药学实验教学中心.ppt

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1、药学实验教学中心 伍小波药理学实验药理学实验 实验一实验一 药理实验基础知识药理实验基础知识实验二实验二不同给药途径对药物效应的影响不同给药途径对药物效应的影响实验三实验三 药物的协同作用和拮抗作用药物的协同作用和拮抗作用实验四实验四 硝酸士的宁硝酸士的宁LDLD5050的测定的测定实验五实验五 利尿药对家兔尿量的影响利尿药对家兔尿量的影响实验一实验一 药理实验基础知识药理实验基础知识一、目的一、目的1.1.掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；2.2.更好地掌握药理学基本理论知识；更好地掌握药理学基本理论知识；3.3.培养科学思维培养科学思维二、二、基本要求基本

2、要求1.1.实验前：实验前：预习实验内容并复习相关理论知识；预习实验内容并复习相关理论知识；2.2.实验时实验时 实验器材要妥善保管；实验器材要妥善保管；实实验验操操作作按按步步骤骤进进行行，仔仔细细观观察察实实验验中中出出现现的的现现象象，实实事求是地做好记录；事求是地做好记录；注意节约实验药品；注意节约实验药品；维持良好的课堂纪律。维持良好的课堂纪律。3.3.实验后实验后 各各组组同同学学将将实实验验动动物物处处死死，实实验验台台擦擦干干净净，将将实实验验方方盘盘送回准备室；送回准备室；值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所；值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所；书写实验报告

3、。书写实验报告。三、实验报告的书写三、实验报告的书写1.1.题目题目2.2.目的目的3.3.原理原理4.4.材料材料：实验动物，器材，药品：实验动物，器材，药品5.5.方法方法：用自己的语言简单扼要描述出来；：用自己的语言简单扼要描述出来；6.6.结果结果：要求真实、清楚；：要求真实、清楚；7.7.讨讨论论：将将实实验验结结果果进进行行比比较较、分分析析；实实验验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；8.8.结结论论：将将实实验验结结果果进进行行归归纳纳总总结结，应应带带有有提示性质。提示性质。四、实验设计基本原则四、实验设计基本原则1.1.随机原则随

4、机原则使使每每一一实实验验对对象象都都有有同同等等的的机机会会抽抽到到实实验验组组或或对对照照组组中中，除除处处理理因因素素外外其其他他因因素素尽尽可可能能均均衡衡一一致致，从而抵消非实验因素的影响。从而抵消非实验因素的影响。2.2.对照原则对照原则 组组间间对对照照：阴阴性性对对照照，阳阳性性对对照照，同同因因素素不不同水平对照；同水平对照；自身前后对照自身前后对照3.3.重复原则重复原则五、实验动物五、实验动物1.1.动物的选择动物的选择 小小白白鼠鼠：适适用用于于需需大大量量动动物物的的实实验验，如如某某些些药药物物的的筛筛选选，半半数数致致死死量量的的测测定定。也也较较适适用用于于避避

5、孕孕药药实实验验、抗抗炎炎镇镇痛痛药药实实验验、中中枢枢神神经经系系统统药药实实验验、抗抗肿肿瘤瘤药药及及抗衰老药实验等。抗衰老药实验等。大大白白鼠鼠：比比较较适适用用于于抗抗炎炎药药物物实实验验，血血压压测测定定、利利胆胆、利利尿尿药药实实验验，也也可可用用于于进进行行亚亚急急性性和和慢慢性性毒毒性性实验。实验。豚豚鼠鼠：因因其其对对组组胺胺敏敏感感，并并易易于于致致敏敏，故故常常被被选选用用于于抗抗过过敏敏药药、平平喘喘药药和和抗抗组组胺胺药药的的实实验验。也也常常用用于于离离体体心心脏脏、心心房房、肠肠管管实实验验。又又因因它它对对结结核核敏敏感感，常用于抗结核病药的实验。常用于抗结核病

