微生物指标及微生物检验精.ppt

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1、微生物指标及微生物检验第1页，本讲稿共42页我国旧的饮用水水质标准是我国旧的饮用水水质标准是1985年颁布实施的年颁布实施的GB5749-85，标准检验方法为标准检验方法为GB5750-85。该标准与国外的饮用水标准相比，。该标准与国外的饮用水标准相比，主要差别在于微生物指标项目少，缺少有机物和消毒副产物指标。主要差别在于微生物指标项目少，缺少有机物和消毒副产物指标。微生物指标只有细菌总数和总大肠菌群微生物指标只有细菌总数和总大肠菌群2项，不能确切的评价水质项，不能确切的评价水质的卫生状况。的卫生状况。修订后的标准，微生物学指标增加为修订后的标准，微生物学指标增加为6项：菌落总数、总大肠菌群、

2、项：菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌、贾第鞭毛虫和隐孢子虫。耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌、贾第鞭毛虫和隐孢子虫。同时在资料性附件中增加了肠球菌和产气荚膜梭状芽胞杆菌。同时在资料性附件中增加了肠球菌和产气荚膜梭状芽胞杆菌。第2页，本讲稿共42页水质常规指标及限值水质常规指标及限值修修订订前前修修订订后后微生物指微生物指标标限限值值微生物指微生物指标标限限值值细细菌菌总总数数100 CFU/mL菌落菌落总总数数/（CFU/mL）100总总大大肠肠菌群菌群每每100mL水水样样中不得中不得检检出出总总大大肠肠菌菌/（MPN/100mL或或CFU/100mL）不得不得检检出出粪大肠菌群粪

3、大肠菌群每每100mL水水样样中不得中不得检检出出耐耐热热大大肠肠菌菌/（MPN/100mL或或CFU/100mL）不得不得检检出出游离余氯游离余氯在与水接触在与水接触30min后应不后应不低于低于0.3mg/L,管梢末水不管梢末水不应低于应低于0.5mg/L大大肠肠埃希氏菌埃希氏菌/（MPN/100mL或或CFU/100mL）不得不得检检出出第3页，本讲稿共42页水质非常规指标及限值水质非常规指标及限值修修订订前前修修订订后后微生物指微生物指标标限限值值微生物指微生物指标标限限值值-菌落总数菌落总数/（CFU/100mL）500小型集中式供水和分散式供水部分水质指标及限值小型集中式供水和分散

4、式供水部分水质指标及限值修修订订前前修修订订后后微生物指微生物指标标限限值值微生物指微生物指标标限限值值-贾第鞭毛虫贾第鞭毛虫/（个（个/10L）1-隐孢子虫隐孢子虫/（个（个/10L）1第4页，本讲稿共42页生活饮用水水质参考指标及限值生活饮用水水质参考指标及限值修修订订前前修修订订后后微生物指微生物指标标限限值值微生物指微生物指标标限限值值-肠球菌肠球菌/（CFU/100mL）0-产气荚膜梭状芽胞杆产气荚膜梭状芽胞杆/（CFU/100mL）0第5页，本讲稿共42页一、菌落总数一、菌落总数修订前修订前修订后修订后细菌总数细菌总数原理：细菌总数是指水样在一定条原理：细菌总数是指水样在一定条件下

5、培养后（培养基成分、培养温件下培养后（培养基成分、培养温度和时间、度和时间、pH、需氧性质等）所得、需氧性质等）所得1ml水样所含菌落的总数。按本规水样所含菌落的总数。按本规范规定所得结果只包括一群能在营范规定所得结果只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数菌菌落总数培养条件：培养条件：361 24h 菌落总数菌落总数定义：水样在营养琼脂上有氧条件定义：水样在营养琼脂上有氧条件下下37培养培养48h后，所得后，所得1ml水样所水样所含菌落的总数。含菌落的总数。361 48h 第6页，本讲稿共42页二、总大肠菌群（埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌

