培养基制作精.ppt

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1、培养基制作第1页，本讲稿共35页教学目的：教学目的：熟练掌握各级培养基的制作方法。教学重点：教学重点：培养基的制作方法。第2页，本讲稿共35页第一节第一节 母种培养基的制作母种培养基的制作一、菌种培养基一、菌种培养基(一一)按营养物质种类分类按营养物质种类分类 l.l.天然培养基天然培养基 常用的生物材料有马铃薯、胡萝卜、常用的生物材料有马铃薯、胡萝卜、蚕蛹粉、豆芽汁、花生饼粉、玉米粉、酵母等。适合于蚕蛹粉、豆芽汁、花生饼粉、玉米粉、酵母等。适合于各类微生物的生长各类微生物的生长 2.2.合成培养基合成培养基 是指用已知成分和数量的化合物配制而成的是指用已知成分和数量的化合物配制而成的培养基。

2、适用研究培养基。适用研究 3.3.半合成培养基半合成培养基 利用天然物质作为碳、氮源及维生素利用天然物质作为碳、氮源及维生素的来源另加一些无机盐类配制而成的来源另加一些无机盐类配制而成第3页，本讲稿共35页(二二)按培养基的物理状态分类按培养基的物理状态分类 1.1.液体培养基液体培养基 不加琼脂，多用于生理生化方面研究不加琼脂，多用于生理生化方面研究,培养培养液体菌种等。液体菌种等。2.2.固体培养基固体培养基 凝固剂的量凝固剂的量,琼脂冬季为琼脂冬季为1.5%-2.0%,1.5%-2.0%,夏夏季季2.2%-2.3%2.2%-2.3%。3.3.半固体培养基半固体培养基 含有较少量琼脂含有较

3、少量琼脂(0.2%-0.5%)(0.2%-0.5%)的培养基的培养基,使培养基未达到固态而呈粘稠状态。使培养基未达到固态而呈粘稠状态。第4页，本讲稿共35页 二、母种培养基配方二、母种培养基配方：1.1.土豆土豆200g200g、糖、糖20g20g、琼脂、琼脂18g18g、水、水1000ml1000ml2.2.去去皮皮马马铃铃薯薯200g200g、葡葡萄萄糖糖20g20g、琼琼脂脂18-20g18-20g、水水1000ml1000ml、PHPH值值自自然然，另另外外添添加加：麸麸皮皮20g20g、玉玉米米面面5g5g、黄黄豆豆粉粉5g5g、磷磷酸酸二二氢氢钾钾2g2g，硫硫酸酸镁镁2g2g，V

4、 VB1B11 1片片（10mg10mg）。此此配配方方适适用用于于大大多多数数菌菌种种，金金针针菇、黑木耳、灵芝生长尤其茁壮。可作黑木耳复壮培养基。菇、黑木耳、灵芝生长尤其茁壮。可作黑木耳复壮培养基。3.3.去去皮皮马马铃铃薯薯200g200g、葡葡萄萄糖糖20g20g、琼琼脂脂18-20g18-20g、水水1000ml1000ml、PHPH值值自自然然，另另外外添添加加：麸麸皮皮20g20g、玉玉米米面面5g5g、黄黄豆豆粉粉5g5g、磷磷酸酸二二氢氢钾钾2g2g，硫硫酸酸镁镁2g2g，V VB1B11 1片片（10mL10mL），平平菇菇子子实实体体100g100g。此此配配方方适适用用

5、于大多数菌种生长。做平菇的复壮培养基效果显著。于大多数菌种生长。做平菇的复壮培养基效果显著。4.4.去去皮皮马马铃铃薯薯200g200g、葡葡萄萄糖糖20g20g、琼琼脂脂18-20g18-20g、水水1000ml1000ml、PHPH值值自自然然，另另外外添添加加：麸麸皮皮20g20g、玉玉米米面面5g5g、黄黄豆豆粉粉5g5g、磷磷酸酸二二氢氢钾钾2g2g，硫硫酸酸镁镁2g2g，V VB1B11 1片片（10mg10mg）1 1片片，香香菇菇子子实实体体100g100g。此此配配方方适适用用于于大大多多数数菌菌种种生生长长，可可做做香香菇菇的的复复壮壮培培养养基基，效效果显著。果显著。第5

