环境微生物学实验报告.docx

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1、环境微生物学实验报告一、试验目的（1）了解一般光学显微镜的构造及原理，驾驭显微镜的操作及保养方法。（2）视察、识别几种原核微生物。真核微生物的个体形态，学会生物图的绘制。二、试验器皿与材料（1）器皿：显微镜、擦镜纸、二甲苯。（2）材料：示范片：细菌三形（球状、杆状、螺旋状）、弧状（硫酸盐还原菌）、丝状（浮游球衣菌等）、细菌鞭毛及细菌荚膜。放线菌、颤蓝细菌、微囊蓝细菌或念珠蓝细菌等。三、试验步骤（1）将标本片放在载物台上，使视察的目的物置于圆孔正中心。（2）将镜头换成低倍镜，将粗调整器向下旋转（或载物台向上旋转），眼睛凝视物镜。当物镜的尖端距离载玻片约0.5cm处时停止旋转。（3）左眼对着目镜视

2、察，将粗调整器向上旋转，假如见到目的物，但不非常清晰，可用细调整器调整，直至目的物清楚。此时找到目的物并移至中心。（4）换成高倍镜，视察目的物，旋转细调整钮，直至视野清楚。（5）视察示范片，绘出其形态图。四、思索题（1）运用油镜时，为什么要先用低倍镜视察？答：为了找到目的物并移动到中心。（2）要使视野光明，除采纳光源外，还可实行哪些措施？答：调大孔径光阑，调整光源。假如是用反光镜的显微镜，用凹面镜可使视野光明。五、生物图试验二、微生物培育基的配制与灭菌一、试验目的（1）熟识玻璃器皿的洗涤和灭菌前的打算工作。（2）了解配置微生物培育基的基本原理，驾驭配置、分装培育基的方法。（3）学会各类物品的包

3、装、配置（稀释水等）和灭菌技术。二、试验器皿与材料（1）试验器皿：高压蒸汽灭菌器、干燥箱、煤气灯、培育皿、试管、刻度移液管、锥形瓶、烧杯、两桶、药物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉网、药匙、铁架、表面皿、pH试纸和棉花等。（2）材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和琼脂等。三、试验原理培育基是微生物生长的基质，是根据微生物养分、生长繁殖的须要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁及微量元素和水，按肯定的体积分数配置而成。调整合适的pH，经高温灭菌后以备培育微生物之用。由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而培育基种类也多，它们的配方及配制方法也各有差异，但一般的配制过程大致相同。四、试验步

4、骤1、取100mL蒸馏水倒入锥形瓶；2、称取牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，琼脂20g；3、用100g/LNaOH调整pH至7.27.4；4、盖上棉塞，121下灭菌1520min。五、思索题1、固体培育基加琼脂后加热溶化时要留意哪些问题？答：（1）加热器功率不能太高，也不能太低。太高，简单沸腾和把培育基烧焦；太低，培育基简单凝固。（2）受热要匀称，可以垫上石棉网，要用玻璃棒不停缓慢搅拌。（3）加热完毕后，要在合适的温度（60左右）倒平板，防止凝固。2、培育基中加琼脂的作用是什么？答：琼脂的作用就是让培育基凝固。3、如何检查培育基灭菌是否彻底？答：将灭菌后的培育基按灭菌锅内不同位置

5、,每处抽取数管标号,置25至30摄氏度培育一周左右进行检查,若培育基无什么改变说明灭菌效果较好试验三、细菌的革兰氏染色一、试验目的（1）了解细菌的涂片及染色在微生物学试验中的重要性。（2）学会细菌染色的基本操作技术，从而驾驭微生物的一般染色法和革兰氏染色法。二、染色原理微生物细胞由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物组成。所以，微生物表现出两性电解质的性质。两性电解质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中解离出碱性基，呈碱性带正电；在碱性溶液中解离出酸性基，呈酸性带负电。经测定，细菌等电点（pI）在25之间时，大多以两性离子存在，当细菌在中性、碱性或偏酸性溶液中时，细菌带负电荷，所以简单与带正电荷的

6、碱性染料结合，故用碱性染料染色的为多。微生物体内各结构与染料结合力不同，故可用各染料分别染微生物的各结构以便视察。三、试验器皿、试剂、材料（1）器皿：显微镜、接种环、载玻片、酒精灯。（2）试剂：草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、体积分数为95%的乙醇、质量浓度为5g/L的沙黄染色液等。（3）材料：枯草杆菌、大肠杆菌。四、试验步骤（1）涂片：载玻片滴一滴蒸馏水蘸菌染匀（2）初染：用草酸铵结晶紫染液染色12min后水洗（3）媒染：用革兰氏碘液染色12min后水洗（4）脱色：滴加体积分数为95%的乙醇，约45s后水洗（5）复染：滴加番红染色23min后水洗并干燥（6）镜检：用显微镜视察菌体形态五、思索题（1）要得到正确的革兰氏染色结果必需留意哪些操作？关键在哪几步？为什么？答：应留意干燥时不要用火烧太久。关键在于涂片，涂片的时候要留意涂匀称，并且两个菌的量也要差不多，否则太厚的地方脱色就不匀称了。