微生物的生理1.ppt
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1、微生物的生理1 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望第一节第一节 微生物的酶微生物的酶微生物的营养和代谢需在酶的参与下才能正常进微生物的营养和代谢需在酶的参与下才能正常进行。酶是动物、植物及微生物等生物体内合成的,行。酶是动物、植物及微生物等生物体内合成的,催化生物化学反应的,并传递电子、原子和化学催化生物化学反应的,并传递电子、原子和化学基团的生物催化剂。基团的生物催化剂。一、酶的组成一、酶的组成酶酶酶酶酶蛋白(单一蛋白质)酶蛋白(单一蛋白质)全酶全酶
2、 单成分酶单成分酶简单酶简单酶(单一蛋白质)单一蛋白质)结合酶结合酶金属离子金属离子辅酶(有机物)、辅基(小分辅酶(有机物)、辅基(小分子化合物)子化合物)加速生物化学反应的作用加速生物化学反应的作用传递电子、原子、传递电子、原子、化学基团的作用化学基团的作用除传递电子、原子、除传递电子、原子、化学基团的作用;还化学基团的作用;还起激活剂的作用起激活剂的作用几种重要的辅基:几种重要的辅基:几种重要的辅基:几种重要的辅基:1、铁卟啉,细胞色素氧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶等、铁卟啉,细胞色素氧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶等的辅基。的辅基。2、CoA,辅酶,辅酶A分子结构含嘌呤核苷酸、泛酸和巯基乙
3、胺等分子结构含嘌呤核苷酸、泛酸和巯基乙胺等部分,在糖代谢和脂肪代谢中起重要作用。部分,在糖代谢和脂肪代谢中起重要作用。3、NAD和和NADP,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和烟酰胺腺嘌呤,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。脱氢辅酶。二核苷酸磷酸。脱氢辅酶。4、FMN和和FAD,黄素酶,传递氢。,黄素酶,传递氢。5、CoQ,泛醌,传递电子和氢。,泛醌,传递电子和氢。6、L&TPP,传递氢和酰基。,传递氢和酰基。7、ATP、AMP8、磷酸吡哆,和转氨有关。、磷酸吡哆,和转氨有关。9、生物素,羧化酶的辅基,微生物的生长因子。、生物素,羧化酶的辅基,微生物的生长因子。10、辅酶、辅酶F,传递甲酰基
4、和羟甲基。,传递甲酰基和羟甲基。11、金属离子,激活剂。、金属离子,激活剂。12、辅酶、辅酶M,是专性厌氧的产甲烷菌特有的辅酶,甲基转移酶。,是专性厌氧的产甲烷菌特有的辅酶,甲基转移酶。13、F420,产甲烷菌的辅酶。,产甲烷菌的辅酶。14、F430,参与甲烷形成的末端反应。,参与甲烷形成的末端反应。15、MPT,参与,参与C1还原反应。还原反应。16、MFR在甲烷和乙酸形成过程中起甲基载体作用在甲烷和乙酸形成过程中起甲基载体作用三、酶的活性中心三、酶的活性中心酶的活性中心是指酶蛋白分子中与底物结合,并起酶的活性中心是指酶蛋白分子中与底物结合,并起催化作用的小部分氨基酸微区。催化作用的小部分氨
5、基酸微区。v绝大多数酶是绝大多数酶是绝大多数酶是绝大多数酶是蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质;v化学组成化学组成化学组成化学组成:简单酶、结合酶;:简单酶、结合酶;:简单酶、结合酶;:简单酶、结合酶;v结构的不同结构的不同结构的不同结构的不同:单体酶、聚合酶;:单体酶、聚合酶;:单体酶、聚合酶;:单体酶、聚合酶;v存在位置的不同存在位置的不同存在位置的不同存在位置的不同:胞内酶、胞外酶;:胞内酶、胞外酶;:胞内酶、胞外酶;:胞内酶、胞外酶;v催化反应性质的不同催化反应性质的不同催化反应性质的不同催化反应性质的不同:水解酶、氧化还原酶、转移:水解酶、氧化还原酶、转移:水解酶、氧化还原酶、转移:水解酶、氧