6、页，本讲稿共35页（一）营养液制作（一）营养液制作1.1.准备工作准备工作三、制作方法三、制作方法第6页，本讲稿共35页 2.2.称量、材料预处理称量、材料预处理按配方准确称量各营养物质。将马铃薯去皮、挖掉按配方准确称量各营养物质。将马铃薯去皮、挖掉芽眼后称量芽眼后称量200g200g，切成，切成1cm1cm见方的小块。琼脂剪碎后用水见方的小块。琼脂剪碎后用水浸泡。浸泡。第7页，本讲稿共35页 3.3.熬煮熬煮将将切切好好的的马马铃铃薯薯块块加加适适量量水水后后放放入入电电饭饭锅锅中中，煮煮至至酥而不烂。酥而不烂。第8页，本讲稿共35页 4.4.过滤、加可溶药物过滤、加可溶药物 用双层沙布过滤

7、，取滤汁，放在电饭锅中加用双层沙布过滤，取滤汁，放在电饭锅中加 入糖入糖第9页，本讲稿共35页 5.5.熬琼脂、定容熬琼脂、定容 在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全溶化为在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全溶化为止，定容至止，定容至1000ml1000ml。第10页，本讲稿共35页 （二）营养液分装（二）营养液分装 1.1.用注射器分装用注射器分装 2.2.分装标准分装标准:分装量为试管长度的分装量为试管长度的1/41/51/41/5。注意培养基不能沾污试管口。注意培养基不能沾污试管口。第11页，本讲稿共35页3.3.塞棉塞塞棉塞棉塞松紧适度，棉塞松紧适度，1/31/3在管外，在管外，2/32/

8、3在管内。在管内。4.4.扎捆扎捆7-107-10支支试试管管捆捆在在一一起起，棉棉塞塞上上包包好好防防水水纸纸，直直立立放入高压灭菌锅中。放入高压灭菌锅中。第12页，本讲稿共35页 (四四)摆斜面摆斜面灭菌结束后锅盖开灭菌结束后锅盖开1/51/5的小缝，用余热烘干报纸和的小缝，用余热烘干报纸和棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/21/2第13页，本讲稿共35页 （三）灭菌处理（三）灭菌处理 在在1.01.5 kg/cm1.01.5 kg/cm2 2压力下维持压力下维持20-30min20-30min。第14页，本讲稿共35页 (四四)摆斜面摆斜面灭菌结

9、束后锅盖开灭菌结束后锅盖开1/51/5的小缝，用余热烘干报纸和的小缝，用余热烘干报纸和棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/21/2第15页，本讲稿共35页 第二节第二节 原种、栽培种培养基制作原种、栽培种培养基制作一、常见原种配方一、常见原种配方木屑培养基配方木屑培养基配方细细木木屑屑80%80%，麸麸皮皮12%12%，玉玉米米面面1%1%，黄黄豆豆粉粉2%2%，过过磷磷酸酸钙钙1.5%1.5%，红红糖糖0.5%0.5%，尿尿素素0.4%0.4%，硫硫酸酸镁镁0.1%0.1%，石石灰灰1%1%，石石膏膏2%2%，料料：水水=1=1：1.0-1.21.0-

10、1.2。此此配配方方适适合合香香菇菇、黑黑木木耳耳、平平菇菇原原种生长，菌丝粗壮洁白。种生长，菌丝粗壮洁白。玉米芯培养基配方玉米芯培养基配方玉玉米米芯芯80%80%，麸麸皮皮14%14%，糖糖0.5%0.5%，过过磷磷酸酸钙钙1%1%，石石灰灰2%2%，尿尿素素0.5%0.5%，玉玉米米面面2%2%，料料：水水=1=1：1.4-1.51.4-1.5。此此配配方方适适合合于于培培养养平平菇菇原种，菌丝生长速度快，且菌丝粗状。原种，菌丝生长速度快，且菌丝粗状。第16页，本讲稿共35页玉米芯、木屑混合培养基配方玉米芯、木屑混合培养基配方玉玉米米芯芯42%42%，木木屑屑20%20%，豆豆秸秸20%2