6、属、二、总大肠菌群（埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属、肠杆菌属）肠杆菌属）除多管发酵法、滤膜法外，增加了酶底物检测方法除多管发酵法、滤膜法外，增加了酶底物检测方法多管发酵法多管发酵法修订前修订前修订后修订后多多管管发发酵酵法法原原理理：总总大大肠肠菌菌群群系系指指一一群群在在37 培培养养24h能能发发酵酵乳乳糖糖、产产酸酸产产气气、需需氧氧和和兼兼性性厌厌氧氧的的革革兰兰氏氏阴阴性性无无芽芽胞胞杆杆菌菌。该该菌菌群群主主要要来来源源于于人人畜畜粪粪便便，具具有有指指示示菌菌的的一一般般特特征征，故故以以此此作作为为粪粪便便污污染指染指标评标评价价饮饮水的水的卫卫生生质质量。量。总总大大

7、肠肠菌菌群群定定义义：总总大大肠肠菌菌群群指指一一群群在在37 培培养养24h能能发发酵酵乳乳糖糖、产产酸酸产产气气、需需氧氧和和兼兼性性厌厌氧氧的的革革兰兰氏氏阴阴性性无无芽芽胞胞杆菌。杆菌。结结果：果：5个个10ml 管中阳性管数管中阳性管数为为0时时，MPN值为值为0（主要（主要针对针对出厂自来水或需出厂自来水或需每天每天检验检验一次的水一次的水样样）结结果：果：5个个10ml 管中阳性管数管中阳性管数为为0时时，MPN值值2.2 第7页，本讲稿共42页滤膜法滤膜法修订前修订前修订后修订后滤膜法原理：用孔径为滤膜法原理：用孔径为0.45m的的微孔滤膜过滤水样微孔滤膜过滤水样,细菌被截留在

8、细菌被截留在滤膜上滤膜上,将滤膜贴在选择培养上将滤膜贴在选择培养上,经经培养后培养后,计数生长在滤膜上的典型计数生长在滤膜上的典型大肠菌群菌落数。大肠菌群菌落数。培养条件：培养条件：37 18-24h 滤膜法定义：总大肠菌群滤膜法是滤膜法定义：总大肠菌群滤膜法是指用孔径为指用孔径为0.45m的微孔滤膜过的微孔滤膜过滤水样滤水样,将滤膜贴在添加乳糖的选将滤膜贴在添加乳糖的选择培养上择培养上,37 培养培养24h，能形成，能形成特征菌落的需氧和兼性厌氧的革兰特征菌落的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌以检测水中总大氏阴性无芽胞杆菌以检测水中总大肠菌群的方法。肠菌群的方法。培养条件：培养条件：37

9、 242h 第8页，本讲稿共42页酶底物法酶底物法酶底物法定义：总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生酶底物法定义：总大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生-半乳糖苷酶的半乳糖苷酶的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，以细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，以此技术来检测水中总大肠菌群的方法。此技术来检测水中总大肠菌群的方法。培养基：培养基：MMO-MUG培养基（培养基（Minimal Medium ONPG-MUG）。本方法可分为定性和定量。本方法可分为定性和定量。定量法：定量法：10管法、管法、51孔定量法孔定量法 培

10、养条件：培养条件：361 24h 能产生能产生-半乳糖苷酶的细菌群组分解半乳糖苷酶的细菌群组分解ONPG使培养基呈黄色使培养基呈黄色酶底物法的主要特点：酶底物法的主要特点：优点：优点：可同时判断水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌可同时判断水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌检测时间较短，只需检测时间较短，只需18-24h，最长需要，最长需要28h无需确证试验无需确证试验操作简单，对试验条件和人员要求低操作简单，对试验条件和人员要求低缺点：缺点：检测成本高检测成本高第9页，本讲稿共42页总大肠菌群三种方法的比较总大肠菌群三种方法的比较多管发酵法多管发酵法滤膜法滤膜法酶底物法酶底物法时间时间24-72h24-4

