化学发光免疫优秀PPT.ppt
《化学发光免疫优秀PPT.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《化学发光免疫优秀PPT.ppt(46页珍藏版)》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、化学发光免疫第1页,本讲稿共46页第十章第十章 化学发光免疫化学发光免疫 分析技术分析技术第一节第一节 慨慨 述述一、化学发光一、化学发光二、化学发光效率二、化学发光效率第二节第二节 化学发光剂和标记技术化学发光剂和标记技术一、化学发光剂一、化学发光剂二、发光剂的标记技术二、发光剂的标记技术第2页,本讲稿共46页第三节第三节 化学发光免疫分析的类型化学发光免疫分析的类型一、直接化学发光免疫分析一、直接化学发光免疫分析二、化学发光酶免疫分析二、化学发光酶免疫分析三、电化学发光免疫分析三、电化学发光免疫分析四、临床应用四、临床应用思考题思考题小结小结第3页,本讲稿共46页发光免疫分析发光免疫分析:
2、是将发光分析和免疫反应是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术。原或抗体的新型标记免疫分析技术。第4页,本讲稿共46页第一节第一节 概概 述述第5页,本讲稿共46页放放射射免免疫疫技技术术酶酶免免疫疫技技术术发发光光免免疫疫技技术术三大经典标记技术三大经典标记技术第6页,本讲稿共46页 发光发光:是指分子或原子中的电子吸收能量后,由基态(较是指分子或原子中的电子吸收能量后,由基态(较低能级)跃迁到激发态(较高能级),然后再返回到基态,低能级)跃迁到激发态(较高能级),然后再返回到基态,并释放光子的过程。并释放光
3、子的过程。根据形成激发态分子的能量来源不同可分为根据形成激发态分子的能量来源不同可分为:光照发光、生物发光、光照发光、生物发光、化学发光化学发光等。等。第7页,本讲稿共46页 光照发光光照发光(photoluminescence)是指发光剂是指发光剂(荧光素)经短波长的入射光照射后,电子吸收能(荧光素)经短波长的入射光照射后,电子吸收能量跃迁到激发态,在其回复至基态时,发射出较长量跃迁到激发态,在其回复至基态时,发射出较长波长的可见光(荧光)。波长的可见光(荧光)。生物发光生物发光(bioluminescence)是指发生在生物体内的是指发生在生物体内的发光现象,如萤火虫的发光,反应底物为萤火
4、虫荧光发光现象,如萤火虫的发光,反应底物为萤火虫荧光素,在荧光素酶的催化下,利用素,在荧光素酶的催化下,利用ATPATP能,生成激发态能,生成激发态氧化型荧光素,它在回复基态时多余的能量以光子氧化型荧光素,它在回复基态时多余的能量以光子的形式释放出来。的形式释放出来。第8页,本讲稿共46页 化学发光化学发光(chemiluminescence)是指伴随化学反应过是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。某些物质程所产生的光的发射现象。某些物质(发光剂发光剂)在化学反在化学反应时,吸收了反应过程中所产生的化学能,使反应的产物应时,吸收了反应过程中所产生的化学能,使反应的产物分子或反应的中间态分子
5、中的电子跃迁到激发态,当电子分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态,当电子从激发态回复到基态时,以发射光子的形式释放出能量,从激发态回复到基态时,以发射光子的形式释放出能量,这一现象称为化学发光。这一现象称为化学发光。一、化学发光一、化学发光第9页,本讲稿共46页一些化学反应能释放足够一些化学反应能释放足够的能量把参加反应的物质激的能量把参加反应的物质激发到能发射光的电子激发态,发到能发射光的电子激发态,若被激发的是一个反应产物若被激发的是一个反应产物分子,则这种反应过程叫直分子,则这种反应过程叫直接化学发光。反应过程可简单地描述如下:接化学发光。反应过程可简单地描述如下:A A十十B C
6、*B C*C*C C*C h h其中其中为光子,为光子,C*C*表示表示C C处于单线激发态。处于单线激发态。第10页,本讲稿共46页若激发能传递到另一个未参加化学反应若激发能传递到另一个未参加化学反应的分子的分子D D上,使上,使D D分子激发到电子激发态,分子激发到电子激发态,D D分子从激发态回到基态时发光,这种过分子从激发态回到基态时发光,这种过程叫间接化学发光。反应过程可表示如下:程叫间接化学发光。反应过程可表示如下:A A十十B CB C*C C*十十D CD C十十D D*D D*D D十十h h第11页,本讲稿共46页 化学发光效率决定于生成激发态产物分子的化学化学发光效率决定
