血栓与止血试验.ppt

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1、 血栓与止血检验血栓与止血检验 临床血液学教研室临床血液学教研室 第一节第一节 血栓与止血的筛选检验血栓与止血的筛选检验一、一期止血缺陷的筛选检验一、一期止血缺陷的筛选检验二、二期止血缺陷的筛选检验二、二期止血缺陷的筛选检验三、纤溶活性增强的的筛选检验三、纤溶活性增强的的筛选检验四、四、抗凝物质检验抗凝物质检验出血时间测定出血时间测定(bleeding time(bleeding time，BT)BT)一、原理：一、原理：测定在皮肤受特定条件外伤后，出血自然停止测定在皮肤受特定条件外伤后，出血自然停止所需的时间即为出血时间。此过程反映了毛细血管所需的时间即为出血时间。此过程反映了毛细血管与血小

2、板的相互作与血小板的相互作 用，包括内皮下组织与血小板用，包括内皮下组织与血小板粘附（通过粘附（通过vWF 的作用）、血小板的聚集和释放的作用）、血小板的聚集和释放等反应，以等反应，以 及及PGI2与与TXA2的动态平衡。的动态平衡。二、方法二、方法 Duke法、法、Ivy法、法、出血时间测定器法（出血时间测定器法（TBT法法）（卫生部推荐方法）（卫生部推荐方法）三、试剂与器材：三、试剂与器材：1、血压计，秒表，干净滤纸、血压计，秒表，干净滤纸 2、出血时间测定器、出血时间测定器 四、操作：四、操作：1 1、血压计袖带缚于测定上肢的上臂，加压并维、血压计袖带缚于测定上肢的上臂，加压并维 持在持

3、在40mmHg,40mmHg,儿童减半。儿童减半。2 2、在肘前窝下、在肘前窝下5cm5cm处的尺侧做局部消毒后，将测定器垂处的尺侧做局部消毒后，将测定器垂 直贴于皮肤表面，按下按钮，同时启动秒表，移开测直贴于皮肤表面，按下按钮，同时启动秒表，移开测 定器。定器。3 3、每隔、每隔30s,30s,用干净滤纸吸去流出的血液，直至流血自用干净滤纸吸去流出的血液，直至流血自然停止，并记录秒表读数。然停止，并记录秒表读数。五、参考值五、参考值：2.3-9.5 min六、临床意义：六、临床意义：延长：延长：1、血小板数量异常，如血小板数量异常，如ITP、TTP 2、血小板功能异常，如、血小板功能异常，如

4、plt无力症、巨大无力症、巨大plt综合征、综合征、储存池病储存池病 3、血管壁异常血管性血友病、遗传性毛细血管扩张症血管壁异常血管性血友病、遗传性毛细血管扩张症 4、某些严重的凝血因子缺乏、某些严重的凝血因子缺乏 缩短：高凝状态和血栓性疾病缩短：高凝状态和血栓性疾病七、质量控制七、质量控制 1、注意影响、注意影响BT测定的因素测定的因素 2、滤纸吸去血液时，避免与伤口接触、滤纸吸去血液时，避免与伤口接触 3、注意药物的影响（抗凝剂、注意药物的影响（抗凝剂、Apc） 血小板检验血小板检验一、血小板计数一、血小板计数二、血小板生存时间检测二、血小板生存时间检测三、血小板相关抗体检测三、血小板相关

5、抗体检测四、血小板粘附试验四、血小板粘附试验五、血小板聚集试验五、血小板聚集试验六、血小板第六、血小板第3因子有效性检测因子有效性检测七、血小板膜糖蛋白检测七、血小板膜糖蛋白检测八、血小板活化指标检测（血浆八、血小板活化指标检测（血浆-TG、PF4、血、血 小板小板P选择素检测选择素检测） 血小板计数血小板计数（platelet count,PCplatelet count,PC或或pltplt）正常值：（正常值：（100100300300）10109 9/L/L危险危险PCPC201020109 9/L/L可引起自发性出血可引起自发性出血 血血 小小 板板 粘粘 附附 试试 验验 (plat

