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1、PCR实验室开展检验工程总结PCR实验室又叫基因扩增实验室,实时荧光定量PCR技术是DNA定 量技术的一次飞跃,是用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特 殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含 量,其精确度高达纳米级别。而实时荧光定量PCR那么是实现该项技术的 载体。PCR实验常用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾 病,通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病毒含量不 高的感染者体内是否含有特定的病毒。PCR检测方法具有灵敏度高、特 异性高、快捷、对样品要求低等优点,因此被临床医生广为认可,已广 泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病
2、诊断。在新形势推动下,各地区各级医院都开始或者准备建立独立的PCR 实验室,都已具备核酸检测能力已经成为各医疗机构。但由于各地区疫 情的差异化使得长期低风险地区的一些核酸实验室除了具备应急功能 之外几乎处于停滞状态。此类情况也是各级医院领导在建立实验室最担 心的问题,投入了资金和精力但又不能给医院带来创收。PCR实验室其实功能极其强大,定性分析和定量检测是它最大的两 个应用方向,那除了新冠核酸检测,我们“万能”的PCR实验室还能做 些什么呢?接下来就给大家展示几个具体应用方向的工程例如,也希望 通过这些例如可以给各级医疗系统提供一些工程开展的思路和方向。(一)病原体测定PCR技术的问世使病原体
3、检测能够快速、方便地进行。由于PCR技 术假阳性率太高,只要有微量病原体存在就可得到阳性结果,这并不能 作为诊断依据,只有当一定数量的病原体存在时才有临床意义。因此, 对模板准确定量显得特别重要,应用荧光技术PCR就能够快速、准确地 得到结果。对于解决免疫学检测的“窗口期”问题,判断疾病是否处于 隐性或亚临床状态,以及抗体检测不能判定是现症感染还是既往感染时, 均可利用PCR进行确定。例如:新型冠状病毒核酸检测。方法学:荧光PCR法。用途:用于体外定性检测新型冠状病毒感染的肺炎疑似病例、疑似 聚集性病例患者、其他需要进行新型冠状病毒感染诊断或鉴别。检测基因:新型冠状病毒(2019-nCoV)
4、OR Flab和N基因、E基 So标本类型:上呼吸道标本:咽拭子、鼻拭子;下呼吸道标本:呼吸 道抽取物、肺泡灌洗液样本、肺组织活检标本。检测流程:(1)核酸检测前的生物安全防护(工作人员个人三级防护的穿戴) f (2)样本的灭活(56灭活30分钟)一(3)样本的核酸提取(手 工、核酸提取仪)f (4) PCR体系的配制和模板加样一(5)上机检测 及结果分析一(6)检测后的消毒。其他病原体检测:HIV、甲乙丙肝、HPV、肺支、肺衣、EB病毒、腺 病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族链球菌。适合开展的医院和科室:儿童医院、妇幼、儿检所、第三方、各种级别的有需求的医院。(二)遗传病检测基因突变和拷
5、贝数变异是遗传病发生的主要遗传学基础,也是遗传 病检测的主要靶标。遗传病的复杂性伴随着基因突变数目多、类型广; 基因拷贝数变异不仅表现为缺失和复制,而且缺失位置、大小以及复制 倍数都呈现多样性。遗传变异的复杂性为遗传病的临床检测提出了技术 挑战。实时PCR技术是我们最近开展起来新一代实时PCR技术,利用荧 光标记或熔点分析,可以在单个反响管内检测多个靶标。例如:人Y染色体AZF区微缺失检测。方法学:荧光PCR法。用途:本产品用于定性检测男性全血样本中丫染色体无精子症因 子。(AZF)区域是否存在缺失,具体检测缺失位点为:AZFa: sY84、sY86; AZFb: sY127、 sY134;
6、AZFc: sY254、 sY255; AZFd: sY145、 sY152o临床研究说明,Y染色体AZF区(AZFa,AZFb,AZFc,AZFd)不同程 度的缺失可导致男性的少精症、无精症或精子畸形等病症,从而导致男 性不育。本试剂盒可辅助诊断确诊不孕不育患者的病因分析,检测结果 仅供临床参考,不能单独用做确诊或排除病例等临床诊断的依据。标本类型:全血。检测流程:(1)样本处理及DNA提取(在标本制备区完成)一(2)样本处理 及DNA提取(在标本制备区完成)一(3)加样(在标本制备区完成) 一 (4) PCR扩增(在扩增区完成)一(5)结果分析与判定。其他同类工程:地贫、耳聋、苯丙酮尿症(
7、PKU)、蚕豆病(G6PD)、 脊髓型肌萎缩(SMA)、进行性肌营养不良(DMD)、强直性脊柱炎(HLA)、 血友病。适合开展的医院和科室:妇幼、第三方、各种级别的有需求的医院。(三)个性化用药药理学和药物基因组学的开展,说明了药物代谢和效应个体差异的 遗传本质,药物异常反响主要是因为药物代谢酶基因变异而导致酶活性 异常,进而导致服药后体内药物未能被正常代谢、消除而排出体外,使 得体内药物浓度过高或过低,达不到理想的治疗效果。这种异常药物反 应,可通过检测与患者所服用药物相关的遗传基因,调整药物剂量或寻 找替代药物,最大程度地制定出更合理、有效、经济的药物治疗方案。例如:心血管个体化用药指导检
8、测:CYP2c19基因突变检测试剂盒、 CYP2c9基因突变检测试剂盒、ALDH2基因突变检测试剂盒、MTHFR基因 突变检测试剂盒。方法学:荧光PCR法。用途:氯口比格雷、华法林、硝酸甘油及叶酸均为心血管临床上常见 的药物,心血管用药指导分子生物学检测,明确基因分型,药学部临床 药师根据检测结果,并综合考虑患者自身因素、临床诊断以及联合用药 等相关信息,为临床出具个体化用药建议。标本类型:全血(本试剂盒无需提取DNA,加样直接PCR)。检测流程:(1)配制反响体系(在样本准备区完成)一 (2)直接加入全血(在 标本制备区完成)一(3) PCR扩增(在扩增区完成)一(4)结果分析 与判定。其他
9、同类工程:他汀类用药(ApoE)、B受体阻滞剂(ADRB1)、儿 童安全用药、肿瘤靶向化疗个性化用药(EGFR、kRAS)类。适合开展的医院和科室:心血管医院、肿瘤医院、第三方、各种级 别的有需求的医院。(四)肿瘤研究肿瘤是危害人类健康的一种疾病,它的恶性程度与预后判断主要依 靠是否有转移和病理切片分期。随着分子生物学的迅猛开展,肿瘤研究 领域的大量研究成果显示,肿瘤的发生、开展、治疗和预后与肿瘤细胞 内部基因和肿瘤相关病毒有关。很多原癌基因和抑癌基因的表达情况的 检测都可揭示了癌变的可能性,而PCR方法学可以解决此类问题,此 外,PCR方法用于体外定性检测人外周血血浆中septin9基因甲基化, 用于各种肿瘤的临床辅助诊断。标本类型:全血/组织。检测流程:(1) PCR反响体系构建(在试剂准备区完成)(2)样本 处理及DNA提取(在标本制备区完成)一(3)亚硫酸盐转化(在标本 制备区完成)一(4)PCR扩增(扩增区完成)一(5)结果分析与判定。其他同类工程:SH0X2基因、RASSF1A基因、SDC2基因甲基化、MGMT 基因甲基化、RNF180. her2o适合开展的医院和科室:肿瘤医院、第三方、各种级别的有需求的医院。
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