7、于生成激发态产物分子的化学激发效率(激发效率(CE)和激发态分子的发射效率()和激发态分子的发射效率(EM)。)。化学发光反应的发光效率、光辐射的能量大小以及光化学发光反应的发光效率、光辐射的能量大小以及光谱范围,完全由发光物质的性质所决定,每一个发光谱范围,完全由发光物质的性质所决定,每一个发光反应都具有其特征性的化学发光光谱和不同的化学发反应都具有其特征性的化学发光光谱和不同的化学发光效率。光效率。二、化学发光效率二、化学发光效率第12页,本讲稿共46页第二节第二节 化学发光剂和标记技术化学发光剂和标记技术第13页,本讲稿共46页 在化学发光反应中参与能量转移并最终以在化学发光反应中参与能
8、量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物,称为发射光子的形式释放能量的化合物,称为化学化学发光剂或发光底物。发光剂或发光底物。一、化学发光剂一、化学发光剂第14页,本讲稿共46页能作为化学发光剂的条件:能作为化学发光剂的条件:发光的量子产率高;发光的量子产率高;它的物理它的物理-化学特性要与被标记或测定的化学特性要与被标记或测定的 物质相匹配;物质相匹配;能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物;能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物;其化学发光常是氧化反应的结果;其化学发光常是氧化反应的结果;在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性。在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性。第15页,本讲稿共46页 直接
9、化学发光剂直接化学发光剂 直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用,直接参与发光反应,它们在化学的催化作用,直接参与发光反应,它们在化学结构上有产生发光的特有基团,可直接标记抗结构上有产生发光的特有基团,可直接标记抗原或抗体。原或抗体。第16页,本讲稿共46页1.1.吖啶酯吖啶酯 在碱性条件下被在碱性条件下被H H2 2O O2 2氧化时氧化时,发出波长为发出波长为470nm470nm的光,具有很高的发光效率,的光,具有很高的发光效率,其激发态产物其激发态产物N-N-甲基吖啶酮是该发光反应甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。体系的发光体。第17
10、页,本讲稿共46页2 2三联吡啶钌三联吡啶钌三联吡啶钌三联吡啶钌 RU(bpy)3RU(bpy)32+2+是电化是电化学发光剂,它和电子供体三丙胺(学发光剂,它和电子供体三丙胺(TPATPA)在阳电极)在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。三联吡啶钌三联吡啶钌第18页,本讲稿共46页电化学发光剂反应原理电化学发光剂反应原理 第19页,本讲稿共46页 酶促反应发光剂:酶促反应发光剂:是利用标记酶的催化作用,使发光剂(底是利用标记酶的催化作用,使发光剂(底 物)发光,这一类需酶催化后发光的发光剂物)发光,这一类需酶催化后发光的发光剂 称为酶促反应发光剂
11、。称为酶促反应发光剂。1鲁米诺及其衍生物鲁米诺及其衍生物 2AMPPD第20页,本讲稿共46页1 1鲁米诺鲁米诺鲁米诺发光原理鲁米诺发光原理第21页,本讲稿共46页鲁米诺增强发光反应原理鲁米诺增强发光反应原理 第22页,本讲稿共46页2AMPPD3-(23-(2-螺旋金刚烷螺旋金刚烷)-4-)-4-甲氧基甲氧基-4-(3-4-(3“-磷酰氧基磷酰氧基)苯苯-1,2-1,2-二氧杂环丁烷二氧杂环丁烷第23页,本讲稿共46页1.1.碳二亚胺(碳二亚胺(EDCEDC)缩合法)缩合法 二、发光剂的标记技术二、发光剂的标记技术第24页,本讲稿共46页2.2.过碘酸钠氧化法过碘酸钠氧化法 第25页,本讲稿
12、共46页3 3重氮盐偶联法重氮盐偶联法 第26页,本讲稿共46页4.N-4.N-羟基琥珀酰亚胺活化法羟基琥珀酰亚胺活化法 第27页,本讲稿共46页 1 1发光剂的选择发光剂的选择 2 2被标记蛋白质的性质被标记蛋白质的性质 3 3标记方法的选择标记方法的选择 4 4原料比原料比 5 5标记率标记率 6 6温度温度 7 7纯化与保存纯化与保存 影响标记的因素影响标记的因素第28页,本讲稿共46页第三节第三节 化学发光免疫分析的类型化学发光免疫分析的类型 第29页,本讲稿共46页用吖啶酯直接标记抗体用吖啶酯直接标记抗体(抗原抗原),与待测标本中相应的抗原,与待测标本中相应的抗原(抗体抗体)发生免疫
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 化学 发光 免疫 优秀 PPT
限制150内