6、elet adhension test,PAdT)原理：原理：受检者血液一定速度通过一定量玻璃珠的塑料管受检者血液一定速度通过一定量玻璃珠的塑料管，测定通过玻璃珠前后血液中血小板数的差值，即，测定通过玻璃珠前后血液中血小板数的差值，即为粘附于玻珠和塑料管的血小板数，由此可计算出为粘附于玻珠和塑料管的血小板数，由此可计算出其占血小板总数的百分比，即为血小板粘附率。其占血小板总数的百分比，即为血小板粘附率。方法：玻球法、玻璃滤器法、玻珠法方法：玻球法、玻璃滤器法、玻珠法临床意义：临床意义：血管性血友病、巨大血小板综合症、血小板无力症、肝血管性血友病、巨大血小板综合症、血小板无力症、肝硬化、硬化、M

7、DS、急性白血病、服用抗血小板药物等、急性白血病、服用抗血小板药物等 血栓前状态和血栓性疾病、妊高症、口服避孕药等血栓前状态和血栓性疾病、妊高症、口服避孕药等粘附率减低粘附率减低粘附率增高粘附率增高诱聚剂诱聚剂PPPPPPPRPPRP血血 小小 板板 聚聚 集集 试试 验验platelet aggregation tset，PAgT比浊法：以比浊法：以PPP设最低浊度，设最低浊度，PRP设最高浊度，在血浆中加入诱聚剂，设最高浊度，在血浆中加入诱聚剂，测定血浆浊度的变化，绘制血小板聚集曲线。测定血浆浊度的变化，绘制血小板聚集曲线。 临床意义：临床意义：血小板无力症、血管性血友病、巨大血小板综合症

8、、血小血小板无力症、血管性血友病、巨大血小板综合症、血小板贮存池病、低（无）纤维蛋白原血症、肝硬化、使用血板贮存池病、低（无）纤维蛋白原血症、肝硬化、使用血小板抑制剂等小板抑制剂等。高凝状态、血栓形成性疾病、动脉粥样硬化、糖尿病、口高凝状态、血栓形成性疾病、动脉粥样硬化、糖尿病、口服避孕药、人工瓣膜移植术后、吸烟等。服避孕药、人工瓣膜移植术后、吸烟等。聚集率减低聚集率减低聚集率增高聚集率增高质量控制：质量控制：1.1.采血要顺利，避免组织液混入，抗凝剂使用合理（不用采血要顺利，避免组织液混入，抗凝剂使用合理（不用EDTAEDTA抗凝）抗凝）2.2.采集后采集后3h3h内室温下完成内室温下完成

9、3.3.试验前十天停用一切抑制血小板聚集的药物；试验前禁试验前十天停用一切抑制血小板聚集的药物；试验前禁食高脂类食物食高脂类食物 4.4.注意注意 PRPPRP：1000r/min1000r/min离心离心10min10min PLT(100PLT(100300)10300)109 9/L/L PPP PPP：3000r/min3000r/min离心离心20min20min PLTPLT201020109 9/L/L 全血凝固时间测定（全血凝固时间测定（CT）活化部分凝血活酶时间测定（活化部分凝血活酶时间测定（APTT）血浆凝血酶原时间测定（血浆凝血酶原时间测定（PT）第二节第二节 二期止血缺

10、陷筛查检验二期止血缺陷筛查检验全血凝全血凝 固时间测定固时间测定(coagulation time,CT)原理原理 观察血液自离体后，到玻璃试管中凝固所需时间观察血液自离体后，到玻璃试管中凝固所需时间观察血液自离体后，到玻璃试管中凝固所需时间观察血液自离体后，到玻璃试管中凝固所需时间血液血液从血管中从血管中抽出抽出与带负电荷与带负电荷表面接触表面接触内源性凝血途径启动内源性凝血途径启动纤维蛋白形成（血液凝固）纤维蛋白形成（血液凝固）XII XIIaXII XIIaXII XIIaXII XII临床意义临床意义 1.因子因子VIII、IX、XI活性减低；严重的因子活性减低；严重的因子、和和纤维蛋

