第十章吸光光度法 (2)优秀课件.ppt

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1、第十章 吸光光度法第1页，本讲稿共73页l教学内容教学内容：物质对光的选择性吸收、光吸收定律及其应用条件、摩尔吸光系数与灵敏度；显色反应及其影响因素；吸光光度法的特点与应用、吸光光度法仪器l教学重点教学重点：吸收光谱、工作波长的确定、线性范围、检出限、准确度与精密度、回收率l教学难点教学难点：参比溶液的选择、共存离子干扰、络合物组成的确定第2页，本讲稿共73页化学分析化学分析：常量组分：常量组分(1%),Er:0.1%0.2%依据化学反应依据化学反应,使用玻璃仪器使用玻璃仪器 化学分析与仪器分析方法比较仪器分析：微量组分(1%),Er:1%5%依据物理或物理化学性质,需要特殊的仪器例例:含含F

2、e约约0.05%的样品的样品,称称0.2 g,则则m(Fe)0.1 mg重量法重量法 m(Fe2O3)0.14 mg,称不准称不准容量法容量法 V(K2Cr2O7)0.02 mL,测不准测不准 光度法 结果0.048%0.052%,满足要求准确度高准确度高灵敏度高灵敏度高第3页，本讲稿共73页第十章 吸光光度法 10-1 吸光光度法 特点特点 灵敏度高：测定下限可达灵敏度高：测定下限可达10-510-6molL-1,10-4%10-5%准确度能够满足微量组分的测定要求：准确度能够满足微量组分的测定要求：相对误差相对误差25（12）操作简便快速操作简便快速应用广泛应用广泛 吸光光度法是基于被测物

3、质的分子对光具有选择性吸收的特性而建立起来的分析吸光光度法是基于被测物质的分子对光具有选择性吸收的特性而建立起来的分析方法。方法。第4页，本讲稿共73页 光的性质及物质对光的选择性吸收光的性质及物质对光的选择性吸收 光的性质光的性质 光具有二象性光具有二象性,即波动性和粒子性即波动性和粒子性,可用普朗克方程表示可用普朗克方程表示:c 真空中光速真空中光速 2.99792458108m/s3.0 108m/s 波长，单位：波长，单位：m,cm,mm,m,nm,1m=10-6m,1nm=10-9m,1=10-10m 频率，单位：赫芝频率，单位：赫芝(周周)Hz 次次/秒秒 n 折射率，真空中为折射

4、率，真空中为1光的传播速度:波动性第6页，本讲稿共73页X磁场向量传播方向YZx电场向量第7页，本讲稿共73页h普朗克普朗克(Planck)常数常数 6.62610-34Js 频率频率E光量子具有的能量光量子具有的能量 单位：单位：J(焦耳焦耳)，eV(电子伏特电子伏特)1eV=1.6021019 J微粒性光量子，具有能量。第8页，本讲稿共73页结论结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越一定波长的光具有一定的能量，波长越 长长(频率越低频率越低)，光量子的能量越低，光量子的能量越低.波粒二象性真空中:第9页，本讲稿共73页 (单色光)橙 白光 青兰 互补光(即复合光:由2 or 多种单色光混

5、合而成的混合光)黄 绿 青红 紫 兰 (单色光)只有一种波长的光例:I0 KMnO4 紫光(紫红色)颜色(i)物质 通过 透过 青色 互补 选择性吸收绿光 *全吸收 呈黑色 *不吸收 呈无色 单色光：具有相同能量(相同波长)的光.混合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在一起.例如白光第10页，本讲稿共73页/nm颜色互补光400 450紫黄绿450 480蓝黄480 490绿蓝橙490 500蓝绿红500 560绿红紫560 580黄绿紫580 610黄蓝610 650橙绿蓝650 760红 分子对光的吸收与吸收光谱不同颜色的可见光波长及其互补光蓝绿第11页，本讲稿共73页 为什么为什么KM

6、nO4 吸收绿光呢？吸收绿光呢？光吸收曲线（吸收光谱）光吸收曲线（吸收光谱）I0,1 KMnO4 I I0,22 I0,3 3 A A CKMnO4（定量）（定量）浓度浓度 max 绿青色光绿青色光 紫红色紫红色 如稀释时 ilogI0/I=const：令为A（吸光度）如何定量呢？光吸收曲线：主要用于选定工作波长无关31(定性)max不变不变第12页，本讲稿共73页光吸收定律（光吸收定律（LambertBeer定律）定律）表达式表达式 log I0/I=A=k k1 b（、C、T=const时）时）Lambert定律定律=k k2 C（、b、T=const时）时）Beer定律定律 kbc（La

