色代谢培养基中加有能与某一菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而用产物发生显色

22、反应的指示剂，从而用肉眼就能使该菌菌落与外形相似的它肉眼就能使该菌菌落与外形相似的它菌相区分菌相区分一些鉴别培养基一些鉴别培养基培养基名称培养基名称加入化学物质加入化学物质微生物代谢微生物代谢产物产物培养基特性变培养基特性变化化主要用途主要用途酪素酪素培养基培养基酪素酪素胞外蛋白酶胞外蛋白酶蛋白水解圈蛋白水解圈鉴别产蛋白酶鉴别产蛋白酶的菌种的菌种明胶培养基明胶培养基明胶明胶胞外蛋白酶胞外蛋白酶明胶液化明胶液化鉴别产蛋白酶鉴别产蛋白酶的菌种的菌种油脂培养基油脂培养基食用油、吐温食用油、吐温中性红批示剂中性红批示剂胞外脂肪酶胞外脂肪酶由淡红色变成由淡红色变成深红色深红色鉴别产脂肪酶鉴别产脂肪酶菌株

23、菌株淀粉培养基淀粉培养基可溶性淀粉可溶性淀粉胞外淀粉酶胞外淀粉酶淀粉水解圈淀粉水解圈鉴别产淀粉酶鉴别产淀粉酶的菌种的菌种H2S试验培养基试验培养基醋酸铅醋酸铅H2S产生黑色沉淀产生黑色沉淀鉴别产鉴别产H2S菌菌糖发酵培养基糖发酵培养基溴甲酚紫溴甲酚紫乳酸、醋酸乳酸、醋酸由紫色变黄色由紫色变黄色 鉴别肠道细菌鉴别肠道细菌伊红美蓝培养伊红美蓝培养基基伊红、美蓝伊红、美蓝酸酸带金属光泽深带金属光泽深紫色菌落紫色菌落鉴别水中大肠鉴别水中大肠菌群菌群(四四)按照培养微生物的种类分按照培养微生物的种类分培养基按微生物的种类可培养基按微生物的种类可分为分为四类：四类：细菌培养基细菌培养基、放线菌培养基放线菌

24、培养基、酵母菌培养基酵母菌培养基和和霉菌霉菌培养基培养基。常用的细菌培养基常用的细菌培养基-营养肉汤和营养琼脂培养基；营养肉汤和营养琼脂培养基；常用的放线菌培养基常用的放线菌培养基-高氏高氏1 1号培养基；号培养基；常用的酵母菌培养基常用的酵母菌培养基-马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基；培养基；常用的霉菌培养基常用的霉菌培养基-马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基和察氏培养基等。萄糖（或蔗糖）琼脂培养基和察氏培养基等。培养基是微生物菌种生长繁殖和发酵的培养基是微生物菌种生长繁殖和发酵的重要物质基础，也是微生物赖以生存的外界重要物质基

25、础，也是微生物赖以生存的外界环境。在科学实验和实际生产中，会遇到许环境。在科学实验和实际生产中，会遇到许多问题，有些培养基即是液体培养基，又是多问题，有些培养基即是液体培养基，又是选择培养基也可能是天然培养基，掌握不同选择培养基也可能是天然培养基，掌握不同类型的培养基特点，并将之灵活地应用于具类型的培养基特点，并将之灵活地应用于具体的实际工作之中。体的实际工作之中。本节要点：本节要点：一、培养基一、培养基按照微生物生长繁殖所需要的，用人工方法配制而按照微生物生长繁殖所需要的，用人工方法配制而成的适合于微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质成的适合于微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。二、配

26、制培养基的原则二、配制培养基的原则:1.1.选择适宜的营养物质选择适宜的营养物质 2.2.控制营养物控制营养物质浓度及配合合适质浓度及配合合适3.3.控制控制PHPH值值4.4.原料来源的选择原料来源的选择.选择适宜选择适宜的灭菌处理方法。的灭菌处理方法。三、三、培养基的分类：按培养基的分类：按组成成分组成成分:合成、天然、半合成；合成、天然、半合成；按按物理状态物理状态分分：固体、半固体、液体培养基；：固体、半固体、液体培养基；按用途分按用途分:基础培基础培养基、选择培养基、鉴别培养基、加富培养基。养基、选择培养基、鉴别培养基、加富培养基。四、四、基础培养基基础培养基是含有一般微生物生长繁殖

27、所需的基本营养物是含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基。质的培养基。选择培养基选择培养基在在培养基中加入某些培养基中加入某些化学药品化学药品以以抑制抑制不不需要的微需要的微生物生长，而生物生长，而促进促进需要的微生物生长的培养基。需要的微生物生长的培养基。加富培养基加富培养基在基础培养基添加特殊营养物质，用以培养营养要在基础培养基添加特殊营养物质，用以培养营养要求比较苛刻的某些微生物或分离某种微生物求比较苛刻的某些微生物或分离某种微生物。鉴别培养基是鉴别培养基是培养基中加有指示剂，从而用肉眼就能使培养基中加有指示剂，从而用肉眼就能使目的微生物或待分离微生物的菌落与其他微生物菌落目的

28、微生物或待分离微生物的菌落与其他微生物菌落区别开来区别开来。常用的鉴别培养基常用的鉴别培养基：伊红：伊红-美蓝琼脂培养基（美蓝琼脂培养基（EMPEMP）五、培养基按五、培养基按微生物的种类微生物的种类分为分为：细菌培养基、放线菌细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基。培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基。培养基配制的核心培养基配制的核心：确定培养基的营养物质及其配比：确定培养基的营养物质及其配比。作业作业：1.1.什么是培养基什么是培养基?有何作用有何作用?2 2.配制培养基的原则是什么配制培养基的原则是什么?3.3.培养基是如何进行分类的培养基是如何进行分类的?什么是基础、选择、鉴什么是基础、选择、鉴别、加富培养基？别、加富培养基？4.4.详细说明培养基按微生物的种类如何分类？详细说明培养基按微生物的种类如何分类？5.5.培养基配制的核心是什么？培养基配制的核心是什么？思考题思考题:在实际生产中如何选择和配制培养基在实际生产中如何选择和配制培养基?