11、8h24-28h验证试验验证试验需要需要需要需要不需要不需要步骤步骤较繁较繁较简便较简便简便简便特殊设备特殊设备显微镜显微镜显微镜、过滤设备显微镜、过滤设备压膜机压膜机价格价格低低低低较高较高第10页，本讲稿共42页三、耐热大肠菌群（埃希氏菌属、耐热克雷伯氏菌）三、耐热大肠菌群（埃希氏菌属、耐热克雷伯氏菌）检测方法：多管发酵法、滤膜法检测方法：多管发酵法、滤膜法修订前修订前修订后修订后原理：用提高培养温度的方法将自然原理：用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中大肠菌群环境中的大肠菌群与粪便中大肠菌群区分开，在区分开，在44.5仍能生长的大肠菌仍能生长的大肠菌群群,称为粪大肠菌群。称

12、为粪大肠菌群。定义：用提高培养温度的方法将自然定义：用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中大肠菌群环境中的大肠菌群与粪便中大肠菌群区分开，在区分开，在44.5仍能生长的大肠菌仍能生长的大肠菌群群,称为耐热大肠菌群。称为耐热大肠菌群。第11页，本讲稿共42页四、大肠埃希氏菌四、大肠埃希氏菌检测方法：多管发酵法、滤膜法、酶底物法检测方法：多管发酵法、滤膜法、酶底物法大肠埃希氏菌多管发酵法定义：大肠埃希氏菌是指多管发酵法总大肠菌群阳大肠埃希氏菌多管发酵法定义：大肠埃希氏菌是指多管发酵法总大肠菌群阳性，在含有荧光底物的培养基上性，在含有荧光底物的培养基上44.5培养培养24h产生产生-葡萄

13、糖酫酸酶，分解荧葡萄糖酫酸酶，分解荧光底物释放出荧光产物，使培养基在紫外光下产生特征性荧光的细菌，以光底物释放出荧光产物，使培养基在紫外光下产生特征性荧光的细菌，以此来检测水中大肠埃希氏菌的方法。此来检测水中大肠埃希氏菌的方法。培养基：培养基：EC-MUG（4-甲基伞形酮甲基伞形酮-D-葡萄糖酫酸苷）。葡萄糖酫酸苷）。培养条件：培养条件：44.50.5 培养培养242h。紫外灯：波长。紫外灯：波长366nm，功率，功率6W大肠杆菌能产生大肠杆菌能产生-葡萄糖酫酸酶分解葡萄糖酫酸酶分解MUG，菌落在，菌落在366nm紫外光下产生蓝色荧紫外光下产生蓝色荧光光滤膜法定义：用滤膜法检测水样后，将总大肠

14、菌群阳性的滤膜滤膜法定义：用滤膜法检测水样后，将总大肠菌群阳性的滤膜 在含有荧在含有荧光底物的培养基上培养，能产生光底物的培养基上培养，能产生-葡萄糖酫酸酶分解荧光底物释放出荧光产物，葡萄糖酫酸酶分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光，以此来检测水中大肠埃希氏菌的方法。使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光，以此来检测水中大肠埃希氏菌的方法。培养基：培养基：NA-MUG培养条件：培养条件：361 培养培养4h紫外灯：波长紫外灯：波长366nm，功率，功率6W第12页，本讲稿共42页酶底物法定义：在选择培养基上能产生酶底物法定义：在选择培养基上能产生-半乳糖苷酶分解色原半乳糖

15、苷酶分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，并能产生底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，并能产生-葡萄糖葡萄糖酫酸酶分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落能够在紫外光下产生酫酸酶分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光，以此技术来检测大肠埃希氏菌的方法为大肠埃希氏菌特征性荧光，以此技术来检测大肠埃希氏菌的方法为大肠埃希氏菌酶底物法。酶底物法。培养基：培养基：ONPG-MUG结果判定：水样变黄色同时在结果判定：水样变黄色同时在366nm的紫外光下产生蓝色荧光为阳性。的紫外光下产生蓝色荧光为阳性。水样未变黄色而有蓝色荧光产生不能判定为阳性。水样未变黄色而有蓝色荧光产生不能

