血液及其成分的保存、运输和领发.ppt

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1、第四章第四章 血液及其成分的保存、血液及其成分的保存、运输和领发运输和领发全血在保存时会发生什么样的变化？全血在保存时会发生什么样的变化？全血保存主要需要解决哪些问题？全血保存主要需要解决哪些问题？第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液在贮存中的变化血液在贮存中的变化(一一)血浆的变化血浆的变化项目项目保存液保存液保存天数保存天数0 07 7141421213535血浆血浆pHpHACDACD7.00 7.00 6.79 6.79 6.73 6.73 6.71 6.71 CPDCPD7.20 7.20 7.00 7.00 6.89 6.89 6.84 6.84 第一节第一节 全血的保存全血的

2、保存 三、血液在贮存中的变化三、血液在贮存中的变化(一一)全血的变化全血的变化项目项目保存液保存液保存天数保存天数0 07 7141421213535血浆钠离子血浆钠离子(mmol)(mmol)ACDACD172172158158150150146146CPDCPD175175163163155155152152血浆钾离子血浆钾离子(mmol)(mmol)ACDACD1010202029293535CPDCPD3.93.911.911.917.217.22121CPDA-1CPDA-127.327.3血浆血浆Hb(mg/L)Hb(mg/L)ACDACD100100220220350350530

3、530CPDCPD17177878125125191191CPDA-1CPDA-18282461461第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液在贮存中的变化血液在贮存中的变化血小板血小板白细胞白细胞5 5天之后逐渐死亡天之后逐渐死亡24h24h之后功能逐渐丧失之后功能逐渐丧失第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液在贮存中的变化血液在贮存中的变化不稳定的凝血因子不稳定的凝血因子活性逐渐下降活性逐渐下降第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液在贮存中的变化血液在贮存中的变化红细胞红细胞膜蛋白、脂质发生变化，钾离子降低，钠、膜蛋白、脂质发生变化，钾离子降低，钠、钙离子升高。钙离子升高。双凹形变成球

4、形或桑椹形，脆性增加，易双凹形变成球形或桑椹形，脆性增加，易发性溶血。发性溶血。第一节第一节 全血的保存全血的保存 三、血液在贮存中的变化三、血液在贮存中的变化红细胞红细胞的变化的变化项目项目保存液保存液保存天数保存天数0 07 7141421213535ATP(%)ATP(%)CPDCPD10010096968383CPDA-1CPDA-110010096968383707057572,3-DPG2,3-DPGACDACD100100606023231010CPDCPD100100999980804444CPDA-1CPDA-11001009999808044445 5红细胞存活率红细胞存活

5、率(%)(%)ACDACD100100989885857070CPDCPD100100989885858080CPDA-1CPDA-11001009898909085857979成熟红细胞不仅无细胞核，而且也无线粒体、成熟红细胞不仅无细胞核，而且也无线粒体、核蛋白体等细胞器，不能进行核酸和蛋白质核蛋白体等细胞器，不能进行核酸和蛋白质的生物合成，也不能进行有氧氧化，不能利的生物合成，也不能进行有氧氧化，不能利用脂肪酸。血糖是其唯一的能源。用脂肪酸。血糖是其唯一的能源。红细胞携带红细胞携带O O2 2,自身不消耗自身不消耗O O2 2,其内电解质以其内电解质以钾最多、钠含量较少钾最多、钠含量较少,

6、与血浆的钾钠含量相与血浆的钾钠含量相反。红细胞内反。红细胞内CaCa离子浓度低于血浆。离子浓度低于血浆。红细胞的特点红细胞的特点主要途径主要途径磷酸戊糖旁路磷酸戊糖旁路葡萄糖酵解葡萄糖酵解合成合成ATP：合成合成2,3-DPG（2,3-二磷酸甘油酸二磷酸甘油酸）控制静脉侧氧气的释放和维持控制静脉侧氧气的释放和维持Hb二价铁，进行氧气的传递二价铁，进行氧气的传递通过磷酸戊糖通路代谢，为红细胞提供另一种还原力，在红细胞氧化还原系统中发挥通过磷酸戊糖通路代谢，为红细胞提供另一种还原力，在红细胞氧化还原系统中发挥重要作用，具有保护膜蛋白、血红蛋白及酶蛋白的琉基不被氧化，还原高铁血红蛋白重要作用，具有保

7、护膜蛋白、血红蛋白及酶蛋白的琉基不被氧化，还原高铁血红蛋白等多种功能。等多种功能。葡萄糖葡萄糖磷酸化、变构、裂解磷酸化、变构、裂解2分子乳酸分子乳酸 2ATP红细胞能量代谢红细胞能量代谢成熟红细胞的糖酵解特点：成熟红细胞的糖酵解特点：红细胞糖酵解的特点是在酵解过程中有相当数量的红细胞糖酵解的特点是在酵解过程中有相当数量的1.3-1.3-DPGDPG转变成转变成2.3-DPG2.3-DPG，后者再脱磷酸变成，后者再脱磷酸变成3-PG3-PG，并进一步，并进一步酵解产生乳酸。此酵解产生乳酸。此2.3-DPG2.3-DPG侧支循环称侧支循环称2.3-DPG2.3-DPG支路，产支路，产生支路的原因是