7、mber-Beer定律）定律）常数？即：当一束平行单色光 通过均匀溶液时，Sol的A与Sol的浓度、液层的厚度成正比。第13页，本讲稿共73页吸光度与光程的关系吸光度与光程的关系 A=abc 0.10b0.202b0.00光源检测器显示器参比第14页，本讲稿共73页吸光度与浓度的关系吸光度与浓度的关系 A=abc0.10c0.202c0.00光源检测器显示器参比第15页，本讲稿共73页吸光度与波长的关系吸光度与波长的关系 A=abc0.00红0.10红0.00光源检测器显示器参比蓝绿光红光第16页，本讲稿共73页 c b k A=kbcg/L cm a(Lg cm )=abcmol/L cm

8、k(Lmol cm )=kbc ()()-1-1-1-1灵敏度正 灵敏度表示法：灵敏度表示法：灵敏度 104 高 106 超高负L.D.(检出限)s=M（g/mol）/k（g/cm）k ,s（桑德尔灵敏度）即 指当仪器所能测出的Amin=0.001时,单位面积光程内能检出的吸光物质的最低含量 a(吸光系数吸光系数)k（摩尔吸光系数）（摩尔吸光系数）k值因c、b 的单位而异，如第17页，本讲稿共73页 AT（透光度）（透光度）I/I0=T T1 T%=T100A=I I0/I I=I I/I I0=T=1/T=1/T100%=2T%=kbc AC AC 正负 定量分析 相关性还可用曲线表示：第1

9、8页，本讲稿共73页A=a+kc LD=3Sb/k(斜率)试剂空白试剂空白11次平行测定值的标准偏差次平行测定值的标准偏差 S=（Xi-x）/（n-1）2斜率斜率=tg 截 距 第19页，本讲稿共73页吸光度吸光度A、透射比、透射比T与浓度与浓度c 的关系的关系AT(%)cA=kbc1.00.80.60.40.2100 80 60 40 20第20页，本讲稿共73页 定律应用的前提条件定律应用的前提条件 入射光不平行，入射光不平行，散射散射 前提条件：前提条件：sol 均匀、透明、非散射性均匀、透明、非散射性入一定的单色光入一定的单色光 C=10 10（mol/L）线性线性 否则 偏离 物理因

10、素 化学因素单色光不纯单色光不纯（最主要因素）导致-3 10 负偏离 10 正偏离-4-3-4l1.入一定的单色光即应选用入一定的单色光即应选用 max处或肩峰处测定处或肩峰处测定.l 2.sol 均匀、透明、非散射性即均匀、透明、非散射性即吸光质点形式不变吸光质点形式不变 离解、络合、缔合会破坏线性关系离解、络合、缔合会破坏线性关系,应控制条件应控制条件(酸度、浓度、介质等酸度、浓度、介质等).3.C=10 10 （mol/L）浓度增大，分子之间作用增强浓度增大，分子之间作用增强.-3-4第21页，本讲稿共73页 平衡效应平衡效应 如：如：Cr2O7 +H2O HCrO4 2CrO4 +2H

11、 橙色 黄色2350nm 375nm入入=25nm 偏离 酸效应酸效应 如如HB H +B A总总=AHB+AB=KHBCHB+KBCBKB=KHB（偏离可忽略）KHB C 正偏离正偏离C 负偏离负偏离 溶剂效应溶剂效应 极性极性 I I2颜色颜色 入入max +C2H5OH（+）红棕 小+CCl4 （）紫 大 如I2+2化学因素第22页，本讲稿共73页 必须指出，偏离是由仪器或分析实践所造成的，并非光吸收定律的缺陷。Vis光度分析是利用有色溶液进行，这就需要理想的星色反应体系及合适的分析条件。影响显色反应的因素影响显色反应的因素 设：设：M +R MR（显色反应）（显色反应）O-H反应 络合