16、判定为阳性。第13页，本讲稿共42页五、贾第鞭毛虫子和隐孢子虫五、贾第鞭毛虫子和隐孢子虫 贾第鞭毛虫和隐孢子虫是一类寄生于人和动物体内的肠道贾第鞭毛虫和隐孢子虫是一类寄生于人和动物体内的肠道原虫，可致人兽共患病。患此病的人和动物从粪便中排出大原虫，可致人兽共患病。患此病的人和动物从粪便中排出大量的卵量的卵(孢孢)囊污染环境，在地面水和防护差的地下水及处囊污染环境，在地面水和防护差的地下水及处理不良的自来水中都可检出卵理不良的自来水中都可检出卵(孢孢)囊。随着社会发展，优质囊。随着社会发展，优质供水势在必行。对一些潜在的危险因素加以限制很有必要。在此供水势在必行。对一些潜在的危险因素加以限制很有

17、必要。在此基础上，新标准中增加了贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测方法。基础上，新标准中增加了贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测方法。第14页，本讲稿共42页Cryptosporidium 隐孢子虫隐孢子虫特点特点:单一细胞原生动物，约单一细胞原生动物，约3-73-7 m m。有。有微小隐孢子虫微小隐孢子虫、鼠隐孢子虫和贝氏隐孢子虫三种，寄生于人、牛等体内的主要为鼠隐孢子虫和贝氏隐孢子虫三种，寄生于人、牛等体内的主要为微小隐孢子虫（微小隐孢子虫（C Cparvumparvum）。）。宿主：人类、宿主：人类、鸟类、鼠类、爬行类、鱼类鸟类、鼠类、爬行类、鱼类感染源感染源:隐孢子虫主要寄生在被感染的动物体肠道内，卵

18、囊通过粪隐孢子虫主要寄生在被感染的动物体肠道内，卵囊通过粪便排出体外污染环境。便排出体外污染环境。易感人群：免疫缺陷者（如爱滋患者）、儿童、老人、医务人员等易感人群：免疫缺陷者（如爱滋患者）、儿童、老人、医务人员等传播方式传播方式:以粪以粪-口，手口，手-口途径为主，污染的水源和空气均可传播。口途径为主，污染的水源和空气均可传播。第15页，本讲稿共42页Cryptosporidium Cryptosporidium 隐孢子虫生活周期隐孢子虫生活周期子孢子子孢子滋养体滋养体型裂殖体型裂殖体裂殖子裂殖子型裂殖体型裂殖体雌、雄配子体雌、雄配子体合子合子成熟卵囊成熟卵囊裂殖子裂殖子第16页，本讲稿共4

19、2页Cryptosporidium Cryptosporidium 隐孢子虫隐孢子虫(染色后荧光显微镜下染色后荧光显微镜下)第17页，本讲稿共42页v特点特点:单一细胞原生动物，大小约单一细胞原生动物，大小约10-1510-15 m m，含，含4 4对鞭毛和双核。对鞭毛和双核。人、动物共染。寄生人体内为人、动物共染。寄生人体内为蓝氏贾第鞭毛虫蓝氏贾第鞭毛虫 Giardia Giardia lamblialamblia。在不同温度和纬度地区均能发现该病；发达国家在不同温度和纬度地区均能发现该病；发达国家感染率为感染率为2-5%2-5%；发展中国家感染率可高达到；发展中国家感染率可高达到20-30

20、%20-30%。可引可引起急慢性腹泻、肠吸收紊乱及延缓儿童的生长发育。起急慢性腹泻、肠吸收紊乱及延缓儿童的生长发育。v传染源：被孢囊污染的水和食物；往往一人带孢囊全家感染；传染源：被孢囊污染的水和食物；往往一人带孢囊全家感染；v传播传播:通过被污染的水和食物经口传播；接触（往往一人带孢囊全通过被污染的水和食物经口传播；接触（往往一人带孢囊全家感染）；娱乐用水；旅游。家感染）；娱乐用水；旅游。v易感人群：易感人群：3 3岁以内婴儿；免疫功能受损害者；旅游者。岁以内婴儿；免疫功能受损害者；旅游者。Giardia 贾第鞭毛虫贾第鞭毛虫第18页，本讲稿共42页重要的动物宿主重要的动物宿主贾第鞭毛虫在自

