2022年组织培养实验室的规划设计 .docx

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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 组织培育试验室规划设计一、试验室要求抱负的组织培育试验室应当建立在寂静、清洁、 远离污染源的地方,最好在常年主风向的上风方向, 尽量削减污染； 规模化生产的组织培育试验室最好建在交通便利的地方,便于培育产品的运输；试验室的建设均需考虑两个方面的问题：一是所从事的试验的性质,即是生产性的仍是讨论性的, 是基本层次的仍是较高层次的；二是试验室的规模,规模主要取决于经费和试验性质；无论试验室的性质和规模如何,试验室设置的基本原就是：科学、高效、经济和有用；一个组织培育试验室必需满意3 个基本的需要：试验预备（培育基制备、器皿洗涤、培育基和培育器皿灭菌

2、） 、无菌操作和掌握培育；此外,仍可依据从事的试验要求来考虑帮助试验室及其各种附加设施,使试验室更加完善；在进行植物组织培育工作之前,第一应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的明白, 以便因地制宜地利用现有房屋,或新建、改建试验室；试验室的大小取决于工作的目 的和规模；以工厂化生产为目的,试验室规模太小,就会限制生产,影响效率；在设计组织 培育试验室时, 应按组织培育程序来没计,防止某些环节倒排,引起日后工作纷乱；植物组 织培育是在严格无菌的条件下进行的；要做到无菌的条件,需要肯定的设备、器材和用具,同时仍需要人工掌握温度、光照、湿度等培育条件；二、试验室组成（一）基本试验室 基本试验室

3、包括预备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培育室、缓冲间,是组织培育试验所必需具备的基本条件；如进行工厂化生产,年产420 万,需 34 间试验用房；试验室设名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 计布局如下：1、预备室（化学试验室）功能： 又叫化学试验室,进行一切与试验有关的预备工作：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、培育基配制与分装、培育基和培育器皿的灭菌、培育材料的预 处理等；要求：最好有 20 m2左右；要求宽阔光明、以便于放置多个试验台和相关设备,便利多人同时工作；同时要求通风条件好,处理；便于气体交换

4、；试验室地面应便于清洁,并应进行防滑分体式 -讨论性质试验室,分开的如干房间将预备室分解为药品贮藏室、培育基配制与洗涤室和灭菌室等,功能明确,便于治理,但不适于大规模生产；通间式 -规模化试验室,预备室一般设计成大的通间,使试验操作的各个环节在同一房间内按程序完成； 预备试验的过程在同一空间进行,便于程序化操作与治理,试验中削减各环节间的连接时间,从而提高工作效率；此外仍便于培育基配制、分装和灭菌的自动化操作程序设计, 从而削减规模化生产的人工劳动,立；更便于无菌条件的掌握和标准化操作体系的建设备：预备室应具备试验台、药品柜、水池、仪器、药品、防尘橱（放置培育容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度

5、计及常用的培育基配制用玻璃仪器等；2、洗涤灭菌室功能：完成各种器具的洗涤、干燥、储存、培育基的灭菌等；要求：洗涤灭菌室依据工作量的大小打算其大小,一般面积掌握在3050 m2；在试验室的一侧设置专用的洗涤水槽,用来清洗玻璃器皿；中心试验台仍应配置 2 个水槽,用于清洗小型玻璃器皿；假如工作量大, 可以购置一台洗瓶机；预备 12 个洗液缸, 特地用于洗涤对干净度要求很高的玻璃器皿,地面应耐湿并 排水良好；设备： 水池、 落水架、 中心试验台、 高压灭菌锅、 超声波清洗器、 干燥灭菌器 （如烘箱）等；3、无菌操作室（接种室）功能：也叫接种室,主要用于植物材料的消毒、接种、培育物的转移、试管苗的继代

6、、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序,键的一步；是植物离体培育讨论或生产中最关名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 要求：接种室宜小不宜大,一般1020 m2 即可,其规模依据试验需要和环境掌握的难易程度而定；要求封闭性好,干爽寂静,清洁光明,能较长时间保持无菌,因此不易设在容易受潮的地方；地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑,易于清洁和消毒；配置拉动门,以减少开关门时的空气扰动；为便于消毒处理, 地面及内墙壁都应采纳防水和耐腐蚀材料；为了保持清洁,无菌室应防止空气对流；接种室要求在适当位置吊装12 盏紫外线灭

7、菌灯,用以照耀灭菌； 最好安装一小型空调,使室温可控, 这样可使门窗紧闭,削减与外界空气对流；一般新建试验室的无菌室在使用之前应进行灭菌处理,处理方法是甲醛和高锰酸钾熏蒸,并需定期灭菌处理,仍可用紫外线照耀12h/周,或每次使用前照耀1030min；设备：紫外灯、空调、解剖镜、消毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针）,试验台、和搁架,仍有超净工作台和整套灭菌接种仪器、药品等；4、培育室功能：对接种到培育瓶等器皿中的植物离体材料进行掌握条件下的培育,无论是讨论性试验室仍是生产性试验材料进行培育的场所；要求：约需 1020 m 2 左右,培育室的大小可依据需要培育架的大小、数目、