11、0%，麸麸皮皮10%10%，过过磷磷酸酸钙钙1.5%1.5%，石石灰灰2%2%，石石膏膏1%1%，糖糖0.5%0.5%，玉玉米米面面3%3%，料料：水水1=11=1：1.4-1.4-1.51.5。此此配配方方适适合合于于培培养养平平菇菇原原种种。生生长长健健壮壮，也也可可培培养养金金针菇，滑子蘑原种。针菇，滑子蘑原种。软质木屑配方软质木屑配方椴椴木木屑屑75%75%（木木线线厂厂下下脚脚料料，颗颗粒粒较较大大），麸麸皮皮15%15%，玉玉米米面面5%5%，石石膏膏1.5%1.5%，石石灰灰1%1%，糖糖0.5%0.5%，过过磷磷酸酸钙钙1.5%1.5%，尿尿素素0.5%0.5%，料料，水水=1

12、=1：1.21.2左左右右。适适用用于于金金针针菇菇，滑滑子子蘑蘑等等分分解解基基质质能能力力较弱的品种使用。较弱的品种使用。第17页，本讲稿共35页麦粒、木屑培养基配方麦粒、木屑培养基配方新新鲜鲜、优优质质小小麦麦80%80%，阔阔叶叶树树木木屑屑20%20%，木木屑屑：水水=1=1：1 1左左右右，拌拌木木屑屑用用煮煮小小麦麦水水，或或在在此此基基础础上上，加加入入总总量量0.5%0.5%的的过过磷磷酸酸钙钙，0.5%0.5%的的蔗蔗糖糖,1%,1%的的石石灰灰，在在麦麦粒粒煮煮好好后后连连同同木木屑屑拌拌入。入。玉米粒培养基配方玉米粒培养基配方优优质质新新鲜鲜玉玉米米100%100%，或

13、或后后期期加加入入0.5%0.5%过过磷磷酸酸钙钙，0.5%0.5%的的糖糖,1%,1%的石灰。的石灰。玉玉米米粒粒培培养养基基制制作作的的原原种种，具具备备麦麦粒粒原原种种的的优优点点，后后劲劲更更足足，接种扩繁量更大。接种扩繁量更大。第18页，本讲稿共35页二、原种培养基的制作方法二、原种培养基的制作方法一、谷粒培养基制作一、谷粒培养基制作1.1.按配方称量各营养物质按配方称量各营养物质 配配方方一一：优优质质新新鲜鲜小小麦麦65%65%，木木屑屑15%15%，棉棉籽籽壳壳15%15%，麸麸皮皮5%5%，石石膏膏1%1%，过过磷磷酸酸钙钙0.5%0.5%，糖糖0.5%0.5%，尿尿素素0.

14、5%0.5%2.2.谷粒浸泡吸水谷粒浸泡吸水冬季浸泡冬季浸泡24-4824-48小时，夏季加小时，夏季加1%1%石灰（以防变酸）石灰（以防变酸）浸泡浸泡2424小时，隔夜换水。小时，隔夜换水。第19页，本讲稿共35页3.3.煮沸、沥干捞出煮沸、沥干捞出泡好后，漂洗干净（去杂），煮至饱胀泡好后，漂洗干净（去杂），煮至饱胀无白心，切忌煮开花，沥干水分后捞出。无白心，切忌煮开花，沥干水分后捞出。4.4.拌料拌料 用煮小麦水拌木屑、棉籽壳、麸皮，最用煮小麦水拌木屑、棉籽壳、麸皮，最后再一起与麦粒拌匀。后再一起与麦粒拌匀。第20页，本讲稿共35页5.5.装瓶装瓶(1)(1)装料量应为装料量应为1/31/

15、3或或1/21/2罐头瓶，便于培养罐头瓶，便于培养时摇动基料促进丝均匀生长。时摇动基料促进丝均匀生长。(2)(2)擦净并封瓶口擦净并封瓶口封口塑料袋采用规格为封口塑料袋采用规格为13cm13cm0.004cm13cm13cm0.004cm高压聚丙稀袋，二层，里层在中央剪一高压聚丙稀袋，二层，里层在中央剪一3cm3cm宽宽菱形口。至少二个皮套。菱形口。至少二个皮套。第21页，本讲稿共35页6.6.装锅灭菌装锅灭菌 高压灭菌于高压灭菌于126126左右维持左右维持2 2小时；常小时；常压灭菌于压灭菌于100100维持维持10-1210-12小时，夏季时间小时，夏季时间可酌情延长。可酌情延长。7.7