11、白原缺乏纤维蛋白原缺乏 2.原发性纤溶亢进；血循环中存在抗凝物质原发性纤溶亢进；血循环中存在抗凝物质 高凝状态和血栓性疾病高凝状态和血栓性疾病CT延长延长CT缩短缩短肝素治疗用量检测指标肝素治疗用量检测指标活活 化化 部部 分分 凝凝 血血 活活 酶酶 时时 间间 测测 定定(activated partial thromboplastin time，APTT)一、原理一、原理APTT Ca2+脑磷脂脑磷脂白陶土白陶土 Ca2+脑磷脂脑磷脂部分凝部分凝血活酶血活酶 二、操作二、操作 （一）（一）APTT手工法手工法(试管法）试管法）血浆血浆0.1mlAPTT试剂各试剂各0.1ml +CaCl2

12、0.1ml （混匀计时）（混匀计时）结果观察：缓慢倾斜试管，观察液体流动状态，流动结果观察：缓慢倾斜试管，观察液体流动状态，流动 停止停止计时停止停止计时 参考值参考值 2545s45s (二）二）仪器法器法 3737水浴水浴5min3737温浴温浴三、临床意义三、临床意义APTT纠正试验纠正试验 于患者血浆中分别加入于患者血浆中分别加入1/4 的正常新鲜血浆、硫酸钡的正常新鲜血浆、硫酸钡吸附血浆、正常血清，再作吸附血浆、正常血清，再作APTT试验。试验。硫酸钡吸附血浆硫酸钡吸附血浆 VIII、XI、XII （不含（不含IX）正常血清正常血清 IX、XI、XII（不含（不含VIII）新鲜血浆新

13、鲜血浆 VIII、IX、XI、XII 凝血酶原时间测定凝血酶原时间测定Prothrombin time，PT一、原理一、原理 Ca2+脑磷脂脑磷脂PT组织因子组织因子Ca2+脑磷脂脑磷脂二、报告方式二、报告方式 1.直接报告患者及正常对照的直接报告患者及正常对照的PT秒数秒数 2.报告凝血酶原时间比值（报告凝血酶原时间比值（PTR）PTR=受检者受检者PT（秒）（秒）/正常对照正常对照PT（秒）（秒）3.报告国际标准化比值（报告国际标准化比值（INR）INR=PTRISI 组织凝血活酶的国际敏感指数（组织凝血活酶的国际敏感指数（internation sensetivity index,ISI

14、）是用组织凝血活酶试剂与）是用组织凝血活酶试剂与ISI已知的国际参比品或已知的国际参比品或经其标定过的参比品之间敏感度相比较的一个参数。经其标定过的参比品之间敏感度相比较的一个参数。测定方法：测定方法：用多份凝血因子水平不同的血浆（包括正常人和口服抗凝用多份凝血因子水平不同的血浆（包括正常人和口服抗凝剂患者的血浆），用参比品测得它们的剂患者的血浆），用参比品测得它们的PT的对数（的对数（lgPT），），再用待标定的组织凝血活酶测得它们的再用待标定的组织凝血活酶测得它们的lgPT，以前者为纵坐，以前者为纵坐标，后者为横坐标作图，经回归求得直线斜率。标，后者为横坐标作图，经回归求得直线斜率。待标定

15、的组织凝血活酶的待标定的组织凝血活酶的ISI=已知的已知的ISI斜率斜率三、临床意义三、临床意义要保证止凝血检验的质量要保证止凝血检验的质量 必须做好以下十点：必须做好以下十点：1.采血须顺利，尽量用大号针头，动作要轻柔；采血须顺利，尽量用大号针头，动作要轻柔；2.标本用加盖有刻度标记的塑料试管或硅化管收标本用加盖有刻度标记的塑料试管或硅化管收 集集；3.抗凝剂用抗凝剂用109mmol/L的枸橼酸钠，抗凝剂与的枸橼酸钠，抗凝剂与 血液的比例为血液的比例为1:9。当当Hct Hct 增高增高55%55%或或25%40mg/L，见于原发性纤，见于原发性纤溶症、溶症、DIC、M3、应用链激酶等溶栓治