8、及其他附属设备而定,其设计以充分利用空间和节约能源为原就；基本要求是能够掌握光照和温度,并保持相对的无菌环境,因此, 培育室应保持清洁和适度干燥；为满意植物培育材料生长对气体的需要, 仍应安装排风窗和换气扇等培育室的换气装置；为节约能源和空间,应配置适宜的培育架,并安装日光灯照明；讨论用试验室, 通常可依据光照时间设置成长日照、中日照、短日照培育室, 也可以根据温度设置成高温顺低温培育室,每一个培育室的空间不宜过大,便于对条件的匀称掌握；进行精细培育类型如细胞培育和原生质体培育,可采纳光照培育箱或人工气候箱代替培育室；为了掌握培育室的温度和光照时间及其强度,培育室的房间不要窗户,但应当留一个通

9、气窗, 并安上排气扇；室内温度由空调掌握,光照由日光灯掌握；天花板和内墙最好用塑料钢板装修,地面用水磨石或瓷砖铺设,一般要分两间,一为光照培育室,一为暗培育室；培养室外应有一预备间或走廊；培育材料放在培育架上培育；培育架大多由金属制成,一般设 5 层,最低一层离地高约l0cm ,其他每层间隔 30cm 左右,培育架即高 1.7m 左右；培育架长度都是依据日光灯的长度而设计,如采纳 40W 日光灯就长 1.3m,采纳 30W 日光灯就长 lm,宽度一般为 60cm；日光灯一般用 40W ,固定在培育架的侧面或搁板的下面,每层有两支日光灯,距离在 20cm,光照强度为 20003000lx ；培育

10、室最重要的因子是温度,一般保持在2027左右,具备产热装置,并安装窗式或立式空调机； 由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度,最好不同种类有不同的培养室；室内湿度也要求恒定,相对湿度以保持在70%80%为好,可安装加湿器；掌握光照时间可安装定时开关钟,一般需要每天光照 1016h,也有的 需要连续照明；短日照植物需要 短日照条件, 长日照植物需要长日照条件；现代组培试验室大多设计为采纳自然太阳光照作 为主要能源,这样不但可以节约能源,而且组培苗接受太阳光生长良好,驯化易成活；在阴 雨天可用灯光作补充；设备：培育架（控温控光控湿）、摇床、转床、自动控时器、紫外灯、光照培育箱或人工气候箱、

11、生化培育箱、 边台试验台用于拍照培育物生长状况,除湿机、 显微镜、 温湿度计、空调等；5、缓冲间名师归纳总结 功能： 是进入无菌室前的一个缓冲场地,削减人体从外界带入的尘埃等污染物；工作人第 3 页,共 6 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 员在此换上工作服、拖鞋,戴上口罩,才能进入无菌室和培育室；进入无菌操作室前在此更衣换鞋,以削减进出时带入接种室杂菌；要求：缓冲间需35 m2,可建在预备室外或无菌操作室外,应保持清洁无菌；备有鞋架和衣帽挂钩, 并有清洁的试验用拖鞋、已灭菌过的工作服； 墙顶用 12 盏紫外灯定时照耀,对衣物进行灭菌； 缓冲间最好也

12、安一盏紫外线灭菌灯,用以照耀灭菌； 缓冲间的门应当与接种室的门错开,两个门也不要同时开启,以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌；设备： 12 盏紫外灯、水槽、试验台、鞋帽架、柜子、灭菌后的工作服、拖鞋、口罩；（二）帮助试验室等；依据讨论或生产的需要而配套设置的特地试验室,主要用于细胞学观看和生理生化分析1、细胞学试验室 功能：用于对培育物的观看分析与培育物的计数,对培育材料进行细胞学鉴定和讨论,由制片室和显微观看室组成；制片是猎取显微观看数据的基础,配备有切片机、磨刀机、温箱及样品处理和切片染色的设备；应有通风橱和废液处理设施；显微观看室主要是显微镜和图像拍照、处理设备；要求：光明、清洁、干

13、燥、防止潮湿和灰尘污染；设备：双筒实体显微镜、显微镜、倒置显微镜等；2、生化分析试验室功能： 培育细胞产物为主要目的的试验室,应建立相应的分析化验试验室,随时对培育物成分进行取样检查；大型次生代谢物生产,仍需有效分别试验室；三、仪器设备和器皿用具（一）常规设备1、天平 组织培育试验室需要 23 台不同精度的天平；感量 0.001g 的天平（分析天平）和感量0.0001g 的天平（电子天平）用于称量微量元素和一些较高精确度的试验用品；感量 0.01g 和 0.1g 的天平,用于大量元素母液配制和一些用量较大的药品的称量；2、冰箱各种维生素和激素类药品以及培育基母液均需低温报存,温处理,一般一般冰