8、红细胞中存在生支路的原因是红细胞中存在DPGDPG变位酶和变位酶和2.3-DPG2.3-DPG磷酸磷酸酶，前者活性大于后者，故可使酶，前者活性大于后者，故可使2.3-DPG2.3-DPG堆积起来。堆积起来。2.3-DPG2.3-DPG生成的主要生理意义在于降低生成的主要生理意义在于降低HbHb对氧的亲和力，对氧的亲和力，在组织氧分压较低的情况下，在组织氧分压较低的情况下，HbO2HbO2放出氧适应组织需要放出氧适应组织需要。血红蛋白与氧亲和性增加血红蛋白与氧亲和性增加2,3-DPG2,3-DPG含量减少含量减少氧解离曲线向左移氧解离曲线向左移组织氧供给不足组织氧供给不足P50是指血红蛋白氧饱和

9、度为是指血红蛋白氧饱和度为50%时的血氧分压，时的血氧分压，可以反映可以反映Hb与与O2的亲和力。的亲和力。P50增大，氧离曲线增大，氧离曲线右移，表示右移，表示Hb与与O2的亲和力小，的亲和力小，P50减小，氧离减小，氧离曲线左移，说明亲和力大。曲线左移，说明亲和力大。2,3-DPG的生理意义的生理意义1.1.维持维持NaNa+-K-K-ATP ATP酶酶(钠泵钠泵)功能。通过功能。通过ATP ATP 提供能提供能量量,维持维持K+K+的浓度在红细胞内比血浆高的浓度在红细胞内比血浆高5 5倍。所倍。所以以,红细胞产生的红细胞产生的ATPATP主要用于维持红细胞膜主要用于维持红细胞膜NaNa+

10、-K-K-ATP ATP酶酶的正常功能酶酶的正常功能,以保证红细胞的离以保证红细胞的离子平衡。子平衡。在保存过程中在保存过程中,红细胞膜和膜蛋白的损伤以及红细胞膜和膜蛋白的损伤以及葡萄糖的持续消耗引起的葡萄糖的持续消耗引起的ATPATP供能减少都会影响供能减少都会影响NaNa+-K-K-ATP ATP酶功能的正常发挥酶功能的正常发挥,导致细胞内导致细胞内K+K+的逸出的逸出,从而使血浆从而使血浆K+K+浓度不断升高浓度不断升高。红细胞红细胞ATPATP的功能的功能（红细胞内糖代谢的意义）（红细胞内糖代谢的意义）2 2、维持红细胞膜上钙泵一的正常运转，将红细胞、维持红细胞膜上钙泵一的正常运转，将

11、红细胞内的内的CaCa2+2+泵入血浆以维持红细胞内的低钙状态。泵入血浆以维持红细胞内的低钙状态。正常情况下，红细胞内的正常情况下，红细胞内的CaCa2+2+浓度很低浓度很低（20umol/L)20umol/L)。，而血浆。，而血浆CaCa2+2+的浓度为的浓度为2-3mmol/L2-3mmol/L。血浆内钙离子会被动扩散进入红细胞。缺乏血浆内钙离子会被动扩散进入红细胞。缺乏ATPATP时，钙泵不能正常运行，钙将聚集并沉积于红细时，钙泵不能正常运行，钙将聚集并沉积于红细胞膜上，使膜失去柔韧性而趋于僵硬，使红细胞胞膜上，使膜失去柔韧性而趋于僵硬，使红细胞易被破坏易被破坏红细胞红细胞ATPATP的

12、功能（红细胞内糖代谢的意义）的功能（红细胞内糖代谢的意义）3.3.维持红细胞膜上脂质与血浆脂蛋白中的脂质维持红细胞膜上脂质与血浆脂蛋白中的脂质进行交换。红细胞膜的脂质处于不断更新中，进行交换。红细胞膜的脂质处于不断更新中，此过程需消耗此过程需消耗ATPATP。缺乏。缺乏ATPATP时，脂质更新受时，脂质更新受阻，红细胞可塑性降低，易于破坏阻，红细胞可塑性降低，易于破坏4.4.少量用于谷胱甘肽的生物合成。少量用于谷胱甘肽的生物合成。5.5.用于葡萄糖的活化，启动糖酵解过程用于葡萄糖的活化，启动糖酵解过程。红细胞红细胞ATPATP的功能（红细胞内糖代谢的意义）的功能（红细胞内糖代谢的意义）红细胞内