16、疗时。、应用链激酶等溶栓治疗时。血浆血浆D-二聚体测定二聚体测定一、原理：一、原理：1.胶乳凝集法胶乳凝集法 2.ELISA法法二、参考值：二、参考值：0.5mg/L有临床意义有临床意义三、临床意义：三、临床意义：1.DIC时呈阳性或明显增高，另见深静脉血栓、时呈阳性或明显增高，另见深静脉血栓、心梗、肺栓塞、重症肝炎等心梗、肺栓塞、重症肝炎等 2.可作为原发纤溶和继发纤溶鉴别的重要依可作为原发纤溶和继发纤溶鉴别的重要依据。据。 血浆硫酸鱼精蛋白副凝试验血浆硫酸鱼精蛋白副凝试验（plasma protamine paracoagulation test,3P）结果判断结果判断 阴性阴性也是鉴别继

17、发性纤溶也是鉴别继发性纤溶与原发性纤溶的试验与原发性纤溶的试验血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验plasma protamin parcoagulation test，3P四、临床意义四、临床意义 1.阴性阴性 正常或正常或DIC晚期，原发纤溶晚期，原发纤溶 2.阳性阳性 含细颗粒沉淀，粗颗粒沉淀、纤维蛋白含细颗粒沉淀，粗颗粒沉淀、纤维蛋白丝网或胶冻样物质，见于丝网或胶冻样物质，见于DIC早期，中期，静脉血早期，中期，静脉血栓、严重创伤，大手术，及久置冰箱的标本栓、严重创伤，大手术，及久置冰箱的标本 生理性抗凝蛋白检验：生理性抗凝蛋白检验：一、抗凝血酶检测一、抗凝血酶检测 1

18、、血浆抗凝血酶活性检测、血浆抗凝血酶活性检测 2、血浆抗凝血酶抗原检测、血浆抗凝血酶抗原检测二、蛋白二、蛋白C检测检测 1、血浆蛋白、血浆蛋白C活性检测活性检测 2、血浆蛋白、血浆蛋白C抗原检测抗原检测三、血浆蛋白三、血浆蛋白S抗原检测抗原检测四、组织因子途径抑制物检测四、组织因子途径抑制物检测第四节第四节 抗凝物质检验抗凝物质检验病理性抗凝物质检验：病理性抗凝物质检验：一、复钙交叉试验一、复钙交叉试验二二、凝血酶时间检测及甲苯胺蓝纠正试验、凝血酶时间检测及甲苯胺蓝纠正试验三、普通肝素和低相对分子质量肝素检测三、普通肝素和低相对分子质量肝素检测四、凝血因子四、凝血因子抑制物检测抑制物检测五、狼

19、疮抗凝物质的筛选试验和确诊试验五、狼疮抗凝物质的筛选试验和确诊试验凝血酶时间测定及甲苯胺蓝纠正凝血酶时间测定及甲苯胺蓝纠正试验试验 thrombin time,TT一、原理一、原理:凝血酶凝血酶TT二、结果判断：二、结果判断：正常人凝血酶时间一般在正常人凝血酶时间一般在16-18s，超过正常对，超过正常对照照3s以上视为延长；如正常对照在以上视为延长；如正常对照在20s以上，则超以上，则超过过5s为延长。为延长。加甲苯胺蓝后加甲苯胺蓝后TT明显缩短，与未加甲苯胺蓝明显缩短，与未加甲苯胺蓝的的TT比较相差比较相差5s以上，视为纠正。以上，视为纠正。高纤维蛋白原血症为心脑血管血栓高纤维蛋白原血症为心脑血管血栓形成的独立危险因素。形成的独立危险因素。增高增高严重肝病严重肝病营养不良营养不良DIC减低减低老年人、慢性感染老年人、慢性感染肿瘤、应激、肿瘤、应激、口服避孕药期间等口服避孕药期间等