14、箱即可；3、酸度计某些试验仍需植物材料进行低用于测定培育基及其它溶液的pH,一般要求可测定pH 范畴 114 之间,精度 0.01 即可；4、离心机用于细胞、 原生质体等活细胞分别,亦用于培育细胞的细胞器、核酸以及蛋白质的分别提取； 依据分别物质不同配置不同类型的离心机；细胞、 原生质体等活细胞的分别用低速离心机； 核酸、蛋白质分别用高速冷冻离心机；规模化生产次生产物,仍需挑选大型离心分别系统；5、加热器用于培育基的配制；讨论性试验室一般选用带磁力搅拌功能的加热器,规模化大型试验室用大功率加热和电动搅拌系统；6、其它纯水器、分装设备（二）灭菌设备名师归纳总结 - - - - - - -第 4

15、页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 维护相对得无菌环境是组织培育试验室的基本要求；1、高压灭菌锅用于培育基、 玻璃器皿以及其它可高温灭菌用品的灭菌,依据规模大小有手提式、立式、卧式等不同规格；2、干热消毒柜 用于金属工具如镊子、剪刀、解剖刀,以及玻璃器皿的灭菌；一般选用 200左右的普 通或远红外消毒柜；3、过滤灭菌器 用于一些酶制剂、 激素以及某些维生素等不能高压灭菌试剂的灭菌,主要有真空抽滤式 和注射器式；4、紫外灯 便利经济的掌握无菌环境的装置,缓冲间、接种室和培育室必备；（三）无菌操作设备 1、接种箱是使用较早的最简洁的无菌装置,使用时对无菌室要求较高；2、

16、净化工作台主体为玻璃箱罩、 入口有袖罩, 内装紫外灯和日光灯,其操作台面是半开放区,具便利、操作舒服优点,通过过滤的空气连续不断吹出,大于0.03m 直径的微生物很难在工作台的操作空间停留,保持了较好的无菌环境；由于过滤器 吸附微生物,使用一段时间后过滤网易堵塞,因此应定期更换；（四）培育设备 培育设备是指依据需要所选用的不同规格和掌握精度的用于植物细胞、组织和器官培育 的设施和设备；1、培育架 目前全部植物组织培育试验室植株繁衍培育的通用设施；成本低、 设计敏捷、 可充分利 用培育空间, 以操作便利、 最大限度利用培育空间为原就；一般有 45 层,层间间隔 4050cm,光照强度可依据培育植

17、物特性来确定,一般每架上配备 24 盏日光灯；2、培育箱 细胞培育、原生质体培育等要求精确培育的试验,可用光照培育箱、CO 2 培育箱、湿度 掌握培育箱等培育；3、摇床 进行液体培育时,为改善通气状况,可用振荡培育箱或摇床；4、生物反应器 进行植物细胞生产次生产物的试验室,仍需生物反应器；（五）其他设备可安装时间程序掌握器、温度掌握系统或空调；实体显微镜、 倒置式生物显微镜及配套的摄影、录像和图像处理设备；电泳仪、萃取和层析设备、紫外分光光度计、高效液相色谱 仪、气相色谱仪、酶联免疫测定系统；四、培育容器与用具培育容器指盛有培育基并供应培育物生长空间的无菌置,用的各种金属或塑料制品,试验室必备

18、；（一）培育容器培育用具指培育物接种封口所名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 包括各种规格的培育皿、三角瓶、试管、培育瓶；玻璃容器,一般用无色并不产生颜色折射的硼硅酸盐玻璃材质；塑料容器材质轻、不易破裂、制作便利,广泛使用；一般为聚丙烯、聚碳酸酯材料的培育容器；（二）金属用具1、镊子 植物组织解剖用小的尖头镊子,分株转移繁衍转接用枪型镊子,1622cm 长；2、剪刀 不锈钢医用弯头剪,做取材和切段转移繁衍,1422cm；3、解剖刀 组织切段,多用短柄可换刀片的医用不锈钢解剖刀；4、其他用具 接种铲、接种针在花药培育、花

19、粉培育中有用；（三）塑料用具各种封口膜、盖、塑料盘及其它试验用具；五、培育主要试剂1、激素类：6-BA 、6-KT 、CPA、BPA、ABA 、IAA 、IBA 、IPA、NAA 、TIBA 、BNOA 、GA 、2,4-D 、CPPU、异戊烯基腺嘌呤2iP 、苯基噻二唑基脲TDZ 、腺嘌呤、腺嘌呤硫酸盐、毒莠定、反-玉米素、 Jasmonic acid、Dicamba 等；2、有机和无机试剂类：VB 、核黄素、抗坏血酸、D-生物素、叶酸、青霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、肌醇、蛋白胨、 水解酪蛋白、 酪蛋白、水解乳蛋白、硝酸铵、 硝酸钾、硫酸镁、 无水氯化钙、磷酸二氢钾、 EDTA 、硫酸亚铁、硼酸、蔗糖、消毒剂等；3、培育基：琼脂粉、琼脂条、卡拉胶、魔芋胶等；名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 6 页