13、的谷胱甘肽代谢红细胞内的谷胱甘肽代谢红细胞内谷胱甘肽含量很高(2mmol/L)，而且几乎全是还原型的，主要生理功能是对抗氧化剂对巯基的氧化。第一节第一节 全血的保存全血的保存 第一节第一节 全血的保存全血的保存 对于需要短时间内纠正载氧能力的患者和特别经受不对于需要短时间内纠正载氧能力的患者和特别经受不住组织缺氧的患者输入住组织缺氧的患者输入2,3-DPG2,3-DPG水平低的血是无益的，水平低的血是无益的，应该给这些患者输注保存期不超过应该给这些患者输注保存期不超过710710天的血液。天的血液。第一节第一节 全血的保存全血的保存 二、血液保存需要解决的问题二、血液保存需要解决的问题需解决的

14、问题需解决的问题 血液凝固血液凝固 红细胞溶血红细胞溶血放氧能力下降放氧能力下降 抗凝剂抗凝剂红细胞营养代谢红细胞营养代谢抗溶血剂抗溶血剂改善放氧改善放氧保存容器保存容器红细胞保存液考虑的几个方面红细胞保存液考虑的几个方面1.保护细胞的能量产生机构，使其维持保护细胞的能量产生机构，使其维持正常结构和功能正常结构和功能2.尽量减慢细胞代谢速度，减少能量消尽量减慢细胞代谢速度，减少能量消耗并供应能量物质。耗并供应能量物质。3.其他：抗氧化剂的作用？改善保存容其他：抗氧化剂的作用？改善保存容器？器？第一节第一节 全血的保存全血的保存 常用血液保存液的成分：常用血液保存液的成分：1、抗凝剂、抗凝剂血液

15、抗凝剂是防止血液凝固和红细胞被破坏的化学物质血液抗凝剂是防止血液凝固和红细胞被破坏的化学物质 常用的抗凝剂有哪些？常用的抗凝剂有哪些？第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液保存液的成分血液保存液的成分(一一)血液抗凝剂血液抗凝剂 枸橼酸钠枸橼酸钠 肝素肝素 EDTA2Na EDTA2Na 原理原理CaThrombinCa应用应用实验室检测血液标本的抗凝实验室检测血液标本的抗凝及外科体外循环手术的抗凝及外科体外循环手术的抗凝实验室检测血液标本的抗凝实验室检测血液标本的抗凝全血及血液成分保存的抗凝剂全血及血液成分保存的抗凝剂第一节第一节 全血的保存全血的保存 葡萄糖的在血液中浓度应为葡萄糖的在血

16、液中浓度应为0.5%l%，以，以0.5%为宜为宜 枸橼酸钠枸橼酸钠+葡萄糖葡萄糖 葡萄糖用于维持红细胞代谢，葡萄糖用于维持红细胞代谢，延长红细胞的保存时间延长红细胞的保存时间血液保存液的成分：血液保存液的成分：2、提供红细胞的能量代谢、提供红细胞的能量代谢葡萄糖葡萄糖第一节第一节 全血的保存全血的保存 腺嘌呤腺嘌呤提高提高ATPATP水平和活性的另一办法就是在保存液中加入水平和活性的另一办法就是在保存液中加入少量腺嘌呤少量腺嘌呤腺嘌呤腺嘌呤磷酸腺苷（磷酸腺苷（AMPAMP）磷酸化磷酸化ATPATP血液保存液的成分：血液保存液的成分：2、提供红细胞的能量代谢、提供红细胞的能量代谢第一节第一节 全

17、血的保存全血的保存 血液保存液的成分：血液保存液的成分：3、抗溶血剂抗溶血剂目前国际上使用较多的是甘露醇，它的用量很小，一目前国际上使用较多的是甘露醇，它的用量很小，一般在般在1 1以下。以下。蔗糖蔗糖 山梨醇山梨醇甘露醇甘露醇具有缓解红细胞溶血的功能和具有缓解红细胞溶血的功能和加固细胞膜的作用，而不影响加固细胞膜的作用，而不影响红细胞代谢红细胞代谢第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液保存液的成分：血液保存液的成分：4、改善红细胞的放氧能力改善红细胞的放氧能力ACDACD或或CPDCPD血液保存到血液保存到l l周和周和2 2周后，其红细胞放氧能周后，其红细胞放氧能力均降到力均降到50%5

18、0%，对于即刻需要纠正缺氧的患者，输注，对于即刻需要纠正缺氧的患者，输注保存时间长的血液是不适宜的。保存时间长的血液是不适宜的。第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液保存液的成分：血液保存液的成分：4、改善红细胞的放氧能力改善红细胞的放氧能力血红蛋白的解离度血红蛋白的解离度 红细胞的放氧能力红细胞的放氧能力 影响因素：影响因素：COCO2 2分压、分压、O O2 2分压、分压、pHpH和和2,3-DPG2,3-DPG含量及其生成有关酶系有关含量及其生成有关酶系有关第一节第一节 全血的保存全血的保存 一、全血在一、全血在(42)(42)时的保存时的保存 4、改善红细胞的放氧能力改善红细胞的放氧