21、然界广泛存在，包括两栖动物；鸟类；哺贾第鞭毛虫在自然界广泛存在，包括两栖动物；鸟类；哺乳动物在内的乳动物在内的40多种动物均可成为贾第鞭毛虫的宿主。多种动物均可成为贾第鞭毛虫的宿主。调查表明，人排出孢囊可使狗、海狸、麝鼠、沙土鼠及调查表明，人排出孢囊可使狗、海狸、麝鼠、沙土鼠及大鼠等动物感染。大鼠等动物感染。一些生活在水中的动物可被来源于人的贾第鞭毛虫孢囊一些生活在水中的动物可被来源于人的贾第鞭毛虫孢囊感染，因此这些动物即使不是主要宿主也可能作为贾第鞭感染，因此这些动物即使不是主要宿主也可能作为贾第鞭虫的传播媒介。虫的传播媒介。第19页，本讲稿共42页Giardia Giardia 贾第鞭毛虫

22、贾第鞭毛虫第20页，本讲稿共42页两虫感染的特点两虫感染的特点贾第氏鞭毛虫贾第氏鞭毛虫(Giardia)/Giardia)/隐孢子虫隐孢子虫(Cryptosporidium)/Cryptosporidium)/感染后感染后无特殊临床症状无特殊临床症状,无预防疫苗，绝大多数抗生素无效，治疗无预防疫苗，绝大多数抗生素无效，治疗依赖于自身抵抗力依赖于自身抵抗力大部份作为源水的江河及水库水等地表水是高危的大部份作为源水的江河及水库水等地表水是高危的,大部分地下大部分地下水都有被地表水污染的潜在危险水都有被地表水污染的潜在危险可以通过被污染的源水而进入供水系统可以通过被污染的源水而进入供水系统,水源性感

23、染已成为最大水源性感染已成为最大的感染源，但孢的感染源，但孢/卵囊对传统的水处理法中氯化消毒有抗性卵囊对传统的水处理法中氯化消毒有抗性,氯不氯不能渗透过卵囊，沙滤及膜过滤法也不能完全去除能渗透过卵囊，沙滤及膜过滤法也不能完全去除 饮用水高温煮沸也并非有效饮用水高温煮沸也并非有效对氯消毒耐受、对热敏感、感染剂量低、感染率高对氯消毒耐受、对热敏感、感染剂量低、感染率高第21页，本讲稿共42页隐孢子虫感染案例隐孢子虫感染案例 1993 1993 年在美国威斯康星州的东南年在美国威斯康星州的东南 部港口城市密尔沃基暴发部港口城市密尔沃基暴发 400,000 400,000 人被人被Cryptospor

24、idiumCryptosporidium感染，感染，4,0004,000人到医院人到医院 就医，就医，6060人死亡。调查显示致病源为处理不慎的饮用水。人死亡。调查显示致病源为处理不慎的饮用水。1996 1996 年美国年美国CDCCDC将将 CryptosporidiumCryptosporidium感染列入国家必须申感染列入国家必须申报的传染病名单，报的传染病名单，20022002年将年将 Giardia Giardia 感染列入国家必须申报的感染列入国家必须申报的传染病名单传染病名单 U.S.EPAU.S.EPA第22页，本讲稿共42页两虫的检测方法（免疫磁分离荧光抗体法）两虫的检测方法