6、化还原酶、转移酶、聚合酶、异构化酶、合成酶、裂解酶、激酶等。酶、聚合酶、异构化酶、合成酶、裂解酶、激酶等。酶、聚合酶、异构化酶、合成酶、裂解酶、激酶等。酶、聚合酶、异构化酶、合成酶、裂解酶、激酶等。四、酶的分类四、酶的分类B水解酶催化底物的加速水分解反应。水解酶催化底物的加速水分解反应。水解酶催化底物的加速水分解反应。水解酶催化底物的加速水分解反应。B主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。B例如,脂肪酶例如,脂肪酶例如,脂肪酶例如,脂肪酶(Lipase)(Lipase)(L
7、ipase)(Lipase)催化脂的水解反应:催化脂的水解反应:催化脂的水解反应:催化脂的水解反应:(1 1)水解酶)水解酶 hydrolase hydrolaseI氧化氧化氧化氧化-还原酶催化氧化还原酶催化氧化还原酶催化氧化还原酶催化氧化-还原反应。还原反应。还原反应。还原反应。I主要包括脱氢酶主要包括脱氢酶主要包括脱氢酶主要包括脱氢酶(dehydrogenase)(dehydrogenase)和氧化酶和氧化酶和氧化酶和氧化酶(Oxidase)(Oxidase)。I如,乳酸如,乳酸如,乳酸如,乳酸(Lactate)(Lactate)脱氢酶催化乳酸的脱氢反应。脱氢酶催化乳酸的脱氢反应。脱氢酶催
8、化乳酸的脱氢反应。脱氢酶催化乳酸的脱氢反应。(2)氧化氧化-还原酶还原酶 Oxidoreductase转移酶催化基团转移反应,即将一个底物分子转移酶催化基团转移反应,即将一个底物分子转移酶催化基团转移反应,即将一个底物分子转移酶催化基团转移反应,即将一个底物分子的基团或原子转移到另一个底物的分子上。的基团或原子转移到另一个底物的分子上。的基团或原子转移到另一个底物的分子上。的基团或原子转移到另一个底物的分子上。例如,例如,例如,例如,谷丙转氨酶催化的氨基转移反应。谷丙转氨酶催化的氨基转移反应。谷丙转氨酶催化的氨基转移反应。谷丙转氨酶催化的氨基转移反应。(3)转移酶)转移酶 Transferas
9、e)裂合酶催化从底物分子中移去一个基团或裂合酶催化从底物分子中移去一个基团或原子形成双键的反应及其逆反应。原子形成双键的反应及其逆反应。)主要包括醛缩酶、水化酶及脱氨酶等。主要包括醛缩酶、水化酶及脱氨酶等。)例如,例如,延胡索酸水合酶催化的反应。延胡索酸水合酶催化的反应。(4)裂合酶)裂合酶 Lyase(异构酶催化各种同分异构体的相互转化,异构酶催化各种同分异构体的相互转化,即底物分子内基团或原子的重排过程。即底物分子内基团或原子的重排过程。例如,例如,6-磷酸葡萄糖异构酶催化的反应。磷酸葡萄糖异构酶催化的反应。(5)异构酶)异构酶 Isomerase合成酶,又称为连接酶,能够催化合成酶,又称
10、为连接酶,能够催化合成酶,又称为连接酶,能够催化合成酶,又称为连接酶,能够催化C-CC-C、C-OC-O、C-N C-N 以及以及以及以及C-S C-S 键的形成反应。这类反应必须与键的形成反应。这类反应必须与键的形成反应。这类反应必须与键的形成反应。这类反应必须与ATPATP分解反应相互偶联。分解反应相互偶联。分解反应相互偶联。分解反应相互偶联。A+B+ATP+H-O-H=A A+B+ATP+H-O-H=A B+ADP+Pi B+ADP+Pi 例如,丙酮酸羧化酶催化的反应。例如,丙酮酸羧化酶催化的反应。例如,丙酮酸羧化酶催化的反应。例如,丙酮酸羧化酶催化的反应。丙酮酸丙酮酸 +CO2 2 草