19、能力解决的方法：解决的方法：1 1、保存液中加、保存液中加NaHCONaHCO3 3，所产生的所产生的C0C02 2，可由内在的，可由内在的Ca(OH)Ca(OH)2 2来消来消除，避免除，避免pHpH降低，有利于降低，有利于2,3-DPG2,3-DPG的合成的合成2 2、加磷酸二羟丙酮，可以增加、加磷酸二羟丙酮，可以增加2,3-DPG2,3-DPG含量。含量。3 3、加丙酮酸盐、通过辅酶、加丙酮酸盐、通过辅酶系统增加系统增加1,3-1,3-二磷酸甘油酸（二磷酸甘油酸（1,1,3-DPG3-DPG），然后变成），然后变成2,3-DPG2,3-DPG。4 4、加维生素、加维生素C C，增加还原力

20、，进而维持有关酶的活性。，增加还原力，进而维持有关酶的活性。第一节第一节 全血的保存全血的保存 全血在全血在(42)(42)时的保存时的保存 保存温度保存温度低温保存低温保存排放整齐排放整齐红细胞代谢缓慢，乳酸生成速度下降，红细胞代谢缓慢，乳酸生成速度下降，pHpH下降速度也变缓慢。下降速度也变缓慢。维持红细胞正常代谢，血袋要排放整齐，维持红细胞正常代谢，血袋要排放整齐，避免重叠堆积。避免重叠堆积。温度对红细胞保存的影响温度对红细胞保存的影响6 6 以上时以上时,无法保证血液成分的活性和有效性。高于无法保证血液成分的活性和有效性。高于10 10 红细胞破坏增加红细胞破坏增加,10,10 以上超

21、过以上超过30 min30 min游离血红游离血红蛋白的含量逐渐增加蛋白的含量逐渐增加,pH,pH下降下降,血钾浓度也逐渐上升。血钾浓度也逐渐上升。保存温度低于下限保存温度低于下限22时时,红细胞可能溶解破裂红细胞可能溶解破裂,输给患输给患者可能造成输血不良反应。者可能造成输血不良反应。储存温度储存温度6 6 可最大限度地抑制血液中的细菌生长。可最大限度地抑制血液中的细菌生长。在不正确的条件下储存在不正确的条件下储存30 min 30 min 以上的血液有发生细菌以上的血液有发生细菌污染和污染和(或或)细胞功能丧失的可能细胞功能丧失的可能第一节第一节 全血的保存全血的保存 一、全血在一、全血在

22、(42)(42)时的保存时的保存 保存容器保存容器聚乙烯烃袋聚乙烯烃袋聚氯乙烯（聚氯乙烯（PVC)PVC)袋袋全血、红细胞等的保存全血、红细胞等的保存血小板的保存血小板的保存第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液保存液血液保存液 ACDACD保养液保养液（枸櫞酸盐（枸櫞酸盐-葡萄糖葡萄糖-枸橼酸）枸橼酸）pH5.03pH5.03 21 21天天 CPDCPD保养液保养液（枸櫞酸盐（枸櫞酸盐-葡萄糖葡萄糖-枸橼酸枸橼酸-磷酸盐）磷酸盐）pH5.63pH5.63 21 21天天CPDACPDA保养液保养液(枸櫞酸盐枸櫞酸盐-葡萄糖葡萄糖-枸橼酸枸橼酸-磷酸盐磷酸盐-腺嘌呤腺嘌呤)pH5.63 3

23、5pH5.63 35天天加入磷酸盐加入磷酸盐加入腺嘌呤加入腺嘌呤第一节第一节 全血的保存全血的保存 二、血液保存液二、血液保存液 第一节第一节 全血的保存全血的保存 三、血液在贮存中的变化三、血液在贮存中的变化(二二)贮存期（贮存期（shelf life）全血，聚氯乙烯塑料袋，全血，聚氯乙烯塑料袋，44条件下贮存：条件下贮存：ACDACD或或CPDCPD保存液：贮存期为保存液：贮存期为2121天天CPDA-1CPDA-1保存液：贮存期为保存液：贮存期为3535天天 第二节第二节 红细胞的保存红细胞的保存 一、浓缩红细胞保存一、浓缩红细胞保存44保存保存保存液是全血保存液保存液是全血保存液从采血

24、日起，与相应的保存液的储存期一致从采血日起，与相应的保存液的储存期一致 第二节第二节 红细胞的保存红细胞的保存 二、添加剂红细胞保存二、添加剂红细胞保存浓缩红细胞浓缩红细胞剩余营养物质少剩余营养物质少黏稠黏稠贮存中易发生溶血贮存中易发生溶血 第二节第二节 红细胞的保存红细胞的保存 二、添加剂红细胞保存二、添加剂红细胞保存1 1、浓缩红细胞加羟乙基淀粉（分子量、浓缩红细胞加羟乙基淀粉（分子量3 3万）溶液在万）溶液在(42)(42)贮存可保存贮存可保存1414天。天。2 2、浓缩红细胞加磷酸腺嘌呤及庆大霉素的新维代浆血，、浓缩红细胞加磷酸腺嘌呤及庆大霉素的新维代浆血，在在(42)(42)可保存可