16、.出锅出锅 、冷却、冷却 冷却至冷却至3030以下待接种。以下待接种。第22页，本讲稿共35页二、二、.木屑、玉米芯料培养基制作方法木屑、玉米芯料培养基制作方法 1.1.按配方称料。按配方称料。2.2.拌料：干混（将石膏和不溶于水的主料和拌料：干混（将石膏和不溶于水的主料和辅料混匀）；湿混（将石灰和溶于水的辅料辅料混匀）；湿混（将石灰和溶于水的辅料制成母液，加入所需水量稀释后拌料）。制成母液，加入所需水量稀释后拌料）。第23页，本讲稿共35页 装瓶：闷装瓶：闷1-21-2个小时（夏季时间不宜过长）个小时（夏季时间不宜过长）待料充分吸足水后装瓶，装料至瓶肩，上紧下松待料充分吸足水后装瓶，装料至瓶

17、肩，上紧下松压平料面，擦净瓶口，打压平料面，擦净瓶口，打1.5cm1.5cm粗接种孔至瓶底粗接种孔至瓶底封口。封口。灭菌：同谷料培养基制作灭菌：同谷料培养基制作 出锅、冷却：同谷粒培养基制作出锅、冷却：同谷粒培养基制作第24页，本讲稿共35页三、栽培种制作三、栽培种制作 制作方法基本同于原种制作。需要注意制作方法基本同于原种制作。需要注意的是栽培种培养基制作一般选用加富的培养的是栽培种培养基制作一般选用加富的培养料，而且含水量要较原种加大，更利于菌种料，而且含水量要较原种加大，更利于菌种快速吃料。容器可以用快速吃料。容器可以用500ml500ml罐头瓶，也可罐头瓶，也可以用（以用（17-181

18、7-18）X X（30-3530-35）X X（0.04-0.050.04-0.05）cmcm低压聚乙烯袋。低压聚乙烯袋。第25页，本讲稿共35页 第三节第三节 液体菌种制作技术液体菌种制作技术 一、液体菌种制作的原理一、液体菌种制作的原理食用菌液体菌种制作是在发酵罐中，采用液食用菌液体菌种制作是在发酵罐中，采用液体培养基通入无菌空气并加以搅拌，增加培体培养基通入无菌空气并加以搅拌，增加培养基中溶氧含量，提供食用菌菌体呼吸代谢养基中溶氧含量，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，获所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，获得大量的菌丝体或代谢产物。得大量的菌丝体或代谢产物。第2

19、6页，本讲稿共35页二、液体菌种制作的特点二、液体菌种制作的特点1.1.原料来源广泛原料来源广泛2.2.菌丝体生长快速菌丝体生长快速3.3.生产周期短生产周期短食用菌深层发酵一般仅需食用菌深层发酵一般仅需2-7d2-7d就可获得大量的菌丝体，就可获得大量的菌丝体，而固体培养则需而固体培养则需30-60d30-60d。4.4.工厂化生产、无季节性工厂化生产、无季节性食用菌深层发酵是在发酵罐内、控制最佳条件来培养菌食用菌深层发酵是在发酵罐内、控制最佳条件来培养菌体的，不受季节性限制。体的，不受季节性限制。第27页，本讲稿共35页三、液体菌种制作的用途三、液体菌种制作的用途1.1.生产液体菌种生产液