11、酰乙酸草酰乙酸(6)合成酶)合成酶 Ligase or Synthetase酶促反应的基本概念底 物产 物酶促反应酶促反应酶促反应的特点 与一般催化剂的共同点:与一般催化剂的共同点:与一般催化剂的共同点:与一般催化剂的共同点:自身质量不变,少量即可发挥作用自身质量不变,少量即可发挥作用自身质量不变,少量即可发挥作用自身质量不变,少量即可发挥作用只催化热力学允许的反应只催化热力学允许的反应只催化热力学允许的反应只催化热力学允许的反应不改变反应的平衡常数,只加快反应速度不改变反应的平衡常数,只加快反应速度不改变反应的平衡常数,只加快反应速度不改变反应的平衡常数,只加快反应速度催化反应的机理相同,都
12、是降低反应活化能催化反应的机理相同,都是降低反应活化能催化反应的机理相同,都是降低反应活化能催化反应的机理相同,都是降低反应活化能 高效性高效性比非催化高比非催化高1081020倍倍比非酶催化高比非酶催化高1071013倍倍 高度专一性高度专一性 反应条件温和反应条件温和 对环境条件的高度敏感性对环境条件的高度敏感性 酶催化是可调控的酶催化是可调控的酶的高效性是底物与酶酶的高效性是底物与酶酶的高效性是底物与酶酶的高效性是底物与酶之间的极性引力、电子之间的极性引力、电子之间的极性引力、电子之间的极性引力、电子云张力、酸碱催化、共云张力、酸碱催化、共云张力、酸碱催化、共云张力、酸碱催化、共价催化等
13、的共同合力的价催化等的共同合力的价催化等的共同合力的价催化等的共同合力的结果。结果。结果。结果。酶酶催催化化特特性性具有高度的底物专一性具有高度的底物专一性一一一一种种种种酶酶酶酶仅仅仅仅作作作作用用用用于于于于一一一一种种种种或或或或一一一一类类类类化化化化合合合合物物物物,或或或或一一一一定定定定的的的的化化化化学学学学键键键键,催化特定的化学反特性称为酶作用的专一性。催化特定的化学反特性称为酶作用的专一性。催化特定的化学反特性称为酶作用的专一性。催化特定的化学反特性称为酶作用的专一性。v 绝对专一性绝对专一性一种酶只能作用于特定结构的底物,只催化一种专一反应,生成特定结构产一种酶只能作用
14、于特定结构的底物,只催化一种专一反应,生成特定结构产物。物。例如,脲酶只催化尿素水解。例如,脲酶只催化尿素水解。v 相对专一性相对专一性一种酶只能作用于一类化合物或一种化学键,催化一类化学反应。一种酶只能作用于一类化合物或一种化学键,催化一类化学反应。例如,胰蛋白酶催化由碱性氨基酸的羧基形成的肽键。例如,胰蛋白酶催化由碱性氨基酸的羧基形成的肽键。v 立体异构专一性立体异构专一性一种酶只能作用于某个化合物立体异构体的一种,称为立体异构特异性。一种酶只能作用于某个化合物立体异构体的一种,称为立体异构特异性。例如,乳酸脱氢酶仅催化例如,乳酸脱氢酶仅催化L-乳酸,不催化乳酸,不催化D-乳酸。乳酸。米米
15、-门方程门方程nKm 即为米氏常数,即为米氏常数,nVmax为最大反应速度为最大反应速度l当反应速度等于最大速度当反应速度等于最大速度一半时底物的浓度,即一半时底物的浓度,即V=1/2 Vmax,Km=S l上式表示,米氏常数是反上式表示,米氏常数是反应速度为最大值的一半时的应速度为最大值的一半时的底物浓度。底物浓度。l因此,米氏常数的单位为因此,米氏常数的单位为mol/L。影响酶活力的因素影响酶活力的因素酶的活力大小用酶所催化反应的酶的活力大小用酶所催化反应的酶的活力大小用酶所催化反应的酶的活力大小用酶所催化反应的反应速度反应速度反应速度反应速度来表示来表示来表示来表示米氏常数米氏常数Km的