25、保存3535天。天。(一一)含胶体的红细胞悬液（胶体代浆血）含胶体的红细胞悬液（胶体代浆血）第二节第二节 红细胞的保存红细胞的保存 二、添加剂红细胞保存二、添加剂红细胞保存(二二)晶体盐红细胞悬液（晶体盐代浆血）晶体盐红细胞悬液（晶体盐代浆血）添加剂添加剂成分成分保存期保存期备注备注生理盐水生理盐水24d24dSAGSAGNaClNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、腺嘌呤、葡萄糖35d35dSAGMSAGMNaClNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇35d35d甘露醇抗溶血剂甘露醇抗溶血剂SAGSSAGSNaClNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、蔗糖、腺嘌呤、葡萄糖、蔗糖35d35d更低溶血

26、率更低溶血率MAPMAPNaClNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、磷酸盐、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、磷酸盐35d35d补充抗凝补充抗凝低渗低渗NH4ClNH4ClNH4ClNH4Cl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、枸橼酸盐、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、枸橼酸盐120d120d输注前需洗涤，临输注前需洗涤，临床未使用床未使用SAGMSAGM麦芽糖麦芽糖NaClNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、麦芽糖12w12w五联袋，每五联袋，每4 4周更周更换保存液换保存液目前还不能断定高水平的目前还不能断定高水平的ATPATP是否为氯化是否为氯化氨的作用氨的作用,有关理论也有待于进一步研

27、有关理论也有待于进一步研究。但作者深信新溶液的保存作用究。但作者深信新溶液的保存作用,且且有可能是氨的存在是基于这种溶液的非有可能是氨的存在是基于这种溶液的非渗透性低渗的原因并得以维持渗透性低渗的原因并得以维持ATPATP 的的含量和延长红细胞的贮存期含量和延长红细胞的贮存期。第二节第二节 红细胞的保存红细胞的保存 二、添加剂红细胞保存二、添加剂红细胞保存(三三)红细胞复苏液红细胞复苏液复苏液（丙酮酸盐、肌苷、葡萄糖、磷酸盐、腺嘌呤及复苏液（丙酮酸盐、肌苷、葡萄糖、磷酸盐、腺嘌呤及NaCl NaCl）加入浓缩红细胞加入浓缩红细胞3737保温保温1 1小时小时红细胞复苏：红细胞复苏：ATP AT

28、P和和2,3-DPG2,3-DPG恢复到正常水平恢复到正常水平输注前要去除复苏液输注前要去除复苏液第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用鉴定血液应在充分的自然光线或日光灯下进行（必要时鉴定血液应在充分的自然光线或日光灯下进行（必要时可用放大镜检查）可用放大镜检查）第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察一、正常血的肉眼观察血液流入袋内多呈暗红色，有时呈鲜红色血液流入袋内多呈暗红色，有时呈鲜红色血浆呈草黄色或淡黄色者为多见血浆呈草黄色或淡黄色者为多见分层分层红细胞层呈暗红色红细胞层呈暗红色白膜层白膜层分层界面清晰分层界面清

29、晰第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察一、正常血的肉眼观察血浆层内不应有肉眼可见的血块、絮状物或漂浮物。血浆层内不应有肉眼可见的血块、絮状物或漂浮物。有时出现不同程度的均匀乳黄色或乳白色脂肪颗粒样漂有时出现不同程度的均匀乳黄色或乳白色脂肪颗粒样漂浮物，在浮物，在3737加温时易溶解呈透明状加温时易溶解呈透明状若细菌污染则加热后不透明。若细菌污染则加热后不透明。第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察一、正常血的肉眼观察白膜层白膜层(buffy coat)(buffy coat)，荷叶状、放射波浪状、

30、雪花状、龟裂状等荷叶状、放射波浪状、雪花状、龟裂状等第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察一、正常血的肉眼观察红细胞层暗红色不含肉眼可见的血凝块或其他异常物质。红细胞层暗红色不含肉眼可见的血凝块或其他异常物质。如果有气泡：如果有气泡：1 1周后逐渐消失周后逐渐消失 正常正常在保存中如气泡日渐增多，则有污染产气杆菌的可能。在保存中如气泡日渐增多，则有污染产气杆菌的可能。第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察一、正常血的肉眼观察血液发出前，要仔细检查，观察是否有红细胞微小凝块，血液发出前，要仔细检查，观

31、察是否有红细胞微小凝块，即冷凝集现象。即冷凝集现象。冷凝集的血输用前加温，一般冷凝集的血输用前加温，一般37 51037 510分钟分钟经保温的血液若有溶血发生则应放弃。经保温的血液若有溶血发生则应放弃。第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察二、异常血的肉眼观察一般库存血红细胞为暗红色，如果颜色变成暗紫色（高一般库存血红细胞为暗红色，如果颜色变成暗紫色（高锰酸钾溶液颜色），则常常是细菌污染造成红细胞溶血锰酸钾溶液颜色），则常常是细菌污染造成红细胞溶血的结果。的结果。这种血不能输用，必须进行细菌培养。这种血不能输用，必须进行细菌培养。(一一)血液颜