25、（免疫磁分离荧光抗体法）检测程序：检测程序：水样过滤水样过滤 洗涤洗涤 离心离心 免疫磁珠捕获卵囊免疫磁珠捕获卵囊 磁珠与磁珠与卵囊复合物的分离卵囊复合物的分离 荧光标记和荧光标记和DAPI染色染色 显微镜检显微镜检查记述查记述 结果报告结果报告检测问题：检测问题：方法操作复杂方法操作复杂检出率低检出率低无法进行生物活性判定无法进行生物活性判定不能进行属、种鉴定不能进行属、种鉴定价格高价格高第23页，本讲稿共42页IDEXX Filta-MaxIDEXX Filta-Max 手动手动/自动系统自动系统滤器及滤芯滤器及滤芯FiltaMax Xpress 快速系统快速系统-滤器及滤芯滤器及滤芯过滤

26、器过滤器滤芯滤芯第24页，本讲稿共42页Filta-Max:Filta-Max:滤芯结构（手动滤芯结构（手动/自动法）自动法）v60 60 层环状海绵层环状海绵:55:55mm x 10mm mm x 10mm(18mm(18mm 中孔中孔)v从从6060cm cm 压缩成压缩成 3 3cmcmv螺栓固定螺栓固定Filta-Max Filta-Max xpressxpress:快速法滤芯结构快速法滤芯结构v40 40 层海绵层海绵:55:55mm x 10mm(18mm mm x 10mm(18mm 中孔中孔)v3939层海绵层海绵:40mm x 10mm(18mm:40mm x 10mm(1

27、8mm中孔中孔)v交互叠放交互叠放v从从7979cm cm 压缩到压缩到 3 3cmcmv螺栓固定螺栓固定第25页，本讲稿共42页水样流向1.水样过滤水样过滤水样从两侧流经压缩的海绵膜汇集至中孔水样从两侧流经压缩的海绵膜汇集至中孔“两虫两虫”在滤芯表面被捕获在滤芯表面被捕获滤器连接套件滤器连接套件滤器滤器滤芯（过滤模块）滤芯（过滤模块）第26页，本讲稿共42页 洗涤管洗涤管滤芯置于洗涤管滤芯置于洗涤管,并将滤并将滤芯下部的压缩固定锣栓解芯下部的压缩固定锣栓解除除周律性地压缩周律性地压缩/扩展海绵滤扩展海绵滤芯芯2.洗涤洗涤(淘洗淘洗)滤芯滤芯第27页，本讲稿共42页洗涤洗涤(淘洗淘洗)装置装置

28、Filta-Max手动淘洗装置Filta-Max自动淘洗装置FiltaMax Xpress 快速淘洗装置过滤器过滤器500ml锥形锥形离心瓶离心瓶第28页，本讲稿共42页Filta-Max xpress快速法淘洗流程快速法淘洗流程 v滤器（带滤芯）放入淘洗装置滤器（带滤芯）放入淘洗装置v淘洗装置连接缓冲液及空气压缩机淘洗装置连接缓冲液及空气压缩机v加加 4.0 4.0 巴巴(58 psi)(58 psi)压缩空气压缩空气v按动按动F1F1钮钮v2 2分钟后收集分钟后收集400400mlml淘洗液淘洗液v快速全自动快速全自动压缩压缩空气空气滤器滤芯滤器滤芯淘洗液收集淘洗液收集第29页，本讲稿共4

29、2页1 1.将装有淘洗液样本的将装有淘洗液样本的500500mLmL离心管置离心管置20002000g g离心力下，离心离心力下，离心1515minmin。慢慢地。慢慢地减速，（不能使减速，（不能使用制动装置！）用制动装置！）以免搅起沉淀物。以免搅起沉淀物。2 2.用吸气装置将沉淀物上层用吸气装置将沉淀物上层8 8-10mL-10mL处的悬浮物小心吸出处的悬浮物小心吸出 （吸气装置的真空应小于（吸气装置的真空应小于3.3kPa3.3kPa）。）。3.离心浓缩离心浓缩第30页，本讲稿共42页4.4.免疫磁珠捕获免疫磁珠捕获捕获原理捕获原理:标记标记A抗体的磁珠抗体的磁珠具有具有A A抗原的抗原的