16、意义的意义不同的酶具有不同不同的酶具有不同不同的酶具有不同不同的酶具有不同K Kmm值,它是酶的一个重要值,它是酶的一个重要值,它是酶的一个重要值,它是酶的一个重要的特征物理常数。的特征物理常数。的特征物理常数。的特征物理常数。K Kmm值只是在固定的底物,一定的温度和值只是在固定的底物,一定的温度和值只是在固定的底物,一定的温度和值只是在固定的底物,一定的温度和pHpH条条条条件下,一定的缓冲体系中测定的,不同条件下件下,一定的缓冲体系中测定的,不同条件下件下,一定的缓冲体系中测定的,不同条件下件下,一定的缓冲体系中测定的,不同条件下具有不同的具有不同的具有不同的具有不同的K Kmm值。值。
17、值。值。K Kmm值表示酶与底物之间的亲和程度:值表示酶与底物之间的亲和程度:值表示酶与底物之间的亲和程度:值表示酶与底物之间的亲和程度:K Kmm值大值大值大值大表示亲和程度小,酶的催化活性低;表示亲和程度小,酶的催化活性低;表示亲和程度小,酶的催化活性低;表示亲和程度小,酶的催化活性低;K Kmm值小值小值小值小表示亲和程度大,酶的催化活性高。表示亲和程度大,酶的催化活性高。表示亲和程度大,酶的催化活性高。表示亲和程度大,酶的催化活性高。米氏常数的求法米氏常数的求法求求倒倒数数斜率斜率=Km/Vmax-1/Km1/Vmax双倒数作图法双倒数作图法影响酶促反应速度的因素影响酶促反应速度的因素
18、在低底物浓度时在低底物浓度时在低底物浓度时在低底物浓度时,反应速度反应速度反应速度反应速度与底物浓度成正比,表现为与底物浓度成正比,表现为与底物浓度成正比,表现为与底物浓度成正比,表现为一级反应特征。一级反应特征。一级反应特征。一级反应特征。当底物浓度达到一定值,几当底物浓度达到一定值,几当底物浓度达到一定值,几当底物浓度达到一定值,几乎所有的酶都与底物结合后,乎所有的酶都与底物结合后,乎所有的酶都与底物结合后,乎所有的酶都与底物结合后,反应速度达到最大值反应速度达到最大值反应速度达到最大值反应速度达到最大值(V Vmaxmax),此时再增加底物),此时再增加底物),此时再增加底物),此时再增
19、加底物浓度,反应速度不再增加,浓度,反应速度不再增加,浓度,反应速度不再增加,浓度,反应速度不再增加,表现为零级反应。表现为零级反应。表现为零级反应。表现为零级反应。1.底物浓度对酶促反应速度的影响底物浓度对酶促反应速度的影响JJ在底物浓度足够时在底物浓度足够时在底物浓度足够时在底物浓度足够时,酶酶酶酶浓度越高,酶促反应越浓度越高,酶促反应越浓度越高,酶促反应越浓度越高,酶促反应越快。快。快。快。JJ当酶浓度很高时,酶促当酶浓度很高时,酶促当酶浓度很高时,酶促当酶浓度很高时,酶促反应速度趋于平缓,表反应速度趋于平缓,表反应速度趋于平缓,表反应速度趋于平缓,表现为零级反应。现为零级反应。现为零级
20、反应。现为零级反应。2 酶浓度对酶促反应速度的影响酶浓度对酶促反应速度的影响Concentration of Enzyme(mol/L)3.pH 的影响的影响JJ在一定的在一定的在一定的在一定的pH pH 下下下下,酶具有最大的催化酶具有最大的催化酶具有最大的催化酶具有最大的催化活性活性活性活性,通常称此通常称此通常称此通常称此pH pH 为最适为最适为最适为最适 pH pH。4.温度的影响温度的影响一方面是温度升高一方面是温度升高一方面是温度升高一方面是温度升高,酶促反酶促反酶促反酶促反应速度加快。应速度加快。应速度加快。应速度加快。另一方面另一方面另一方面另一方面,温度升高温度升高温度升高