6、药的实验。家家兔兔：常常用用于于观观察察研研究究脑脑电电生生理理作作用用，药药物物对对小小肠肠的的作作用用。由由于于家家兔兔体体温温变变化化敏敏感感，也也常常用用于于体体温温实验，用于热原检查。实验，用于热原检查。狗狗：狗狗是是记记录录血血压压，呼呼吸吸最最常常用用的的大大动动物物。还还可可利利用用狗狗做做成成胃胃瘘瘘、肠肠瘘瘘，以以观观察察药药物物对对胃胃肠肠蠕蠕动动和和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。2.2.实验动物的编号实验动物的编号狗狗、兔兔等等较较大大的的动动物物可可用用特特制制的的铝铝质质号号码码牌牌固固定定在在颈颈部部或

7、或耳耳上上。大大鼠鼠、小小鼠鼠如如为为白白色色可可用黄色苦味酸在不同的体表标志上标记。用黄色苦味酸在不同的体表标志上标记。3.3.麻醉药的选择麻醉药的选择局局部部麻麻醉醉：常常采采用用2 2普普鲁鲁卡卡因因做做皮皮下下浸浸润润注注射射，可用于局部手术。可用于局部手术。全身麻醉全身麻醉：吸吸入入麻麻醉醉：可可将将乙乙醚醚蘸蘸在在棉棉球球上上放放入入玻玻璃璃罩罩内内，利利用用乙乙醚醚挥挥发发的的性性质质，经经肺肺泡泡吸吸收收，作作用用较较快快，适适用用于小鼠、大鼠短时间麻醉。于小鼠、大鼠短时间麻醉。注射麻醉：注射麻醉：常用戌巴比妥钠和乌拉坦。常用戌巴比妥钠和乌拉坦。4.4.动物捉拿及固定方法动物捉

8、拿及固定方法 小白鼠小白鼠右右手手抓抓住住其其尾尾部部放放在在鼠鼠笼笼盖盖铁铁纱纱网网上上，用用左左手手拇拇指指及及食食指指沿沿其其背背部部向向前前抓抓起起颈颈背背部部皮皮肤肤，并并以以左左手手的的小小指、无名指固定其尾部，便可将小鼠固定在手上。指、无名指固定其尾部，便可将小鼠固定在手上。大白鼠大白鼠用用右右手手提提起起尾尾部部，放放在在粗粗糙糙面面上上，左左手手的的拇拇指指和和食食指捉其头部，其余三指夹住背腹部即可固定。指捉其头部，其余三指夹住背腹部即可固定。豚鼠豚鼠豚鼠性情温和不咬人，用手握住躯干即可。豚鼠性情温和不咬人，用手握住躯干即可。家兔家兔可用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一

9、手可用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作托其臀部，使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作时，可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头时，可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定。部用兔头固定夹固定。5.5.动物的给药方法动物的给药方法 小白鼠小白鼠 灌灌胃胃法法(i.g.)(i.g.)：以以左左手手固固定定小小鼠鼠后后，使使其其腹腹部部朝朝上上，颈颈部部伸伸直直。右右手手持持配配有有灌灌胃胃针针头头的的注注射射器器，自自口口角角插插入入口口腔腔，再再从从舌舌面面沿沿上上腭腭进进入入食食道道。小小鼠鼠灌灌胃胃容量一般为容量一般为10

10、g10g。腹腹腔腔注注射射(i.p.)(i.p.)：以以左左手手固固定定小小鼠鼠，方方法法同同灌灌胃胃，右右手手持持注注射射器器，取取3030度度角角将将针针头头从从下下腹腹部部向向头头端端刺刺入入腹腹腔腔。进进针针部部位位不不宜宜过过高高，刺刺入入不不宜宜太太深深，以以免免伤及内脏。小鼠腹腔注射量一般为伤及内脏。小鼠腹腔注射量一般为l0gl0g。皮下注射皮下注射(s.c.)(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可。射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可。静脉注射静脉注射(i.v.)(i.v.)：将小鼠置于特制的固定筒内或：将小鼠置于