20、体菌种食用菌经深层发酵食用菌经深层发酵2-7d的幼嫩菌丝体，可以用来作为食用菌栽培用的幼嫩菌丝体，可以用来作为食用菌栽培用的原种和栽培种。的原种和栽培种。2.2.制备药物或提取生化制品制备药物或提取生化制品许多食用菌种类，其深层发酵培养的菌丝体可作为提取药物许多食用菌种类，其深层发酵培养的菌丝体可作为提取药物成分或生化制品的材料。成分或生化制品的材料。3.3.制作食品或畜禽饲料制作食品或畜禽饲料 第28页，本讲稿共35页四、液体菌种制作的主要设备四、液体菌种制作的主要设备 1.1.摇床摇床往复式播床：振荡方式为来回振荡往复式播床：振荡方式为来回振荡旋转式摇床：振荡方式为旋转旋转式摇床：振荡方式

21、为旋转第29页，本讲稿共35页四、液体菌种制作的主要设备四、液体菌种制作的主要设备 2.2.种子罐和发酵罐种子罐和发酵罐许多食用菌种类，其深层发酵培养的菌丝体可作为提取药物成许多食用菌种类，其深层发酵培养的菌丝体可作为提取药物成分或生化制品的材料。分或生化制品的材料。第30页，本讲稿共35页四、液体菌种制作的主要设备四、液体菌种制作的主要设备 3.3.空气净化设备空气净化设备 4.4.培养基连续灭菌设备培养基连续灭菌设备 包括配料罐、连消塔、维持塔、喷淋冷却器等。包括配料罐、连消塔、维持塔、喷淋冷却器等。5 5供气设备供气设备 主要是蒸气锅炉及附属设备主要是蒸气锅炉及附属设备 第31页，本讲稿

22、共35页五、液体菌种制作的主要工艺五、液体菌种制作的主要工艺 1.1.种子制备种子制备种子制备的目的是大量繁殖足够数量的、健壮的、高纯度的种种子制备的目的是大量繁殖足够数量的、健壮的、高纯度的种子子斜面菌种制备斜面菌种制备 。摇瓶种子制备摇瓶种子制备一级、二级种子制备一级、二级种子制备一级种子罐通常为一级种子罐通常为50-100L50-100L，二级种子罐为，二级种子罐为500-1000L500-1000L。第32页，本讲稿共35页六、液体菌种制作的主要参数六、液体菌种制作的主要参数1.1.菌龄菌龄菌菌龄龄与与种种子子的的活活力力密密切切相相关关。通通常常，摇摇瓶瓶种种子子菌菌龄龄控控制制在在

23、4-4-10d10d，一级种子和二级种子菌龄为，一级种子和二级种子菌龄为48-96H48-96H。2.2.接种量接种量一般地，食用菌深层发酵时的接种量为一般地，食用菌深层发酵时的接种量为10-20%10-20%。3.3.温度温度通常在通常在22-3022-30生长最快，得率最高。生长最快，得率最高。第33页，本讲稿共35页4.4.通气量通气量食食用用菌菌深深层层发发酵酵的的通通气气量量以以0.2-1.50.2-1.5通通气气体体积积/培培养养液液体体积积/min/min为宜。为宜。5.5.搅拌速度搅拌速度食用菌深层发酵的搅拌速度一般是食用菌深层发酵的搅拌速度一般是180-500r/min180

24、-500r/min。6.6.酸碱度酸碱度不不同同种种类类的的食食用用菌菌都都有有一一个个最最适适酸酸碱碱度度，例例如如，黑黑木木耳耳的的最最适适pHpH为为6.0-6.56.0-6.5、金针菇为、金针菇为6.36.3、香菇为、香菇为4.5-6.54.5-6.5。第34页，本讲稿共35页7.7.罐压罐压在发酵过程中罐压通常为在发酵过程中罐压通常为0.2-0.7Kg/cm0.2-0.7Kg/cm。8.8.泡沫控制泡沫控制在在发发酵酵过过程程中中泡泡沫沫过过多多不不利利于于发发酵酵，目目前前大大多多数数是是加加入入0.006%0.006%的泡敌做消泡剂消除泡沫。的泡敌做消泡剂消除泡沫。9.9.发酵特点发酵特点发发酵酵终终点点是是否否准准确确，应应参参考考产产物物浓浓度度、过过滤滤浓浓度度、氨氨基基酸酸含含量量、残糖量、菌丝形态、残糖量、菌丝形态、pHpH、发酵液的外观和粘度等因素才能决定。、发酵液的外观和粘度等因素才能决定。第35页，本讲稿共35页