12、反应 待测组分 显色剂 有色物质 关键：关键：显色剂或显色反应的选择标准显色剂或显色反应的选择标准第23页，本讲稿共73页1选择性好 即 2.灵敏度高灵敏度高 即即 K()MR 大大3.入（入入（入 max-入入 max）60nm;4.v、k大，MR组成恒定 反应速率常数 5.显色反应条件易控 标准 R+MMRR+N(干扰离子干扰离子)NRMRR 影响显色反应的因素影响显色反应的因素 1.CR：应适宜，否则会引起副反应。：应适宜，否则会引起副反应。CR由由ACR 曲线确定曲线确定 第24页，本讲稿共73页2pH:如如M+R=MR1,MR2 OH H+M(OH)HR M R KMR,AMR 导致

13、 pH=5 适宜适宜pH第25页，本讲稿共73页 3t(min):MR形成形成T()颜色稳定颜色稳定 Amax t,Tt1t2T1T2第26页，本讲稿共73页4.有机溶剂，表面活性剂 CTMAB PAM CPB(溴化十六烷基吡啶)SLS DBS Triton-100 Tween-80 作用：增敏，增溶，增稳 5共存离子共存离子Er(5)产生清除：调空pH，加掩蔽剂，沉淀剂等分离共存离子除了上述因素将影响光度分析结果外，仪器测量误差也会影响测定的准确度。仪器测量误差仪器测量误差来源：光源不稳，A,T标尺不准等 第27页，本讲稿共73页 表示法：一般控制：一般控制：T=1570 Er较小较小 A=

14、0.150.80 即较准确即较准确为获得准确的分析结果，必须选择测量条件。第28页，本讲稿共73页 测量条件：测量条件：（1）入：干扰 无无 选用选用max有 按A最大，干扰最小的原则 入（2）A=0.150.80 如控制Ws.试液的稀释或浓缩。（3）校准b,入，A，T标尺刻度等（4）选择参比溶液：试液 显色剂（R）其它试剂 参比溶液 蒸馏水或纯溶剂蒸馏水或纯溶剂 +试剂空白试剂空白 (即不加试液外其它溶液即不加试液外其它溶液)+不加不加R的试液的试液有吸收 无吸收例：在入测量处 选择催化、抑制反应体系，均可选用水作为参比溶液。第29页，本讲稿共73页 吸光光度法的应用吸光光度法的应用 单组分

15、的测定单组分的测定(1)工作曲线法工作曲线法：配制标准溶液系列：令配制标准溶液系列：令C1，C2，C3Er%:5%以入以入max测其测其A A1，A2，A3减小减小 AC 曲线曲线 工作曲线工作曲线 测测Ax,由曲线平坦部分求由曲线平坦部分求Cx 0.5%可用差示光度法可用差示光度法 第30页，本讲稿共73页*工作曲线不经过原点的原因工作曲线不经过原点的原因空白溶液选择和配制不当即用空白液不能使干扰物质的光吸收恰好抵消空白溶液选择和配制不当即用空白液不能使干扰物质的光吸收恰好抵消显色反应和显色条件选择不当显色反应和显色条件选择不当b与光学性能不一致与光学性能不一致仪器波长刻度不准仪器波长刻度不

16、准T的影响等等。的影响等等。*工作曲线不直的原因单色光不纯，导致单色光不纯，导致A产生负误差产生负误差有色吸光质点，组成不恒定，因而引起颜色强度的变化，工作曲线弯曲有色吸光质点，组成不恒定，因而引起颜色强度的变化，工作曲线弯曲溶液有胶体形成，对光产生散射溶液有胶体形成，对光产生散射溶液存在各种平衡效应（如缔合、离解、酸碱等）使溶液存在各种平衡效应（如缔合、离解、酸碱等）使A不正比于不正比于C第31页，本讲稿共73页(2)差示光度法（浓溶液差示光度法）方法原理：参比溶液 标液 普通光度法：C0 C2 差示光度法 C1 C2 代代替替C2C1C1C2第32页，本讲稿共73页调调 T%=100%T%

17、:T70 10100 A1=KbC1 Ex:5 0.5 50.5 A2=KbC2 即即Ex%准确度准确度 A2-A1=Kb(C2-C1)b相同相同 (同一种物质，同一比色皿同一种物质，同一比色皿)A K C (方法原理方法原理)应用：（1）工作曲线法：AC第33页，本讲稿共73页（2）公式法：）公式法：CX=KAX+C1,K=(C1-C2)/A2例：丁二酮肟 Ni2+,且A2=0.47,AX=0.52,求 Ni%C1=6.12%C2=11.49%Ni%=（C1-C2）/A2AX+C1Ni%=(11.49-6.12)/0.470.52+6.12=12.06%多组分的测定多组分的测定第34页，本讲

