流式细胞术在周期与凋亡中的应用优秀PPT.ppt

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1、流式细胞术在周期与凋亡中的应用你现在浏览的是第一页，共34页目目 录录010203工作原理周期应用周期应用凋亡应用凋亡应用04案例分析案例分析你现在浏览的是第二页，共34页Published journal（sci papers1000)你现在浏览的是第三页，共34页你现在浏览的是第四页，共34页概念概念流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选

2、的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来你现在浏览的是第五页，共34页仪器基本组成仪器基本组成流动室和液流系统流动室和液流系统流动室流动室 鞘液鞘液SHEATH SHEATH 激光源和光学系统激光源和光学系统光源光源滤片滤片光电管和检测系统光电管和检测系统光电倍增管光电倍增管PMTPMT计算机和分析系统计算机和分析系统 计算机计算机你现在浏览的是第六页，共34页液流系统液流系统InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheath fluid流流动动室室你现在浏览的是第七页，共34页光路图光路图

3、Air-cooled Argon Ion LaserBeam Shaping LensesHigh SensitivityQuartz Flow CellForward ScatterDetectorSide ScatterDetector525BP FL1(FITC)575BP FL2(PE)620BP FL3(ECD)675BP FL4(PC5)488DL488BK550DL600DL645DL流动室流动室你现在浏览的是第八页，共34页激光配置激光配置激光配置激光配置488nm氩离子激光器氩离子激光器633nm氦氖激光器氦氖激光器大功率紫外激光器大功率紫外激光器你现在浏览的是第九页，共34

4、页光路-滤片特性l 长通滤片长通滤片 允许长于设定波长的光通过允许长于设定波长的光通过l 短通滤片短通滤片 允许短于设定波长的光通过允许短于设定波长的光通过l 带通滤片带通滤片 允许一定带宽的波长通过允许一定带宽的波长通过630 nm BandPass FilterWhite Light Source你现在浏览的是第十页，共34页光信号收集光信号收集 光信号分离，导向，各探测通道光信号分离，导向，各探测通道PMTPMT接收并转化为电信号。接收并转化为电信号。二色镜二色镜 1 2 3带通滤波片带通滤波片光电倍增管光电倍增管激光束激光束细胞细胞收集透镜收集透镜前前向向散散射射光光侧向散射光，侧向散

5、射光，荧光荧光你现在浏览的是第十一页，共34页数据处理数据处理FSC SSC FL1 FL2 FL3脉冲处理，模数转换光信号光信号电信号电信号记录数据，显示结果记录数据，显示结果（面积，峰高，宽度）（面积，峰高，宽度）你现在浏览的是第十二页，共34页颗粒度颗粒度细胞大小细胞大小参数非荧光信号非荧光信号你现在浏览的是第十三页，共34页FL1 FITC,GFP(PMT2)FL2 PE(PMT3)FL3 ECD,PI(PMT4)FL4 PC5,APC(PMT5)荧光信号荧光信号你现在浏览的是第十四页，共34页激光器你现在浏览的是第十五页，共34页周期应用你现在浏览的是第十六页，共34页你现在浏览的是

6、第十七页，共34页单参数直方图你现在浏览的是第十八页，共34页DNA细胞周期分析细胞周期细胞周期G2MGG0GG1s2004006008001000G0G1sG2MDNADNA分析分析分析分析DNA含量含量细细胞胞数数量量2N2N4N4N你现在浏览的是第十九页，共34页产品列表你现在浏览的是第二十页，共34页研究领域你现在浏览的是第二十一页，共34页分析软件Modfit:http:/ EXPRESS:http:/ 结果判定早期凋亡：AnnexinV+/PI-死亡或者晚期凋亡：AnnexinV+/PI+正常的活细胞：AnnexinV-/PI-你现在浏览的是第二十八页，共34页线粒体水平检测相关产

7、品线粒体水平检测相关产品线粒体膜电位的检测原理：荧光染料JC-1在活细胞中以聚体形式存在于线粒体基质上产生红色荧光，在凋亡细胞中，以单体形式存在不与线粒体结合而产生绿色荧光。操作简单，试剂直接加入细胞中，20分钟后检测你现在浏览的是第二十九页，共34页JC-1 检测结果流式图Antifibrotic effects of ZK14,a novel nitric oxide-donating biphenyldicarboxylate derivative,on rat HSC-T6 cells and CCl4-induced hepatic fibrosisLiDai,HuiJi,Xiang

8、-wenKongandYi-huaZhang你现在浏览的是第三十页，共34页DNA水平的凋亡检测水平的凋亡检测-晚期检测晚期检测凋亡晚期DNA内切酶活性被激活升高，双链DNA在核小体之间切断形成185bp为基数的有序片段检测方法Tunel流式法，通过在核酸片段末端标记，跟传统相比优点在于可以计算凋亡百分比DNA Ladder分析，但凋亡细胞太少时作不到你现在浏览的是第三十一页，共34页TUNELTUNEL简介简介n n通过通过DNADNA末端转移酶将带标末端转移酶将带标记的记的 dNTP dNTP（多为多为dUTPdUTP）接接到到DNADNA片段的片段的3-3-OHOH端，再通过端，再通过荧光检测定量分析结果。荧光检测定量分析结果。TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling）你现在浏览的是第三十二页，共34页DNADNA断裂点检测断裂点检测33KeylabofMedicineSchoolofSuZhouUniversity你现在浏览的是第三十三页，共34页你现在浏览的是第三十四页，共34页