32、色变化血液颜色变化第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察二、异常血的肉眼观察溶血：溶血：发生溶血的初期，血浆层底部首先变为红色或白细胞层发生溶血的初期，血浆层底部首先变为红色或白细胞层出现玫瑰色的小环，这些现象是溶血初期的特征。出现玫瑰色的小环，这些现象是溶血初期的特征。溶血加重后，红色血浆部分则越来越多，并向上部扩展，溶血加重后，红色血浆部分则越来越多，并向上部扩展，最后全部血浆变为红色。最后全部血浆变为红色。(二二)血浆层与红细胞层分界不清血浆层与红细胞层分界不清第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉

33、眼观察二、异常血的肉眼观察抗凝不佳：抗凝不佳：形成肉眼见到的小凝块，严重时可形成整个大块形成肉眼见到的小凝块，严重时可形成整个大块血凝块往往沉降在血细胞层内，可使整齐的表面变成凹血凝块往往沉降在血细胞层内，可使整齐的表面变成凹凸不平。凸不平。(三三)大量血块存在大量血块存在第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察二、异常血的肉眼观察库存血亦可能发生大小不等的纤维蛋白絮状凝块，漂浮库存血亦可能发生大小不等的纤维蛋白絮状凝块，漂浮于血浆层表面或悬浮在血浆层中。于血浆层表面或悬浮在血浆层中。多量、大块的血凝块或纤维蛋白块的存在，均表明血液多量、大块的血凝

34、块或纤维蛋白块的存在，均表明血液质量不佳，不仅输血困难，也可能发生输血反应。质量不佳，不仅输血困难，也可能发生输血反应。原来血液没有凝块，保存后产生了血凝块，则应怀疑可原来血液没有凝块，保存后产生了血凝块，则应怀疑可能是细菌污染所致。能是细菌污染所致。(三三)大量血块存在大量血块存在第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察二、异常血的肉眼观察乳糜：血浆内含过多脂肪。乳糜：血浆内含过多脂肪。库存血如发生血浆明胶化现象，可能细菌污染，不能发库存血如发生血浆明胶化现象，可能细菌污染，不能发出使用。出使用。(四四)血浆层呈乳糜或明胶化血浆层呈乳糜或明胶化第

35、四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 血液的冷冻保存研究开始于血液的冷冻保存研究开始于2020世纪世纪4040年代年代19491949年年PolgePolge和和SmithSmith等人发现甘油对牛精子的冷冻保存有等人发现甘油对牛精子的冷冻保存有保护作用，从中得到启示保护作用，从中得到启示第二年，第二年，SmithSmith应用甘油作保护剂冷冻红细胞获得成功应用甘油作保护剂冷冻红细胞获得成功其后，血液冷冻保存的研究迅速发展，但是由于没能解其后，血液冷冻保存的研究迅速发展，但是由于没能解决去除防冻保护剂的问题，临床尚未能得到广泛应用。决去除防冻保护剂的问题，临床尚未能得到广泛应用。第四节第四

36、节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 19561956年，年，TullisTullis应用应用CohnCohn分离器将防冻剂甘油去除，从而分离器将防冻剂甘油去除，从而使冷冻红细胞成功地应用于临床。使冷冻红细胞成功地应用于临床。19631963年，年，HugginsHuggins发现红细胞在糖溶液中有可逆性的聚集发现红细胞在糖溶液中有可逆性的聚集反应，利用此反应原理，可用糖液洗涤法去除防冻保护反应，利用此反应原理，可用糖液洗涤法去除防冻保护剂剂甘油。甘油。MerymanMeryman等人利用不同浓度梯度的氯化钠洗涤红细胞等人利用不同浓度梯度的氯化钠洗涤红细胞去除防冻剂去除防冻剂第四节第四节 血液的冷

37、冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制低温损伤机制低温损伤机制第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制相变温度区间：相变温度区间：细胞在冷冻或复溶过程中，发生液相和固相转变的细胞在冷冻或复溶过程中，发生液相和固相转变的温度区间温度区间在相变过程中，通常伴随吸热或者放热反应，以及在相变过程中，通常伴随吸热或者放热反应，以及体积的改变体积的改变第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制降温过程的低温损伤：降温过程的低温损伤：来自于降温、复温过程中必须经过的一个温度区

38、间，来自于降温、复温过程中必须经过的一个温度区间，即即15 15 至至60 60 之间。之间。该温度区间对细胞具有杀伤性。该温度区间对细胞具有杀伤性。第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制(一一)盐变性学说盐变性学说 慢速冷冻细胞损伤的主要原因：慢速冷冻细胞损伤的主要原因：LovelockLovelock等人提出，细胞外水结冰时，细胞收缩、脱水等人提出，细胞外水结冰时，细胞收缩、脱水使细胞内外产生的高浓度电解质，作用于细胞膜，引使细胞内外产生的高浓度电解质，作用于细胞膜，引起脂蛋白复合物的变性和部分类脂质的丢失，增加了起脂蛋白复合物的变性和