21、温度升高,酶的酶的酶的酶的高级结构将发生变化或变高级结构将发生变化或变高级结构将发生变化或变高级结构将发生变化或变性,导致酶活性降低甚至性,导致酶活性降低甚至性,导致酶活性降低甚至性,导致酶活性降低甚至丧失。丧失。丧失。丧失。因此大多数酶都有一个最因此大多数酶都有一个最因此大多数酶都有一个最因此大多数酶都有一个最适温度。适温度。适温度。适温度。在最适温度条件在最适温度条件在最适温度条件在最适温度条件下下下下,反应速度最大。反应速度最大。反应速度最大。反应速度最大。QQ1010=1.4-2.0=1.4-2.0QQ1010=2-3=2-3(化学催化)(化学催化)(化学催化)(化学催化)5.激活剂对
22、酶活性的影响激活剂对酶活性的影响使酶表现出催化活性或强化其催化活性的现象,称为使酶表现出催化活性或强化其催化活性的现象,称为使酶表现出催化活性或强化其催化活性的现象,称为使酶表现出催化活性或强化其催化活性的现象,称为酶的激活作用。酶的激活作用。酶的激活作用。酶的激活作用。能够激活酶的活性的化合物则称为激活剂。能够激活酶的活性的化合物则称为激活剂。能够激活酶的活性的化合物则称为激活剂。能够激活酶的活性的化合物则称为激活剂。激活剂的种类:激活剂的种类:a.无机阳离子无机阳离子b.无机阴离子无机阴离子C.有机化合物有机化合物有些酶被合成后呈现无活性状态,这种酶成为酶原。经激有些酶被合成后呈现无活性状
23、态,这种酶成为酶原。经激活剂激活后才具有活性。活剂激活后才具有活性。6.抑制剂对酶活性的影响抑制剂对酶活性的影响使酶的活性降低或丧失的现象,称为酶的抑制使酶的活性降低或丧失的现象,称为酶的抑制使酶的活性降低或丧失的现象,称为酶的抑制使酶的活性降低或丧失的现象,称为酶的抑制作用。作用。作用。作用。能够引起酶的抑制作用的化合物则称为抑制剂。能够引起酶的抑制作用的化合物则称为抑制剂。能够引起酶的抑制作用的化合物则称为抑制剂。能够引起酶的抑制作用的化合物则称为抑制剂。酶的抑制剂一般具备两个方面的特点:酶的抑制剂一般具备两个方面的特点:酶的抑制剂一般具备两个方面的特点:酶的抑制剂一般具备两个方面的特点:
24、1.1.能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式形成比较稳定的复合体或结合物。形成比较稳定的复合体或结合物。形成比较稳定的复合体或结合物。形成比较稳定的复合体或结合物。2.2.在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的过渡状态相似。过渡状态相似。过渡状态相似。过渡状态相似。(1)抑制剂)抑制剂-形成复合体或结合物形成复合体或结合物 a.a.不可逆抑制不可逆抑制不可逆抑制不可逆
25、抑制 抑制剂与酶反应中心的活性基团以共抑制剂与酶反应中心的活性基团以共抑制剂与酶反应中心的活性基团以共抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合,引起酶的永久性失活。价形式结合,引起酶的永久性失活。价形式结合,引起酶的永久性失活。价形式结合,引起酶的永久性失活。如有机磷毒剂二异丙基氟磷酸酯。如有机磷毒剂二异丙基氟磷酸酯。如有机磷毒剂二异丙基氟磷酸酯。如有机磷毒剂二异丙基氟磷酸酯。b.可逆抑制可逆抑制抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合,抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合,引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通过透析等方法被除去,并且能部分通过透析等方法被除去,并且能部分或全部
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- 微生物 生理
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