石蜡切片技术操作精.ppt

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1、石蜡切片技术操作第1页，本讲稿共13页 实验目的 掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求。实验原理 见石蜡切片理论部分实验材料 小白鼠各种器官组织第2页，本讲稿共13页实验方法石蜡切片技术（一）取材与固定石蜡切片技术（二）渗透与包埋石蜡切片技术（三）切片石蜡切片技术（四）染色石蜡切片技术（五）观察总结第3页，本讲稿共13页1 准备工作：工具、药品、计划等2 动物的麻醉：氯仿麻醉3 解剖取材4 材料分割：保持样品的完整性与代表性，考虑切片方向，实心组织大小5*5*2mm,空心细长组织10mm长。5 固定：布温氏固定液固定24h。6 漂洗：70%乙醇换洗3次，每次2060min。7 保存：70%乙醇0

2、4 。一、取材与固定第4页，本讲稿共13页二、脱水、渗透与包埋1 脱水：85%乙醇95%乙醇100%乙醇100%乙醇，每步30min60min2透明：1/2乙醇1/2二甲苯二甲苯二甲苯，每步30min60min3 渗透：1/2二甲苯 石蜡 石蜡石蜡，每步20min60min，温度624 包埋：将材料放入盛有石蜡的纸盒中，摆好位置（要考虑下一步的修快与切片方向），在水中冷却510min.第5页，本讲稿共13页三、切片1 修块 用单面刀片在玻璃板上修快使达到以下要求：（1）一个蜡块含一个材料，蜡块呈正方形或长方形，材料位于蜡块正中央。（2）材料边缘与蜡块边缘平行，各面要平直，材料边缘与蜡块边缘的距

3、离约3mm。2 固着 将修好块的蜡块用烧热的解剖刀固着在样品台上。第6页，本讲稿共13页3 切片 按以下顺序进行 （1）将样品台固定在切片机样品臂上，使切面竖 直；（2）调切片厚度510um；（3）将切片刀用纱布蘸少许二甲苯擦净后装到切片机上，调刀角1520，将刀固定好；（4）调刀距 使样品与刀口尽可能靠近；(5)切片 顺时针摇动切片机速度40-60r/min；(6)将切好的蜡带光面向下用毛笔放到台纸上。第7页，本讲稿共13页第8页，本讲稿共13页4 贴片 (1)清洗载波片；(2)加粘片剂，要求薄、匀；(3)放切片，光面向下；(4)加水于切片下面；(5)展片 将载波片放于50的温台上至切片完全

4、展平；(6)烤干 吸掉多余水，继续放于温台上至水完全干燥；5 贴标签 临时标签，用铅笔写明组号、姓名。第9页，本讲稿共13页四、染色1 脱蜡 二甲苯(2)二甲苯(1)，每步5-10min；2 复水 1/2乙醇+1/2二甲苯100%乙醇(2)100%乙醇(1)85%乙醇 70%乙醇 50%乙醇 30%乙醇蒸馏水,每步2min；3 初染 代氏苏木精染色15min；4 分化 0.1%HCl脱色至变红0.1%NaOH至变蓝；5 脱水 蒸馏水（35s）30%乙醇 50%乙醇 70%乙醇 85%乙醇,每步2min；6 复染 0.5%伊红（溶于95%乙醇）染色1015min；7 脱水透明 95%乙醇(10-

5、20s)100%乙醇(1)100%乙醇(2)1/2乙醇+1/2二甲苯二甲苯(1)二甲苯(2)(3min),每步23min；第10页，本讲稿共13页8 封片 将材料周围擦干净（注意在擦的过程中材料上的二甲苯必须保证不能干，可随时补加），加12滴中性树胶，加盖玻片（需提前洗净擦干备用）；9 贴标签 注明样品名称、染色方法、组号、姓名和日期；10 镜检 检查样品取材、切片及染色情况，熟悉样品为下次样品观察做好准备；11 干燥 平放于展片盘中，于37温箱中或自然干燥；12 预习 下次实验：样品的观察，需提前做好预习，并准备纸、铅笔。第11页，本讲稿共13页五、观察1 样品观察小白鼠脑；小白鼠心肌；小白鼠肝脏；小白鼠肾脏；小白鼠肺；小白鼠小肠；小白鼠肌肉；小白鼠精巢；小白鼠卵巢等。第12页，本讲稿共13页2 绘图任选一种样品将结构完整地绘于实验报告上。3 样品结构显微照片如下：第13页，本讲稿共13页