39、部分类脂质的丢失，增加了细胞对阳离子的通透性，并使细胞膜上形成一些小孔，细胞对阳离子的通透性，并使细胞膜上形成一些小孔，冰融化时水进入细胞内引起渗透休克冰融化时水进入细胞内引起渗透休克第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制(二二)冰晶的机械作用冰晶的机械作用快速冷冻时细胞损伤的主要原因：快速冷冻时细胞损伤的主要原因：在快速冷冻时，细胞内形成许多冰晶，在快速冷冻时，细胞内形成许多冰晶，冰晶作用于细胞膜，并使细胞膜上产生小孔，使得细冰晶作用于细胞膜，并使细胞膜上产生小孔，使得细胞膜不可逆地丧失其半透性胞膜不可逆地丧失其半透性第四节第四节 血液的

40、冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制(二二)冰晶的机械作用冰晶的机械作用降温过快或过慢，都会杀死细胞降温过快或过慢，都会杀死细胞在慢的降温速率下，细胞的低温损伤源于在慢的降温速率下，细胞的低温损伤源于“盐变性盐变性”在高降温速率下，细胞的低温损伤源于在高降温速率下，细胞的低温损伤源于“胞内冰胞内冰”细胞冰冻保存的最佳降温速率，应该是慢到足以防止细胞冰冻保存的最佳降温速率，应该是慢到足以防止“胞内冰胞内冰”，同时又快到使，同时又快到使“盐变性盐变性”最小最小不同的细胞，由于细胞膜的生物特性不同，对最佳降温不同的细胞，由于细胞膜的生物特性不同，对最佳降温速率的要

41、求也不同。速率的要求也不同。第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制(三三)化学损伤化学损伤LevittLevitt提出：冷冻时，在细胞脱水和溶质浓缩过程中，提出：冷冻时，在细胞脱水和溶质浓缩过程中，蛋白质组分异常靠近，最终使蛋白质分子中巯基蛋白质组分异常靠近，最终使蛋白质分子中巯基(SH)(SH)和和二硫键二硫键(SS)(SS)发生相互不可逆的反应，形成新的化学键，发生相互不可逆的反应，形成新的化学键，导致蛋白质变性而引起细胞死亡。导致蛋白质变性而引起细胞死亡。第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的

42、低温损伤机制(四四)细胞的融化反应细胞的融化反应细胞复融过程中的损伤：融化反应细胞复融过程中的损伤：融化反应尚不明确尚不明确第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制(四四)细胞的融化反应细胞的融化反应经验总结：经验总结：慢速冷冻的标本应慢速融化慢速冷冻的标本应慢速融化快速冷冻的标本则应采用快速融化的方法快速冷冻的标本则应采用快速融化的方法第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 二、冷冻保护剂二、冷冻保护剂冷冻保护剂可根据它们能否穿透细胞膜分为两种冷冻保护剂可根据它们能否穿透细胞膜分为两种 细胞内保护剂细胞内保护剂细胞外保护剂细胞外保护剂加

43、入保护剂后，可降加入保护剂后，可降低溶液的冰点，并增低溶液的冰点，并增加未冻水量加未冻水量小分子小分子大分子大分子能自由地通过细胞膜能自由地通过细胞膜不能穿透细胞不能穿透细胞第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 二、冷冻保护剂二、冷冻保护剂胞内外盐数量一定胞内外盐数量一定未冻水量增加未冻水量增加盐的浓度降低盐的浓度降低使细胞处于盐浓度较低的环境中使细胞处于盐浓度较低的环境中第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 二、冷冻保护剂二、冷冻保护剂(二二)冷冻保护剂的种类冷冻保护剂的种类细胞内保护剂：甘油、细胞内保护剂：甘油、DMSODMSO、葡萄糖、乙二醇、丙三、葡萄糖、乙二醇、丙三醇、甲

44、醇、乙醇、乙酸胺、甲酞胺等。醇、甲醇、乙醇、乙酸胺、甲酞胺等。细胞外保护剂：乳糖、麦芽糖、木糖、聚乙烯吡咯烷细胞外保护剂：乳糖、麦芽糖、木糖、聚乙烯吡咯烷酮酮(PVP)(PVP)、右旋糖酐、白蛋白、羟乙基淀粉（、右旋糖酐、白蛋白、羟乙基淀粉（HESHES）、）、聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）、甘露醇等。）、甘露醇等。第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 三、低温血液保存与玻璃化三、低温血液保存与玻璃化玻璃化就是生物材料在由液态向固态转化过程中没有相玻璃化就是生物材料在由液态向固态转化过程中没有相变热产生，也就是没有晶体生成。变热产生，也就是没有晶体生成。有人认为冷却速率达到有人认为冷