18、稿共73页分析：分析：入入1M1,AM 入入1(M+N),AM+N 入入1N1,AN 入入1 (M+N),AN (1).联立方程法：入联立方程法：入1,入入2M+N(待测待测)入入1,入入2 M+N(标液标液)同同 上上A入入1=AM 入入1+AN 入入1A入入2=AM 入入2+AN 入入2(2).作图法：由作图法：由AC曲线斜率求曲线斜率求CM，CN 络合物组成的测定：络合物组成的测定：(1)摩尔比法（适用于摩尔比法（适用于小，小，n高的络合物）高的络合物）:离解度离解度 n；络合比；络合比第35页，本讲稿共73页(2)等摩尔连续变化法（适用于a低，稳定性高的络合物）A1,A2CR/CMA1

19、,A2const第36页，本讲稿共73页即A为pH相对应的溶液的吸光度pKa=pH+lg(AA B-)/(AHBA)第37页，本讲稿共73页 测定中的干扰以及消除方法测定中的干扰以及消除方法Co2+,Fe3+Co2+FeF63-Co(SCN)2(蓝)NaFSCNCo2+Fe2+,Sn4+(2)Sn2+Co(SCN)2SCN测Co2:(掩蔽法)1.化学法第38页，本讲稿共73页Co2+,Zn2+,Ni2+,Fe2+CoR,ZnR NiR,FeRCoR,Zn2+,Ni2+,Fe2+钴试剂RH+测Co2:(生成络合物性质不同)消除干扰，也可采取分离法。Fe3+,Cu2+FeSSal（紫红）Cu2+p

20、H=2.5SSal测Fe3:(控制pH)第39页，本讲稿共73页2.物理法物理法选择适当的测定波长选择适当的测定波长515655415500钍-偶氮砷III 钴-亚硝基红盐 AA络合物络合物试剂试剂/nm/nm第40页，本讲稿共73页 1.1.仅络合物有吸收，仅络合物有吸收，溶剂溶剂作参比。作参比。如如 phenphenFeFe2+2+标准曲线标准曲线2.2.待测液也有吸收待测液也有吸收，被测液被测液作参比。作参比。如如 测汽水中的测汽水中的 FeFe3.3.显色剂或其他试剂也有吸收，显色剂或其他试剂也有吸收，空白溶液空白溶液作参比作参比 例例:邻二氮菲光度法测邻二氮菲光度法测Li2CO3中的

21、中的 Fe，参比溶液为不含参比溶液为不含Li2CO3样品的所有试剂样品的所有试剂。4.4.干扰组分与显色剂有反应干扰组分与显色剂有反应,又无法掩蔽消除时：又无法掩蔽消除时：1 1）掩蔽被测组分掩蔽被测组分，再加入显色剂，作参比，再加入显色剂，作参比.2 2）加入等量干扰组分加入等量干扰组分到空白溶液中到空白溶液中,作参比作参比.3.3.选择适当的参比溶液选择适当的参比溶液第41页，本讲稿共73页10 2 光度分析的方法和仪器光度分析的方法和仪器方便、灵敏，准确度差方便、灵敏，准确度差.常用于限界分析常用于限界分析.10.2.1 光度分析的几种方法1.目视比色法观察方向观察方向空白c1c2c3c

22、4第42页，本讲稿共73页2.光电比色法光电比色法光电比色计结构示意图通过滤光片得一窄范围的光(几十nm)第43页，本讲稿共73页3.吸光光度法和分光光度计吸光光度法和分光光度计光源单色器吸收池检测系统分光光度计的基本组成通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光.波长可调,故选择性好,准确度高.第45页，本讲稿共73页分光光度计的主要部件分光光度计的主要部件光源：光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够发出所需波长范围内的连续光谱，有足够 的光强度的光强度,稳定。稳定。可见光区：可见光区：钨灯，碘钨灯钨灯，碘钨灯(3202500nm)紫外区：紫外区：氢灯，氘灯氢灯，氘灯(180375nm)氙灯氙灯

