丙二醛(MDA)含量的测定复习课程.ppt

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1、 丙二醛（丙二醛（MDA）含量）含量(hnling)的测定的测定 丙二醛是膜脂过氧化最重要的产丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物之一。植物在逆境物之一。植物在逆境(njng)下遭受下遭受伤害与活性氧积累诱发的膜质过氧化伤害与活性氧积累诱发的膜质过氧化作用密切相关。作用密切相关。植物植物(zhw)生理学实生理学实验课件验课件第一页，共10页。植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物膜脂过氧化的产物(chnw)有二烯轭合物、有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙脂类过氧化

2、物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（二醛（MDA：Malondialdehyde）是）是膜脂过氧化最重要的产物膜脂过氧化最重要的产物(chnw)之一，之一，因此可通过测定因此可通过测定MDA了解膜脂过氧化的程了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。的抗逆性。原理原理(yunl)第二页，共10页。丙二醛在高温及酸性环境丙二醛在高温及酸性环境(hunjng)下可与下可与2-硫代巴硫代巴比妥酸（比妥酸（TBA）反应产生红棕色的产物）反应产生红棕色的产物3,5,5-三甲三甲基恶唑基恶唑2,4-二酮（三甲川），该物质在二酮（三甲川），该物质在532

3、 nm处有处有一吸收高峰，并且在一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据处有较小光吸收。根据其其532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。醛、可溶性糖对此反应有干扰，在醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一吸处有一吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。收峰，可用双组分分光光度法加以排除。原理原理(yunl)硫代巴比妥酸丙二醛3,5,5-三甲(sn ji)基恶唑2,4-二酮 （三甲(sn ji)川）第三页，共10页。仪器设备仪器设备1.分光分光(fn un)光度计；光度计；2.研钵；研钵；3.剪刀；剪刀；4.恒温水浴；恒温水浴；5.试管

4、：试管：20 mL4 6.离心机。离心机。第四页，共10页。试剂试剂(shj)1.5%三氯醋酸；三氯醋酸；2.0.5%硫代巴比妥酸（用硫代巴比妥酸（用5%三氯醋酸三氯醋酸溶解溶解(rngji)定容）；定容）；3.0.05 mol L1磷酸缓冲液，磷酸缓冲液，pH 7.8。第五页，共10页。材料材料(cilio)正常正常(zhngchng)生长的以及经逆境处理的生长的以及经逆境处理的小麦、玉米或其他植物的叶片。小麦、玉米或其他植物的叶片。第六页，共10页。方法方法(fngf)与步骤与步骤1取小麦植株上不同叶位的叶片取小麦植株上不同叶位的叶片35片，洗净擦干，剪成片，洗净擦干，剪成0.5 cm长的

5、小段，混匀。长的小段，混匀。2称取叶片切段称取叶片切段0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入少许石英砂，放入冰浴的研钵中，加入少许石英砂和和2 mL 0.05 mol L-1磷酸磷酸(ln sun)缓冲液，研磨缓冲液，研磨成匀浆。将匀浆转移到试管中，再用成匀浆。将匀浆转移到试管中，再用3 mL 0.05 mol L-1磷酸磷酸(ln sun)缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。3在提取液中加入在提取液中加入5 mL 0.5%硫代巴比妥酸溶液，摇匀。硫代巴比妥酸溶液，摇匀。4将试管放入沸水浴中煮沸将试管放入沸水浴中煮沸10 min，（自试管内溶液中出，（自试管内溶

6、液中出现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放入冷现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放入冷水浴中。水浴中。5待试管内溶液冷却后，待试管内溶液冷却后，3000g离心离心15 min，取上清液，取上清液并量其体积。以并量其体积。以0.5%硫代巴比妥酸溶液为空白测硫代巴比妥酸溶液为空白测532 nm、600 nm和和450 nm处的消光值。处的消光值。第七页，共10页。计算结果计算结果式中，式中，Vt：提取液总体积（：提取液总体积（mL）；）；Vs：测定：测定(cdng)用提取液体积用提取液体积（ml）；）；FW：样品鲜重（：样品鲜重（g）。）。第八页，共10页。注意事项注意事项

7、 1可溶性糖与可溶性糖与TBA显色反应的产物在显色反应的产物在532 nm也有吸收（最大吸收在也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物），当植物(zhw)处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。2低浓度的铁离子能增强低浓度的铁离子能增强MDA与与TBA的显色反的显色反应，当植物应，当植物(zhw)组织中铁离子浓度过低时应补组织中铁离子浓度过低时应补充充Fe3+（最终浓度为（最终浓度为0.5 nmol L-1）3如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最好使用低温离心机离心。好使用低温离心机离心。第九页，共10页。思考题思考题 不同植物在同一不同植物在同一(tngy)逆境下，丙二醛含逆境下，丙二醛含量变化不同，说明了什么？量变化不同，说明了什么？第十页，共10页。