45、却速率达到10/10/秒，颗粒小于秒，颗粒小于5l0nm5l0nm就不会就不会使生物材料受到冷冻损伤，这就叫玻璃化。使生物材料受到冷冻损伤，这就叫玻璃化。第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 三、低温血液保存与玻璃化三、低温血液保存与玻璃化添加冷冻保护剂或快速冷冻生物材料的目的就是使生物添加冷冻保护剂或快速冷冻生物材料的目的就是使生物材料中的水处于容易达到玻璃化的状态。材料中的水处于容易达到玻璃化的状态。第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 四、红细胞甘油化、冷冻、融化和去甘油的方法四、红细胞甘油化、冷冻、融化和去甘油的方法高浓度甘油慢速冷冻高浓度甘油慢速冷冻低浓度甘油快速冷冻低浓

46、度甘油快速冷冻解冻：慢速融化解冻：慢速融化去除甘油试剂可用糖液聚集法去除甘油试剂可用糖液聚集法或不同浓度梯度氯化钠洗涤法或不同浓度梯度氯化钠洗涤法解冻：快速融化解冻：快速融化去除甘油试剂可用不同浓度梯去除甘油试剂可用不同浓度梯度氯化钠溶液，由高渗逐渐过度氯化钠溶液，由高渗逐渐过渡到等渗分次洗涤渡到等渗分次洗涤第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 五、冷冻红细胞的制备方法五、冷冻红细胞的制备方法在我国普遍使用在我国普遍使用高浓度甘油慢速冷冻高浓度甘油慢速冷冻 第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 五、冷冻红细胞的制备方法五、冷冻红细胞的制备方法高浓度甘油慢速冷冻高浓度甘油慢速冷冻 盐

47、液离心洗涤法盐液离心洗涤法 糖液聚集洗涤法糖液聚集洗涤法 按解冻后洗脱甘油的方法：按解冻后洗脱甘油的方法：方法：先采用高张溶液使融化的高渗红细胞渗透方法：先采用高张溶液使融化的高渗红细胞渗透压达到平衡，接着用逐渐减低的高张溶液进行分压达到平衡，接着用逐渐减低的高张溶液进行分次洗涤，最后用含有葡萄糖的等渗次洗涤，最后用含有葡萄糖的等渗NaCl悬浮悬浮第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 五、冷冻红细胞的制备方法五、冷冻红细胞的制备方法等张溶液是指不引起红细胞膜变形的溶液，这个概等张溶液是指不引起红细胞膜变形的溶液，这个概念是从生理角度考虑的。念是从生理角度考虑的。有些溶质的等渗浓度与等张浓

48、度相同或相近，如有些溶质的等渗浓度与等张浓度相同或相近，如0.9%的氯化钠溶液，既是等渗溶液又是等张溶液。的氯化钠溶液，既是等渗溶液又是等张溶液。第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 五、冷冻红细胞的制备方法五、冷冻红细胞的制备方法有些溶质如盐酸普鲁卡因、甘油、尿素等，等渗溶液不有些溶质如盐酸普鲁卡因、甘油、尿素等，等渗溶液不等于等张溶液。等于等张溶液。例如例如2.6%的甘油溶液与的甘油溶液与0.9%的氯化钠溶液具有相同的渗的氯化钠溶液具有相同的渗透压，但是透压，但是2.6%的甘油的甘油100%溶血，所以是不等张的。溶血，所以是不等张的。高张溶液会使红细胞脱水皱缩，低张溶液会使红细胞吸高

49、张溶液会使红细胞脱水皱缩，低张溶液会使红细胞吸水膨胀。水膨胀。第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 五、冷冻红细胞的制备方法五、冷冻红细胞的制备方法先采用高张溶液使融化的高渗红细胞渗透压达到先采用高张溶液使融化的高渗红细胞渗透压达到平衡，接着用逐渐减低的高张溶液进行分次洗涤，平衡，接着用逐渐减低的高张溶液进行分次洗涤，最后用含有葡萄糖的等渗最后用含有葡萄糖的等渗NaCl悬浮悬浮内内 外外高渗高渗水水高张高张水水第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 五、冷冻红细胞的制备方法五、冷冻红细胞的制备方法(一一)慢速冷冻糖液聚集洗涤制备法慢速冷冻糖液聚集洗涤制备法1、糖液聚集洗涤法去甘油原理

50、、糖液聚集洗涤法去甘油原理在在pH5.26.1的范围内，血浆中的丙种球蛋白与红细的范围内，血浆中的丙种球蛋白与红细胞膜的脂蛋白之间可形成一种可逆性的复合物胞膜的脂蛋白之间可形成一种可逆性的复合物第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 五、冷冻红细胞的制备方法五、冷冻红细胞的制备方法(一一)慢速冷冻糖液聚集洗涤制备法慢速冷冻糖液聚集洗涤制备法1、糖液聚集洗涤法去甘油原理、糖液聚集洗涤法去甘油原理当加入非电解质溶液时，如果糖、葡萄糖、蔗糖等，由于当加入非电解质溶液时，如果糖、葡萄糖、蔗糖等，由于离子强度减小，与脂蛋白结合的球蛋白之间又可结合，使离子强度减小，与脂蛋白结合的球蛋白之间又可结合，使