23、：紫外、可见光区紫外、可见光区均可用作光源均可用作光源/nm钨灯（热辐射光源）4006008001000氙灯（气体放电光源）氢灯强度第46页，本讲稿共73页氙灯氢灯钨灯第47页，本讲稿共73页单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。棱镜：棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同依据不同波长光通过棱镜时折射率不同.玻璃玻璃3503200nm,石英石英1854000 nm入射狭缝准直透镜棱镜聚焦透镜出射狭缝白光红紫1 12 2800 600 500400第48页，本讲稿共73页光栅：光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距等宽度等间距条痕条痕(600

24、、1200、2400条条/mm)。利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光。利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光。波长范围宽波长范围宽,色散均匀色散均匀,分辨性能好分辨性能好,使用方便使用方便.平面透射光栅平面透射光栅反射光栅（广泛使用）反射光栅（广泛使用）光栅衍射示意图M1M2出射狭缝光屏透镜平面透射光栅第49页，本讲稿共73页吸收池吸收池(比色皿比色皿)：用于盛待测及参比溶液。：用于盛待测及参比溶液。可见光区：光学玻璃池可见光区：光学玻璃池 紫外区：石英池紫外区：石英池检流计检流计（指示器）：（指示器）：低档仪器：刻度显示低档仪器：刻度显示 中高档仪器：数字显示，自动扫描记录中高档仪器

25、：数字显示，自动扫描记录检测器检测器：利用光电效应，将光能转换成：利用光电效应，将光能转换成 电流讯号。电流讯号。光电池，光电管，光电倍增管光电池，光电管，光电倍增管第50页，本讲稿共73页硒光电池（硒光电池（Barrier-layer photocell）适用于300-800 nm,在500-600 nm范围最灵敏。Se阴极Au，Ag半导体h阳极第51页，本讲稿共73页光电管(Phototube)h（片）红敏管 625-1000 nm蓝敏管 200-625 nm第52页，本讲稿共73页光电倍增管(Photomultiplier Tube,PMT)1个光子可产生106107个电子160-700

26、 nm第53页，本讲稿共73页4.吸光光度法仪器主要差异比较吸光光度法仪器主要差异比较可见光（380780nm）紫外光（200380nm)中红外（2.550 m)光源钨灯碘钨灯3202500氢灯氘灯180375硅碳棒（红外线）吸收池材料玻璃（3503200）石英（1854000）NaCl晶体第54页，本讲稿共73页5.1.单光束分光光度计单光束分光光度计可变波长单光束紫外-可见分光光度计示意图5.分光光度计的基本类型第55页，本讲稿共73页5.2.双光束分光光度计双光束分光光度计参比池检测器滤光片或单色器放大器样品池光源 hv光子检测器反光镜反光镜透明部分扇形镜 正面图扇形镜反光镜栅镜双光束型

27、可以消除光源强度变化的影响.第56页，本讲稿共73页 Vis.UVVis.IR单单(双双)光束光束,双波长光路图双波长光路图I1 I2A=A入入2 A入入1=lg I1/I2=(k入入2k入入1)bc (与背景吸收无关与背景吸收无关)第57页，本讲稿共73页5.3.HP 8452A多通道二极管阵列分光光度计第58页，本讲稿共73页镀铝反射镜5.4.纤维光度计示意图第59页，本讲稿共73页5.5.纤维光度计第60页，本讲稿共73页作业:P301 17 19 24第61页，本讲稿共73页1.光学光谱区光学光谱区远紫外近紫外 可见近红外中红外 远红外（真空紫外）10nm200nm200nm 380n

28、m380nm 780nm780 nm 2.5 m2.5 m 50 m50 m 300 m参考资料第62页，本讲稿共73页2.光谱种类光谱种类原子光谱：吸收、发射、荧光线状光谱黑体辐射：白炽灯、液、固灼热发光连续光谱分子光谱：紫外、可见、红外等吸收光谱带状光谱I第63页，本讲稿共73页3.分子吸光与发光第64页，本讲稿共73页4.发光机理(Jablonski Diagram)第65页，本讲稿共73页例1蒽的激发光谱（吸收光谱）和发射光谱（荧光光谱）第66页，本讲稿共73页5.镁-Oxine的激发光谱和发射光谱 荧光分析法测定血清中的镁第67页，本讲稿共73页6.荧光光谱的特点荧光光谱的特点vSt