11、特制的固定筒内或倒置的大漏斗下，让其尾部露出。用酒精或二甲苯倒置的大漏斗下，让其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或将鼠尾在涂擦尾部，或将鼠尾在50C50C热水中浸泡半分钟使血热水中浸泡半分钟使血管扩张。左手拉尾端，右手持注射器将针头刺入尾管扩张。左手拉尾端，右手持注射器将针头刺入尾静脉，推入药液。静脉，推入药液。家兔家兔 灌灌胃胃：需需两两人人合合作作进进行行。一一人人取取坐坐位位用用两两腿腿夹夹持持兔兔身身，左左手手握握家家兔兔双双耳耳，右右手手抓抓住住两两前前肢肢。另另一一人人将将木木制制开开口口器器横横插插家家兔兔口口内内，压压住住舌舌头头并并固固定定之之。取取8 8号号导导尿尿管管从

12、从开开口口器器中中部部小小孔孔插插入入食食道道。插插管管时时如如误误入入气气管管会会出出现现动动物物的的挣挣扎扎和和呼呼吸吸困困难难。也也可可将将导导尿尿管管的的外外端端浸浸入入水水中中，如如有有气气泡泡吹吹出出，表表示示插插在在气气管管内内，此此时时应应拔拔管管重重插插。当当判判明明导导尿尿管管在在食食道道以以内内后后，用用注注射射器接通导尿管将药液推入。器接通导尿管将药液推入。皮皮下下、腹腹腔腔注注射射：给给药药方方法法基基本本上上同同小小鼠鼠，唯唯针针头可稍大，给药量可稍多。皮下与肌内为，腹腔为。头可稍大，给药量可稍多。皮下与肌内为，腹腔为。静静脉脉注注射射：将将家家兔兔置置固固定定箱箱

13、内内，拨拨去去耳耳壳壳外外缘缘的的毛毛，选选择择一一条条比比较较明明显显的的耳耳缘缘静静脉脉，用用酒酒精精棉棉球球涂涂擦擦皮皮肤肤，使使血血管管显显露露。用用左左手手拇拇指指和和中中指指捏捏住住兔兔的的耳耳尖尖部部，食食指指垫垫在在兔兔耳耳注注射射处处的的下下面面，右右手手持持注注射射器器，将将针针头头从从近近耳耳尖尖处处刺刺入入，当当确确认认针针头头在在血血管管中中后后，将将药药液推入。液推入。6.6.动动物物的的处处死死：大大、小小鼠鼠通通常常用用颈颈椎椎脱脱臼臼法法处死。处死。实验二实验二不同给药途径对药物效应的影响不同给药途径对药物效应的影响 一、实验目的一、实验目的 观察不同给药途径

14、对药物效应观察不同给药途径对药物效应的影响。的影响。二、实验材料二、实验材料 lml lml注射器、针头、小鼠灌胃针注射器、针头、小鼠灌胃针头、烧杯、普通天平、头、烧杯、普通天平、3.53.5硫酸镁溶液硫酸镁溶液三、观察指标三、观察指标 动物活动增加情况、呼吸急促、动物活动增加情况、呼吸急促、反射亢进、震颤、惊厥及死亡时间、炭末推进反射亢进、震颤、惊厥及死亡时间、炭末推进率等。率等。四四、实实验验方方法法 取取禁禁食食12h12h的的昆昆明明种种小小鼠鼠3 3只只，称称重重，分分别别标标为为对对照照组组、灌灌胃胃组组和和腹腹腔腔注注射射组组按以下给药：按以下给药：A A：对照组：对照组：灌胃给

15、生理盐水灌胃给生理盐水0.2ml/10g0.2ml/10g；B B：灌胃组：灌胃组：灌胃给灌胃给3.53.5硫酸镁溶液硫酸镁溶液0.2ml/10g0.2ml/10g；C C：腹腔注射组：腹腔注射组：腹腔注射给腹腔注射给3.53.5硫酸镁溶液硫酸镁溶液 0.2ml/10g 0.2ml/10g。给药后给药后注意观察动物的活动情况，是否有肌肉注意观察动物的活动情况，是否有肌肉松弛的表现。松弛的表现。15min15min后后每只小鼠均灌胃给予每只小鼠均灌胃给予5%5%炭末阿拉伯胶混悬液炭末阿拉伯胶混悬液0.2ml0.2ml。炭末灌胃后炭末灌胃后15min15min，将小鼠脱臼，将小鼠脱臼处死处死，剖开