30、C/GC/G DYNAL MIX 1DYNAL MIX 1混合混合器器MPC-1磁极磁极MPC-S磁极磁极第31页，本讲稿共42页5.免疫磁珠与孢（卵）囊复合物的分离免疫磁珠与孢（卵）囊复合物的分离60min5min10min染色镜检染色镜检第32页，本讲稿共42页6.6.染色及镜检染色及镜检v单克隆免疫荧光染色（单克隆免疫荧光染色（FA-FA-异硫氰酸荧光素）异硫氰酸荧光素）v或或 DAPI(4,6-DAPI(4,6-二氨基二氨基-2-2-苯基吲哚苯基吲哚)染色染色v荧光显微镜（荧光显微镜（Differential Interference Contrast,Differential Int

31、erference Contrast,DICDIC）第33页，本讲稿共42页 隐孢子虫隐孢子虫贾第鞭毛虫贾第鞭毛虫两虫的单抗染色结果两虫的单抗染色结果第34页，本讲稿共42页隐孢子虫的单克隆抗体染色结果隐孢子虫的单克隆抗体染色结果第35页，本讲稿共42页 隐孢子虫隐孢子虫 DAPI 染色结果染色结果第36页，本讲稿共42页贾第鞭毛虫的单克隆抗体染色结果贾第鞭毛虫的单克隆抗体染色结果第37页，本讲稿共42页贾第鞭毛虫贾第鞭毛虫 DAPI 染色结果染色结果第38页，本讲稿共42页贾第鞭毛虫孢囊和隐孢子虫卵囊在荧光镜下的特征贾第鞭毛虫孢囊和隐孢子虫卵囊在荧光镜下的特征1.在镜下可见苹果绿色的孢（卵）

32、囊。在镜下可见苹果绿色的孢（卵）囊。2.孢（卵）囊的形状、大小符合描述。孢（卵）囊的形状、大小符合描述。3.膜与胞质的对照，膜的荧光要强一些。膜与胞质的对照，膜的荧光要强一些。4.孢（卵）壁的完整性（孢囊可能会失去！）孢（卵）壁的完整性（孢囊可能会失去！）第39页，本讲稿共42页7.结果的计算、报告和检测限结果的计算、报告和检测限每升水中的孢（卵）囊数计算公式：每升水中的孢（卵）囊数计算公式：Y=（XV）/（V1V2）Y:每升水中的孢囊或卵囊的数目每升水中的孢囊或卵囊的数目X：计数样本的体积中孢囊或卵囊的数目：计数样本的体积中孢囊或卵囊的数目V：离心后再悬浮的体积，单位为：离心后再悬浮的体积，

33、单位为mLV1：计数样本的体积，单位为：计数样本的体积，单位为mLV2：过滤后水的体积，单位为：过滤后水的体积，单位为L计算分析的检出限计算分析的检出限:D=V/(V1V2)D:每升孢囊或卵囊的检测限每升孢囊或卵囊的检测限V:离心后再悬浮的体积，单位为离心后再悬浮的体积，单位为mLV1：计数样本的体积，单位为：计数样本的体积，单位为mLV2：过滤后水的体积，单位为：过滤后水的体积，单位为L第40页，本讲稿共42页两虫检测的质量控制两虫检测的质量控制:免疫荧光质量控制免疫荧光质量控制:针对免疫荧光试剂盒针对免疫荧光试剂盒,由两个试验组成由两个试验组成(阴、阳性对照）阴、阳性对照）;1次次/周。周。整个程序的质量控制：从采样整个程序的质量控制：从采样 镜检（阴、阳性对照）。镜检（阴、阳性对照）。1次次/三个月。三个月。两虫检测所需要最基本的设备：两虫检测所需要最基本的设备：1.蠕动泵蠕动泵2.滤芯的淘洗装置滤芯的淘洗装置3.高速离心机高速离心机4.磁力混合器、磁极磁力混合器、磁极5.荧光显微镜荧光显微镜第41页，本讲稿共42页谢谢谢谢!第42页，本讲稿共42页