29、okes位移：分子荧光的发射峰相位移：分子荧光的发射峰相对于吸收峰位移到较长的波长对于吸收峰位移到较长的波长.v荧光发射光谱的形状与激发波长的选择荧光发射光谱的形状与激发波长的选择无关无关.v镜像规则：荧光发射光谱和它的吸收镜像规则：荧光发射光谱和它的吸收光谱呈镜像对称关系光谱呈镜像对称关系.第68页，本讲稿共73页7.磷光分析法磷光分析法v 获得较强磷光应采取的措施：获得较强磷光应采取的措施：1.低温，低温，禁阻跃迁,几率小;系间窜跃,寿命长.S1 T1 S0无辐射辐射v 磷光分析仪器磷光分析仪器液槽：液槽：石英液槽放入盛液氮的石英杜瓦瓶石英液槽放入盛液氮的石英杜瓦瓶.斩波片：斩波片：在激发

30、光单色器与液槽之间以及在发射光在激发光单色器与液槽之间以及在发射光 单色器与液槽之间各装一个斩波片单色器与液槽之间各装一个斩波片.v 应用应用：主要用于有机分析主要用于有机分析,与荧光法互补与荧光法互补.室温 2.固体磷光，吸附在滤纸或纤维素上固体磷光，吸附在滤纸或纤维素上.3.加表面活性剂加表面活性剂,形成胶束缔合物形成胶束缔合物,增强刚性增强刚性.4.重原子效应重原子效应(Ag+,Pb2+,Tl+盐类盐类),利于系间跨越利于系间跨越.第69页，本讲稿共73页例1 Solid-substrate room-temperature phosphorescence immunoassay bas

31、ed on an antibody labeled with nanoparticles containing dibromofluorescein luminescent molecules and analytical applicationD-SiO2(20 nm)Fig.2 SS-RTP spectrum and three-dimensional spectra of SiO2 and D-SiO2 nanoparticle1.1:SiO2;2.2:D-SiO2;Jia-Ming Liua,Qiao-mei Lua,Yan Wanga,Shan-shan Xua,Xiao-mei L

32、ina,Long-Di Lib,Shao-QinLin.Journal of Immunological Methods,2005,307,34-40 第70页，本讲稿共73页Phosphorescence spectrum of immune complex The SS-RTP spectrum of the immune complex(Ab1-IgG-Ab1-D-SiO2)on the polyamide membrane was scanned and compared with that of reagent blank(D-SiO2-Ab1)(Fig.3).Results sho

33、wed that the phosphorescence intensity of Ab1-IgG-Ab1-D-SiO2 was obviously higher than that of D-SiO2-Ab1.Meanwhile,the exmax/emmax were 451/622 nm and 460/623 nm,respectively.So 460/623 nm was chosen as working wavelength.Fig.3 RTP spectra of Ab1-IgG-Ab1-D-SiO2 1.1.Polyamide membrane 2.2.Ab1 3.3.Ab

34、1+20.0(pg spot1)IgG 4.4.D-SiO2 5.5.Ab1-D-SiO2+Ab1 6.6 Ab1+20.0(pg spot1)IgG+D-SiO2-Ab1 第71页，本讲稿共73页 Working curve,detection limit and precision Human IgG was determined by use of the antibody labeled with D-SiO2 nanoparticle.The results showed that there was a linear correlation between Ip and the c

35、oncentration of IgG(Fig.4)within the concentration range 0.0624-20.0 pg spot1(corresponding to a concentration of 0.156-50.0 ng l1,sample volume:0.4l spot1).The regression equations of the working curves can be expressed as Ip=94.39+17.00m IgG(pg spot1),n=6,r=0.9996.The detection limit calculated as

36、 3Sb/k is 0.015 pg spot1(or 0.038 ng l1).If the molecular weight of IgG is taken as 150000 11,the detection limit is 0.10 amol spot1.After replicate measurement 11 times,RSD are 3.2%and 2.4%for samples containing 0.156 ng l1 and 50.0 ng l1 IgG,respectively.This indicates that the method is of good repeatability.The mechanism discussion of SS-RTP-IA based on an antibody labeled with nanoparticles containing dibromofluorescein luminescent molecules第72页，本讲稿共73页第73页，本讲稿共73页