16、剖开腹腔，腹腔，取出取出胃肠道。胃肠道。剪去剪去附着在肠管上的肠系膜附着在肠管上的肠系膜,将肠管不加牵引将肠管不加牵引地轻轻地地轻轻地平铺平铺在玻璃板上在玻璃板上(玻璃板上滴少许盐玻璃板上滴少许盐水水)。以幽门为起点。以幽门为起点,测量测量炭末在肠管内的移动炭末在肠管内的移动距离和小肠距离和小肠(自幽门至回盲部自幽门至回盲部)的全长的全长,计算计算每每只小鼠炭末的移动距离占小肠全长百分率，只小鼠炭末的移动距离占小肠全长百分率，比比较较3 3组动物的组动物的活动状况活动状况和胃肠炭末和胃肠炭末推进率推进率有何有何不同。不同。五、实验结果 实验结果填入下表中不同途径对药物效应的影响鼠号鼠号 体重体

17、重(g)(g)药物及剂量药物及剂量 给药途径给药途径 动物反应动物反应 炭末推进率（炭末推进率（%）ABC六、思考讨论题 1、灌胃和腹腔注射给硫酸镁的效应有哪些不同？为什么？2、本次实验结果对临床用药有何提示？实验三实验三 药物的协同作用和拮抗作用药物的协同作用和拮抗作用 目的目的观察激动剂与拮抗剂之间的相互作用观察激动剂与拮抗剂之间的相互作用材料材料兔兔子子只只，0.05%0.05%硫硫酸酸阿阿托托品品注注射射液液,0.1%,0.1%盐盐酸酸肾上腺素肾上腺素注液注液,0.2%,0.2%硝酸硝酸毛果芸香碱毛果芸香碱注射液注射液方法方法、取取兔兔放放于于兔兔固固定定箱箱内内固固定定，避避免免阳阳

18、光光直直射射眼眼睛睛，用用毛毛剪剪剪剪去去兔兔两两眼眼睫睫毛毛，然然后后用用瞳瞳孔孔量量尺尺测量测量瞳孔大小，连续三次，取平均值。瞳孔大小，连续三次，取平均值。、在兔、在兔左眼左眼滴入滴入.2%.2%毛果芸香碱毛果芸香碱3 3滴，滴药滴，滴药时用姆指和食指将下眼睑提起时用姆指和食指将下眼睑提起,使成囊状使成囊状,再用再用中指压住鼻泪管开口处中指压住鼻泪管开口处,防止药液流入鼻泪管而防止药液流入鼻泪管而不起作用，再用右手滴入药液。不起作用，再用右手滴入药液。1515分钟后再测分钟后再测量瞳孔大小，连续三次，取平均值，并进行比量瞳孔大小，连续三次，取平均值，并进行比较。较。3 3、滴滴入入毛毛果果

19、芸芸香香碱碱2020分分钟钟后后，分分别别在在两两眼眼滴滴入入0.1%0.1%肾肾上上腺腺素素3 3滴滴，1515分分钟钟后后测测量量两两瞳瞳孔孔大大小，连续小，连续3 3次，取平均值并进行比较。次，取平均值并进行比较。4 4、滴入肾上腺素、滴入肾上腺素1515分钟后分钟后，分别于两眼滴入，分别于两眼滴入0.05%0.05%硫酸硫酸阿托品阿托品注射液注射液3 3滴，滴，1515分钟后观察两分钟后观察两眼瞳孔变化，并测量其大小，连续眼瞳孔变化，并测量其大小，连续3 3次，并取次，并取平均值。平均值。项目正 常毛 果 芸香碱肾 上 腺素阿托品瞳孔大小左 眼右 眼记录记录 讨论题讨论题 从实验结果中

20、如何说明药物的协同作用和拮从实验结果中如何说明药物的协同作用和拮 抗作用？抗作用？实验四实验四 硝酸士的宁硝酸士的宁LDLD5050的测定的测定一、毒理学实验方法一、毒理学实验方法1.1.急急性性毒毒性性实实验验：一一次次性性大大剂剂量量给给予予药药物物后观察药物的作用；后观察药物的作用；2.2.慢慢性性毒毒性性实实验验：长长期期连连续续多多次次给给予予中中、小小剂剂量量的的药药物物，观观察察动动物物一一些些器器官官的的慢慢性性受受损程度；损程度；3.3.特特殊殊毒毒性性实实验验：致致癌癌，致致畸畸，致致突突变变，过敏反应等。过敏反应等。二、LD50的测定1.优点：方法简单易行，所用动物小白鼠

21、价廉易得；2.方法简化机率单位法：要求每组动物数相同，每组剂量呈等比关系，数据不能出现倒置；bliss法：计算准确改进寇氏法、目测法等。三、具体实验(以硝酸士的宁为例以硝酸士的宁为例)目目的的通通过过实实验验学学习习测测定定LDLD的的方方法法、步步骤骤和计算过程，了解急性毒性实验的常规方法。和计算过程，了解急性毒性实验的常规方法。材料材料1.1.动物：动物：昆明种小白鼠昆明种小白鼠(体重体重18-22g18-22g，雌雄各半，雌雄各半)2.2.器材：器材：注射器、鼠笼、天平注射器、鼠笼、天平3.3.药品：药品：0.0080.008硝酸士的宁溶液，苦味酸溶液。硝酸士的宁溶液，苦味酸溶液。硝硝酸

22、酸士士的的宁宁是是较较强强的的致致惊惊剂剂，它它为为脊脊髓髓抑抑制制性性神神经经递递质质甘甘氨氨酸酸受受体体的的拮拮抗抗剂剂。它它的的作作用用快快，中毒中毒30min30min内即可导致动物惊厥，窒息死亡。内即可导致动物惊厥，窒息死亡。实验方法实验方法 1 1、预预实实验验：取取小小白白鼠鼠8-108-10只只，以以2 2只只为为一一组组，分分为为4-54-5组组，选选择择一一系系列列剂剂量量，分分别别按按组组腹腹腔腔注注射射士士的的宁宁溶溶液液，观观察察出出现现的的症症状状并并记记录录死死亡亡数数，找找出出引引起起1010和和9090死亡率剂量的所在范围。死亡率剂量的所在范围。在在预预备备实

23、实验验所所获获得得的的1010和和9090致致死死量量的的范范围围内内，选选用用几几个个剂剂量量，0.10ml/l0g0.10ml/l0g、0.12ml/l0g0.12ml/l0g、0.14ml/10g0.14ml/10g，0.17ml/10g0.17ml/10g、0.20ml/10g0.20ml/10g、0.24ml/10g0.24ml/10g (剂剂量量按按等等比比级级数数排排列列，剂剂量量间间的的比比例例一一般般用用1:0.7-1:0.851:0.7-1:0.85)，使使一一半半组组数数反反应应率率在在10-5010-50，另另一一半半组组数数反反应应率率在在50-9050-90之之间间

24、，各各组组的的动动物物数数应应相相等等，一一般般每每组组可可用用10-2010-20只只，动物的体重和性别要均匀分配。动物的体重和性别要均匀分配。2 2、正式实验、正式实验每每组组取取1212只只小小鼠鼠，称称重重，标标记记，随随机机分分为为6 6个个计计量量组组，每每组组2 2只只，分分别别硝硝酸酸士士的的宁宁0.10ml/l0g0.10ml/l0g、0.12ml/l0g0.12ml/l0g、0.14ml/10g0.14ml/10g，0.17ml/10g0.17ml/10g、0.20ml/10g0.20ml/10g、0.24ml/10g0.24ml/10g；3 3、给给药药后后观观察察并并记

25、记录录中中毒毒症症状状，3030分分钟钟后后记记录各组的死亡小鼠数。录各组的死亡小鼠数。实验结果实验结果 全全班班结结果果汇汇总总，计计算算硝硝酸酸士士的的宁宁的的LDLD5050、LDLD5050的的可信限和可信限率。可信限和可信限率。（）结果处理（）结果处理 实验资料按下表列出：实验资料按下表列出：受试物剂量 对数剂量动物数死亡率概率单位 LD50 （mg/kg）(X)(只)(%)(Y)及置信限(95%)讨论题讨论题什么叫什么叫？测定？测定的意义和根据是的意义和根据是什么？什么？实验五实验五 利尿药对家兔尿量的影响利尿药对家兔尿量的影响一、利尿药一、利尿药1.1.定定义义：是是作作用用于于

26、肾肾脏脏，增增加加电电解解质质和和水水的的排出，使尿量增多的药物。排出，使尿量增多的药物。2.2.分分类类：根根据据利利尿尿药药的的作作用用部部位位，可可分分为为高高效、中效和低效利尿药效、中效和低效利尿药3.3.呋塞米呋塞米为高效利尿药为高效利尿药 利尿作用特点利尿作用特点 作用机制作用机制 临床应用临床应用 不良反应不良反应二、利尿药的实验方法二、利尿药的实验方法1.1.动物选择动物选择可可用用大大白白鼠鼠、小小白白鼠鼠、家家兔兔、猫猫和和狗狗，其其中中以大白鼠较为常用。以大白鼠较为常用。2.2.实验方法实验方法 代谢笼实验法：代谢笼实验法：适用于大、小白鼠；适用于大、小白鼠；直直接接自自

27、输输尿尿管管或或膀膀胱胱收收集集尿尿液液：适适用用于于较较大动物（家兔、猫、狗）。大动物（家兔、猫、狗）。三、具体实验三、具体实验 目的目的 1.1.了解急性利尿的实验方法；了解急性利尿的实验方法；2.2.观察速尿对麻醉兔的利尿作用。观察速尿对麻醉兔的利尿作用。材料材料 1.1.动物动物：家兔：家兔2.2.器材器材：兔手术台、量筒、注射器、手术：兔手术台、量筒、注射器、手术 器械器械3.3.药品药品：2525乌拉坦，乌拉坦，1 1速尿速尿 方法方法1.麻麻醉醉：取取家家兔兔一一只只，称称重重，耳耳缘缘i.v.25乌乌拉拉坦坦4ml/kg；注注意意：注注射射速速度度要要缓缓慢慢，随随时时观观察察

28、角角膜膜反反射射，反反射消失即停止注射。射消失即停止注射。2.水负荷：水负荷：麻醉后麻醉后i.g.给自来水给自来水40ml/kg；注注意意：避避免免灌灌至至气气管管，将将灌灌胃胃管管外外端端浸浸入入水水中中，若有气泡立即拔出。若有气泡立即拔出。3.手手术术：背背位位固固定定后后剪剪去去下下腹腹部部毛毛，于于耻耻骨骨联联合合上上方方切切开开皮皮肤肤约约45cm，并并沿沿腹腹白白线线剪剪开开肌肌肉肉，暴暴露膀胱，在少血管区做荷包缝合后行膀胱插管；露膀胱，在少血管区做荷包缝合后行膀胱插管；注意：膀胱插管需注满生理盐水注意：膀胱插管需注满生理盐水4.4.记记录录正正常常尿尿量量(ml(ml2 2分分钟钟)，连连续续记记录录10min10min；5.5.耳耳缘缘i.v.i.v.1 1速速尿尿4mg/0.4ml/kg4mg/0.4ml/kg，记记录录给给药药后后2 2、4 4、6 6、8 8、1010、1212、1414、1616、1818、20min20min尿量毫升数尿量毫升数(ml(ml2 2分钟分钟)。结果结果 结结果果汇汇总总，计计算算不不同同时时间间尿尿量量的的均均值值，以以尿尿量量毫毫升升数数(ml(ml2 2分分钟钟)为为纵纵坐坐标标，给给药药后后不同时间为横坐标作直方图。不同时间为横坐标作直方图。